文摘
怀孕准确诊断是一个重要的标准和管理工具,成功的制酪业。没有怀孕的早期识别乳制品小母牛和奶牛繁殖后可以提高怀孕率和生命时间生产。孕酮激素水平测定更精确的诊断怀孕失败在乳制品的动物。在发展中国家这种方法并不总是可用的。一些可用的工具开发对人类和可能被用于牛,因为原则上,孕激素不是特异性的检测方法在动物和人类是一样的。这项研究旨在验证人类孕激素酶联免疫试剂盒用于牛作为妊娠诊断工具。四十Boran和杂交牛(孕妇和非孕期18 22日)被选为研究。10毫升的血液样本收集从每个动物使用颈静脉穿刺。我血清和血浆是收获后2小时内静脉穿刺和血清II 12小时后,和所有样本分析孕酮浓度使用ELISA过程提供的工具包。结果表明,88.9% (n= 16)没有怀孕母牛的孕酮浓度低于1 ng / ml的意思(±SE)为0.48±0.75 ng / ml,所有怀孕的母牛都意味着(±SE) 19.3±0.68 ng / ml的浓度与单个值从5.2 -38 ng / ml。孕酮浓度之间的品种和样本类型没有显示怀孕和怀孕母牛的统计上的显著差异。尽管如此,实验的结果充满了希望在奶牛妊娠诊断而言从经济角度和准确性;必须进行大规模的实验证明重复性和敏感性
1。介绍
发展中国家已经近两个世界牲畜人口的三分之一。然而,他们生产世界上不到三分之一的肉和牛奶的五分之一。埃塞俄比亚,撒哈拉以南非洲的一个发展中国家,非洲最大的牛的数量估计的7020万头1]。巨大的牛资源扮演着一个重要的角色在食品安全方面,现金收入,资本资产和社会生活。然而,该国人均牛奶消费量估计大约20公斤,远低于平均人均概念非洲,每年40公斤(2]。牛奶产量往往不能满足的需求由于因素如遗传潜力和繁殖性能差,营养不良,传统的管理系统,高发病率的疾病导致牲畜死亡,和社会经济因素3]。
妊娠诊断是一个重要的要求成功的制酪业和增加农民的财富。怀孕一定要做出正确的诊断后尽快受精,这样可以观察到没有怀孕动物取暖更紧密地合作。没有怀孕的早期识别奶牛,小母牛post-breeding生殖效率,可以提高怀孕率减少受精之间的时间间隔,提高人工授精技术(AI)服务速率。因此,新技术来确定没有怀孕早期奶牛和小母牛AI可能发挥关键作用后管理策略来提高繁殖效率,因此奶牛场的盈利能力。生育管理是乳制品行业的一个主要因素影响盈利能力(4]。理想的怀孕测试应该高灵敏度,正确确定怀孕的动物,特异性高,正确确定没有怀孕的动物,应该是简单和廉价的现场条件下进行。没有简单的实验室测试可用来诊断怀孕牛。直肠触诊是最古老和最广泛使用的方法对早期妊娠诊断奶牛,它有它自己的缺点的直肠出血,早期胚胎死亡率和极端强调怀孕动物和需要一个熟练的兽医5]。目前先进的方法可用于妊娠诊断超声和广播等免疫测定是发达国家和最发达国家使用,不能容易实现在发展中国家的农村地区6埃塞俄比亚等]他们是复杂和昂贵的。使用最广泛、有效和可靠的方法non-pregnancy检测血浆中孕激素的测定或牛奶(7]。孕酮检测农场动物的妊娠诊断早期妊娠诊断的一个重要工具和不孕监测精度高,有利于提高经济效率的一个农场(4]。孕酮浓度检测作为诊断工具已经成为可能,通过引入等技术(6)和酶联免疫吸附试验(ELISA)技术(5]。这个量化有助于怀孕检查早在自然或人工授精(8),几乎95%的奶牛孕酮低不会怀孕24天后AI (9]。不幸的是,未及技术是昂贵的,需要使用专门的放射性同位素的设施,因此不适合田间使用[6]。
