微rna - 520 a抑制非小细胞肺癌的发病和进展通过针对RRM2 / Wnt轴

文摘

小分子核糖核酸(microrna)调节多种细胞的行为,和他们的异常表达是经常与疾病进展相关。本研究关注mir - 520 a的影响在非小细胞肺癌(NSCLC)的发展和分子参与。从24例非小细胞肺癌患者肿瘤和正常组织收集。肿瘤组织和正常组织之间的差异表达microrna是利用基因芯片筛选,筛选和mir - 520 a是肿瘤样本中表达明显不佳。人工upregulation mir - 520——降低扩散、迁移和入侵,和抵抗死亡的非小细胞肺癌A549和H460细胞MTT, EdU标签,transwell,分别和流式细胞术分析。mir - 520 a upregulation体内抑制异种移植肿瘤的生长和转移。综合生物信息学分析和双荧光素酶化验表明,mir - 520 -目标核苷酸还原酶亚基2 (RRM2) mRNA和灭活Wnt /β连环蛋白在非小细胞肺癌细胞信号通路。Upregulation RRM2增强的非小细胞肺癌的恶性行为,但RRM2被封锁的致癌效应mir - 520 a超表达。最后,本研究证明,mir - 520抑制非小细胞肺癌进展通过抑制RRM2和Wnt信号通路。本文为NSCLC的治疗可能会提供新的见解。

1。介绍

肺癌(LC)是一种最普遍和威胁生命的癌症类型,估计占近四分之一的癌症相关的死亡率在2020年(1]。根据病理类型,LC是分为两个主要的亚型包括非小细胞肺癌(NSCLC,占所有病例的将近85%)和小细胞肺癌(15%的病例)2]。在中国,LC在所有癌症死亡率最高(3]。尽管改进传统的治疗方法包括手术、放疗、化疗,LC患者的治疗结果仍然是不利的(4]。一个主要原因是,相当数量的LC患者在最初诊断晚期转移性属性,和这些患者的总体5年生存率极低约5%1]。识别关键分子参与LC的生长和转移是非常重要的开发新的治疗选择。

基于基因的治疗一直是一个有前途的目标疾病治疗和引起了广泛关注。大约97%的人类基因组非编码(nc) rna转录,可以调节的分子过程DNA-RNA-protein水平(5]。小分子核糖核酸(microrna)主要研究短ncRNAs以他们的能力在控制基因表达的主要相互作用3 - - - - - -UTR目标mrna (6]。由于强有力的gene-modifying功能,microrna可以调节不同的基本细胞过程包括细胞凋亡、增殖,维持细胞分化,肿瘤发生在一些癌症包括信用证7]。微阵列分析在这项研究中发现mir - 520 A是一个不善表达异常的microrna在NSCLC组织。mir - 520已经证明是一个肿瘤抑制剂在许多人类恶性肿瘤(8- - - - - -11]。Downregulation mir - 520 - 3 - p的其他RNA转录被建议促进非小细胞肺癌的进展(12,13]。然而,mir - 520的独立的角色——一个在非小细胞肺癌和下游分子还没有充分的探讨。在这里,我们的综合生物信息学分析表明,核苷酸还原酶亚基2 (RRM2) mRNA mir - 520 a的潜在目标记录。RRM2表明在许多恶性肿瘤,如胃癌致癌作用(14和胰腺癌15]。在此,我们假设microrna - 520 a通过抑制RRM2抑制非小细胞肺癌的进展,细胞和动物实验来验证这个假设。

2。材料和方法

2.1。临床样本收集

24与非小细胞肺癌患者的诊断和治疗在山东省胸医院从2015年1月至2016年1月加入了这项研究。与其他慢性疾病患者,化疗/广播史的疗法,或恶性肿瘤家族史被排除在外。肿瘤组织和邻近的正常组织(超过5厘米远离病变网站)在手术切除,立即在液态氮冷冻,保存在-80°C为进一步使用。一项为期三年的随访研究。本研究伦理委员会的批准和监督医院山东省胸部。从每个符合条件的患者签署知情同意收集。所有参与者的临床特征信息提出了表1。

