文摘
种质储运在人工授精技术(AI)和其他先进的技术是通过低温贮藏。在繁殖,精子的冷冻保存允许超远距离运输和使用它即使在陛下的死亡。然而,低温贮藏的技术可能损害精子和限制他们的活动。几个cryobiological调查报道,精子膜的完整性是经常参与物理和生物的元素,影响精子的生存在低温贮藏过程中在低温下。然而,成功的精子冷冻保存的内存仍然是一个进展中的工作,因为相当比例的精子不生存冻融过程。精液的精子低温贮藏期间被摧毁由于不同防冷冻的化学物质的浓度,如果精液不是以最佳的冷却速度冷却。因此,它是至关重要的,知道最佳制冷率与冻融协议最大的可行和功能性精子细胞复苏的成功cryo-freezing ram精子。因此,当前研究中编译和比较不同的低温贮藏过程的影响,研究冷却速度,平衡时间,解冻协议post-thaw ram精液质量。
1。介绍
冷冻保存精子是最重要的工具之一,在动物研究改善生殖技术(1]。哺乳动物的精子冷冻保存是一个复杂的技术,它需要一个适当的平衡的众多因素达到最佳结果。ram精子含有低intramembrane cholesterol-to-phospholipid比率比其他物种。从今以后,冷冲击敏感性在ram中精子是高于其他物种2]。稀释剂、dilution-cooling-freezing,解冻技术都扮演一个角色在ram精液冷冻保存的成功3,4]。此外,需要改善生殖繁殖的功效与冷冻保存精液可能涉及使用更好的冻结方法改善post-thaw精子质量。精子细胞发生生物化学和功能变化由于长期精子存储,限制他们的受精能力(5]。顶体,细胞核、线粒体基因丝,质膜也受到快速温度变化的影响,如冷休克和冰的创建和溶解在冻融过程中(6,7]。防止细胞内结晶,精液常规冷冻保护剂extender稀释。
蛋黄是受雇于非穿透冷冻保护剂,成功保护精子功能(运动性、可行性和顶体完整性)解冻后,而甘油是最常用的穿透冷冻保护剂(8- - - - - -11]。在甘油浓度,提供了最佳的post-thaw存活率在3%和7%之间,而在蛋黄,5至20%。(12- - - - - -14]。低温生存也受到冻融精子率(15,16]。最小化cryoinjuries如精子质膜和DNA结构的破坏造成相当大的胞内冰的形成,以及细胞内的pH值的变化和离子成分,必须确定一个适当的冷却速率(15,17,18]。
精子的快速冷却30到40摄氏度造成“冷休克”伤害(19]。在冷却过程中温度变化产生的应力对精子膜,导致脂质相移和精子细胞膜的功能状态的变化。5°和−15°C之间的温度是导致一个重要的相变(20.),这可能是最佳的温度范围内随温度而变的损害。适当的冻结速率减少细胞内冰晶的形成是缓慢的,足以让水离开细胞但足够快以防止严重脱水和细胞溶解作用[21]。第一次Polge [22]声称大部分精子破坏发生在一个关键温度区15 -−−30°C之间,如果冷却率并不充足,所有的细胞都可能被−80°C。过冷的阶段(0°C−5°C)和冰晶的发展(−−6°C 15°C)是两种主要的温度范围,在冷冻精子受损(23]。Mazur [24)还认为,在冻融过程中,损害精子膜发生的温度范围15°C到−−60°C,这被称为关键的温度范围。
标准的低温贮藏技术包括冷却中包含的精子冷冻保存媒体在塑料吸管在液氮气相。不同的协议上有准确的数据冻结ram使用可编程biofreezers精液,液态氮蒸汽和干冰。技术收集精液,精液extender,精浆是否应该分离冻结之前,应该如何平衡之前漫长的精液冷冻(2 h或4 h)、最终精子浓度(从50×106/ 1000×10毫升6/毫升),吸管大小(0.25毫升,0.5毫升),和冷冻方法(干冰颗粒,气冻结或控制冷冻精液吸管)。所有这些变量会影响他们已经解冻后精子的质量。由于这些和其他的差异,本研究旨在观察精浆效果,媒体精液冷冻保存,冷冻保护剂,精液稀释,冷却速率,和解冻速率以及稻草冻结法的效果(蒸汽冻结,可编程冻结或干冰)post-thaw ram精液质量。
2。精液收集
