CD177幽门螺杆菌感染和炎症年级表达野生型和CD177^{- / -}C57BL / 6小鼠

文摘

本研究进行进一步探讨CD177表达式在幽门螺杆菌(Hp)感染野生型和CD177^{- / -}C57BL / 6小鼠,这可能有助于阐明CD177和Hp-related胃炎之间的关系。20 WT小鼠被随机分配到Hpss1 WT组( )和Hp49503 WT组( );20 KO小鼠被随机分配到Hpss1 KO组( )和Hp49503 KO组( )。剩下的小鼠作为控制。老鼠HpSS1组和相应独立Hp49503组感染菌株。结果表明,惠普殖民得分与粘膜炎症的级( )。之间的炎症级相当HpSS1组和Hp49503组以及在WT组和KO组之间。此外,惠普殖民得分与CD177表达评分( )。CD177表达式惠普殖民组高于non-Hp殖民组( )。CD177表达呈正相关炎症级( )。总之,CD177表达类似HP49503 -和HPss1-infected WT C57BL / 6小鼠,和CD177表达在CD177察觉^{- / -}老鼠。CD177表达增加胃粘膜的炎症级的高度。Hp-infected小鼠的炎症级没有关系,惠普应变和CD177表达式的类型,但Hp-infected老鼠的粘膜炎症评分高于non-Hp被感染的老鼠。

1。介绍

幽门螺杆菌(Hp)是一种革兰氏阴性microaerophile和主要发现在人类和灵长类动物的胃粘膜。大约一半的人口感染Hp (1,2]。Hp感染是胃炎和消化性溃疡的一个重要致病因素。世界卫生组织分类惠普作为类致病因素,这是胃mucosa-associated组织淋巴瘤的发病机制密切相关。因此,越来越多的关注已经支付给Hp根除,但滥用或不合理使用抗生素耐药性显著增加了惠普的3- - - - - -7]。因此,根除Hp, Hp感染的发病机制已成为集中在胃肠病学领域。CD177白细胞抗原6总科的一员,可以编码两个neutrophil-related蛋白质:NB1和PRV-15,8]。有证据表明,对中性粒细胞增加CD177表达式作为炎症反应(9]。近年来,一些研究表明,CD177密切相关的一些疾病是由于炎症失调,如真性红细胞增多、血小板减少症。此外,CD177诊断标记了一些疾病,如真性红细胞增多、血小板减少症、特发性骨髓纤维化(5,10- - - - - -12]。

在我们之前的研究中,结果表明,CD177 Hp-related胃炎患者胃粘膜的表达显著高于non-Hp相关胃炎患者(13]。我们的团队已经成功地建立了一个用CD177感染模型^{- / -}老鼠。本研究进行进一步探讨CD177 CD177表达式^{- / -}老鼠,旨在阐明CD177表达和Hp-related胃炎之间的关系。

2。材料和方法

2.1。材料

悉尼菌株1,幽门螺杆菌魔法石,第1章(VacA + CagA -),和Hp49503 (VacA + CagA +)菌株从美国购买病原生物学、医学院、上海交通大学。布鲁氏菌汤是由上海市疾病控制和预防中心。琼脂粉是从Oxoid购买(英国)。简单的文化和通风柜是由上海生命科学院、中国科学院。其他包括革兰氏染色装备(上海康没有生物技术有限公司),幽门螺杆菌检测设备(脲酶方法)(珠海Lituo生物技术有限公司),盐酸diaminobenzidine (DAB)(美国σ),混合气体(85% N₂,10%的公司₂,5%的人啊₂)(上海Youjiali液氮有限公司),高压蒸汽灭菌器(三洋、日本),超净工作台(苏州工厂即压力调节器),CX31显微镜(日本奥林巴斯),电子天平(缝匠肌、德国),RM2145切片机(德国徕卡),超低温冰箱(三洋、日本),CD177抗体(ab8092;Abcam),紫外线抑制剂(罗氏诊断),紫外线大学乘合(罗氏诊断)、石炭酸红色染料溶液(北京Leigen生物技术有限公司),超纯水计(美国微孔),电动恒温水浴(上海逸恒有限公司),和台式卧式离心机(埃普多夫,德国)。