2.2。苏木精和伊红染色(他)

收集到的组织从病人和老鼠的肝和肺组织(见下文)是嵌入在石蜡和切成5 -μ片。组织切片是先后烤60°C一小时,浸泡在二甲苯I, II, III(每10分钟),在一个提升的一系列酒精脱水5分钟,5分钟,洗水。之后,在苏木精染色切片的解决方案8分钟,分化在0.5%盐酸acid-ethanol混合物10秒钟,浸泡在氨40秒钟,然后沾0.5%伊红5分钟。之后,片在一系列减少酒精的患者,与中性密封胶(96949-21-2,Solarbio、科技有限公司,有限公司,北京,中国),然后在显微镜下观察(BX53,奥林巴斯光学有限公司,东京,日本)5随机选定的字段。细胞核染色在带青色的,而红色的细胞质。每一组,三片相同的组织样本被染色。

2.3。微阵列分析

15毫克非小细胞肺癌和邻近组织的总RNA提取使用miRNeasy工具包(217061、试剂盒GmbH是一家现代化、希尔登,德国)和mirVana microrna的隔离设备(AM1560 Ambion,奥斯汀,德克萨斯州,美国),分别。RNA纯度检测纳米下降(2000/2000C热费希尔科学,卡尔斯巴德、钙、美国)。随后,100 ng RNA是收集和使用microrna的完整的标签和标签Hyb工具包(5190 - 0456,安捷伦科技公司。韦克菲尔德,妈,美国)。然后,与人类V2 mi RNA样本杂化微阵列(G4470B,安捷伦)在200 rpm 60°C为20小时。使用DNA微阵列图像进行扫描和分析扫描仪(安捷伦g2505 - 60525),而获得的数据,分析了GeneSpring GX (V11.5,安捷伦)。

2.4。生物信息学分析

数据分析使用 - - - - - -语言包(3.6.3版本)。芯片结果分析了使用Limma包(http://www.bioconductor.org/)。肿瘤和正常的组织差异表达之间的microrna筛选 和 的筛选标准。使用pheatmap热图是包(https://cran.r-project.org/web/packages/pheatmap/index.html)。mir - 520的表达与预后价值——在首次预测非小细胞肺癌癌症基因组图谱(TCGA,https://cancergenome.nih.gov/)。目标mrna mir - 520在多个生物信息学预测系统包括母星(http://starbase.sysu.edu.cn/),TargetScan (http://www.targetscan.org),miRDB (http://www.mirdb.org)和miRbase (http://www.mirbase.org)。预测结果比较使用gplot包(https://cran.r-project.org/web/packages/gplots/),一个基因本体论(去)富集分析使用clusterProfiler包(http://www.bioconductor.org/)。

2.5。反向Transcription-Quantitative聚合酶链反应(RT-qPCR)

从组织和细胞总RNA提取使用试剂盒试剂(热费希尔科学)。然后,使用高容量是相对地转录成RNA cDNA cDNA逆转录工具包(4368814,热费希尔科学)。随后,使用执行实时qPCR TaqMan microRNA化验用品(4427975,热费希尔科学)在7900年ht快速实时PCR系统(应用生物系统公司,培育城市,CA)。褶皱的变化获得数据的测量使用2^{- - - - - -ΔΔCt}方法。引物序列是在桌上2,U6用作microrna的内部控制而GAPDH RRM2 mRNA的控制。

