文摘
背景。血清浓度的可溶性白介素受体(sIL-7R)和anti-C1q抗体最近被确认为独特的血清学标记狼疮肾炎(LN)患者系统性红斑狼疮(SLE)。在这项研究中,我们评估的相关性在系统性红斑狼疮患者血清sIL-7R和anti-C1q。方法。系统性红斑狼疮患者血清从134和84健康人群检测水平的sIL-7R和anti-C1q抗体的ELISA。sIL-7R相关性和anti-C1q自身抗体进行评估。结果。sIL-7R和anti-C1q抗体的血清浓度显著高于在系统性红斑狼疮患者和LN患者与健康人相比与non-LN /控制和系统性红斑狼疮患者,分别。此外,sIL-7R和anti-C1q浓度明显被发现与系统性红斑狼疮疾病活动以咽部分数评估。有趣的是,血清sIL-7R浓度有密切关系的水平anti-C1q抗体(,与其他血清学标记),但没有统计学上相关,包括anti-dsDNA和补充系统性红斑狼疮患者中C3和C4含量。结论。血清sIL-7R和anti-C1q抗体都与疾病活动和LN在系统性红斑狼疮患者密切相关,表明他们可能可靠的血清学标记识别系统性红斑狼疮疾病和LN患者活跃。
1。介绍
系统性红斑狼疮(SLE)是一种慢性自身免疫性疾病,能够影响多个系统和主要器官,其中狼疮肾炎(LN)是最常见的一种主要器官表现和疾病的发病率和死亡率的主要原因(1]。肾脏疾病活动的参与是最重要的一个系统性红斑狼疮患者的预后因素,和一个识别LN的系统性红斑狼疮患者具有重要的临床意义指导治疗系统性红斑狼疮的临床(2]。由于异常的血清学标志的生产广泛异构群自身抗体在系统性红斑狼疮患者,评估这些概要文件的自身抗体和疾病的临床相关性参数从而帮助识别系统性红斑狼疮患者特定的并发症的风险处于初期阶段,使临床医生能够发起一个有效的治疗策略,可能降低系统性红斑狼疮患者的发病率和死亡率(1- - - - - -4]。
有超过180自身抗体在系统性红斑狼疮患者已报告,其中抗体(自身抗体)补充C1q (anti-C1q)和核抗核抗体(ANA)和双链DNA (anti-dsDNA)促使大多数利益在临床设置(5]。在这方面,anti-dsDNA anti-C1q抗体表现出更强的协会和活跃的系统性红斑狼疮的临床特征,特别是在肾脏疾病活动,比其他血清学抗体,表明测量的一个重要价值这些自身抗体在系统性红斑狼疮患者(4,6]。的确,系统性红斑狼疮患者anti-dsDNA和anti-C1q抗体往往表现肾脏疾病和肾质量差的结果,和anti-C1q抗体血清浓度的增加往往是伴随着减少血清水平的补充C1q活跃的LN患者(7,8]。血清抗体anti-C1q因此被认为是作为预测生物标志物在系统性红斑狼疮肾耀斑,都已经被广泛地研究过了6,7,9- - - - - -15]。值得注意的是,除了anti-C1q抗体浓度的增加,血清水平的补充C1q, C3, C4往往降低系统性红斑狼疮患者(16]。C1q血清水平,因此,组合C3, C4,和/或C1q的自身抗体,dsDNA,和染色质/核小体,被评价为重要的免疫标记对系统性红斑狼疮的诊断,特别是对LN疾病(6,8,10- - - - - -12,16- - - - - -18]。
一般来说,系统性红斑狼疮是公认的疾病,主要是由于自身抗体和免疫复合物沉积。然而,最近越来越多的证据表明,细胞因子也参与系统性红斑狼疮的发病机制(1,19]。细胞因子是细胞间的沟通和协调的重要的介质之间的相互作用的免疫细胞在免疫反应中,扮演重要角色的分化、成熟,各种免疫细胞的激活。对系统性红斑狼疮,细胞因子是关键球员一般免疫失调不仅在SLE发病机制,但还在当地的炎症反应,最终导致组织损伤和器官损伤(1,19]。因此,细胞因子可能作为系统性红斑狼疮的诊断和预后预测生物标志物,以及疾病治疗(治疗靶点20.,21]。一些细胞因子进行了调查作为系统性红斑狼疮症状包括LN的生物标记物,其中白介素- 7 (IL-7) / IL-7受体(IL-7R)信号最近收到一个增加关注,由于其强大的协会与LN的系统性红斑狼疮患者的活动22- - - - - -26]。
