自身免疫性脑炎的鉴别诊断传染性淋巴细胞性脑炎通过分析脑脊液的淋巴细胞亚群

文摘

本研究旨在调查脑脊液(CSF)的淋巴细胞亚群提供可能的诊断价值和更好地理解病理生理学机制自身免疫性脑炎(AE)和传染性淋巴细胞性脑炎。一系列的CD标记,包括CD3/4/8/20代表不同类型和发展阶段的淋巴细胞,被用来计算相应的亚种群CSF anti-N-methyl-D-aspartate受体的临床和实验室确诊病例AE (NMDAR-AE),单纯疱疹病毒脑炎(HSVE)和结核性脑膜炎(TBM)。观察和CD4淋巴细胞的百分比:CD8比率三组之间的比较。没有明显差异的百分比的总淋巴细胞、CD3细胞,每组CSF的CD4细胞。然而,有强烈的统计差异CD4: CD8比率在每组CSF与0.6:1在NMDAR-AE, 0.9: 1在HSVE TBM的3.2:1。CD20 B淋巴细胞比例NMDAR-AE在统计学上高于其他组。淋巴细胞亚群的不同百分比CSF似乎特点和可能作为诊断指标。进一步验证和研究将有必要澄清的意义和性质CD4: CD8比率和B淋巴细胞在AE CSF和传染性淋巴细胞性脑炎。

1。介绍

自身免疫性脑炎(AE)是一群新认识的脑炎综合征相关自身抗体对抗原的神经元(1]。其中,anti-N-methyl-D-aspartate受体AE (NMDAR-AE)被认为是最常见的类型通常是影响年轻的女性,但也不是很少涉及儿童和老人2]。确认诊断的AE依靠自身抗体的检测;然而,抗体测试可以是负的AE在发病早期阶段(3]。此外,NMDAR-AE的病理生理机制仍不完全理解(4]。之前成功检测到抗体,它很容易被误诊为其他疾病的类似的临床表现或脑脊液(CSF)的特点,如单纯疱疹病毒脑炎(HSVE),结核性脑膜炎(TBM)梅毒脑膜炎(SM),和偶尔克雅二氏症。然而,它已被证明,早期诊断和治疗将预测一个更好的预后治疗严重障碍NMDAR-AE [5]。此外,它不太可能有相关的特定的脑成像异常NMDAR-AE最初的演示或随访期间(6]。因此,有必要找到新微分对这些疾病诊断方法。

脑脊液检查仍然是一个专属金诊断方法在CSN传染病患者或AE (7]。但他们通常表现类似CSF发现与淋巴细胞性脑脊液细胞增多或在脑脊液蛋白升高。我们有报道有强烈的差异的CD4和CD45RO CSF在SM和TBM病人的T细胞;可能,可能会有各种途径的免疫失调和大量的激活淋巴细胞进入中枢神经系统,导致相应的淋巴细胞性脑炎(8]。到目前为止,没有任何研究报告来说明微分亚型的AE和传染性淋巴细胞性脑炎患者脑脊液淋巴细胞。

在目前的研究中,免疫细胞化学(ICC)脑脊液的方法是扩展调查不同百分比的淋巴细胞亚群CD4: CD8比率在患者的CSF NMDAR-AE, HSVE, TBM早期诊断的新见解。其次,本研究也将提供NMDAR-AE的潜在机制的解释和这方面的协会与其他传染性脑炎。

2。材料和方法

2.1。病人和数据库

共有66名患者,包括21 NMDAR-AE情况下,23 HSEV情况下,和22 TBM情况下,参加本研究。的基本临床资料如表所示1。所有的病人都承认,在我们医院诊断三年期间2016年1月至2019年3月。本研究伦理批准了南京医科大学附属南京脑科医院。

AE的标准是基于《柳叶刀》的一篇论文的“自身免疫性脑炎的临床诊断方法”(9)和“中国自身免疫性脑炎的诊断和治疗专家共识”(中国医学会神经病学,DOI:10.3760 / cma.j.issn.1006-7876.2017.02.004)。满足初始条件的考虑可能的AE包括如下:(1)一个兼容的亚急性/快速进行性记忆丧失的临床综合征,精神症状,或意识障碍;(2)(A)的一个或多个焦点中枢神经系统发现,(B)新的癫痫发作,(C)语音干扰,(D)严重的运动障碍,和(E)自主功能障碍;(3)脑电图异常;和(4)病理核磁共振神经成像研究。除了临床信息,最后确诊是基于抗体检测结果。Anti-NMDAR测试在脑脊液和血清使用间接免疫荧光法检测(IIFT)方法。后缀的矢状老鼠大脑部分和IIFT检测设备的形式生物芯片公司的商用Euroimmun(德国吕贝克)。但至少,CSF anti-NMDAR积极结果的参考指标。

