增加循环Th17细胞、血清IL-17A和IL-23的动脉炎

文摘

介绍。Th17,γδ在外周血T、NK和NKT细胞和血清IL-17 IL-23的动脉炎(TA)测量和与疾病相关的活动。方法。Th17 (anti-CD3APC CD4PECy7 IL-17PE), NKT, NK (anti-CD3APC CD56FITC)γδT (anti-CD3FITC和γδTCRAPC)细胞被枚举通过流式细胞术患者外周血30 TA (ACR1990标准)和20名健康对照组,血清ELISA IL-17和IL-23测量。与疾病活动(NIH标准,ITAS2010)分析(使用非参数测试,中位数和四分位范围)。结果。患者的平均年龄25年(女性);症状持续时间是年。13没有免疫抑制剂;12活跃(ITAS2010≥4)。Th17细胞的百分比显著扩大在TA(病人2.1(1.5 - -3.2)与控制0.75 (0.32 - -1.2);在其他细胞群)无差异。血清IL-17和IL-23 (pg / mL)的病人(6.2(4.6 - -8.5)和15(14.9 - -26.5),职责)明显高于()比对照组(3.9(3.9 - -7.3)和检测的中值,分别地)。Th17细胞亚组分析显示不相关,血清IL-17 IL-23与疾病活动或药物,药物治疗之前和之后也没有显著差异。结论。有显著的扩张Th17细胞和血清IL-17和IL-23水平升高在TA患者与健康对照组相比。

1。介绍

Takayasu指出动脉炎(TA)是一种罕见的肉芽肿性大血管血管炎(LVV)的病因不明。助教的发病机制尚未明确阐明;先天和适应性免疫。先天免疫细胞,γδ(γδ)T淋巴细胞和自然杀伤细胞,增加主动脉组织切片的TA (1]。适应性免疫中也扮演了重要的角色在TA的患者外周血CD4的比例增加⁺/ CD8⁺T细胞(2]。辅助细胞产生干扰素-γ(Th1细胞)促进TA的肉芽肿性炎症。研究巨细胞动脉炎(GCA),其他变种的LVV,显示增加Th1和Th17(辅助17细胞,产生IL-17A)外周血和升高血清干扰素-γ和IL-17A3]。最近的研究表明il - 6受体封锁的功效(叫)耐火TA (4]。il - 6的倾斜天真辅助细胞Th17表型,由IL-23分泌抗原呈递细胞(5,6]。自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T (NKT细胞),γδT细胞也产生IL-17A [5,7]。自从IL-17A尚未明确定义的角色在助教,我们提出研究细胞群,在外周血IL-17A生产商,也就是说,Th17细胞,NK细胞,NKT细胞,γδT细胞,患者的血清水平的IL-17A和IL-23助教,并寻找与临床疾病的关系的活动。

2。材料和方法

研究机构伦理委员会的批准,SGPGIMS,勒克瑙(伦理委员会2013 - 24 - dm exp)和执行按照道德标准制定1964年的赫尔辛基宣言及其后来的修正案。连续30个病人履行1990年美国风湿病学院助教(标准8)后被包括寻求知情同意。相比之下,20名健康对照组相似的年龄和性别都包括在获得知情同意。红细胞沉降率(ESR)测定魏氏的抽样方法,所有的病人在时间。临床活动评估使用ITAS2010 ITAS-A [9),国家卫生研究院标准(10]。1.0毫升的肝素化全血收集和流式细胞仪立即进行枚举下细胞群研究。血清是储存在−IL-17A和IL-23估计80°C。10个病人呈现给我们的第一次被诊断出患有Takayasu指出动脉炎(TA);因此他们没有治疗前(即。首次治疗)。活动性疾病的临床评估开始理所当然的免疫抑制治疗。他们当作每标准实践在我们的诊所每周口服甲氨蝶呤(15 - 25毫克/周)和强的松(1毫克/公斤/天为6周之后,逐渐锥度7.5毫克/天/ 3到6个月)。对于这些患者来说,重复的血液抽样完成后3个月与基线比较样本在接受免疫抑制剂。使用图表分析都使用非参数测试垫棱镜软件版本6.0 e(值表示为中位数和四分位范围在括号Mann-Whitney测试用于组间比较)。

