文摘

肠道寄生虫感染在小反刍动物属于主要的健康问题。调节胃肠感染山羊和开发的反应对他们似乎不同于观察到羊。在文献中,有一个缺乏数据的影响胃肠道寄生虫感染山羊血清蛋白概要文件。因此,这项研究的目的是确定在山羊血清蛋白质的电泳模式自然感染胃肠道寄生虫和比较血清总蛋白和血清蛋白的变化分数(白蛋白和α₁- - - - - -,α₂- - - - - -,β- - - - - -,γ球蛋白)antihelminthic治疗后获得的。八个成年女性白色短毛品种的山羊从一个小山羊奶制品农场在年龄介于3和5年平均体重35.4±3.2公斤,体况评分从1.5到2.5 (BCS)被用于这项研究。山羊的血清蛋白质是分为五个部分:白蛋白,α₁- - -α₂球蛋白,β- - -γ球蛋白。治疗后显著变化被发现在相对浓度的白蛋白( )和α₂- ( ),β- ( ),和γ球蛋白( ),以及白蛋白/球蛋白比例( )。血清总蛋白的平均浓度,杀寄生虫药治疗后,显著提高。球蛋白分数中,γ球蛋白比例贡献了最重要的是这些变化( )。提出了研究结果显示抗治疗的一个重要影响山羊血清蛋白质的合成和血清蛋白的比例的变化分数。

1。介绍

小反刍动物胃肠道线虫感染属于主要的发展中国家的健康问题和在热带和亚热带地区最常见的,但在全球范围内,他们继续是一个主要的约束也为其他领域,不仅对贫穷的发展中国家(1,2]。欧洲中部的气候温和的国家允许动物花大部分的牧场,他们通常在哪里接触感染性阶段的寄生虫,这些都会增加感染的风险(3,4]。许多文献来源指出,频繁的出现和盛行的胃肠道线虫在许多国家和小反刍动物感染的危险因素分析(5- - - - - -11]。胃肠道寄生虫感染不仅影响健康,还间接地在畜牧业造成巨大的经济损失由于整体产量的损失,减少动物的性能和体重增加,生长迟缓,治疗费用,和死亡率12- - - - - -14]。Abomasal和肠道线虫感染山羊是世界范围内最重要的疾病之一,特别是在那些一直在户外的全部或部分。临床症状可能会有所不同从减肥和减少产奶量显著疾病严重水样腹泻导致dehydratation,低白蛋白血症,迅速死亡。感染肠道线虫生产绒毛萎缩和墓穴增生。不成熟的上皮细胞的合成快速细胞营业额允许流体和血浆蛋白的损失到肠道内腔,导致蛋白质损失率肠病(15]。是前面描述的肠胃寄生虫感染羊与血清蛋白的变化有关,尤其是与血清总蛋白和白蛋白浓度的减少,和改变也被发现在血清中蛋白质分数(16,17]。数据的影响胃肠道寄生虫感染山羊的血清蛋白资料缺乏。蛔虫感染可能导致严重损害宿主组织由于直接入侵和胃肠道功能紊乱在山羊,但生理,生化,免疫反应这些感染绵羊和山羊之间可能有所不同。到目前为止,大多数数据评估胃肠道寄生虫感染的生物化学变化的形式记录主要是羊。因此,在山羊的物种需要更多的研究来描述肠道蠕虫病的影响在生物的生化参数和响应与血清蛋白的变化相关配置文件(18- - - - - -20.]。蛋白质电泳是最可靠的实验室方法准确地确定异常血清蛋白分数的分布和量化几个血清蛋白分数(21]。甚至在不变的情况下,血清总蛋白浓度,这可能有用的实验室技术检测可能的血清蛋白异常模式(22]。因此,本研究的目的是确定在山羊血清蛋白质的电泳模式自然感染胃肠道寄生虫和评估血清蛋白浓度的变化分数打虫药治疗后获得的。

2。材料和方法

2.1。伦理批准

处理与动物、样本收集和准备进行按照道德标准和指南委员会批准的大学的兽医和药房在Košice保护动物用于科学和符合道德规范的制度要求科学家(74/2019 / UVLF指令)。

