慢性髓系白血病5例复杂变异t(9;22)染色体易位分析

摘要

费城(在90%以上的慢性髓系白血病(CML)患者中发现由t(9;22)易位引起的染色体，并导致嵌合融合基因的形成bcr - abl．然而，有一小部分CML患者存在这种易位的简单或复杂变异，包括9q34和22q11之外的各种断点。我们报告了5例携带变异Ph易位的CML病例，包括9号和22号染色体以及3号、5号、7号、8号和10号染色体。g带显示了3q21、5q31、7q32、8q24和10q22的相互三向易位。bcr - abl所有病例均发现der(22)融合信号。

1.介绍

慢性粒细胞性白血病(CML)以费城染色体(Ph¹(q34;q11.2)，是由9号染色体长臂和22号染色体之间的平衡易位引起的。1］．形成Ph¹染色体,的区域c-ABL癌基因由9q34转位到的区域BCR基因在22号染色体上形成融合基因bcr - abl，它编码具有组成型酪氨酸激酶活性的融合蛋白[2］．虽然绝大多数CML患者表现为经典的t(9;22)(q34;q11.2)易位，但变异的Ph易位存在于5%-10%的CML病例中。这些被细胞遗传学分类为简单变异，包括染色体22和一条除9以外的染色体，和复杂变异，包括染色体9,22和一条或多条其他染色体[3.］．在几乎所有的情况下，变异Ph¹染色体,bcr - abl重排可以通过分子方法或荧光原位杂交(FISH)检测。

在这项工作中，我们描述了5名患有CML的患者，他们携带不同的复杂变异Ph易位，包括染色体9,22以及另一条染色体。采用g显带法、FISH法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对其进行研究。

2.材料和方法

2．1．病人

1999年3月至2005年11月，本院共确诊81例CML患者。根据《赫尔辛基宣言》获得患者或患者监护人的知情同意，并获得当地伦理委员会批准。其中，5例患者(6%)表现出变异的Ph易位，涉及染色体3、5、7、8或10。这些患者的主要临床特点见表1．


情况下	性别/年龄	白细胞(10⁹/ L)	PLT (10⁹/ L)	BM爆炸(%)	BM Eo / Bso (%)	在诊断阶段	治疗	后续(个月)

(一)	米/ 75	306	390	0	6／1	慢性	胡,伊马替尼	30.
(b)	F / 50	671	408	2	11	慢性	胡,伊马替尼	+ 12
(c)	F / 59	123	250	0	- - - - - -	慢性	胡,伊马替尼	＋18
(d)	56米/	431	222	0	5/0	慢性	胡、auto-PBSC干扰素,伊马替尼	+ 71
(e)	F / 71	689	479	2	5／2	慢性	胡,伊马替尼	＋86

2．2.细胞遗传学研究

常规细胞遗传学分析是对骨髓(BM)标本进行24小时无刺激培养。细胞经常规培养处理，染色体经胰蛋白酶- giemsa显带(gtg -带带)染色。核型根据国际人类细胞遗传学命名系统(ISCN, 2005)描述[4］．

2．3.鱼的分析

对制备的甲醇/醋酸固定BM细胞载片进行FISH分析BCR / ABL额外信号(ES)双色探头试剂盒(Vysis Inc.， Downers Grove, IL)。简单地说，从保存在固定液中的细胞发生微球制备新鲜载玻片20.^º用乙醇脱水。探针和载玻片编码在75^ºC孵育1分钟，37℃共杂交过夜^ºC在HYBrite变性/杂交系统(Vysis)中。玻片经清洗和复染6-diamidino-2-phenylindole DAPI染色。荧光信号在尼康Eclipse E600显微镜(尼康，东京，日本)下进行可视化，并使用ISIS图像分析软件(metasystinc .，德国)进行分析。

2．4．嵌合BCR-ABL转录本的定量实时逆转录聚合酶链反应(QT-RT-PCR)

使用MagNa Pure LC mRNA HS试剂盒(Roche Diagnostics GmbH Mannheim, Germany)从患者BM细胞中提取RNA，该试剂盒在MagNa Pure机器人上自动化。在最后的25卷中进行了逆转录L，按照制造商的说明(TaqMan逆转录试剂，应用生物系统，福斯特市，CA)。cDNA合成后，进行QT-RT-PCR检测t(9;22)易位衍生的嵌合转录本。使用LightCycler Fast Start DNA Master杂交探针(Roche Diagnostics GmbH Mannheim)和LightCycler Fast Start DNA Master杂交探针(Roche Diagnostics GmbH Mannheim)进行qrt - pcr检测。检测BCR / ABL融合转录本，使用Bolufer等人描述的引物和特异性标记探针对样品进行分析[5］．BCR / ABL放大产物归一化为ABL使用Cross等人描述的引物A2和CA3对每个样品进行扩增[6］．