2.2。动物

这项研究是根据指南进行护理和使用实验动物(National Institutes of Health);不,85.23;1996年修订)。动物程序依法进行的实验动物保健和使用指南第十人民医院。44 C57BL / 6小鼠的实验动物中心购买第十人民医院同济大学。动物是有根据标准实验动物微生物和寄生虫的水平。特定的无菌健康CD177^{- / -}C57BL / 6小鼠(CD177 KO; )和野生型C57BL / 6小鼠(WT; )年龄在6 - 8周,体重18 - 30 g被用于这项研究和住在第十人民医院的实验动物中心同济大学。每组有11个男性和11个女性。所有的动物都被允许适应环境和SPF环境中7天12 h / 12 h光/暗周期。动物有随意访问水和食物,和房间温度和湿度控制在25°C和60%,分别。有5 - 6每个笼子里的动物。本研究经伦理委员会批准的第十人民医院和上海科委。

2.3。建立动物模型和分组

20 WT小鼠随机分为Hpss1 WT组和Hp49503 WT组( 每组)。此外,20 KO小鼠被随机分配到Hpss1 KO组和Hp49503 KO组( 每组)。剩下的两个WT和两个KO小鼠担任WT空白控制( )和KO空白控制( ),分别。

2.4。惠普的准备暂停

惠普的标准菌株被收集,然后确定脲酶和氧化酶检测和革兰氏染色法。然后,Hp菌株resuspended在PBS和用分光光度法测定惠普的浓度。660纳米的吸光度是1时,惠普的浓度 克隆形成单位(CFU) /毫升。惠普悬挂在 CFU /毫升用于以下实验。Hp菌株的培养基的制备是在我们以前的研究报道(14- - - - - -16]。

2.5。动物模型的建立

据之前报道(17- - - - - -21),每个鼠标intragastrically管理0.3毫升的惠普悬挂 CFU /毫升每隔一天一次和三次接种完成。在控制,老鼠intragastrically管理0.3毫升的消毒PBS。所有的动物都剥夺食物前12 h和剥夺水4 h胃内的管理。惠普暂停接种后,动物继续被剥夺水4 h和剥夺食物。空白对照组的小鼠没有接受任何治疗。

2.6。胃粘膜的集合

在上届政府的惠普悬挂2周后,小鼠牺牲,整个胃收集(包括胃窦、语料库和十二指肠)。胃大弯被打开,胃粘膜暴露出来。在PBS洗涤后,胃黏膜分离(17:一半是嵌入在石蜡病理检查,一半是储存在生物分析-80°C。

2.7。病态的处理

组织在10%福尔马林固定,脱水乙醇,使透明在二甲苯中,嵌入在石蜡和分段。然后,部分被加热在56°C 2 h。

2.8。他常规染色

他染色,部分deparaffinized,在乙醇脱水,然后被苏木精染色。治疗与盐酸乙醇后,部分与伊红染色为5分钟。常规脱水后,transparentization安装,部分光学显微镜下观察。细胞核是蓝色,细胞质和惠普浅红色。

2.9。酚Acid-Azaleine染色

Paraffinized部分是deparaffinized和水化。部分与酚acid-azaleine孵化染色缓冲3 - 5分钟。然后,部分是用流动的水清洗。治疗后与盐酸乙醇,部分是用流动的水清洗。与二甲苯transparentization后,部分安装,光学显微镜下观察到。