2.6。细胞培养和转染

肺大细胞癌细胞系H273 (crl - 5917)和H460 (htb - 177),肺腺癌细胞系H23 (crl - 5800)和A549 ccl(- 185),一个正常的肺上皮细胞系16 hbe (pc - 300 - 010),和HEK293T (crl - 3216)细胞从美国购买类型文化集合(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)。rpmi - 1640细胞培养(21870076,热费希尔科学)含10%胎牛血清(美国马的边后卫,北安多弗)在37°C公司为5%₂。mir - 520模拟和RRM2 overexpressing (OE)矢量合成由RiboBio有限公司有限公司(广州,广东省,中国)。细胞转染使用Lipofectamine执行2000个DNA转染试剂(11668027,热费希尔科学)。总之,当细胞融合达到80%,在Opti-MEM Lipofectamine试剂被稀释,而另一个Opti-MEM被用来稀释DNA。稀释的DNA混合稀释Lipofectamine 2000的比率1:1。5分钟后,这些细胞被充满DNA-lipid化合物和培养48小时的37°C。

2.7。(3)- 4 5-Dimethylthiazol-2-yl 2, 5-Diphenyltetrazolium溴化(MTT)测定

指数增长的细胞resuspended 。细胞悬液是分为96 - 100孔板μL直到细胞密度达到每口井 细胞/(边际毛孔满心无菌磷酸盐(PBS)来消除潜在的边缘效应)。每组三个重复的井设置。板块在37°C孵化器孵化有限公司为5%₂。一个板块是测量每24小时取出。总之,每一个充满了20μL MTT解决方案(M1025 Solarbio),另一个4小时的细胞被孵化。井的培养基是丢弃,并且每个进一步含有150μL二甲亚砜完全溶解晶体紫罗兰。然后,光密度在570 nm的决心使用标(Varioskan勒克斯,热费希尔科学)。肝癌和获得的数据分析了产生扩散曲线。

2.8。5-Ethynyl-2 - - - - - -脱氧尿苷(EdU)标记分析

指数增长的细胞分为6-well盘子。当细胞融合达到80%,10μM EdU解决方案(美国Genecopoeia)加载到每个。细胞培养2小时,洗在PBS,固定在4%多聚甲醛30分钟,甘氨酸溶液中孵化,冲洗PBS含有0.5% tritonx - 100。随后,这些细胞被孵化与安迪萤石™555叠氮化(美国Genecopoeia A004)在黑暗中30分钟,在甲醇和PBS洗,进一步孵化4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 20分钟。荧光显微镜下观察标签(XSP-BM13C,上海CSOIF。有限公司、上海、中国)×400放大与3个随机领域包括在内。红色EdU-positive细胞被染色,和所有的细胞都被DAPI染色在蓝色: 。

2.9。Transwell化验

24-well板用于transwell化验。基底膜基质凝胶(美国纽约康宁,康宁公司)是采用无血清稀释rpmi - 1640 5的比例:1,然后加载到顶端室(80μL在每个顶端室)和维护1 - 2小时,虽然每个基底室挤满了500μL 10%的边后卫,rpmi - 1640。细胞被播种到24-well盘子和孵化24小时。细胞入侵到低膜固定在4%多聚甲醛和结晶紫染色法染色的解决方案(C0121, Beyotime生物技术有限公司,上海,中国)10分钟。在显微镜下观察染色(BX53,奥林巴斯光学有限公司,东京,日本)×400放大与5个随机领域包括在内。细胞迁移是在类似的方式除了检查涂层的基底膜基质凝胶在顶端。入侵和迁移细胞的数量统计,威尔斯和3重复的平均值计算。

2.10。流式细胞术

细胞凋亡的细胞是由一个膜联蛋白V-FITC凋亡检测设备(15342 - 54,Nacalai Tesque,日本)。转染后细胞培养在37°C公司为5%₂48小时,离心机在1000转3分钟,洗在PBS,然后再次离心。然后,20μL膜联蛋白V绑定缓冲(×10)添加到200年μL PBS。细胞在PBS resuspended然后孵化10μL膜联蛋白V-FITC共轭和5μ在黑暗中Lπ溶液在室温下15分钟。然后,细胞与300年被添加μL绑定缓冲,激发波长为488 nm决心使用流式细胞分析仪(美国贝克曼库尔特6028651)。