HSV的标准如下(10]:(1)有病毒感染的典型临床表现,如发热、头痛、呕吐、癫痫、精神障碍;(2)明确病因的诊断HSVE是基于任何取得的积极成果在以下四个实验室检测:嵌套式聚合酶链反应,化学发光分析中,特定的鞘内HSV抗体合成,或下一代测序。入选标准TBM的详细描述在我们之前的研究8]。病原体的能力和安全测试在我们医院授权由江苏省疾病控制和预防中心。

排除标准如下:(1)高的比例不能存活的细胞或细胞数量评估不足;(2)anti-NMDAR脑脊液和血液中抗体是完全积极的,但是没有相关临床脑炎证据;和(3)当第一个CSF收集病人的承认,它比发病后两周结束了。

2.2。免疫细胞化学和半定量的分析

2.2.1。检验方法

脑脊液样本收集在入学的第一天,没有任何特殊或nonspecial治疗疾病的自然历史,包括防病毒、抗结核,或任何类型的类固醇。CSF评估团队诊断是不可见的。CSF的幻灯片准备如下:(i)吸入200毫升的CSF细胞离心(Statspin Cytofuge 12或Cytospin 3)以较低的速度1000转/ 3分钟(离心半径:13厘米);(2)在室温下干燥的幻灯片(RT);(3)用冷丙酮固定在4°C在冰箱里3 - 5分钟;及(iv)留出准备使用。总脑脊液白细胞计数和淋巴细胞的比例在每个病人CSF观察使用Wright-Giemsa染色方法和离心机CSF如前所述的沉积物。

2.2.2。采用免疫染色方法

具体协议如下:使用SP染色进行装备根据制造商的指示。了10分钟后用5%正常山羊血清在RT,上面的幻灯片准备孵化主要抗体。鼠标anti-CD3单克隆抗体(克隆SP7,商品目录号。rma - 0543)代表了成熟T细胞类型。鼠标反CD4单克隆抗体(克隆4 b12,目录。马伯- 0521)代表辅助T细胞或诱导T细胞,作为执行的功能细胞,调节免疫系统。鼠标anti-CD8单克隆抗体(克隆SP16,商品目录号。rma - 0514)的标记T细胞负责直接杀死感染和异常细胞。鼠标anti-CD20单克隆抗体(克隆L26,商品目录号。马伯- 0020)是B细胞的特殊标记。 All the four kinds of primary antibodies were purchased from Maixin Bio Co., Ltd., Fuzhou, China.

主要的抗体的稀释比例是1:100一夜之间在4°C。洗后,切片与biotin-labelled第二抗体,孵化reagent-labelled山羊anti-mouse, anti-rabbit免疫球蛋白聚合物(如一个增强的聚合物)(商品目录号。ZSGB-BIO Polink-2轻拍,北京,中国对30分钟)在37°C。然后,免疫反应性测试avidin-biotin-peroxidase技术,使用3,30-diaminobenzidine色原体。

CD3, CD4细胞的百分比和CD8 T细胞和CD20 B-positive细胞数,分别。我们的出版工作中描述的方法(8]。ICC染色后的下滑是放置在JEK彩色显微图像分析系统,有三种不同的脑脊液涂片沉积物。五个不同的愿景是随机在每个子集的脑脊液淋巴细胞样本。淋巴细胞的总数计算第一,然后,阳性细胞的百分比被手动计数进行定性比较分析淋巴细胞表达的强度不同的组。

2.3。统计分析

测量数据被表示为 。定性数据被描述为百分比或口粮。组间差异与连续数据进行分析单向方差分析,进一步的事后多重比较测试使用最小显著性差异(LSD)方法。一个卡方检验被用于分析分类变量。的价值报告是双面的, 被认为是具有统计学意义。所有使用SPSS分析软件(版本13.0,SPSS Inc .)、芝加哥,美国)。

3所示。结果与讨论

3.1。结果

年龄和性别的分布并没有统计上的不同的三组(表中1)。也没有明显的差异的时间从发病到CSF收集和口服体温在他们入学。平均总脑脊液白细胞计数、淋巴细胞的平均百分比,CD4, CD8比率的CSF三组如表所示2。没有明显差异的百分比的总淋巴细胞和CD3细胞在每组CSF ( 和 ,分别);然而,NMDAR-AE组白细胞总数低于HSVE和TBM组(两种 )。这表明,它可能很难用传统方法的CSF细胞学不同NMDAR-AE传染性淋巴细胞性脑炎包括HSVE和TBM如果他们提出了类似的脑脊液白细胞计数。