孕酮检测方法基本上是相同的原理在动物和人类。主要有五个化学测试套件用于检测牛奶中的荷尔蒙和一个用于血清在小母牛4,10)在埃塞俄比亚,早孕测试套件不容易在市场上的动物。即使可用,这是人力资源的两倍,不能轻易获得由研究人员和乳制品从业者。另一方面,人类孕酮测定包都可以在市场和兽医用品相比更便宜。缓解的问题诊断包费用高,重要的是要开发一个替代简单,可靠和便宜的测试来确认在奶牛怀孕。这项研究开始与假设:人类的ELISA孕酮测定装备将在奶牛产生相同的结果。因此,本研究的目的是验证使用人类孕酮酶联免疫试剂盒的牛。
2。材料和方法
2.1。研究区域
Holeta农业研究中心的研究(HARC),位于亚的斯亚贝巴以西33公里,西结23:23 Oromia区区域状态,埃塞俄比亚。它有一个海拔2400米的高度。Holeta区域有双峰降雨量和年平均降水量1014毫米,以亚热带天气凉爽最小和最大温度为6.16°C和22.3°C,分别平均相对湿度为59% (11]。
2.2。研究动物和他们的管理
研究奶牛健康怀孕22 (PG)(11纯Boran和11 Boran X Holstein-Friesian十字架)和18没有怀孕(NPG) (9 Boran和9杂交)由HARC拥有。牛的年龄范围在4到10岁之间,他们的身体状况得分是在4(媒介)8(脂肪)对牛组。所有牛被允许每天八小时放牧和与本地干草和补充商业集中。水了随意一天两次。泌乳奶牛是machine-milked一天两次。怀孕的状态是通过直肠触诊60天post-breeding决定的。收集样本怀孕母牛明确确认怀孕后60天更牛。
2.3。研究设计
总共20 Boran (11 PG和9 NPG)和20个杂交(PG和9 NPG) 11日牛选择和用于这项研究。PG牛被证实怀孕60天而组成的核计划组的奶牛产后至少14天。
约10毫升的血液样本收集来自所有研究动物在两个平原和一个使用颈静脉穿刺肝素化真空采血管管。提取血清(血清I)和等离子体从一个平原,一个肝素化管2小时后集合,而另一个血清血清(II)收集后剩下的普通真空采血管保持样品在室温下过夜(12小时)检查其可能性血清是否受到隔夜存储用于野外条件。提取血清和血浆样本放置在cryovials和存储−20°C到化验。
收集到的样本的孕酮的浓度是决定使用竞争ELISA技术(人类®、孕激素化验设备,德国)根据过程提供的工具包。这个工具包的分析灵敏度0.03 ng / ml。校准器的吸光度和标本决定使用自动ELISA读者系统(德国HUMAREADER)使用一个参考波长630 nm。孕酮的浓度在收集标本从剂量反应曲线插值生成利用已知的孕酮浓度水平的血清校准设备。孕酮的工具是基于竞争互动和hormone-enzyme共轭有限数量的固定化anti-progesterone抗体,因此绑定hormone-enzyme共轭的数量成反比标本中孕酮的浓度。校准器的浓度范围是0到40 ng / ml。
2.4。统计分析
收集的数据来自实验进入Microsoft Excel 2010的数据库管理软件。数据分析使用一般线性模型(GLM)过程的统计分析系统(SAS研究所、吴雨霏数控。美国)测试品种的固定效果,怀孕状态,血液样本类型孕酮浓度。在所有情况下, - - - - - -值小于0.05被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
研究显示,观察血孕酮浓度的研究动物对应于个人的怀孕状态的动物,这意味着所有的值都是3 ng / ml以上PG牛或低于3 ng / ml NPG的。结果表明,所有的核计划组牛孕酮浓度≤1.2 ng / ml和PG奶牛所孕酮浓度≥5.2 ng / ml样品(表1)。