2.2。动物和样品收集

八个成年女性山羊从一个小山羊奶制品农场群包括24动物(15 9成人和孩子)被用于这项研究。评估动物是白色的短毛品种的年龄3至5年不等。他们在贫穷的营养状况,其中一些腹泻。在一些山羊的粪便,绦虫发现节片发布的存在。山羊的平均体重为31.4±3.2公斤,和体况评分(BCS)从1.5到2.5不等。得分进行了使用二元同步通信与0.5增量(从1到523]。以来白天放牧动物的春天,在夜间,山羊被安置在一个谷仓,他们有自由进入草地干草和水,还收到了浓缩饲料的混合物。获得的粪便和血液样本在主要放牧季节。山羊在农场没有接受驱肠虫剂由于放牧季节的开始。

收集粪便样本直接从直肠评估山羊的使用塑料手套进塑料粪便容器。样本的标签,然后转移到实验室反刍动物诊所的兽医大学的医学和药学的Košice检查寄生粪蛋。检查样品在一天内进行。蛋白质分析血液样本被两次,第一次采样之前治疗的动物和第二次治疗后3周评估治疗的效果评估参数的变化。现有的蠕虫病治疗的一剂口服剂量的阿苯达唑5毫克每千克体重(Albendavet 1 9%, Slo-Werft)。通过直接穿刺收集血液样本诉jugularis与凝血激活血清凝胶血液采集管,但是没有抗凝剂(描述,Piove di焦点在于,意大利)。收集后,血液样本在室温下凝结,然后离心机在3000 g 30分钟。分离血清是储存在−20°C到分析。

2.3。实验室分析

泰勒描述的标准直接浮选技术et al。24)是用于鸡蛋的评价线虫、绦虫,coccidian卵囊。寄生卵的形态检查与光学显微镜进行识别寄生虫的卵的礼物。根据标准的寄生虫学的标准所描述的桑丘[25),混合感染胃肠道线虫和绦虫被检测到。以下类型的鸡蛋被确认:Strongylida,类圆线虫属,鞭虫,Moniesiaspp。

血清用于测定血清总蛋白的浓度和蛋白质的分数。血清总蛋白被缩二脲的方法估计使用商用诊断包(英国草毒死,Crumlin)自动化学分析仪Alize (Lisabio、妓女en Auxois、法国)。琼脂糖凝胶电泳进行与商业诊断包Hydragel 7 Proteine(埃夫Sebia公司,丽丝,Cedex、法国)使用一个电泳系统Hydrasys(埃夫Sebia公司,丽丝,Cedex、法国)根据程序所描述的制造商。

染色凝胶电泳后,使用微扫描光学扫描系统爱普生完美V700(爱普生美国公司,美国)和评估根据光线传播的原则通过彩色凝胶和转换成一个光密度曲线。计算机软件程序携运5.50 (Sebia公司、法国)被用来可视化乐队的山峰(电泳图)。目视检查发现的蛋白质分数是根据电泳图上的山峰之间的中点。评估的山羊,下面的蛋白质分数被确定在电泳图:白蛋白,α₁- - -α₂球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白。根据获得的光密度,每个峰面积计算,各个区域的相对浓度(%)作为血清总蛋白的百分比计算。因此,每个的绝对浓度(g / l)乐队来自百分比和量化的血清总蛋白浓度。白蛋白与球蛋白比值(A / G)也计算。

2.4。统计分析

为每个评估变量的均值和标准差的计算使用统计软件程序GraphPad棱镜V5.02(美国加州GraphPad软件有限公司)。数据的分布由Kolmogorov-Smirnov评估测试正常。并不是所有的评估参数正态分布。样本集合之间的差异(治疗前后)测试使用配对t检验正态分布数据和Wilcoxon测试的非正态的分布数据。差异被认为是重要的 水平的概率。

3所示。结果

山羊的血清蛋白质是分为五个部分:白蛋白,α₁- - -α₂球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白。如表所示1的分析值的相对浓度的白蛋白明显下降后杀寄生虫药治疗( )。的平均值α₁球蛋白治疗前后没有显著不同的动物,重大的改变之间的样本集合中被发现α₂球蛋白,显示治疗后明显降低相对的值( )。在一个相反的趋势β- - -γ球蛋白,显著增加平均浓度的球蛋白antihelminthic治疗后( 和 ,分别)。A / G比值降低,治疗后显著降低( )。

如表所示2,意思是杀寄生虫药治疗后血清总蛋白浓度显著增加超过10 g / l的平均值相比之前治疗( )。蛋白质的绝对浓度分数的分析显示,除了白蛋白,重大改变后的值除寄生虫的动物。白蛋白治疗后的绝对浓度是无意义的不过是略高于治疗前。的浓度α₁- - -α₂球蛋白,显著增加的值被发现后antihelminthic治疗( 和 ,分别)。同样的,绝对的浓度β球蛋白治疗后显著增加( )。最显著增加球蛋白分数之间的绝对浓度的浓度γ球蛋白。他们的价值观在治疗后增加了超过7 g / l相比,预处理浓度( )。