2.11。双荧光素酶报告基因分析

3 - - - - - -UTR RRM2序列、SDC1 YWHAZ mrna包含假定的绑定和mir - 520 a插入序列pGL3向量(kl - zl - 1031,柯Lei生物科技有限公司,有限公司,上海,中国)构建pGL3-based宽类型(WT)向量。相应的突变类型(MT)使用变异绑定向量也建造序列。构建良好的向量和mir - 520 a cotransfected模仿或模拟控制HEK293T细胞使用Lipofectamine 2000套件。48小时后,收集细胞和细胞溶解,细胞的相对荧光素酶活性是评价使用荧光素酶记者分析工具包(Biovision k801 - 200)和双荧光素酶报告实验系统(WI E1910 Promega,麦迪逊,美国)。

2.12。免疫印迹分析

细胞离心和清洗在PBS和resuspended三含有蛋白酶抑制剂(50毫米Tris-HCL, 150毫米氯化钠)。蛋白质浓度测定用皮尔斯™BCA蛋白质分析工具包(23225年,热费希尔科学)。然后,一个适当的体积的蛋白质在8% - -12% sds - page分离和转移到PVDF膜(lm - 937 d, LMAI生物,上海,中国。膜被封锁和5%脱脂奶洗净1小时,紧随其后的是一个孵化与主b细胞抗体lymphoma-2 (bcl - 2, 1: 1000年,sc - 7382,圣克鲁斯,CA,美国),Bcl-2-associated x(伯灵顿,1:5000年,sc - 7480, SANTA CRUZ), caspase-3(1: 1000年,ab208161 Abcam, Inc .,剑桥,妈,美国),裂解caspase-3(1: 500年,ab2302 Abcam),β连环蛋白(1:1000年,ab208161 Abcam),细胞周期蛋白D1 (sc - 8396 1: 500年,SANTA CRUZ),和β肌动蛋白(1:1000,# 3700,细胞信号技术)在4°C 16个小时。之后,膜清洗和进一步孵化二级抗体免疫球蛋白g(1: 5000年,ab205719 Abcam)和裂解半胱天冬酶(1:10000年,ab205718 Abcam)在20°C 2小时。蛋白质乐队开发使用增强化学发光免疫印迹基质(PE0010 Solarbio)和图像捕获和分析使用免疫印迹成像系统(FluorChem M, ProteinSimple)。

2.13。在裸鼠异种移植肿瘤的生长

总共12女性裸体小鼠(应变:BALB / c;3 - 4周, )从至关重要的河流购买实验动物科技有限公司有限公司(中国,北京)。老鼠在恒定25°C和45%的湿度免费获取食物和水。老鼠被随机分成4组:分配mir - 520 a对照组( ,每个老鼠注射A549细胞转染和mir - 520 -控制),mir - 520模拟组( ,每个老鼠注射A549细胞转染mir - 520 a模仿),mir - 520 a对照组( ,每个老鼠注射H460细胞转染和mir - 520 -控制),和mir - 520模拟组( ,每个老鼠注射H460细胞转染和mir - 520模拟)。对于细胞植入,指数增长的A549 / H460细胞稳定转染mir - 520模拟或模拟控制调整 细胞/毫升。然后,每个鼠标移植20μ通过腋窝注射L细胞悬液,然后体内肿瘤的生长被拍到和记录。肿瘤体积( )每7天记录如下: (“a”指的是长直径而“b”指的是短直径),和生长曲线。28天后,过量的小鼠安乐死1%戊巴比妥钠(150毫克/公斤),肿瘤是收集和重16]。所有程序都执行符合动物伦理委员会的指导方针山东省医院胸部。伟大的试图减少动物的使用和疼痛。

