文摘
表型表达的常见p.C282Y / p.C282YHFE有关的血色沉着病基因型是异构的,取决于基因和非基因因素之间复杂的相互作用。结合珠蛋白有至关重要的作用在自由血红蛋白铁复苏,以及存在三个主要类型:Hp1-1, Hp2-1 Hp2-2。Hp2-2支持血红蛋白铁在单核细胞/巨噬细胞的内吞作用,导致部分铁保留和增加细胞内铁蛋白水平。这种情况一般不会严重影响铁内稳态,但被发现与健康男性血清铁指数升高。Hp2-2基因型是否充当修饰语HFE有关的血色沉着病尚不清楚。在这项研究中,我们调查的影响Hp2-2铁指数和潜在的混杂因素的351便士。C282Y纯合子患者。我们得出这样的结论:Hp2-2基因型之间的因果关系,增加铁指标p。C282Y纯合子患者。Hp2-2效果,然而,有限的,只有明显的男性。
1。介绍
血色素沉着症(HC);遗传性血色素沉着症)是指一些遗传疾病的代名词的铁代谢特点是进步的铁积累主要器官(1- - - - - -4]。如果不能识别和治疗,这进步铁负荷会导致组织损伤和严重的临床并发症,包括肝硬化、肝细胞癌、心肌病(5]。
血色沉着病的历史和主要形式是一个成人通常与常染色体隐性条件HFEp.C282Y / p。C282Ygenotype. In Northern European populations, this genotype is carried by approximately 1 person in 200 [4]。然而,其表型表达异构显然取决于强调之间的平衡和减少的因素。的影响,性别、年龄、和生活方式的组件,如酗酒、已经被很好地记录下来了(2,6,7]。修饰基因的参与或表观遗传机制不太明显,但支持研究Hfe基因敲除小鼠,以及生物和临床之间的更大的和谐家庭中的铁过载表型比家庭之间4,8,9]。
大多数铁在体内直接红细胞生成和存在血红素在血红蛋白(Hb)。血红素铁通常是回收后由巨噬细胞衰老红细胞的破坏。然而,在生理条件下,多达10%的乙肝分子逃入等离子体(10]。这些免费乙肝分子受触珠蛋白(Hp),提供他们的肝实质细胞,枯氏细胞和巨噬细胞。通过这种方式,结合珠蛋白阻止铁损通过肾小球和保护肾脏氧化损伤(11]。
结合珠蛋白合成为一个单一多肽链,裂解在内质网是一个伴链和carboxy-terminal链(12]。惠普的基本结构为指定的Hp1-1两个惠普分子加入了一个二硫桥通过各自的进行攻击。人类不同于其他物种通过两种惠普等位基因(表示Hp1和Hp2),由于部分基因重复,代码很短或长时间链,链。由于细长的链包含两个半胱氨酸残基形成二硫桥与另外两个进行攻击,个人的纯合子Hp2等位基因显示multimeric惠普指定Hp2-2类型。Hp2-1指的类型(包括惠普二聚体和多聚体)中看到两个人杂合的惠普等位基因(13]。
Hp2-2报道喜欢Hb-Hp复合体由单核细胞/巨噬细胞内吞作用,产生部分铁保留(13,14]。这导致更高的细胞内铁蛋白浓度,而影响血清铁参数被发现是温和和达到意义只有在健康男性(14]。同意这种性别效应,Hp2-2与血清铁和铁蛋白水平升高在p。C282Y纯合子的男性病人而不是p。C282Y纯合子的女性患者(15]。然而,这一发现挑战了两个其他的研究(16,17]。
Tolosano等人最近报道说Hfe和惠普复合基因敲除小鼠肝铁显著低于积累起来的Hfe零老鼠,从而证明Hp-mediated Hb-iron复苏可能导致铁加载在HC (18]。Hp2不指定一个空等位基因。相反,它编码一种蛋白质,这种蛋白质可以支持免费血红蛋白铁移位为巨噬细胞。洞察的作用惠普作为修饰基因HFE有关的血色沉着病,我们调查的影响Hp2-2基因型在大量的p。C282Y纯合子患者。我们假设可能是有限的,蒙面的主要影响性别和其他重要的非基因修饰符(年龄和酒精滥用)。
2。材料
2.1。研究的患者
三百年,51纳入本研究的患者。在第一次访问这些病人的医疗中心布列塔尼(法国西部),临床问卷由专业医师完成。信息包含在这个问卷之前详细描述(6]。它提供了信息社会人口特征的患者,他们的年龄在诊断、HC的情况下诊断、生化参数,和相关的临床症状发作的时候。
诊断存在的基本原因HFEp.C282Y / p。C282Ygenotype and the observation of abnormal iron indices (elevated transferrin saturation with or without elevated serum ferritin concentration). It means that not all patients presented with clinical signs.