IL-7已经证明在t细胞发育发挥着基础性的作用,体内平衡和免疫耐受27]。在生理条件下,IL-7是控制在一个有限的资源,由于主音IL-7信号可以不断给t细胞,并提供连续的生存信号幼稚t细胞。这不同于激活细胞因子,细胞因子的生产和受体表达只有调解瞬态效应后免疫激活(28,29日]。因此,减少IL-7消费lymphopenic主机顺序会导致IL-7水平升高,进而增强增生性反应弱自体抗原和结果在一个稳态扩散(30.]。几行最近的研究表明,增加水平的可溶性IL-7R (sIL-7R)在自身免疫性疾病有临床意义,包括类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化症(MS)、和系统性红斑狼疮26,31日- - - - - -33]。在这种情况下,循环sIL-7R结合IL-7和竞争细胞相关IL-7R减少过度IL-7信号复杂,因此导致已故IL-7消费,和提高整体IL-7生物利用度,因为IL-7是一种有限的资源,主要是监管水平通过受体介导。此外,sIL-7R也能够调节IL-7信号的质量,减少负面的感应调节器(24]。
对系统性红斑狼疮,责任人IL-7和sIL-7R疾病进展的研究证明了遗传协会和评估等离子sIL-7R浓度(23,24,26,34]。多态分析确定几个IL-7R单核苷酸多态性(snp)与系统性红斑狼疮的易感性和/或有关LN在系统性红斑狼疮患者24,34]。例如,王等人最近检查协会IL-7R SNP rs6897932 (C / T)对系统性红斑狼疮,发现主要的C等位基因的SNP与系统性红斑狼疮发病风险增加在中国的人口,虽然没有明显的苏格兰民族党协会和11 subphenotypes的存在,包括LN,成立(34]。在另一项研究中,Lundstrom等人测量了等离子sIL-7Rα多发性硬化(MS)患者之间的浓度(autoimmune-predisposing)和(自体免疫保护性)基因型,他们发现sIL-7R高出约三倍α在MS患者窝藏相对于那些有一个基因基因型(24]。事实上,几行最近的研究表明,系统性红斑狼疮患者的血浆sIL-7R水平升高与或预测一个系统性红斑狼疮肾炎的发生耀斑,表明血清sIL-7R浓度可能是一个潜在生物标志物具有高敏感性和特异性的诊断SLE患者LN (25,26,35]。
一个令人信服的证据表明,结合anti-C1q anti-dsDNA和/或核小体抗体与肾密切相关的疾病,可以被用作LN患者的预后6,8,11]。此外,anti-C1q抗体已经提出更强烈与肾耀斑相比其他血清学标记(36),和病人免费anti-C1q抗体不太可能有活跃肾疾病6,10,11,37]。鉴于血清anti-C1q和sIL-7R都与系统性红斑狼疮疾病活动和LN密切相关,这可能意味着anti-C1q和sIL-7R之间的相关性,这可能是一个有价值的诊断和预后标记为系统性红斑狼疮和LN。因此,有必要进一步评估的相关性anti-C1q和sIL-7R水平在系统性红斑狼疮患者血清在临床的设置。本报告的目的是首先确定关联anti-C1q血清浓度的抗体和sIL-7R血清LN和进一步评估相关性anti-C1q抗体和134年sIL-7R系统性红斑狼疮患者在一个单一的中心。我们的结果显示一个强大的协会血清anti-C1q或sIL-7R在系统性红斑狼疮患者肾脏疾病活动,这两个血清学标记也有很强的相关性与LN系统性红斑狼疮患者。
2。材料和方法
2.1。道德声明
人类血液样本收集与伦理委员会批准的协议进行的人类研究宁夏医科大学(nxmu - e2012 - 102 - p)。书面同意从每个个体获得根据伦理委员会进行的人类研究协议。18岁以下的参加者,书面通知同意从他们的监护人或父母代表孩子。所有工作人员提供的书面知情同意出版的数据。本研究的π维护人类研究记录,包括签署和日期同意文件,后十(10)年的年龄多数。伦理委员会的人类研究宁夏医科大学批准同意这个研究过程(nxmu - 2012 - 102 - e)。
2.2。血液样本
