文摘

目标的工作。评价的诊断和预后能力14-3-3η蛋白质在RA早期,究其致病性和theragnostic作用,并找到其相关性建立了RA患者的疾病活动和严重程度。对象和方法:80早期RA患者,80建立了RA患者和80名健康控制纳入本研究。ROC曲线分析射频、ACCP和14-3-3η在疾病早期,和血清水平的14-3-3η评估ELISA和重新评估早期RA患者anti-TNF治疗后6个月。14-3-3的相关性η与疾病活动和严重程度的参数进行了分析。结果。Serum14-3-3η水平明显高于所有RA患者比控制 ,其敏感性为86.7%和88.3%,早期RA患者建立显著差异和射频ACCP在疾病早期,特异性为96.7%。有显著减少14-3-3η水平在第一组在治疗后6个月 ,和血清14-3-3之间有显著的正相关关系η水平和疾病活动和严重程度的参数。结论。14-3-3η可能是小说、有力和有效的诊断、预后的标志RA具有高度的敏感性,可能成为治疗RA的新目标。

1。介绍

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病,影响约占人口的1.5%。有多种病理生理因素的病因和症状,还有高异质性在整个疾病患者。严重,若不及时治疗类风湿性关节炎导致关节破坏,导致受损的身体活动和残疾(1]。现在明白疾病的结果和病人预后可以显著提高了类风湿性关节炎的早期识别和预测疾病的严重程度在诊断实施有效的治疗策略2]。

然而,风湿性关节炎的早期诊断困难是由于有限的临床症状和体征的缺失。实验室数据的关节痛患者,如类风湿因子(RF)和anticyclic citrullinated肽(ACCP),为RA并不显著。因此,有一个伟大的需要的发展和验证新的生物标志物具有预测能力的RA (3]。

射频是一种自身抗体,免疫球蛋白的Fc地区目标。射频测试60 - 86%的敏感性,建立RA为57%,早期RA,但射频测试的工具是有限的特异性低85%至70为建立和早期RA (4]。最近,在2010年,循环citrullinated肽(CCP)添加到分类标准对RA的美国风湿病学院/欧洲联盟对风湿病(ACR /欧拉)[5]。共产党的射频测试灵敏度类似建立RA(64%到88%)和早期RA (59%) (6),但其特异性(99%到90)较高的建立和早期疾病(7]。

尽管共产党比射频测试更具体的,它并不被视为替代射频。血清学检测标记都包含在ACR /欧拉RA分类标准(5),研究表明,联合使用的标记提供了更大的敏感性。然而,28 - 44%的早期RA患者经历负面测试结果,和腐蚀性RA患者可能同时保持消极的标记。因此,其他的RA标记进行了调查(8]。

14-3-3蛋白的细胞内chaperonins代表一个家庭只在真核细胞表达。七个亚型,份额超过50%的氨基酸同源性孤立:β(β),ε(ε)、γ(γ),埃塔(η),τ(τ),泽塔(ζ)和σ(σ)。14-3-3的家庭可以与200多胞内蛋白(9]。因此,参与协调一系列生物过程,包括蛋白质贩卖,信号传导,细胞骨架运输(10]。

14-3-3η蛋白质是一种新型生物标志物的检测RA。它可能扮演一个角色在刺激肿瘤坏死因子-α,金属蛋白酶以及其他炎症介质,共同侵蚀的关键。这说明与目标治疗的预后价值。血液水平的14-3-3η在RA患者往往会升高,但不与其他胶原蛋白在这些疾病11]。14-3-3的优势之一η作为RA标志是,它可以提高早期RA的辨识率。Maksymowych等人发现,增加14-3-3η射频和CCP抗体检测诊断敏感性增加早期RA患者(11]。

本研究旨在评估的作用14-3-3η在风湿性关节炎的早期诊断以及其敏感性和特异性相对传统的生物标志物。此外,我们的相关性定义14-3-3η与疾病的活动,从RA患者严重程度和超声特性建立了疾病。最后,我们澄清anti-TNF疗法的效果(道)14-3-3η水平在早期RA患者。

2。对象和方法

研究人口:80例患者早期诊断RA(我组),80例建立疾病(第二组),和80年的年龄,sex-matched健康志愿者(第三组)包括在这项研究中。所有患者选择从物理医学、风湿病、和康复诊所,坦塔大学医院。伦理批准获得医院伦理研究委员会的坦塔大学医学院批准代码:32768/12/20。所有调查都向病人解释,每个病人进入研究得知,给书面的知情同意,审判是根据赫尔辛基宣言的原则进行的。

RA患者诊断根据美国风湿病学院(ACR) /欧洲联盟对风湿病(欧拉描述)2010 RA(标准5),和其他自身免疫性疾病患者,感染,骨质疏松症和恶性肿瘤被排除在外。