在当前的研究中,平均血孕酮水平为0.48±0.75 ng / ml (n= 18)值从0.1到1.2 ng / ml的产后NPG奶牛。16(88.89%)的18早期产后NPG奶牛平均孕酮水平低于1 ng / ml。均值(±SE)孕激素水平PG组为19.31±0.68 ng / ml与单个值从5.2 -38 ng / ml。血孕酮浓度品种之间没有表现出统计上的显著差异在PG和核计划组牛(表2)。孕激素分析结果也表明,平价数量没有显著影响孕酮浓度水平。PG和核计划组奶牛的平均孕酮浓度为23.14±1.18,0.56±1.31 ng / ml等离子体,19.22±1.18,0.46±1.31血清我和15.57±1.18,0.43±1.31血清二世(表3)。
数值,孕酮的浓度水平的变化之间是血浆,血清,观察和serum-II但没有统计学意义差异。而孕激素浓度的血清,血清二世和等离子体明显( )不同PG和核计划组头奶牛。
摘要孕激素浓度的不同样本PG和核计划组群表中给出了两个品种的动物2。
4所示。讨论
孕酮的浓度水平中发挥着重要作用评价奶牛的繁殖状况。这是一个重要的生殖激素维持妊娠和是由卵巢的黄体。经测量,浓度的血液水平增加排卵后,在怀孕期间,减少黄体回归和分娩期间卵泡增长之后12]。由黄体孕酮浓度维持在一个较高的水平相比,怀孕的母牛怀孕牛(5]。因此,它是一种理想的生物标志物可以帮助确定量化的牛是骑自行车还是怀孕了(8]。人类的孕激素酶联免疫试剂盒能够区别PG和NPG牛;,孕酮的浓度在核计划组奶牛不到1.2 ng / ml,虽然高于3 PG牛ng / ml。不同的实验对兽医孕酮包维护类似PG和核计划组动物之间的区别12]。
装备有一个分析灵敏度0.03 ng / ml的人类血液样本,可以检测到相同的动物。最小的孕酮值核计划组(0.1)和PG (5.2 ng / ml)发现在目前的研究密切相似的其他结果由兽医用品(12]。发现孕酮的浓度大于3 ng / ml在所有样本PG牛是强有力的证据存在的一个活跃的黄体在所有的动物13,14]。同样,意思是孕激素水平在两个样本(血清,血清二世和等离子体)收集的核计划组牛低于1纳克/毫升(n= 16)这是一个迹象表明,动物没有怀孕,可能在发情周期的卵泡期。孕激素浓度的血清样本收集从PG和核计划组牛5 ng / ml以上,低于1 ng / ml,分别,这表明孕激素浓度水平没有区别,如果血清样本提取立即对现场条件或存储在一夜之间。牛(n= 2)最高的孕酮(1.2 ng / ml)水平在产后组可能有早期恢复卵巢的活动。这个结果一致的发现Purohit [14)测定孕酮和报道,高孕酮浓度可能表明动物怀孕和血孕酮水平低浓度在18到24天的post-breeding可以预测动物是没有怀孕,在卵泡期。孕酮浓度分析结果表明,品种间没有观察到显著差异和奇偶校验样本。
在目前的研究中,孕酮检测所有样品(血清,血清二世和等离子体)收集的PG牛大于3 ng / ml。这个结果也与其他人类工具的验证报告牛,Bos indicus,和杂交(牛xBos indicus)牛在喀麦隆12]。这个结果也同意这一发现Cavestany et al。13]。也没有显著差异在孕酮的浓度在所有样本为PG和核计划组。它表明血清中孕酮的浓度和血浆样品平行于黄体的增长和回归。
5。结论
人类孕激素酶联免疫试剂盒在当前的研究中显示出类似的结果验证各级兽医用品执行乳制品的动物。最小的和最高的值检测样品测试报告的范围内相似研究动物。鉴于兽医用品的高成本和可用性,人类孕酮包提供最好的选择给等效的结果。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。