连续血液样本134系统性红斑狼疮患者样本(118女性和16个男性)收集从诊所门诊风湿病宁夏医科大学总医院的从2014年1月至2015年6月。均值±SEM对系统性红斑狼疮患者年龄时抽取样本年(12 - 68),平均持续时间的疾病(0.2至20年)。美国风湿病学院(ACR)标准被用来诊断SLE患者(38,39,根据定义的疾病活动是系统性红斑狼疮疾病活动指数(咽部)标准(40,41]。患者咽部菌≥10被定义为积极的系统性红斑狼疮。肾参与定义基于临床和实验室表现。积极LN被定义为尿蛋白排泄≥500毫克/天或细胞投38]。84年性别和年龄健康个体的血清男性和78名女性(6)也被收集。这些健康控制军团招募从那些经历了全面的医疗检查宁夏医科大学总医院的,谁没有慢性疾病史和家族史的自身免疫性疾病。个人参与这个研究的人口统计数据表中列出1。所有血清和肝素治疗冻结在100年μL整除−80°C到被分析。没有这些个体之间的遗传关系。所有的样品被收集在一个知情同意。
2.3。检测Anti-C1q免疫球蛋白自身抗体
anti-C1q血清抗体的浓度测量的酶联免疫吸附试验(ELISA)使用商用工具根据制造商的指令(INOVA诊断Inc .)、圣地亚哥、钙、美国)如前所述在我们的实验室6]。短暂,血清稀释1/100,然后添加到每个;井用高离子强度缓冲孵化后在室温下1 h。然后,辣根过氧化物酶耦合反免疫球蛋白分子共轭工具包提供的作为第二抗体。30分钟孵化后,井被广泛洗了三遍,紧随其后的100年μL三甲苯溶液和孵化在100年之前30分钟μL停止解决方案添加到每个。当时光密度测量在450海里。吸光度(通过标准曲线)被转化为一个集中的截断值10 AU /毫升(由制造商决定的)。anti-C1q的截止值在本研究< 10 AU /毫升,≥10 AU / mL被视为积极的按照制造商的建议。其他实验室数据,包括血清补体C3、C4,血红蛋白,抗核抗体(ANA), anti-dsDNA抗体,antiribonucleoprotein,细胞核周围的antineutrophil细胞质抗体(pANCA),抗体干燥综合征(SSA)和B(单边带),和anti-Smith (Sm),分别也记录(表1)。
2.4。ELISA对sIL-7R
血清浓度sIL-7R决心使用biotin-avidin夹心酶联免疫试剂盒的人类IL-7R根据制造商的指令(Elabscience生物技术,武汉,中国)。在这个工具包,第一个anti-IL-7R抗体作为捕获抗体;sIL-7R被发现与生物素化的anti-IL-7R抗体生成比生产其他物种IL-7R捕获抗体。Streptavidin-HRP应用于确定抗原抗体结合的丰富之前报道(33]。
2.5。RNA隔离和实时定量rt - pcr
外周血单核细胞总RNA (PBMCs)纯化使用EasyPure从全血血RNA设备/制造商的指令(Transgen生物技术,北京)。质量化验RNA的RNA完整性计算数量(RIN)。高质量的RNA (RIN值大于9.0)被用于逆转录合成第一链cDNA逆转录使用M-MLV逆转录酶(豆类,大连,中国)。实时定量rt - pcr(存在)是执行在罗氏Lightcycler 2.0使用豆类SYBR绿色我工具包(豆类,大连,中国);PCR扩增的热循环条件是30秒95°C, 40 95°C的周期为5秒,60°C,持续20秒,72°C, 20秒,紧随其后的是40°C为20分钟。引物的序列集用于内部控制β肌动蛋白和sIL-7R互补脱氧核糖核酸扩增如下:β肌动蛋白:转发:5′AGCGAGCATCCCCAAAGTT3′和反向:5′GGGCACGAAGGCTCATCATT3′;sIL-7R:转发:5′GGATGTAGTCATCACTCCCAGAAAG3′和反向:5′GGACCTGGAAGAGGAGAGAATA3′(26]。内部控制每个反应总是包括规范化对RNA的完整性,样品装入和inter-PCR变化。相对表达比率计算实时PCR效率和交叉点的偏差sIL-7R基因对β肌动蛋白基因。PCR的特异性是由PCR产品的排序。
2.6。统计分析