3.结果

5例患者由3例女性和2例男性组成，年龄在50 - 75岁之间。所有患者在就诊时均处于慢性期，并在每一时刻接受标准的羟基脲、干扰素-治疗α和伊马替尼。1例患者在干扰素-治疗失败后接受自体外周血干细胞移植．

g显带细胞遗传学分析显示经典t(9;22)(q34;q11)存在5个相互的三方变异易位。涉及这些复杂变异易位的染色体断点如下:3q21, 5q31, 7q32, 10q22和8q24(图)1)．此外，患者(a)和(d)还表现出额外的异常:患者(a)显示了一个复杂的核型，至少有两个主要的不相关克隆，而患者(d)显示了染色体15和22的数量异常。BCR / ABL双色鱼在所有情况下都表现出通常的模式BCR / ABL融合基因在Ph¹通常呈22q形态的染色体(未显示)。尽管这些易位的复杂性，但未检测到衍生染色体9上t(9;22)断点附近的缺失。进一步的嵌合特征bcr - ablrt - pcr检测所有患者的b3a2融合转录本。这些细胞遗传学和分子分析的结果汇总在表中2．


情况下	染色体组型	ABL删除	rt - pcr	bcr - ABL / ABL(%)的诊断	伊马替尼后BCR-ABL/ABL (%)

(一)	46, XY, t(5、9、22)(问;q34 q11)/ 45, X,同上的,Y/46 X, idem， +8/46, XY， +8, t(5;9;22)/ 46, XY,4, t(5、9、22),7 + der (X) ?t (X; 1) (p11.4;温度系数),+ 3月	没有	b3a2	11.09	0．11
(b)	46, XX, t (9; 22; 10) (q34; q11的时候)	没有	b3a2	1．75	0.014
(c)	46, XX, t(7、9、22)(q34; q11;问)	没有	b3a2	13.56	0.004
(d)	45, XY, t(3、9、22)(温度系数;q34 q11),15/46 XY，同上，+22/ 46, XY	没有	b3a2	11.06	负
(e)	46, XX, t(8、9、22)(q24.1; q34 q11)	没有	b3a2	厦门市	负

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

目前，除患者(a)死于与伊马替尼治疗无关的充血性心力衰竭外，所有患者在标准剂量伊马替尼治疗后血液学和细胞遗传学完全缓解均良好。患者(d)和(e)分别在随访71个月和86个月后显示融合转录本完全消失。患者(a) - (c)的BCR-ABL转录本水平降低超过2个日志(表)2)．

4.讨论

在本报告中，我们分析了5例携带复合Ph的CML患者¹通过细胞遗传学、FISH和分子方法涉及各种伴侣染色体的易位。在每种情况下，染色体易位都会导致bcr - abl融合，如发生在标准t(9;22)易位[2］．在这些变异易位中存在的第三条染色体在一些ph阳性的CML病例中是已知的。此外，3q21(3例)、5q31(2例)、7q32(1例)、8q24(3例)、10q22(9例)条带的累及在其他CML病例中也有报道[7］．然而，由于在2005年ISCN之前观察到的细胞遗传学命名的大量变异性，因此很难报告这种复杂易位病例的确切数量。

对这些易位的预后意义的评估已经在病例报告或小系列中进行了分析，给出了有争议的结果。然而，最近有报道称，变异易位患者的预后与经典的Ph值相似¹甲磺酸伊马替尼治疗易位[8- - - - - -10］．在我们的系列研究中，所有患者在接受标准剂量伊马替尼治疗后，经过12至86个月的随访，目前均处于血液学和细胞遗传学完全缓解状态。关于分子缓解，患者(d)和(e)分别在71个月和86个月后显示融合转录本完全消失。患者(a) - (c)融合转录本未完全消失，但降低水平超过2个对数。患者(a)显示较轻的复位，可能是诊断时复杂的核型所致。

在10%-15%的慢性期患者中发现der缺失(9)，在变异易位中更常见。这些缺失被认为发生在Ph¹并且已知与更差的生存有关[11］．然而，最近的一项研究表明甲磺酸伊马替尼可能克服der(9)缺失的不良预后意义[12］．在我们的研究中，没有一个患者在9号衍生染色体上有相当大的部分缺失。

总之，我们描述了5个低频复杂变异t(9;22)易位，占我们中心近7年诊断的CML病例的6%。尽管数量很少，但根据我们的经验，携带复杂Ph¹易位在血液学和临床特征上与标准易位者无显著差异。

参考文献

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