2.14。在裸小鼠肿瘤转移

另一个12裸体小鼠被分为4组体重和分配编号再次执行以上( 在每组)。肿瘤转移测量,A549 / H460细胞与稳定转染mir - 520 a模仿或模拟控制是通过尾静脉注入小鼠。老鼠安乐死以类似的方式在45^th一天后注入。然后,老鼠的肺和肝组织收集,嵌入在石蜡,切成薄片染色。转移性结节的形成在显微镜下观察组织5不重叠的领域包括在内。

2.15。统计分析

SPSS 22.0(美国纽约阿蒙克的IBM公司)是用于数据分析。测量数据收集和表达为三个独立的实验 (SD)。每两组之间进行了分析使用的数据 - - - - - -测试,而在多个组分析单向或双向方差分析(方差分析)与图基的多重比较检验。的值从双尾测试, 被认为显示统计学意义。

3所示。结果

3.1。mir - 520非小细胞肺癌组织和细胞表达得很糟糕

从三个非小细胞肺癌患者组织样本为他收集的染色和microrna的微阵列分析。染色结果表明,细胞在NSCLC组织显示被破坏细胞结构和核萎缩,表明在肺部严重损伤(图1(一))。然后,从三对组织提取的RNA样品用于微阵列分析。重要的是,mir - 520被发现明显NSCLC肿瘤组织中表达下调与邻近组织(图1 (b))。为了验证这一点,组织从所有用于RT-qPCR 24例。因此,穷人mir - 520 a的表达被发现在NSCLC组织相比配对相邻组织(图1 (c))。后续的研究结果表明,较高的患者mir - 520 a最好的预后和长寿命(图1 (d))。此外,mir - 520 a的表达在非小细胞肺癌细胞株H273 H23,正常肺上皮细胞A549, H460和16 hbe由RT-qPCR决定。发现所有的非小细胞肺癌细胞系显示,mir - 520 a的表达降低(图16 HBE细胞1 (e))。其中,A549和H460细胞显示最低mir - 520 a的表达转染了mir - 520 a模仿或模拟控制(图供后续使用1 (f))。此外,根据TCGA数据库的数据,mir - 520——在NSCLC(图不善表达1 (g)),和穷人mir - 520 a的表达表明不利的非小细胞肺癌患者的预后(图1 (h))。这些结果表明,mir - 520 a可能在非小细胞肺癌预后价值。

3.2。人工Upregulation mir - 520 a抑制非小细胞肺癌的进展

随后,我们发现mir - 520 a的超表达microrna的模仿导致的数量大幅下降EdU-positive A549和H460细胞(图2(一个))。MTT试验结果表明,增生性A549和H460细胞的数量减少后,mir - 520超表达(图2 (b))。至于细胞迁移和入侵,transwell化验结果表明,迁移和入侵能力A549和H460细胞减少在mir - 520超表达(数据2 (c)和2 (d))。此外,过度的流式细胞术结果表明,mir - 520膜联蛋白V - PI-positive细胞的数量增加,即A549细胞凋亡的增加和H460细胞(图2 (e))。从分子的角度来看,发现mir - 520模拟bcl - 2的水平下降,但增加了伯灵顿和裂解caspase-3(图2 (f))。总的来说,这些结果表明,mir - 520 a抑制非小细胞肺癌细胞的恶性行为。

3.3。mir - 520 a直接绑定到RRM2调解Wnt信号通路

进一步识别潜在的下游分子有牵连,我们第一次预测,mir - 520 a的目标mrna在几个生物系统包括母星,TargetScan miRDB miRBase, 219 mrna被发现是交叉(图3(一个))。然后,基于这些基因的富集分析,识别,Wnt信号是高纯度(图3 (b)),18基因丰富的信号通路。然后,细胞周期蛋白D1和Wnt信号pathway-related水平因素β连环蛋白在A549和H460细胞线测量。免疫印迹分析结果表明,细胞周期蛋白D1和β连环蛋白水平在两个细胞被拒绝后,mir - 520超表达(图3 (c)),这表明mir - 520 -灭活Wnt信号。随后,我们测试了mrna的表达丰富的Wnt信号使用RT-qPCR组织。发现SDC1的表达,YWHAZ, RRM2显著增加肿瘤组织比配对正常组织(图3 (d))。然后,荧光素酶检测验证,只有RRM2提出一个绑定和mir - 520 a(图的关系3 (e))。相关分析表明,mir - 520 a的表达是负相关,RRM2 mRNA的表达在NSCLC肿瘤组织(图3 (f))。与上面的结果,RRM2表达式被发现在非小细胞肺癌细胞株高于16 hbe细胞(图3 (g))。同时,mir - 520模拟发现减少RRM2表达式在A549和H460细胞(图3 (h))。此外,RRM2超表达的细胞周期蛋白D1的水平和增加β连环蛋白在A549和H460细胞(图3(我)),这表明mir - 520 a可灭活Wnt信号通路可能通过下调RRM2表达式。