所有实验室数据输入和提取棱镜(第5版)(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)和/或SPSS为Windows(17.0版)(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。统计评估的数据是由一个t -测试比较两组之间的差异。定性变量之间的关系被斯皮尔曼相关评估。数据提出了均值的平均值±标准误差(SEM)。一个小于0.05被认为是具有统计学意义的价值。;;和(NS:无统计差异)。
3所示。结果
3.1。系统性红斑狼疮人口统计数据
未选中的系统性红斑狼疮人口研究研究包括118年代女性(86.76%)和16(13.24%)的男性的平均年龄年(12 - 68),疾病的平均持续时间(0.2至20年)。咽部的均值得分系统性红斑狼疮(范围0 - 36)。人口统计的数据和其他系统性红斑狼疮患者的临床参数和LN non-LN被展示在表1。
3.2。血清水平的sIL-7R和Anti-C1q抗体在系统性红斑狼疮患者
越来越多的证据显示sIL-7R浓度的增加和anti-C1q抗体在系统性红斑狼疮患者血清,并与系统性红斑狼疮疾病活动和LN (6,26,35]。符合这些发现,高架sIL-7R也决定与LN系统性红斑狼疮患者,相比non-LN系统性红斑狼疮患者(ng / mL和ng / mL,)和健康人群(ng / mL和ng / mL,)(图1(一))。血清浓度的sIL-7R non-LN系统性红斑狼疮患者还与健康对照组相比更高(ng / mL和ng / mL,)(图1(一))。有趣的是,大量的sIL-7R成绩单的PBMCs表现出这些组之间无统计学差异(图1 (b)),它是在协议与发现报道Badot et al。26]。符合我们之前的结果(6咽部菌群),分数和anti-C1q浓度要大于LN系统性红斑狼疮患者比non-LN系统性红斑狼疮患者和健康人(图2)。在系统性红斑狼疮患者咽部菌平均分数LN与系统性红斑狼疮患者没有LN (与,)(图2(一个)和表1)。anti-C1q抗体的效价与LN与系统性红斑狼疮患者没有LN是系统性红斑狼疮患者非盟/毫升和非盟/毫升,;在没有LN的系统性红斑狼疮患者和健康人非盟/毫升和非盟/毫升,;与LN系统性红斑狼疮患者和健康人群非盟/毫升和非盟/毫升,(图2 (b)和表1)。
(一)
(b)
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(b)
3.3。血清的补充C3和C4水平,Anti-dsDNA,抗核抗体在系统性红斑狼疮患者
低血清浓度的补充C3和C4 LN患者比那些没有LN疾病(数字3(一个)和3 (b)、表1)。系统性红斑狼疮患者之间的C3浓度与LN和没有LNμ克/毫升,μg / mL,分别为()(图3(一个));系统性红斑狼疮患者之间的C4含量与LN和没有LNμ克/毫升,μg / mL,分别为()(图3 (b))。ds-DNA抗体和抗核抗体(ANA)是最普遍的自身抗体中观察到这些系统性红斑狼疮组由ELISA,被发现在100%(134/134)和97.02%(130/134)的系统性红斑狼疮患者,分别(表1)。符合anti-C1q抗体的浓度检测系统性红斑狼疮,anti-dsDNA和安娜是适度高滴度的系统性红斑狼疮患者与LN与那些没有肾介入相比,但无统计差异决定在这项研究中,分别为(数字3 (c)和3 (d)、表1)。anti-dsDNA抗体的滴度国际单位/毫升与LN和系统性红斑狼疮国际单位/毫升系统性红斑狼疮不LN ()(图3 (c));安娜的滴度在与LN和系统性红斑狼疮在系统性红斑狼疮没有LN ()(图3 (c))。其他自身抗体,包括心磷脂抗体(ACL),胞质antineutrophil细胞质抗体(cANCA),细胞核周围的中性粒细胞胞质(pANCA)核糖体P-proteins (Rib-P)核糖核蛋白,干燥综合征A和B,也在系统性红斑狼疮患者中发现,表中列出1。值得注意的是,系统性红斑狼疮患者之间的显著差异和LN non-LN只观察血清sIL-7R, anti-C1q,补体C3。
(一)