2.10。免疫组织化学的CD177

部分(4μ米)被加热在56°C 2 h,旨在防止剥离。部分在二甲苯deparaffinized三次(每10分钟),然后绝对乙醇处理5分钟,5分钟的95%乙醇,75%乙醇为5分钟。然后,部分是用流动的水冲洗5分钟。部分被加热1 x EDTA ( )10分钟,然后允许冷却至室温,然后洗1 x PBS三次(每5分钟)。他们孵化0.3%过氧化氢为3分钟内源性过氧化物酶的灭活,然后洗1 x PBS三次(每5分钟)。部分是处理CD177抗体(100μ在37°C L) 30分钟和洗1 x PBS三次(每5分钟)。然后,他们对待非特异性抗原抑制剂(紫外线抑制剂;罗氏诊断;100年μL) 5分钟和洗1 x PBS三次(每5分钟)。部分与紫外线大学孵化乘合(罗氏诊断;100年μ在37°C L) 8分钟,洗1 x PBS三次(每5分钟)。可视化是用轻拍(100μ在37°C L) 4分钟,在流水洗5分钟。部分与苏木精染色5分钟,然后洗在流水,在含有1%盐酸乙醇治疗了30年代,用温水和孵化3分钟,其次是在流水洗涤。部分采用75%的乙醇为5分钟,95%乙醇为5分钟,然后绝对乙醇为5分钟。部分被允许在空气中干燥,安装与中性树胶,然后光显微镜下观察到。

2.11。统计分析

统计分析与SPSS 17.0版。比较利率进行卡方检验。的值 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。胃粘膜的炎症级和CD177表达Hp-Infected老鼠

3.1.1。他染色

他染色显示成功惠普在小鼠的胃粘膜,殖民和胃粘膜炎性变化也被观察到。空白对照组,没有观察胃粘膜的炎性变化。病理检查表明,惠普在胃粘膜殖民地的数量增加而增加的炎症。尤其是大量的惠普被发现在小鼠的胃粘膜炎症III级(数字1(一)- - - - - -1 (c))。

3.1.2。免疫组织化学

惠普殖民和CD177表达评估小鼠炎症不同等级(数字2(一个)- - - - - -2 (c))。Azaleine染色显示,惠普殖民的分数增加而增加炎症评分;此外,免疫组织化学显示CD177表达增加与炎症的增加分数。CD177表达显著增加在这两个标准惠普strain-infected C57BL / 6 WT组,分别。然而,CD177表达他们之间是相似的。并在KO小鼠没有CD177表达式。

3.2。惠普殖民之间的相关性和炎症的分数

惠普的殖民地之间比较小鼠炎症I和II的成绩( )。显著差异观察小鼠炎症之间的惠普的殖民第三等级的我:炎症III级的惠普殖民率比我的炎症级( )。没有显著差异的惠普殖民小鼠炎症之间等级的三世和二世( )(表1)。

3.3。炎症级KO小鼠和WT小鼠接种Hpss1应变和Hp49503污渍

有炎症年级组间无显著差异( ):之间的显著差异并没有观察到KO小鼠和WT老鼠老鼠之间以及对待Hpss1应变和处理Hp49503应变(表2)。

3.4。惠普殖民和CD177表达之间的相关性

积极观察CD177表达小鼠没有惠普殖民。CD177的分布有显著差异表达在小鼠不同的惠普殖民分数( )。CD177表达式之间明显不同的老鼠与惠普殖民得分3和那些没有惠普殖民( )。惠普CD177表达小鼠之间的相似与不同的殖民的评分( )(表3)。

3.5。CD177表达之间的相关性和炎症

CD177表达式与炎症有密切关系等级( )。社会团体内部的成对比较表明,CD177表达式之间类似炎症年级我和炎症二级( ),但炎症级之间有显著差异和炎症三级( )二级之间以及炎症,而炎症二级( )(表4)。