3.4。mir - 520 a抑制致癌RRM2对非小细胞肺癌进展的影响

确认的参与RRM2 mir - 520 - a -介导的事件,A549和H460细胞转染与RRM2 OE向量进一步转染mir - 520 a模拟(图4(一))。发现细胞生存能力增加了RRM2被推翻后进一步upregulation mir - 520 a(图4 (b))。此外,cotransfection mir - 520 a和RRM2 OE向量迁移和入侵细胞的数量减少,并增加凋亡细胞的数量相比,转染RRM2 OE向量(数据4 (c)- - - - - -4 (e))。这些结果,共同验证,mir - 520 a直接绑定到RRM2抑制非小细胞肺癌细胞的恶性行为。

3.5。mir - 520 a抑制体内肿瘤的生长和转移

A549和H460细胞稳定mir - 520模拟/控制转染植入裸小鼠腋窝注入增长(测量)或通过尾静脉注射(转移测量)。老鼠体内的肿瘤体积测量每7天。发现mir - 520 a的超表达显著降低小鼠的肿瘤生长速率(图5(一个))。28天后小鼠安乐死时,发现mir - 520模拟也减少了肿瘤重量的裸小鼠(图5 (b))。此外,他染色结果表明,在肺转移性结节(图的数量5 (c))和肝脏(图5 (d))组织减少了mir - 520——模仿。

4所示。讨论

非小细胞肺癌仍是最普遍的癌症,因此癌症相关的发病率在全球范围内的最大原因,了解非小细胞肺癌的生物学和分子识别小说参与发病机制的紧迫性(17]。miRNA-targeted疗法,包括microrna的替换和microrna的寡核苷酸,减少virus-based结构,恢复管理或小分子化合物抑制microrna的表达或抑制致癌microrna的表达,已经引起了越来越多的担忧LC治疗(18]。目前的研究表明,mir - 520——一个在非小细胞肺癌的肿瘤抑制作用在细胞模型和动物模型的差别通过对这些RRM2和Wnt信号的失活。

异常的microrna的表达往往是与疾病,包括癌症的发病和发展(19]。在这里,一个microrna的微阵列分析和RT-qPCR结果表明mir - 520 a是NSCLC肿瘤样本中表达下调。更高层次的mir - 520 A与更好的非小细胞肺癌患者的预后和人工upregulation mir - 520抑制增殖、迁移、入侵、抗非小细胞肺癌细胞株的死亡。有越来越多的证据表明,强调microrna的核心功能,致癌或antioncogenic,在非小细胞肺癌发病机理。例如,mir - 218被报告为一个强大的非小细胞肺癌的肿瘤抑制抑制非小细胞肺癌细胞和肿瘤生长的恶性行为针对白细胞介素- 6受体和JAK3 [20.]。发现mir - 421作为癌基因在非小细胞肺癌细胞和促进增殖和入侵潜力目标PCDC4 [21]。至于mir - 520 a,据报道作为一个肿瘤抑制在许多肿瘤疾病。Upregulation mir - 520 - a - 3 - p,利多卡因,例如,已经发现阻止核扩散和引发细胞凋亡的结直肠癌细胞(22]。抑制肿瘤的功能类似mir - 520 a已经证明在骨肉瘤23和乳腺癌24]。这也适用于非小细胞肺癌。的差别最近的研究指出,对这些mir - 520——一个由其他RNA转录增加增殖,迁移和入侵非小细胞肺癌细胞(12,13,25]。同样,前一个Lv X等人的研究表明,mir - 520 - a - 3 - p抑制增长和侵略性的非小细胞肺癌细胞通过介导mTOR / PI3K / AKT信号通路(26]。在这里,我们的研究验证的抗癌作用在非小细胞肺癌细胞mir - 520 a。此外,动物实验进一步表现在我们的研究中,我们证实upregulation mir - 520 a抑制异种移植肿瘤的生长和转移形成的非小细胞肺癌细胞体内。