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3.4。咽部成绩的相关性sIL-7R和其他血清学标志物
为了揭示循环生物标记对系统性红斑狼疮的临床意义,咽部成绩之间的相关性和一些血清学标志物,包括sIL-7R进行评估(图4)。咽部分数和sIL-7R之间的相关系数,安娜,anti-C1q抗体,anti-dsDNA抗体()(图4(一)),()(图4 (b)),()(图4 (c)),()(图4 (d)),分别。感兴趣的,这些血清标记物的浓度或浓度与咽部分数有显著相关性。
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3.5。之间的正相关血清sIL-7R和Anti-C1q抗体在系统性红斑狼疮患者
我们下一个试图分析sIL-7R是否与其他血清生物标志物。sIL-7R和anti-C1q抗体之间的相关系数,anti-dsDNA抗体,C3和C4含量()(图5(一个)),()(图5 (b)),()(图5 (c)),()(图5 (d)),分别。感兴趣的,只有anti-C1q抗体显示统计学意义与sIL-7R(图5(一个))。没有明显关联发现sIL-7R和血清学标志物之间除了anti-C1q抗体。安娜也没有相关sIL-7R(数据没有显示)。这些数据暗示anti-C1q抗体的结合和sIL-7R可能提高特异性识别的活跃的系统性红斑狼疮和LN患者。
(一)
(b)
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4所示。讨论
sIL-7R是小说循环生物标志物的诊断和预后价值系统性红斑狼疮患者的疾病活动和肾耀斑。在这个报告中,我们评估sIL-7R的血清浓度和anti-C1q自身抗体和分析相关性的sIL-7R系统性红斑狼疮疾病活动(咽部分数)和其他在134年系统性红斑狼疮患者血清生物标志物。结果表明,sIL-7R和anti-C1q都非常活跃的系统性红斑狼疮患者和LN升高相对不活跃的系统性红斑狼疮患者和non-LN,和健康的个人控制。此外,sIL-7R的血清水平和anti-C1q抗体在系统性红斑狼疮患者咽部菌分数呈正相关。有趣的是,sIL-7R显示一个强大的协会与血清anti-C1q抗体在系统性红斑狼疮患者,这意味着他们可能在系统性红斑狼疮,新颖的生物标志物和结合sIL-7R anti-C1q抗体,或其他血清学标志物,可能增加患者的诊断特异性识别活跃的系统性红斑狼疮或LN。从其他组这样的观察结果是一致的6,10,12,14,23,26,35]。
自参与肾耀斑在系统性红斑狼疮疾病代表一个治疗的主要并发症,早期识别LN的指导专家在临床的早期干预。引人注目的研究表明,anti-dsDNA和anti-Sm抗体是有效的血清学标志物识别活动的系统性红斑狼疮和LN活动(42]。然而,不同的化验anti-dsDNA抗体和补充C3和C4对诊断SLE疾病活动产生重大影响的敏感性和特异性(16]。血清学指标变化的系统性疾病活动不能准确反映系统性红斑狼疮的活动。这些生物标记并不一定与活跃的肾脏疾病,尽管他们可能是一个高预测负值在系统性红斑狼疮(43]。此外,尽管renal-specific血尿和蛋白尿的量化显然与肾小球病变的存在,他们可能从肾小球损害的结果而不是炎症。重复活检标本的组织学评估因此通常所需的评估肾在系统性红斑狼疮疾病活动。
最近,一个高水平的抗体C1q经常被观察到活跃的系统性红斑狼疮患者的血清LN,这是与LN的hypocomplementemia和发展密切相关,和系统性红斑狼疮患者免费这些抗体很可能有活跃的肾耀斑(2,3,6,10,44- - - - - -46]。机械化,高架anti-C1q可能诱发C1q-anti-C1q复合物的形成,促进炎症介质的产生,进而抑制活化的补充和免疫复合物的间隙,顺序会导致进一步释放自身抗原,自身抗体的生产,和复合物的形成,最终激活疾病,导致组织损伤(47]。关于hypocomplementemia, anti-C1q可以激活经典通路和凝集素途径而不是替代途径的补充,根据anti-C1q immunoglobulin-class曲目在系统性红斑狼疮患者的血清,对系统性红斑狼疮hypocomplementemia anti-C1q(表明一个重要的角色48]。在目前的研究中,较多的anti-C1q活跃的系统性红斑狼疮患者中也检测到抗体和LN,与健康人群相比,那些不活跃的系统性红斑狼疮和nonrenal参与。这个发现支持这一事实的观点anti-Clq抗体单独或结合其他血清学标记可以作为一个重要的诊断参数识别系统性红斑狼疮患者与活动性疾病和LN (2,3,6,8,10,11,15]。