2.1。方法

2.1.1。组我(早期RA≤6个月)

实验室评估射频、ACCP和14-3-3η血清水平进行了计算每个在早期疾病发病的敏感性和特异性。血清水平的14-3-3η被重新评估anti-TNF治疗后6个月(道;恩利的剂量50毫克/星期SC)。

实验室评估血清14-3-3η水平:静脉血样本收集和离心分离血清的1000克15分钟。血清样本被冻结在−70°C到用于测定血清14-3-3η使用人类的14-3-3蛋白水平(14-3-3 Pro)酶联免疫试剂盒的猫没有。使用double-sandwich MBS269690 ELISA技术。预镀抗体是一种人类14-3-3 promonoclonal抗体,检测抗体是与生物素标记的多克隆抗体。样品和生物素标记抗体加入ELISA板井和PBS或TBS冲毁。然后Avidin-peroxidase轭合物被添加到ELISA井秩序;三甲基质用于着色后反应物由PBS或TBS彻底洗掉。三甲变成蓝色的过氧化物酶催化作用下最后变成黄色的酸。样品的颜色深度和测试因素呈正相关(12]。

2.1.2。第二组:临床和实验室评估

完整的病史和通用和运动系统检查:评估疾病活动的活动分28 (DAS-28):

DAS-28 = 0.56√√(TEN28) + 0.28 (SW28) + 0.70 Ln (ESR) + 0.014 (13]。严重性的评估类风湿性关节炎严重程度量表(ras)包含三个尺度(疾病活动、功能障碍和物理伤害)进行了使用范围的1 - 100,得分1的意思是没有证据的条件下,和100年意味着最大程度的进展(14]。血清水平的射频、ACCP和14-3-3η进行评估以确定其敏感性和特异性建立疾病患者在早期患者与疾病发生和ESR、CRP的实验室评估。

影像学评价:普通x射线的两只手和手腕,执行16个关节进行评估在每只手使用修改后的MLS拉森得分为1995分,最后得分范围从0到16015]。

超声评价:系统选择灰度超声(GSUS)和能量多普勒超声(pdu)检查在临床上最影响腕关节,以标准化的方式基于指南的欧洲联盟对风湿病(欧拉描述)使用关节炎症和损伤参数(滑膜增厚,关节积液、骨侵蚀和能量多普勒PD活动):(1)滑膜增厚:nondisplaceable和可压缩可视化异常性关节内的组织,在纵向和横向的飞机,可以用毫米,2)关节积液:可压缩消声intracapsular区域是半定量的检查如下:等级0:没有积液;1级:最小的;2级:温和的(没有膨胀的关节囊);和三年级:广泛的(与关节囊膨胀),3)多血管能量多普勒(PD):半定量的PD的分级评估如下:等级0:没有在滑膜流;1级:单船信号;2级:不到一半的滑膜的面积是满船信号;和三年级:超过一半的面积满船的信号,和4)骨侵蚀分数:中断两个垂直平面定义为骨表面的侵蚀,评估如下:等级0:正常的骨表面;1级:骨表面不规则性在两架飞机没有残疾;2级:在两架飞机表面缺陷;和三年级:骨缺损创造广泛的骨质破坏(16,17]。

统计分析进行了使用社会科学统计软件包(SPSS)软件,16.0版本Windows (SPSS Inc .,芝加哥,伊利诺斯州,美国)。人口数据之间的病人和对照组相比,使用卡方和未配对的学生的t测试。皮尔森相关系数(r)是用来确定相关性。数据表示为一个平均数±标准差。P小于0.05的值被认为是显著和小于0.001被认为是高度显著的差异和相关性。

3所示。结果

这项研究的结果显示14-3-3非常重要的区别η、射频和ACCP对RA诊断敏感性在早期疾病发作 ,但不是在建立疾病。14-3-3的敏感性η在早期,建立了RA 86.7%和88.3%,分别。血清水平的14-3-3η在所有RA患者非常重要控制相比呢 ,有显著减少anti-TNF治疗后6个月患者早期疾病 (表1)。

关于参数建立了RA患者的活动性疾病,DAS中值为4.13,受影响最严重的手腕的滑膜厚度是2.85毫米根据超声波。大多数病人显示2级关节积液和多普勒的活动。这些患者的疾病严重程度的评估显示修改拉森的平均得分(MLS) 34和70年ras, 31.7%显示2级骨侵蚀其中31.7%(图1和表2)。

14-3-3η呈显著正相关与临床、实验室和放射学参数建立疾病患者的疾病活动和严重程度(表3)。ROC曲线分析了敏感的61.7%、68.3%、86.7%,射频,ACCP, 14-3-3η在发病早期截止值为7.93,21.20,和0.23的特异性为88.3%,95%,和96.7%,分别为(图2和表4)。