随后,219个候选目标mrna mir - 520 a的预计使用一个集成的生物信息学分析。然后,去富集分析证实,Wnt信号通路被这些mrna丰富。Wnt信号是一个进化高度保守的信号通路,为发展和体内平衡是很重要的,和它的异常激活是发病的一个关键因素,维护和开发的许多癌症27- - - - - -29日]。对非小细胞肺癌也不例外,Wnt失活已经回顾了作为一个有前途的治疗选择治疗非小细胞肺癌(30.,31日]。有趣的是,mir - 520已经证明是一个核心的microrna调停食管鳞状细胞癌的敏感性细胞通过Wnt信号通路(新辅助放化疗32]。在这里,在这篇文章中,我们发现mir - 520细胞周期蛋白D1的水平下降β连环蛋白在非小细胞肺癌细胞,表明Wnt缺陷的含义在mir - 520 - a -介导的事件。,此外,我们的研究发现,SDC1 YWHAZ RRM2浓缩在这个信号通路,而只有RRM2被证实有绑定关系mir - 520——根据荧光素酶检测。RRM2是一个细胞周期相关的因素,提出发挥致癌作用在肾上腺皮质癌等癌症的33),神经胶质瘤(34),和神经母细胞瘤35]。有趣的是,RRM2也卷入了几龙头、网络,及其upregulation已经发现触发细胞增殖,耐药性,肿瘤生长在非小细胞肺癌36,37]。细胞内重要的是,人工upregulation RRM2提升细胞生存能力,迁移,入侵、抗细胞凋亡。因此,进一步的实验发现,过度的mir - 520 a阻止上述事件,表明RRM2是下游mir - 520的目标在其监管在非小细胞肺癌的进展。有趣的是,RRM2沉默一直建议灭活Wnt /β连环蛋白信号通路通过增强葡萄糖磷酸化合成酶激酶3β(38]。总的来说,mir - 520 a可能抑制RRM2 / Wnt /β连环蛋白轴阻止非小细胞肺癌的进展。

5。结论

总之,目前的研究证明,mir - 520 a可以抑制恶性细胞的行为和在非小细胞肺癌肿瘤生长直接绑定到RRM2和随后的Wnt信号缺陷。这些发现可以为基于基因的治疗非小细胞肺癌的治疗提供新的见解,mir - 520 a可以作为一个潜在的工具虽然RRM2可能作为一种潜在的治疗目标在临床实践。然而,本研究的样本容量并不大,因为更大的样本量是被分析,但这些患者的3年随访研究尚未完成。我们进一步分析了评价这项研究使用Minitab软件的力量。根据TCGA数据库形式的数据,mir - 520的价值表达肿瘤组织和正常组织之间为0.18,标准差为0.25,和我们定义的功率值是0.8(一个大型效果)。在此设置,18的样本大小可以表示统计结果的意义。我们希望包括数据从一个更大的样本量在我们未来的研究。我们也希望更多的研究在这个领域将开发更多的理解来改进治疗非小细胞肺癌的治疗效果。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

易谢,Congyu雪的贡献同样这项工作。

确认

作者要感谢山东省卫生科技发展规划(2018 ws239)。

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