精液收集的目标是获得最大的从每个射精精子细胞和最好的质量。精液收集主要通过人工阴道(AV)或electroejaculation (EE)在小反刍动物。绵羊精液收集的AV是首选方法(25,26]。精液的AV方法收集更适当的和简单的使用和产生射精精子质量与自然射精(27,28]。温水的AV提供热刺激,而压力AV刺激龟头机械(27]。这种方法的主要缺点是,它需要一个ram有很好的性欲,雌性山还是财富的能力,和射精前培训在AV (28]。作为替代AV,情感表达的方法可以使用(29日]。电极探针(6-12V)用于申请3 - 5次短暂的刺激(3 - 8秒)每隔15 - 20秒的神经附属腺的生殖器官EE方法(30.]。
EE方法不需要内存的训练,提高射精快,,最重要的是,从上级收集精子的男性因伤无法挂载或老31日]。这个过程的主要缺点是,它是有压力的动物,在动物福利(这是一个大问题31日,32]。精子的质量取决于不同的方法收集;然而,当使用AV时,结果是更有利的33]。精液在公羊的AV方法产生精液体积稍高,精子浓度、总精子数量,正常精子的比例,比EE波动方法(32,34]。精液的方法收集影响精浆的组成和体积和功能的精子32]。AV-collected精子在绵羊耐冷冲击比EE-collected精子(32]。此外,据报道,精浆蛋白质起着关键作用在防止冷冲击而不损害精子细胞膜(35]。然而,精液成分可能会改变在EE的过程中,影响精子样本低温电阻。
3所示。精子稀释和浓度
为了实现高生育率与受精和精子受精的最少数量,必须适当稀释精液样本来保证足够数量的精子和稀释剂存在适应的细胞受精稻草。这是常见的做法与精确数量的农场动物精子样本稀释稀释剂或稀释他们指定的精子浓度。它已经被有效地利用稀释率1:1 - 1:23 (v / v);精液稀释剂)(30.,36,37]。相比较而言,精子浓度稀释精液可能是一个理想的方法。有正常的精子冷冻实例和足够的生育与样本从80到500×106细胞/毫升(36- - - - - -39]。
4所示。精子冷冻保存
精子冷冻保存是一个可选的方法阻止精子的最佳供体无限的时间,允许保存基因池和最有效地利用精子剂量使用人工智能。精子冷冻保存的原则是制止精子细胞的细胞代谢率冻结在LN2 (−196°C),然后解冻精子生存恢复其功能40]。整个过程需要高水平的适应多个功能(包括稀释、孵化,冷却、冻结、解冻26,41,42]。精子发生不同程度的超微结构、生化和功能损害,导致精子活性的降低,膜完整性和施肥能力(19,43]。生产精子细胞的胞外和胞内冰被认为造成这些损失。解冻溶液诱发流出细胞内的水通过冰结晶,细胞收缩,可能还有大量的离子。等离子体、顶体膜、线粒体鞘和基因丝frozen-thawed精液的精子更损坏(10,19,32]。
精子的生化性质也受到低温贮藏技术的影响。有一个释放glutamic-oxaloacetic转氨酶(得到),透明质酸酶的失活,精子酵素酶,增加钠。磷酸酶活动减少,acrosomal蛋白水解活性,胆固醇蛋白质、钾含量、和三磷酸腺苷(ATP)和二磷酸腺苷(ADP)的合成,以及氨基酸和前列腺素的损失(2]。总低温贮藏对精子的影响受到内部和外部变量。固有的精子细胞属性,如细胞几何(直径、体积,表面体积的关系),精子水化条件、质膜渗透水和冷冻保护剂,和精子年龄或成熟的状态,都是内在变量(44,45]。胆固醇/磷脂比,脂质双分子层的烃链饱和的程度,以及蛋白质/磷脂比值是必不可少的考虑(42]。在这种情况下,精子从公牛、公羊,和野猪有更大的不饱和饱和脂肪酸比和更敏感。
相比之下,精子从兔子,狗和人类比和较低耐药。冷却和冷冻,冷冻保存剂类型和浓度,extender组成、稀释率、甘油添加到精液的温度、平衡时间和解冻速率都是外在因素(2,45- - - - - -47]。ram的渗透公差限制精子类似于野猪和公牛精子48]。Ram精子细胞更敏感的极端在冻结过程中温度变化和遭受更大的伤害比公牛精子细胞(10,32,49]。ram精子的冷冻保存并不是一个简单的过程。公羊的精子的运动性是缓慢和速冻后保留比精子的形态的完整性。线粒体结构是受到冻融的影响。然而,尾丝纤维不显示任何变化(10]。