3.6。惠普CD177表达小鼠接种

没有显著差异在CD177表达式WT与惠普接种小鼠( )(表5)。

4所示。讨论

惠普是一种革兰氏阴性microaerophile,全世界一半以上的人是受惠普。Hp感染一直是一个重要致病因素的消化系统疾病,如慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃mucosa-associated淋巴组织淋巴瘤(22- - - - - -26]。CD177属于白细胞抗原6总科和编码两个neutrophil-related蛋白质:NB1 PRV-1。人们已经发现,CD177表达显著增加,中性粒细胞作为炎症反应(5,8,9]。近年来,研究表明,CD177与一些疾病包括真性红细胞增多和血小板减少,和CD177一直是诊断某些疾病的标志(如真性红细胞增多、血小板减少和特发性骨髓纤维化)(5,10- - - - - -12]。然而,很少有人知道CD177在Hp-related胃炎的作用。

我们的研究表明,CD177 Hp-related胃炎的表达明显高于non-Hp相关胃炎(13]。此外,我们已经成功地建立了CD177基因敲除小鼠感染Hp在我们之前的研究中。在目前的研究中,CD177表达式CD177 KO小鼠进一步检测,旨在阐明CD177表达和Hp-related胃炎之间的关系。

在目前的研究中,病理检查显示,惠普殖民的高度增加胃粘膜的炎症级。尤其是大量的惠普被发现在胃粘膜炎症III级。这是考试后进一步确认。

然后,惠普殖民之间的相关性和炎症的胃粘膜进一步评估。结果表明,惠普殖民与炎症关系密切的分数,和胃粘膜的炎症级成功惠普殖民比没有惠普殖民的粘膜。然而,在老鼠与惠普殖民,惠普殖民没有炎症相关的分数,这可能与不同的Hp菌株,类型的老鼠,或小样本大小。在一些老鼠与惠普接种,炎症还观察到尽管惠普成功殖民没有观察到,但炎症没有发现老鼠的空白对照组。这表明小鼠胃粘膜炎症没有惠普殖民可能与免疫细胞间隙的惠普,但具体机制值得进一步研究。炎症年级进一步相比在KO小鼠和WT小鼠接种Hpss1 Hp49503。结果表明,炎症年级没有相关的惠普KO小鼠和WT老鼠:KO和WT老鼠,老鼠之间的炎症级相当接种Hpss1 Hp49503;小鼠接种Hpss1 Hp49503,炎症年级KO小鼠和WT老鼠之间的相似。

惠普殖民分数和CD177表达式之间的关系进一步评估。结果表明,殖民得分是CD177表达密切相关。CD177表达分数在老鼠与惠普殖民是更好的比那些没有惠普殖民。CD177和炎症之间的关系等级进一步评估。结果表明,CD177表达密切相关炎症的分数,和CD177表达增加与增加炎症的分数。CD177表达式也在小鼠接种与惠普相比,结果显示没有CD177表达KO小鼠接种Hp49503或Hpss1;CD177表达式相似WT Hp49503接种小鼠和Hpss1之间。

综上所述,CD177表达式类似WT Hp49503接种小鼠和Hpss1之间。CD177表达式KO小鼠没有被观察到。CD177表达式直接与炎症相关的分数,和CD177表达随炎症级的高度。炎症年级与惠普殖民,小鼠炎症年级与惠普殖民优于在老鼠身上没有惠普殖民。然而,炎症年级没有关系的应变惠普和老鼠(WT或KO)的类型。在几个老鼠没有惠普殖民,也存在于胃粘膜炎症,这可能与其他因素比惠普殖民(应变惠普,类型的老鼠,样本大小,或炎症相关的细胞因子),但具体机制应进一步研究。此外,CD177表达式的关系得分与一些细胞因子和受体在WT C57BL / 6小鼠应该更多的研究进一步阐明。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

我们声明我们没有财务或个人关系与他人或组织不当会影响我们的工作和没有专业或其他个人兴趣任何性质的任何产品,服务,和/或公司可能被视为影响手稿。

作者的贡献

Xing-Tang杨和王Zhi-Jun是相等的贡献者。

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