个人的相对比例的变化提出了治疗前后血清蛋白质分数代表山羊电泳图(图1),显示一个占主导地位的差异,尤其是中可见γ球蛋白分数(箭头在图1 (b))。

4所示。讨论

小反刍动物,尤其是食草动物,被感染通常有超过一种胃肠道寄生虫在全球范围内(4]。不仅胃肠道寄生虫也艾美球虫属种虫害通常在粪便样本确认,一个重要的角色在混合胃肠道感染(26]。调节胃肠感染山羊和开发的免疫反应对他们似乎不同于观察到羊,但是只有少数的研究调查了这些反应在山羊和大多数动物进行感染Haemonchus contortus(18,27]。胃肠道寄生虫诱发不仅在肠道内腔形态学变化,组织损伤,减少饲料消化率也一系列血液和生化改变28- - - - - -33]。胃肠粘膜的损害是伴随着蛋白质胃腔的泄漏导致蛋白质损失率肠病和降低血清蛋白的浓度34]。费尔南德斯et al。16)观察山羊感染胃肠道寄生虫,包括Trichostrongylusspp。Oesophagostomumspp。,艾美球虫属spp,降低血清总蛋白和白蛋白的浓度。显著降低血清总蛋白质与胃肠道寄生虫感染山羊也记录了Moudgil et al。35]。这一发现是由于蛋白质损失率胃肠病,从受损的肠道粘膜吸收不良的蛋白质。低蛋白血症和低白蛋白血症是强烈的获得也在山羊自然感染Haemonchus contortus(29日,36)或有严重的寄生肠胃炎的山羊32]。增加血清总蛋白浓度在山羊体内寄生虫被哈桑观察et al。37)14天、28天的治疗后相比,预处理的值。同样,阿拉姆et al。38)记录在山羊与临床肝片吸虫病血清总蛋白质的增加30天的治疗。在我们的研究中,低浓度的血清总蛋白获得的山羊抗治疗前治疗后伴随着值的增加,这表明改善食欲,增加采食量,减少肠道营养损失。然而,没有深入分析个体的血清蛋白质分数,不可能确定哪些蛋白质分数导致总蛋白浓度的变化。提出了我们的研究,记录antihelmintic治疗后血清蛋白浓度的增加可能与增加有关β,主要是γ球蛋白作为体液免疫反应的一部分来克服感染。沉重的感染也可引起严重疾病,并可能导致的损失白蛋白的血管由于其选择性损失和增加部分分解率(24]。低白蛋白血症的另一个原因可能是其受损的肝脏合成的(39]。白蛋白属于群-急性期蛋白,因为它降低了浓度在损伤和炎症反应40]。因此,低浓度的白蛋白在受感染的动物可能是急性期反应的结果由于胃肠道寄生虫感染。低浓度的白蛋白也报道了Bandhaiya et al。41在山羊蠕虫负担高,受感染动物的卵数与白蛋白的浓度高度相关。同样,白蛋白浓度被发现减少了Qamar和Maqbool42在山羊胃。动物中的白蛋白值处理各种类型的antihelmintics明显更高的治疗后28天。生田斗真et al。43)记录在小牛感染胃肠道寄生虫增加白蛋白浓度在90年和120年与fluazurol使用3.5%伊维菌素治疗后,neocidol和二氢噻唑。白蛋白的浓度与3.16%伊维菌素治疗后治疗后和cypermetrine天90年有所下降,120年天治疗后保持稳定。虽然在我们的研究白蛋白值的相对比例减少治疗后显著增加造成的γ球蛋白比例),绝对的值显示无显著轻微增加治疗后的平均值。的浓度α₁球蛋白,显著增加的绝对值在山羊antihelmintic治疗后观察记录治疗前相比值。的α₁球蛋白部分包括许多重要的急性期蛋白,包括α₁抗胰蛋白酶,α₁酸性糖蛋白、血清淀粉样蛋白(22]。因此,浓度越高α₁球蛋白在感染山羊可能与一些急性期蛋白的增加产量由于组织损伤和炎症引起的寄生虫。更高的α₁球蛋白浓度观察与自然获得羊胃肠道线虫感染(17]。在山羊,Haemonchus contortus发现感染导致显著增加α球蛋白值(36]。然而,混合的影响胃肠道寄生虫感染在山羊α球蛋白分数,以及治疗后的变化,不是完全理解。的增加α₁球蛋白浓度观察山羊治疗后可能会在我们的研究表明急性期反应的延续或在一些动物治疗反应不足。是马中描述antihelmintic治疗可能导致局部炎症反应的特点也增加一些急性期蛋白的浓度(44]。观察治疗后增加的值也在我们的研究中α₂球蛋白。此部分包含一些其他急性期蛋白,包括触珠蛋白、血浆铜蓝蛋白,α₂微球蛋白,α₂巨球蛋白,α₂脂蛋白(21]。观察结合珠蛋白和血浆铜蓝蛋白的浓度增加了Ulutaşet al。45在山羊与混合胃肠道线虫的感染和肝吸虫(鞭虫spp。毛圆线虫科spp。,小束仕达屋优先计划。),但进一步的研究的临床重要性增加的分数与治疗疗效的评价antihelmintic治疗山羊。类似于α球蛋白,β球蛋白分数显示增加相对和绝对的平均值n山羊antihelmintic后治疗。一些重要的蛋白质转移到这个分数如补充、c反应蛋白(CRP)和转铁蛋白和铁蛋白(22]。激活补体的第一个非特异性先天感染寄生蠕虫的防御反应,导致增加趋药性的肽的合成C3a ca5,动员嗜酸性粒细胞的感染(46,47]。的增加β球蛋白分数杀寄生虫药治疗后可能反映了补充系统的一些组件的增加,建议治疗后炎症反应的延续。几乎所有的寄生虫侵入胃肠道的组织,因此可能会导致急性期反应的起始与急性期蛋白质浓度的增加。虽然在小反刍动物不是CRP诊断重要,急性期蛋白质只有在炎症反应轻微增加,其显著增加某些疾病的条件。显著增加的c反应蛋白值被发现El-Deeb et al。48山羊,山羊的传染性胸膜肺炎。CRP浓度的改变山羊感染胃肠道线虫尚未研究。上的另一个可能的原因β-globulinaemia感染山羊是增加生产的一些免疫球蛋白,尤其是IgA和IgM,针对入侵的寄生虫,这些免疫球蛋白可能迁移到β区(49]。因此,还需要进一步的分析来建立蛋白质的高度负责β球蛋白在山羊antihelmintic治疗。