2.1。流式细胞仪分析细胞子集

2.1.1。Th17细胞

肝素化全血培养完整的RPMI介质和10% FCS的比率1:1激活了50 ng / mL十四烷酸佛波醇酯(PMA;美国圣路易斯σ)和1μg / mL ionomycin(美国圣路易斯σ)6小时和高尔基体插头2μ美国圣路易斯M莫能菌素(σ)添加过去4四个小时的激活。细胞surface-stained PECy7-labeled单克隆anti-CD4和APC-labeled单克隆抗体anti-CD3 (BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)其次是红细胞(RBC)溶解使用流式细胞仪赖氨酸溶液(BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)。洗后用磷酸缓冲盐(PBS),这些细胞被固定使用一个固定的缓冲区(ABD Serotech Leucoperm,圣地亚哥,美国),洗两次与PBS (pH7.2, 0.15米)。透化作用的细胞被permeabilized缓冲区(ABD Serotech Leucoperm,圣地亚哥,美国)和藻红蛋白-细胞染色(PE)标记单克隆抗体IL-17A。细胞被洗和resuspended PBS。

2.1.2。γδT细胞

100微升肝素化全血与FITC-labeled surface-stained anti-CD3抗体和APC-conjugated反γδ细胞受体(BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)和细胞溶解洗如上所述。

2.1.3。NK和NKT细胞

100微升肝素化全血与APC-labeled surface-stained anti-CD3和FITC-labeled anti-CD56抗体(BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)和细胞溶解洗如上所述。在每个试验中,标记是基于数据来自isotype-specific免疫球蛋白抗体。

100000事件对Th17细胞和50000事件γδT细胞、NK和NKT细胞。NK细胞CD3被确定⁻CD56⁺,NKT细胞CD3⁺CD56⁺(在淋巴细胞门),γδT细胞是γδ识别和CD3⁺(CD3门),和CD3⁺CD4⁺细胞阳性IL-17被确定为Th17细胞(CD3门)。收购的细胞是贝克曼库尔特流式细胞分析仪由家和分析软件。

2.1.4。血清IL-17A和IL-23

IL-17A和IL-23衡量ELISA按照制造商的说明书(美国圣地亚哥eBiosciences)(血清IL-17A敏感性,4 pg / mL,血清IL-23 15 pg / mL)。

3所示。结果

病人的人口学特征和控制详细表1。两人都是类似的年龄和性别分布。

没有显著差异在NK, NKT(图1),或γδT细胞(图2)之间的病人和控制。然而,Th17细胞显著扩大TA患者(3.1倍高的病人与控制(与%,分别地。))。同样显示显著升高患者血清IL-17A水平相对于控件(更高的病人和对照组(1.62倍与pg / mL,职责),)。血清IL-23在14个病人和可检测的控制,和病人的水平明显高于控件(更高的病人和对照组(1.75倍与pg / mL,职责),)(图3)。Th17细胞,血清IL-17,或IL-23与ESR没有显著关联(皮尔逊相关系数的−0.08−0.34−0.21,分别地。对于所有),ITAS2010(皮尔逊相关系数−0.23,+ 0.05,和0.25−,职责。),或ITAS-A(皮尔森相关系数−0.25−0.02−0.26,分别地。对于所有)。之间没有显著的相关性明显Th17细胞和血清IL-17(皮尔森相关系数−0.11,)或IL-23(皮尔逊相关系数+ 0.37,)。活跃其中13例患者评估NIH标准,和12积极评估ITAS2010≥4。没有显著差异的数量Th17细胞或血清IL-17A和IL-23之间积极或不活跃的病人。不是在免疫抑制药物,其中13例患者和比较Th17细胞和血清IL-17A和IL-23与患者免疫抑制显示无显著差异(表2)。

此外,我们相比比例的患者积极(由国家卫生研究院标准)和免疫抑制药物以及ITAS2010 ITAS-A,血清水平的IL-17A IL-23,子组的患者Th17细胞扩张(定义为Th17细胞水平大于2 SD的平均值控制)和那些没有,不能证明这两个子组(表之间的任何差异3)。

10个病人来说,我们以前成对样品和免疫抑制(强的松和甲氨蝶呤)3个月后,Th17细胞治疗后下降。血清IL-17A水平保持相似,并且血清IL-23在3例检测到免疫抑制后也没有。这些差异没有达到统计学意义(图4)。然而,事后权力分析显示,这项研究没有足够的动力来区分的影响药物Th17细胞的水平和血清IL-17 IL-23水平。

4所示。讨论

我们发现增加患者的血清水平的IL-17A和IL-23 TA与控制。增加的水平与整体相关疾病活动状态和成为正常的免疫抑制治疗。我们还发现Th17细胞扩张,增加生产IL-17,但不是与NK, NKT或γδT细胞(其他生产商的IL-17A)外周血。在immunosuppressive-naive病人的一个子集,似乎没有差异Th17细胞免疫抑制之前或之后,serum-IL-17A或IL-23。