4所示。讨论

风湿性关节炎的早期诊断是现在的利益,防止关节损伤和改善临床和功能的结果。血清反应阴性的射频和ACCP在疾病早期阶段需要一个关键需要确定新的生物标志物具有高潜在在早期诊断疾病发作(18,19]。

七个亚型14-3-3蛋白家族的隔离,其中一个是14-3-3η蛋白质。这个同种型高度表达细胞外地腐蚀性RA患者关节和强烈与金属蛋白酶- 1和MMP3滑液和血清。这个特征生物疾病疾病过程中表达和致病作用[20.]。研究类风湿性关节炎患者滑液和血清显示14-3-3的两个亚型,η和η,后者的优势同种型基于质谱的数据(21]。

描述了14-3-3蛋白液的重要组成部分,所以它们在RA被认为是介导细胞外表达部分通过一个exosomal过程。外化14-3-3蛋白由于一个活跃的分泌机制发生在炎症,这是他们所提出的释放激活免疫细胞,包括树突细胞,T细胞,B细胞、巨噬细胞和上皮细胞(22]。因此,本研究旨在评估的诊断效用14-3-3η早期RA患者的蛋白质与传统的生物标志物RF和ACCP相比,它在疾病发病机理中的作用,因此,其theragnostic效用。此外,我们评估其预后的作用建立了RA患者的疾病进展。

射频敏感的早期,建立了RA患者分别为61.7%和78.3%,分别和它们之间的差异是显著的。此外,有显著差异的敏感性ACCP两组之间(68.3 -85%)。相比之下,14-3-3的区别η两组患者是微不足道的(86.7 - -88.3%)。between14-3-3的区别η、射频和ACCP在早期RA患者非常重要,指示其高诊断实用程序比其他生物标志物在疾病早期阶段。

在疾病的早期阶段,射频的特异性,ACCP, 14-3-3η分别是88.3%、95%和96.7%。此外,我们的研究结果显示,36.7%的患者在第一组- RF结果和28.8% - ACCP结果阳性14-3-3η。这个发现把人的注意力吸引到了14-3-3的价值η风湿性关节炎的早期识别。

ROC曲线分析射频、ACCP和14-3-3η在早期疾病发作产生了显著差异的结果对于灵敏度的截止值> 7.93,21.20 >,> 0.234,分别。的诊断效用14-3-3η在发病早期有效的治疗策略和更好的结果在RA患者也评估了Maksymowych等人的疾病持续时间中值< 3.5个月。的截止≥0.19 ng / mL, ROC曲线产生敏感性为63.6%,特异性为92.6%。的增量效益增加14-3-3ηACCP和射频导致72%到59%的识别速度ACCP孤独,和诊断捕获从59 - 72%提高到78% 14-3-3η添加了射频(11]。

在619年进行的一项研究主题,ROC曲线分析显示出显著的曲线下面积(AUC) 0.89的截止≥0.19 ng / mL,产生敏感性77.0%,特异性92.6% (23]。

在一项由Maksymowych et al ., 14 - 3的ROC曲线η自身抗体对早期RA与健康和disease-relevant控制了敏感性为73%,特异性为79%。不像14-3-3η蛋白质,与射频ACPA没有观察到显著相关。同样,没有明显的浓度之间的相关性观察14-3-3η蛋白质和其自身抗体。然而,他们的结合表达发现超过90%的早期RA患者(24]。虽然这些数据支持的互补方面14-3-3η生物标志物的平台,进一步验证根据OMERACT框架在14-3-3之前是必要的η生物标记物达到监控的状态标记(24]。

在当前的研究中,血清水平的14-3-3η两类风湿性关节炎患者组相比明显高于控制。同样,中值14-3-3η水平在早期RA患者明显高于disease-relevant控制(0.76 vs 0.02 ng / mL)研究Maksymowych et al。11]。这些水平是三到五倍的血清中相应的水平匹配的捐献者(21]。

在另一项研究中,619名受试者包括健康和疾病控制(与其它关节病、结缔组织疾病和自身免疫性疾病)被评估血清14-3-3η。中值14-3-3η浓度明显高于建立RA患者和健康人(1.12 vs 0.00 ng / mL)和控制(0.02 ng / mL) (22]。关于14-3-3的诊断效用η148年未分化的RA患者关节痛被招募的队列研究,以确定是否与RA的发展有关。结果表明,中值14-3-3η水平明显高于发达RA关节痛组,而14-3-3η和ACCP滴度(但不是RF)的浓度与RA的发展有关4.12和4.16的LRs (23]。