不仅细胞介导免疫性,体液免疫反应也开始对受感染动物(线虫感染50]。合成的增加γ球蛋白是体液免疫应答的主要成分为克服感染和高的原因γ球蛋白值山羊在我们的研究中。的浓度的增加γ球蛋白是观察也与线虫感染绵羊和羊羔,伴随着对寄生虫感染的体液免疫反应的表现(51,52]。同样,较高的浓度γ球蛋白是由阿拉姆报道等。29日和第欧根尼等。36在山羊感染Haemonchus contortus和杰西et al。32在山羊混合胃肠道线虫感染。提出了我们的研究结果显示增加了γ球蛋白浓度在治疗后,这可能是与后期对寄生虫感染的免疫反应。更高的免疫反应antihelmintic治疗后使用伊维菌素被公布之前,有关大规模释放抗原由于同步死亡的寄生虫,而免疫变化似乎取决于类型的寄生虫和主机物种(53,54]。同样,这是马所使用fenbendazole antihelmintic治疗,该药可能移植免疫反应(55]。白蛋白/球蛋白比例也是影响评估动物。antihelmintic治疗后,我们记录了a / G比值的降低,这是与球蛋白增加分数和白蛋白下降更为显著相关治疗后。

5。结论

总之,到目前为止,只有少数数据评估胃肠道寄生虫感染的生物化学变化一直在山羊。结果记录在研究表明胃肠道寄生虫病和抗治疗的显著影响山羊血清蛋白质的合成和血清蛋白的比例分数。他们与白蛋白明显减少和增加,特别是γ球蛋白分数。在蛋白质的绝对浓度分数,增加的值α- - - - - -,β- - - - - -,γ球蛋白。然而,进一步的研究使用较大的动物保护团体和更频繁的样本集合在杀寄生虫药治疗后较长时间内将有助于产生可靠的结果。

数据可用性

生成的数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作得到了资助(VEGA 1/0398/18号和VEGA 1/0314/20)从教育部、科学、研究、和斯洛伐克共和国的运动。