我们的发现证实了最近的一份刊物Saadoun等人研究T细胞数量和细胞因子显示增加Th17细胞TA患者(11),在体外刺激显示增加IL-17A和IL-23水平与健康对照组相比。然而,他们展示了更高的体外生产IL-17A活跃TA患者(由国家卫生研究院标准作为评估)与缓解相比,与我们的研究结果。没有差异,Th17细胞,血清IL-17A, IL-23免疫抑制的病人。Alibaz-Oner等人探索TA患者血清细胞因子的水平,与我们的研究结果相反,他们没能证明增加血清IL-23水平与健康对照组(12]。他们没有研究血清IL-17A病人。我们研究的力量是我们评估水平的Th17细胞,血清IL-17, IL-23一亚组病人之前和之后的免疫抑制,不能证明不同。

甘氨胆酸的,Th17细胞的扩散和增加血清IL-17控制相比,已经证明,这些水平抑制皮质类固醇使用(3]。有趣的是,我们的研究证实了相反的研究结果在助教11),其中循环Th17细胞并不抑制与免疫抑制药物的使用,包括糖皮质激素。这可能表明,Th17细胞TA和GCA皮质类固醇治疗有不同的反应,尽管都被归类为大型船舶vasculitides。

最近的一项研究显示,增加IL-17 mRNA水平颞动脉活检样本相比,控制尽管外周血IL-17水平被类似于控制。IL-17 mRNA水平升高在颞动脉实际上预测持续响应性糖皮质激素治疗(13]。甘氨胆酸IL-17多态性与[14最近在TA [],15]。研究发病机理的助教是有限的可用性主动脉组织样本(16]。然而,最近的一项研究显示表达式的IL-17A主动脉组织切片的活跃TA患者(11]。

NK细胞和γδT细胞(其他生产商的IL-17A)已被证明是增加血管组织切片从TA患者,但是我们无法证明NK细胞或γδT细胞扩张外周血与控制。助教的疾病进程源于大型船只的城墙。在外周血细胞因子和细胞水平的变化只是一个代理这些变化在主动脉组织,可能不反映在组织层面。这也许可以解释为什么没有明显相关性Th17细胞和血清水平的IL-17,或不同疾病活动或药物的摄入量。疾病的临床评估活动助教是不完美的,是一个正在进行中的工作17]。事实上主动脉活检显示活跃的炎症TA患者正常的ESR (18]。

Th17扩张血管栓中也得到了证实变量,也就是说,遗传病的疾病19]。在小血管vasculitides, Th17扭曲已经证明在不活跃的肉芽肿患者polyangiitis(瓦格纳)和主动与polyangiitis嗜酸性肉芽肿病20.]。Th17细胞仍然升高ANCA血管炎患者在活动性疾病以及缓解,类似于助教(我们的发现21]。

确切的致病Th17细胞扩张TA的意义还不清楚。从TA患者主动脉活检显示中性粒细胞浸润在血管病变(1]。Th17细胞通过分泌IL-17A,可以招募中性粒细胞的血管炎症,IL-23有助于维持Th17细胞的人口。因此,与主动脉活检证实的确切作用需要进一步定义Th17细胞TA的发病机理。

罕见的案例报告巴尔病毒引起的大血管动脉炎(22和柯萨奇病毒23)描述了文学。助教的病因尚不清楚,其中一个假说,从这样的病例报告,是一种病毒感染引发血管炎。Th17细胞与病毒持久性(24];因此助教Th17细胞可以增加我们的发现表明病毒持久性机制驱动的助教。

最近的文献表明il - 6受体封锁的功效(叫)难治性患者助教4]。il - 6, il - 6受体,天真的辅助细胞上表达,倾斜分化对Th17子集。因此我们发现Th17扩张和增加血清IL-17助教可能相关性解释在TA叫疗法的疗效。针对新兴Th17-IL-17 spondyloarthropathies靶向治疗(ustekinumab,抗体共同p40亚基IL12和IL-23;IL-17A secukinumab,抗体;brodalumab,抗体IL-17受体拮抗剂)25),我们的研究结果增加IL-17和IL-23 TA在耐火助教提供潜在的新的治疗方法。

我们的研究的局限性是一个相对较小的样本大小。然而,这必须考虑的事实,助教是一种罕见的大血管血管炎。同时,我们没有测量血清c反应蛋白,而是ESR测量使用标准化技术。缺乏主动脉活检样本研究Th17细胞和IL-17 IL-23 mRNA表达是我们研究的另一个限制。

最后,我们发现增加Th17细胞和血清IL-17A IL-23助教提供新的见解罕见的大血管血管炎的发病机制。缺乏对Th17细胞在接受免疫抑制的病人中,甘氨胆酸与,让人们相信假设TA和GCA pathogenetically不同。组织层面研究先天和适应性免疫细胞和细胞因子的作用将提供进一步的支持Th17细胞这种疾病。

信息披露

当前所属杜尔迦Prasanna Misra:临床免疫学、贾瓦哈拉尔研究所研究生医学教育和研究(极少),Puducherry - 605006,印度。

相互竞争的利益

作者都没有任何利益冲突声明。

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