除了anti-C1q自身抗体,某些细胞因子也可以作为血清学标志物监测疾病活动和预测疾病的严重程度。在这些血清细胞因子,sIL-7R最近刺激增加兴趣血清学标志,由于其强大的协会与自身免疫性疾病和肾耀斑活动的系统性红斑狼疮患者(24,26,31日,35]。在当前背景下,增加循环sIL-7R浓度可以加强IL-7生物活性,促进自身免疫在活的有机体内通过一种机制,通过这种机制sIL-7R能够与细胞相关IL-7受体和减少过度IL-7消费,按顺序增强弱自体抗原的t细胞增殖反应,导致自身免疫性疾病,如1型糖尿病,风湿性关节炎,女士,系统性红斑狼疮(24,25,30.]。这个概念进一步支持多态分析人类女士和系统性红斑狼疮,多态性的IL-7R与对自身免疫性疾病的易感性有关,如系统性红斑狼疮(24,34]。
关于循环sIL-7R的浓度,观察是高架在滑膜组织和血清的RA患者(31日,49,50(女士)和患者24和系统性红斑狼疮26,35]。重要的是,血清水平sIL-7R被发现强烈与系统性红斑狼疮患者的疾病活动和肾耀斑(26,35),这是符合RA患者的发现,在人血清sIL-7R浓度增加与贫穷有关反应(甲氨蝶呤和肿瘤坏死因子抑制剂中)治疗(31日]。在目前的研究中,一个显著更高层次的sIL-7R也发现在系统性红斑狼疮患者血清LN, non-LN患者相比,也积极与疾病活动由咽部分数。这些研究,我们表明,血清sIL-7R可能是一个独特的替代标记用于访问在系统性红斑狼疮患者肾耀斑。此外,sIL-7R和其他生物标志物如anti-C1q anti-dsDNA和/或补充C3和C4可能增加识别的特异性主动LN与复杂的疾病表现(系统性红斑狼疮患者35]。特别是anti-C1q的效价是观察到积极与血清浓度sIL-7R在这项研究中,这意味着sIL-7R和anti-C1q可能提高LN使用血清学诊断和预后的特异性生物标志物在临床的设置,需要进一步调查。
有趣的是,大量的IL-7R成绩单不是PBMCs从统计上改变的LN患者与那些没有LN和控制个体相比,在分歧与蛋白质浓度检测血清,但符合这一发现报道Badot et al。26]。加上IL-7R在肾血管周围细胞的表达,这个观察可能表明sIL-7R浓度升高患者的血清LN反映肾细胞的激活(26]。
5。结论
总的来说,这项研究在134年系统性红斑狼疮患者进一步证实了以前的发现相关的血清sIL-7R浓度与系统性红斑狼疮疾病活动和LN。有趣的是,血清sIL-7R水平呈正相关的丰度anti-C1q抗体在系统性红斑狼疮患者。本研究因此sIL-7R支持的事实是一个独特的血清学标记为系统性红斑狼疮疾病活动和LN和sIL-7R和其他标记,如anti-C1q,可能会增加疾病的特异性评估活动系统性红斑狼疮患者在临床的设置。本研究的局限性包括系统性红斑狼疮的事实,只是一个小尺寸样品进行了研究,并随访数据也缺乏;LN活动主要是由实验室参数和临床表现而非致病性分析肾活检。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
刘Shuhong Chi和小明的构思和设计实验;Shuhong太极和薛京分析数据,起草论文;冯,气,静雪,彩霞朱、选手,和李叫海波进行实验,获得数据;Xuemei Wang Yurong张Jijuan杨Shaolan周,Lijuan杨和陈霁收集样本;小明刘解释数据和批判性的修订。所有作者阅读和批准的最终版本。Shuhong Chi和薛京同样这项工作。
确认
这项工作是由宁夏自然科学基金的资助(NZ1213) Shuhong太极拳。