确定14-3-3的致病作用η,在体外使用人类重组细胞刺激研究进行了14-3-3η在浓度与RA患者血清中找到。研究显示,14-3-3η优先刺激细胞的先天免疫系统,导致激活MAPK / ERK等关键信号级联,SAPK /物,JAK-STAT通路,调节炎症的产生,使下降的因素负责关节损伤。此外,几个RA-relevant记录被调节到14-3-3η,包括促炎细胞因子白介素(IL) 1β、il - 6和TNF -α,以及关节退化等因素MMP-9 kappa-B配体和受体的激活核因素(RANKL)。这些因素可以被预孵化14-3-3η抗体(22]。

anti-TNF治疗后6个月,显著降低血清14-3-3η早期疾病患者发病水平,暗示作用在疾病发病机制与治疗目标和潜在疾病缓解。正在努力理解之间的相互作用14-3-3ηRA和各种趋化因子/细胞因子相关,以及具体的治疗方法如何影响14-3-3η血清水平(24]。此外,研究目前正在调查针对14-3-3的治疗潜力η体内使用胶原诱导关节炎模型(22]。

关于建立RA患者(组2),疾病活动被DAS-28临床评估(平均4.13)和超声发现。当前数据表明密歇根州立大学的一个很好的相关性与经典临床活动的措施,并在某些情况下,密歇根州立大学似乎表现得更好,并优先考虑亚临床的诊断滑膜炎,这可能帮助医生在治疗计划25]。中位数风湿性关节炎患者滑膜厚度是2.85毫米,30%的患者显示2级积液,36.6% 2级多普勒提出的活动。

我们观察到一个高度显著正相关性血清14-3-3η水平和DAS-28和超声发现在我们建立疾病的病人 。我们的研究显示显著正相关的血清14-3-3η与ESR、CRP水平( 和0.045,分别)。高CRP水平导致进步的考虑和侵蚀性的疾病,因此升高血清14-3-3η水平表明疾病进展(26]。患者的血清水平较低14-3-3η在疾病发作表现出更好的临床结果和更高的可能性实现DAS缓解标准DMARDs的反应。这是解释之间存在的相互作用14-3-3η和肿瘤坏死因子-α。更具体地说,14-3-3η能引起各种炎症因素(包括il - 6)在时尚和存在剂量依赖的相关性可能延续“细胞因子风暴”(24- - - - - -27]。

ras在RA患者的中位数是70年,它与14-3-3显著相关η血清水平。MLS在RA患者中值为34岁和31.7%的RA患者在超声检查显示2级骨侵蚀。另外,14-3-3之间有显著的正相关关系η血清水平和放射关节损伤和疾病严重程度的指标。

14-3-3η是一个强有力的,会使关节损伤upregulation存在剂量依赖的相关性因素。RA患者的初步数据分析33显示值14-3-3η水平明显高于早期RA患者影像学进展的患者没有进展(2.68 ng / ml和0.09 ng / ml) (28]。之前的队列研究是为了演示它在疾病预后中的作用,和409年早期RA患者招募。Sharp-van der Heijde影像学进展评估的分数(合成)。67%的患者是14-3-3η积极的,而在病人进行放射学5年,有显著较高的14-3-3η,但不是ACPA射频。积极的14-3-3η地位显著相关的影像学进展在年1,3,5,LR从3.8到6.8 (29日]。

Hirata等人也报道了这个正相关,越高14-3-3η基线水平,较强的协会与影像学进展(30.]。另一项研究显示的水平明显高于14-3-3η在关节损伤患者已经有影像学研究基线,以及那些发达的后续进展。单核细胞THP-1细胞系的刺激与14-3-3η在浓度相似的RA患者的血清中发现的。这导致的促炎细胞因子il - 1β、il - 6和TNF -α,以及关节退化等因素MMP-9和RANKL22]。有显著的正相关,14-3-3η射频和ACPA。

Forslund et al。31日]证明ACPA辐射变化的预测价值。其他研究调查,ACCP抗体更好的预测疾病课程3年以上(32,33]。这支持了我们的研究结果ACCP和血清14-3-3η与关节破坏。然而,几个独立的多中心研究需要扩大我们的理解的诊断,预后和theragnostic应用程序的14-3-3η生物标志物在RA早期治疗干预措施,提高疾病的结果。

5。结论

结论:14-3-3η潜在效用在风湿性关节炎的早期诊断具有较高敏感性和特异性比传统诊断的生物标志物。新增的14-3-3η作为一种新型生物标志物射频和ACCP是有益的风湿性关节炎的早期诊断和早期治疗干预,以减少疾病进展和结构性破坏。高血清水平的14-3-3η在RA患者建立疾病及其与疾病活动和严重程度的相关性反映疾病发病机制的作用,以及它对疾病进展的影响。因此,权证作为新的治疗方法的目标的关注。此外,显著降低血清14-3-3η水平对早期RA患者在6个月后anti-TNF疗法关注其在疾病的发病机理及预后中的作用。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

本文没有利益冲突有关。