选中的病人没有携带额外的突变HAMP贷款和HJV,两个之前报道p的修饰符。C282Y纯合子表型(19,20.]。
这项研究符合法国生物伦理法规。获得患者的知情同意前血液样本。
2.2。评估的铁被放血和日常饮酒
所有患者随访在相同的医疗中心,在常规实践(血清铁蛋白的价值目标是100g / L)。
铁被放血的数量评估从血液中提取的体积损耗治疗期间,假设500毫升的血液含有250毫克的铁元素。共有26个病人(男性和女性9日)17日没有完成铁损耗疗法研究开始的时候。这组的患者被排除在铁被放血的所有统计分析变量。
每日饮酒从详细的项目包括在临床评估问卷,测量的啤酒,葡萄酒,白酒消费,如果各自的酒精(乙醇)内容的4%,12%,20%。酗酒被定义为每天消费≥60克(21]。
2.3。结合珠蛋白基因分型
使用两个互补的allele-specific pcr结合珠蛋白多态性决定,充分描述科赫和合作者22]。简单地说,第一次PCR利用大小不同的两个外显子Hp2等位基因。它会导致1757 - bp的放大产品的Hp1等位基因和3481 -英国石油产品Hp2等位基因。由于引物结合位点和他们来方向,第二个PCR许可的放大349 -英国石油公司的产品Hp2等位基因,但没有放大的Hp1等位基因。这使得Hp2-1杂合的基因型的鉴定更加可靠,在第一轮PCR,扩增Hp1特殊技能1757 -英国石油产品是更有效的,偶尔会导致一个非常弱的检测Hp2-specific 3481 -英国石油产品。
2.4。统计分析
统计分析使用Epi-Info(版本6.04;疾病控制和预防中心,亚特兰大,乔治亚州,美国)或SAS(版本9.1;SAS研究所卡里,NC)软件。
方差分析(方差分析)和学生的以及,考虑到池(等于方差)或Satterthwaite(不平等的方差)方法,用于测试手段的差异。对数变换都是用于统计分析以确保血清ferrtin和铁被放血近似正态分布。
以下潜在混杂因素被认为是在多元线性回归模型与血清铁蛋白浓度或数量的铁被放血因变量:惠普在诊断基因型、性别、年龄(三个虚拟变量定义的四分位数和四分位数1引用),和酒精消费(施虐者与非施虐者)。惠普基因型变量进行分组Hp1-1 Hp2-1基因型,并只考虑Hp2-2基因型作为潜在的预测。这允许我们增加类别的大小作为参考。应该指出的是,惠普基因型变量最初编码为两个虚拟变量(Hp2-1与Hp1-1和Hp2-2和Hp1-1),而相比之下与Hp2-2 Hp2-1没有任何联系的高血清铁蛋白和铁被放血。
血清铁蛋白浓度和铁被放血日志10转换,回归系数对应于一个时代的变化意味着Y(即。,serum ferritin or iron removed) per unit increment in the explanatory variable. In a multiple linear regression model, the coefficients调整了其他covariables。”
3所示。结果
3.1。惠普基因型分布
惠普在351 p基因型。C282Yhomozygous were distributed as follows: 46 for Hp1-1 (13.1%), 179 for Hp2-1 (51.0%), and 126 for Hp2-2 (35.9%). These genotype frequencies were in accordance with previous reports in Northern European populations [15,17,23]。
3.2。关于惠普基因型铁过载状态
3.2.1之上。单变量分析
方差分析未能透露任何各种之间的显著差异惠普p组。C282Yhomozygous patients, in terms of age at diagnosis, transferrin saturation, log-transformed serum ferritin, and log-transformed iron removed by phlebotomy (Table1(a))。
这些结果与男性的积极作用和酗酒的研究铁参数(表1(b)和1(c);学生的测试)。
3.2.2。多变量分析
多元线性回归模型来测试的影响惠普基因型(Hp2-2与Hp1-1和Hp2-1)对数转换血清铁蛋白或对数转换铁被放血,后调整性别、年龄在诊断和饮酒(表2)。为因变量进行评估,更高的价值不仅出现在男性患者(和、职责),病人的年龄诊断(和),患者每天喝至少60 g酒精(和),而且患者Hp2-2基因型(和)。