5。低温贮藏稀释剂
媒体使用稀释剂来增加射精精子体积和保留生育的时间最长,允许多个雌性动物受精在很长一段(10,50]。精液稀释剂应能提供营养物质作为能量来源,保护细胞免受跟温度有关的伤害,提供缓冲,以防止损害pH值的变化(51),抑制细菌的发展,在保存和保护精子细胞(50,52]。稀释剂应具有最大的水溶性和最小溶解度在其他溶剂,低盐效应,缓冲浓度低,低温影响,行为端正的阳离子相互作用,更高的离子的优点,和化学稳定性53]。稀释剂组成的基本要素影响精子质量,而且会使精子生育的最长时间54,55]。早期的稀释剂对ram精子包括柠檬酸、蛋黄、单糖(如葡萄糖或果糖和牛奶10,55]。基于二糖的各种冷冻稀释剂(海藻糖,乳糖),三糖(棉子糖),复杂的多糖(阿拉伯胶),或其他复杂的化合物(聚乙烯吡咯烷酮),以及蛋黄甘油,是用来稀释和冻结ram精液10,56]。在稀释剂组合,tris-based成分或稀释剂和建议常规使用的公羊的精液(8,10,11,57]。为了避免微生物污染的风险,许多研究人员使用大豆卵磷脂代替蛋黄在填充剂(52,58,59]。[据Aboagla和田农60),添加海藻糖或蜜三糖精液填充剂中扮演一个重要的角色在冻结阶段公羊的精液冷冻保存。海藻糖、棉子糖的加入可以提高其防冷冻的活动。Bioxcell®(大豆lecithin-based)和AndroMed®等商业精液稀释剂用于冻结ram (Tris-based)。这些是Tris-based含有磷脂,柠檬酸,碳水化合物,抗氧化剂,甘油(13,58]。然而,各种自制的稀释剂被用来冻结ram精子(8,9,11,55,56]。
6。冷冻保护剂
用于低温贮藏的稀释剂应包含冷冻保存防止剂保护精子低温损伤在冷却和冻结10]。冷冻保护剂保护冷冻精子细胞,抑制过多的盐浓度,限制细胞收缩在给定温度,减少胞内冰的形成,降低解决方案的部分冻结在一个给定的温度(41,61年]。渗透(细胞内的冷冻保护剂)和非穿透(细胞外冷冻保护剂)防冷冻的代理这两种类型的防冷冻的代理。的区别是由于它们的能力进入精子细胞(52,62年,63年]。低分子量穿透冷冻保护剂(甘油、二甲亚砜、乙二醇和丙二醇)引起膜脂质和蛋白质重组由于膜流动性的增加,在较低温度下脱水,增加和降低胞内冰的形成,导致精子存活率高低温贮藏(41]。非穿透的冷冻保护剂(蛋黄脱脂,脱脂牛奶、海藻糖、氨基酸、右旋糖酐,乳糖,大豆,和蔗糖)得到高分子量,不用通过质膜,只有功能细胞外地;因此,他们可以影响细胞脱水。ram精子冷冻时,甘油通常是用作冷冻保护剂(8- - - - - -11,42]。它结合水,降低溶液的冰点,减少成冰作用在任何温度下(19]。由于渗透刺激和细胞脱水机理、甘油具有细胞外作用,减少细胞内的水的体积可以冻结和增加冻存细胞的存活率(41]。基于应用的浓度和温度,甘油是生物对精子有害和有毒膜完整性(59]。甘油的毒性限制了其使用的稀释剂(19,41,52]。高浓度的甘油是精子细胞有害,因为它会导致渗透破坏。提供最好的浓度post-thaw存活率在4%和7%之间。因为甘油更容易进入ram的精子,精子浓度大于6%是有害的生存(10]。甘油的加入稀释剂是由extender组成、甘油添加方法,和冷却和冻结速率(2,10,41]。根据一些研究,添加3%到7%甘油稀释剂组成的5 - 20%蛋黄导致显著post-thaw精子运动性恢复(44 - 85%)的ram (12,14,64年]。Soltanpour和穆贾达姆65年)发现,稀释剂有7%甘油和20%蛋黄比填充剂更好的精子保护提供了5%的甘油和5%的蛋黄。更高的蛋黄浓度用于精液extender,甘油水平较低。努尔et al。7]研究了甘油的影响(6%)、丙二醇(6%)、蔗糖(62.5毫米),和海藻糖(62.5毫米)与20%蛋黄Tris-based extender post-thaw精液精子质量在ram中,发现所有的冷冻保护剂对精子的运动性这种不利影响,形态和DNA的完整性。