CSF CD4 T细胞的比例在病人NMDAR-AE患者低于HSVE组( ),但是没有意义在TBM组( )。CSF的比例患者CD8 T细胞计数明显高于NMDAR-AE ( )和HSVE ( )比在TBM患者。有强烈的统计差异CD4: CD8比率在每组CSF与0.6:1在NMDAR-AE, 0.9: 1在HSVE,和3.2:1在TBM(所有 )。在NMDAR-AE CD20 B淋巴细胞的比例高于其他组。CD20 B细胞的比例没有明显不同群体之间的TBM和HSVE ( )。这些结果表明,CD4: CD8比率在脑脊液和B淋巴细胞可能是有用的AE与中枢神经系统感染性疾病的鉴别诊断(见表2,图1)。

4所示。讨论

本研究旨在评估方法通过脑脊液淋巴细胞数量分析来评估可能的各种神经疾病的诊断分化。基于传统的CSF细胞学方法,我们扩展它来检测淋巴细胞亚型进一步利用国际刑事法院与单克隆抗体染色,比较之间的淋巴细胞亚群分布CSF自身免疫性和传染性脑炎。目前的研究表明,有相似的总额的百分比和CD3脑脊液淋巴细胞的三组。暗示它可能很难区分这淋巴细胞性脑炎根据传统的CSF细胞学方法。与新方法显然是我们的结果显示,有一个最低的优势的B细胞CD4: CD8比率的CSF NMDAR-AE相比其他两种感染性神经系统疾病。至少,它将为我们提供一些线索时,没有检测到抗体NMDAR-AE的早期阶段。

AE被发现与特殊病毒感染密切相关或者潜在的癌11,12]。最近的研究表明,某些形式的AE从HSE可以开发13,14]。在当前结果中,有许多共同特征之间的CSF NMDAR-AE HSEV病人,包括绝对脑脊液白细胞计数,CD3细胞和CD8细胞的比例,尽管CD20 B细胞的不同比例。以前的研究也表明,AE可能涉及患者B细胞自身免疫和CD19的比例(+)B细胞被报道在CSF大于10%,远高于检测不到发炎观察迹象神经障碍(15]。一致,免疫组织化学研究显示突出CD20 B细胞成套出现大脑血管周围伴随着一些浆细胞NMDAR-AE病人通过执行大脑切片免疫调节治疗前(16]。上述结果与我们的协议,一个更高比例的CD20 NMDAR-AE CSF的B细胞。

在我们目前的研究中,我们没有发现显著差异CD3细胞比例的三组患者的CSF与TBM包括中枢神经系统感染性疾病,HSVE, NMDAR-AE。据报道,有更高的比例(51.4 -77.0%)的患者的CSF的CD3细胞神经系统疾病(病毒感染,螺旋体病和多发性硬化症)相比,细菌感染患者(17]。我们推测这种差异可能是检测阶段的疾病或检测方法。这个有趣的现象表明我们执行进一步的研究这个主题使用更多的样本和更精确的方法。

其他有用的信息,我们目前的研究,各种淋巴细胞的增殖和分化可能调解中枢神经系统免疫或感染性炎症性疾病的发展。T细胞有不同的识别抗原的能力和多种多样的功能。CD4细胞是一种成熟的T细胞(18]。CD8细胞,也称为“杀手”或细胞毒性T细胞,执行实际的破坏感染细胞;CD4细胞在免疫应答发挥监管作用协助B细胞产生抗体并协助杀手T细胞在他们攻击外来物质(19]。符合我们的研究中,亚当et al。20.)表明,AE与脑脊液淋巴细胞白血球增多比病毒病因通常是温和的。Intratumoural CD3和CD8细胞密度也被证明是患者的预后因素有手术切除的肝细胞癌(21]。根据测序HSVE和NMDAR-AE之间的关系,它是合理的推测,可能有细胞免疫调节炎症反应主要由CD 4/8 T细胞在感染的早期检测上述细胞免疫可能转移到体液免疫主要由B细胞的活化,从而导致与AE相关抗体的产生。因此,需要进一步的研究来探讨脑脊液淋巴细胞各亚群在AE和中枢神经系统感染性疾病的不同阶段。

5。结论

总之,目前的研究表明,有不同百分比的淋巴细胞亚群CD4: CD8比率在患者的CSF NMDAR-AE, HSVE,和TBM在诊断方面可能扮演一个重要的潜在作用。这可能有助于使用CSF的免疫细胞化学方法,但仍需广泛验证在临床实践中更大的人口。这项研究还提供了线索不同类型的免疫反应发生的病理生理机制与其他传染性脑炎NMDAR-AE和协会。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Qiao-quan张和Yan-fang张同样贡献了这个工作。

确认

这项工作由两笔赠款支持,一个来自南京市医学科技发展基金会(QRX17179)和其他来自中国的国家自然科学基金(批准号81400981)。

引用

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