与日志10依赖变量的变换(即血清铁蛋白),“惠普集团”变量的回归系数为0.117。这意味着平均血清铁蛋白是100.117或1.31倍Hp2-2患者比Hp1-1或Hp1-2基因型患者的基因型,这对其他covariables调整后。模型还表明,平均血清铁蛋白浓度高1.57倍,滥用酒精者出现在非滥用酒精者。
我们没有观察到一个性别和惠普基因型之间的相互作用()。然而,由于性别被证实为p的表型表达的主要修饰符。C282Yhomozygous genotype, and because the effect of the Hp2-2 genotype on serum iron parameters was previously restricted to the male sex [14,15,男性和女性的分析,分别。
3.3。关于性别和惠普基因型铁过载状态
只有两个27重型饮酒的女性,患者每天喝少于60克的酒精首先考虑。在这个类别,方差分析显示显著差异的对数转换血清铁蛋白和各种之间的对数转换铁被放血惠普组的男性,但是女性(数据未显示)。正如所料,后续成对试验观察到的差异归因于高血清铁蛋白和铁被放血的男性携带者Hp2-2基因型(数据没有显示)。
线性回归分析表明,这些观察结果对诊断年龄调整后保持不变和每日饮酒(表3(一)和3(b))。
4所示。讨论
只有一小部分血红蛋白铁通过结合珠蛋白恢复途径。由于这个原因,人们普遍认为,惠普多态性不严重影响铁内稳态,并且不一致解释大型航空公司常见的表型变化HFEp.C282Y / p。C282Ygenotype. However, Vlierberghe et al. have reported a striking association between Hp2-2 and more pronounced iron overload phenotypes in p.C282Y/p.C282Y males [15]。针对这一发现,并牢记矛盾的结果(16,17),我们的研究表明,Hp2-2类型的贡献是重要的但有限。只有明显在考虑性别和进一步发现在比较温和的年龄和酗酒(就是明证回归系数表2)。
之间缺乏复制的早期调查的影响Hp2-2类型表型表达的p。C282Y纯合基因型可能有几种解释。特别是可能反映样本的选择和尺寸的差异进行了研究。在这里,我们招收了大量富有表现力的p。C282Y纯合个体;人显示,至少,疾病的生理变化(增加转铁蛋白饱和度水平,有或没有增加血清铁蛋白浓度)。这允许强大的统计分析和仔细评估Hp2-2基因型之间的关系和铁过载的严重程度。通过这种方式,我们的结果与最初报道Vlierberghe等人从一群167便士。C282Y纯合子患者(15]。在整个人口的患者,单变量分析表明,所有研究铁参数略增加Hp2-2载体的基因型。按性别分层的人口,然而,需要获得显著差异。这些差异是局限于男性的子群,体内过量铁的标记。
作为HFE有关的血色沉着病发展缓慢,性别和年龄是公认的重要修改因素(3]。月经和怀孕,耗尽铁商店,作为临时的保护性因素在生育年龄的女性,而疾病的生理变化和随后的临床表现通常标志着年轻人比老年人更少。此外,饮酒是加剧肝铁过载产生的损害(21,24]。之前我们已经表明,酒精滥用(每天饮酒> 60 g)导致高铁参数,和更频繁的临床表现6]。允许一个更深刻的检查是否有一个真正的因果关系Hp2-2基因型和铁增加参数,我们拟合多重线性回归模型与性别,年龄也在诊断和酗酒是潜在的混杂因素。这些模型导致的表示Hp2-2基因型作为一个独立因素增加血清铁蛋白浓度和铁被放血(表2)。然而,模型还显示,Hp2-2预测是最低的。调整了强烈的性别和年龄的影响,Hp2-2基因型携带者的比滥用酒精者,因此不太可能升高血清铁蛋白和铁被放血。后者在特定的测试验证了中位数为血清铁蛋白和铁被放血在滥用酒精者明显高于(谁把Hp1-1或Hp1-2基因型)患者比Hp2-2基因型(宣布不过度饮酒)。观测值是1256.0g / L (Q1 = 803.0,第三季度= 2311.0)和599.0g / L (Q1 = 319.5;第三季度= 975.0)()和6.6 g (Q1 = 4.8;第三季度= 9.7)和3.6 g (Q1 = 1.8;第三季度= 6.8)(),安排。
我们得出结论,通过强调铁负担,频繁Hp2-2基因型可以解释一些表型异质性的p。C282Y纯合子的血色沉着病病人。然而,我们支持这个想法,这种影响很弱,而其他基因和环境应该考虑修改因素,有效区分那些纯合子患者患病态的并发症的风险更高。
确认
这项工作是支持由德布雷斯特大学医疗中心(项目医院矫揉造作的倩碧),由委员会任职de l 'Etablissement法语杜唱(项目2003.19),倒拉医学基金会。