席尔瓦et al。66年]ram精液稀释在Tris-egg相比蛋黄extender含有甘油(5%)、乙二醇(3%),或乙酰胺(3%)和发现乙二醇,如甘油、有能力保护进步精子的运动性,顶体完整,冻结过程中氧化应激。使用5%的甘油,另一方面,为质膜完整性提供了最好的保护。Moustacas et al。67年]提到extender 5%甘油保持等离子体和acrosomal膜完整性评估的效率更高,当二甲基甲酰胺单独或结合甘油,冻结ram精液的冷冻保护剂。此外,当填充剂包括纯二甲基甲酰胺或超过2%结合甘油被应用,精子运动性降低至接近零的水平。蛋黄阻止精子冷冲击,让他们能动的,防止acrosomal酶损失,并保持他们的线粒体膜完好无损10,41]。蛋黄通常用于冷冻精液稀释剂由于其属性,如磷脂浓度、高分子量和低密度脂蛋白分数。低温贮藏期间,蛋黄的脂质成分保护精子质膜和顶体精子从热损伤10,42]。通过形成一个spermatozoa-lipoprotein复杂,蛋黄磷脂和低密度脂蛋白(LDL)减少精子冷冲击,从而冷却损伤精子(42]。当蛋黄利用与甘油extender,防止冷休克可能增加(52]。更高的蛋黄浓度并不总是意味着改善精子能动性保存。根据吉尔et al。13),蛋黄浓度较高(5%以上)的牛奶extender没有改善post-thaw能动性。虽然取决于extender成分的影响,蛋黄浓度从3 - 6%(低)15 - 20%(高达)被用来冻结ram精液(10,60]。AI, 15%蛋黄扩展frozen-thawed精液增加生育率在羊55]。使用蛋黄和脱脂牛奶和冻融后他们的表现已经证明损害精子质量。柠檬酸相比,蛋黄,相信总体而言,牛奶中使用ram精液保存post-thaw存活率更高。然而,当几个冻结过程的结果比较,柠檬酸蛋黄上面出来(68年]。Alcay et al。69年]尤其是冻干蛋黄相比新鲜蛋黄ram的冷冻精液和报道,冻干蛋黄提供类似防冷冻的后果新鲜蛋黄extender(见表1)。
7所示。精液稀释和冷却
在精液的冷冻,选中的精液样本与稀释剂和涉及冷却逐渐扩展到5°C。稀释和冷却的目的是延长寿命和降低精子的代谢活动。精液稀释在指定比例适当的稀释剂,以确保精液的体积用于受精每剂量,以确保有足够的精子高生育率没有失去细胞(119年]。由于精子细胞的钾含量的增加,精子也集中精子减少精子的代谢活动。当准备AI的精液,精子的数量每AI剂量应标准化,稀释使用extender。冷却过程应该逐渐缓慢,这是足以保存精子细胞。快速冷却30至0°C会导致精子损伤,所谓的“冷休克”[19]。防止精子细胞冷休克,精液慢慢完成的初始稀释到5°C /几个小时(1.5 - -2.0 h)逐渐添加稀释剂、混合,混合物保持接近体温(57,120年]。暴露前细胞脱水,造成高渗的条件必须缓慢的冷却速度足以让足够的细胞脱水,同时仍然不够快冻结剩余的细胞内液(19,42]。另一方面,缓慢冷却允许水逃脱通过渗透细胞,防止致命的胞内冰的创建(121年]。如果冷却慢,ram的精子中段和尾巴是最敏感的79年]。最佳的冷却速率(从体温5°C)−10°C / h,和用人蛋黄或牛奶作为保护剂导致至少冷休克(42]。精液填充剂最初由甘油可以添加或随后在一个单独的稀释和冷却过程中一部分。在一步法,整个extender添加收集精液后的第一个条件。在第二种情况下,部分extender(没有甘油)应用精液收集后,和其余(甘油)添加冷却后精液冷冻(两步过程)30.,122年]。一些作者获得好的结果,当甘油比例添加在4°C,但是在其他的研究中,更好的结果在甘油添加30-37°C (96年,123年]。虽然差异小,添加甘油在5°C的结果改善精子生存比添加30°C。精子的压力降低到可以接受的水平在逐步稀释过程。的冷冻保护剂相比大大提高了存活的精子的分数单步的冷冻保护剂(19]。这可能是由于甘油渗透通过膜的能力在30摄氏度。甘油是在4°C对细胞膜的渗透性降低,减少危险。甘油的使用限制由于其毒性,如前所述。应该平衡平衡时间与甘油利用甘油的冷冻保存精子质量,同时避免不必要的损失在低温贮藏(124年]。适当的甘油平衡稳定时间一直是低温生物学专业人士之间的争论点。几项研究已经发现,让精子平衡几个小时使用甘油增加post-thaw能动性和生育能力。然而,一些作家建议甘油平衡时间(1.5 - -2.0小时57,120年]。
8。平衡时间
的总时间精子与甘油冷冻平衡前联系。然而,平衡过程不仅限于甘油;它也适用于其他osmotically活跃extender成分。因此,平衡方法可以与extender(缓冲和冷冻保护剂)利用的类型和其他低温过程(125年,126年]。不同平衡时间从1到5个小时用于公羊,不同post-thaw开创性的质量(9,70年,71年]。沙玛和Sood127年)和Ranjan et al。128年)发现4平衡期改善post-thaw精液质量。另一方面,约纳利等。129年)没有发现显著变化在精子的运动性或acrosomal完整性精液样本,平衡为0.5,1,或者1.5小时。
9。精液冷冻
冷冻精液的目的是逐步降低温度从5−196°C,以避免受伤的精子细胞。当温度低于5°C和方法−10°C,细胞内的水结冰,精子细胞形成冰晶的风险。自冻结速度调节的程度和速度细胞脱水,应该尽可能快。当精子细胞迅速冷却,水不够迅速失去了维持平衡,和细胞产生胞内冰低温贮藏期间死亡130年,131年]。假设足够冷却速度非常慢。在这种情况下,精子细胞将暴露于高溶质浓度在较长时间内,导致细胞脱水,体积收缩,没有细胞内冻结。所有这些变量影响精子冷冻的成功。精液extender将决定最好的冷却速度和包装使用。细胞和周围的媒体保持解冻和superchilled当冷却−5°C左右。外媒体冻结5和−−10°C之间,然而,细胞内容保持解冻和过冷。因为细胞内的过冷水比水更有效化学势的部分冷冻细胞外的解决方案,水流的细胞osmotically,和外面结冰130年]。合理的建议是将精液液氮(LN2)存储在−15°C /分钟从+ 5°C−100°C (132年]。精子细胞被冻结在快速的步伐15-60°C /分钟和被发现有一个合理的存活率。有效的冷却速率ram精子已经估计大约20°C /分钟或更多。精液可以冰冻的快慢。精液是冷却速度不够快,避免冷却损失但慢慢足以允许细胞干燥没有胞内冰的生产。与这相关的细胞脱水缓慢冷冻技术可能有助于精子细胞生存,而快速冻结利率更可能导致细胞死亡。一个更稳定的热力学平衡特征缓慢冻结。它拥有较低的冷冻保护剂,通常与化学毒性和渗透压(133年]。另一方面,缓慢冻结似乎是羊的最重要方面保护程序(2,133年,134年]。人工冻结或自动编程biofreezer都选择冷冻精液。在冷冻精液吸管放置水平架和冷冻8 - 10分钟4 - 6厘米以上的LN2汽相(−75°C之间和−125°C)在人工冰箱。解冻后,最初的冻结温度对精子的运动性和速度有显著影响;然而,最好的精子能动性可能达到在−125°C (135年]。尽管如此,冻结直径较小的吸管导致温度快速下降,导致细胞内的水结晶,这可能会引起更少的细胞损伤在比延迟冻结温度的下降,产生严重脱水(136年]。应该使用稻草的大小来确定液氮冻结高度,根据Chemineau et al。137年]。0.25毫升吸管应该冻结16厘米以上液态氮2分钟前降至4厘米3分钟之前陷入液氮存储,而0.5毫升吸管应该冻结16厘米以上液态氮2分钟前被陷入液氮存储。选择冻结位置和时间已经提到,像4 - 5厘米以上液态氮4 - 5分钟,用满意的结果(26,138年]。Pontbriand et al。3)发现,每分钟6到24°C的温度变化和承受每分钟10到100°C,这意味着ram精子可以忍受各种各样的冷却率。气温下降速度控制和编程,利用自动冻结机,从4−5°C在20°C /分钟,−−5 110°C在55°C /分钟,110−−140°C在35°C /分钟(80年]。精子细胞通常是冻结在高速率(15-60°C /分钟),导致最佳post-thawing结果(80年]。一般来说,精子在冷冻extender正在缓慢冷却的速度约0.1°C /分钟从环境温度5°C,然后冻结速度60°C·最低为1的温度尽可能低−80°C之前存储在液态氮(139年]。陷入LN2之前,最终温度至少−应该减少到130°C,无论冰冷的缓慢或迅速完成,停止所有的代谢过程,包括热驱动化学变化(42)(见表2)。
10。精液解冻
解冻是冷冻的逆转过程中,固相的转换成正常的液相(42,141年]。解冻冷冻保存方法和后续影响精子的生存。精子质量受到伤害在冻融精子细胞暴露于两个关键温度区(15−−60°C):曾经在冷却−196°C,而融化。一般来说,大约40 - 50百分比的精子冻融后人口死亡(19]。生存能力可以降低在巴克frozen-thawed精子从85.6到34.3%。虽然frozen-thawed ram精液可能包含大部分的能动的细胞(40 - 60%),大约只有20 - 30%的生理活性(10,19,42]。细胞被收回他们的路线在解冻过程中遇到的许多环境,和水的涌入,结果可以诱导膜破损。变暖阶段(融化)精子的生存同样至关重要的作为初始冷却阶段在冷冻精液的冻融期间(10]。处理元素,如甘油内容的结合,冻结速率、和包装方法决定了理想融化率在大多数情况下。值得注意的是,如果使用的冷却速率足够高的冷冻精子诱导细胞内冻结或低足以导致细胞脱水(142年,143年]。如果冷却速度高、快速解冻需要防止精子细胞的胞内冰从再结晶136年]。当精子快速解冻,它们暴露于一个集中溶质和冷冻保护剂短的时间内,恢复细胞内和细胞外平衡速度比当他们慢慢解冻。这个主题突出了Hammerstedt et al。141年),他指出,精液解冻的速度必须为不同的冻结速率调整为了得到最好的精子存活率。缓慢解冻(12秒35°C)导致63%和50% post-thawing精子能动性和膜完整性,分别为(144年]。5秒快速复温(70°C)导致更高post-thawing精子能动性和膜完整性(分别为50%和67)。
埃文斯和麦克斯韦(30.)发现精子解冻ram 38-42°C 15 - 30秒导致精子的运动性,顶体完整,精子生育也相似。然而,解冻温度升高时(8秒60 - 75°C)可能导致精子活性的等效,顶体完整,解冻后精子生育。Pontbriand et al。3)显示,spermatozoal能动性没有区别,进步状况评级,或acrosomal完整性以更高的速度在水浴解冻吸管(60°C 8秒)和较慢的速度为20秒(37°C)。精子解冻时在50°C 9秒,而不是70°C 5秒,在运动性或膜的完整性,没有区别显示,融化在70°C 5秒优于融化在37°C,持续20秒。农业条件下,融化在一个较低的温度可能会使它更容易使用frozen-thawed ram精液。几项研究已经表明,延长解冻期比一个较短的解冻期(145年,146年]。精液吸管解冻通常是通过沉浸在37°C水浴夫人秒(132年]。在温度超过37°C,温度和时间变得更危险,因为这些高温可能导致大规模的精子死亡率如果解冻是做错了147年]。当精子细胞暴露于温度−5至15摄氏度,他们被损坏79年]。个人射精的ram精子只适合保存和受精如果向前移动的精子的比例大于40%,解冻和30% 5 - 6小时后孵化的30.]。
11。结论
cryo-freezing过程期间,ram精子更容易受到冷休克(2]。为了达到最佳精子质量,各种类型的稀释剂,稀释方法,cooling-freezing协议已经被全世界的研究者们不断尝试。在这次审查中,我们总结了不同冷却速度对ram精液冷冻保存。人员技能、质量的化学名称,和适当的仪器功能阻碍实验室生产更高质量的冷冻精子ram。协议,它提供了更好的优势在确保不损害精子细胞和更好的post-thaw质量应采用lab-specified协议和优化。
的利益冲突
手稿是关心所有作者和作者声明没有利益冲突。
作者的贡献
a·萨哈构思主题了,而巴里财政年度监督和看报纸。a·萨哈表的所有数据,年度巴里编辑最终报告。所有作者阅读手稿。
确认
同时进行回顾性研究,作者欣然承认提供的金融支持科学技术部(大部分),孟加拉人民共和国。