Seroprevalence和相关的危险因素钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo在奶牛场和周围Jimma镇西南埃塞俄比亚

文摘

一个横断面研究选择奶牛场Jimma城里,Oromia埃塞俄比亚西南部,从2019年11月至2020年5月决定的seroprevalence钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo(l . hardjo)。此外,信息聚集在单个动物和群体水平通过使用预先测试过的半结构式问卷来评估相关风险因素。分层和简单随机抽样程序被用于奶牛场的选择和个体动物,分别。间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)用于本研究检测抗体l . hardjo。384个动物的血清,94只动物血清反应阳性的反对l . hardjo抗体。从77年奶牛场的选择研究中,57人区分为阳性l . hardjo。钩端螺旋体病的整体seroprevalence所致l . hardjo为24.48% (95% CI: 20.18% - -28.78%)和74.03% (95% CI: 64.23% - -83.82%),个别动物和农场级别,分别。multilogistic回归分析的结果显示,管理系统(< 0.05;或= 4.25(95%置信区间:2.31—-7.82)),农场的卫生状况(< 0.05;或= 0.35(95%置信区间:0.20—-0.61)),年龄的动物(< 0.05;或= 8.30(95%置信区间:1.87—-36.89)),堕胎的历史(< 0.05;或= 8.37(95%置信区间:1.73—-40.42)),群体大小(< 0.05;或= 2.32(95%置信区间:1.17—-4.61)),和访问的啮齿动物农场(< 0.05;或= 0.17(95%置信区间:0.03—-0.86))的发生显著相关l . hardjo感染。然而,品种,奇偶校验,并引入新的动物农场是无关紧要的关联(> 0.05)。管理系统的动物,农场的卫生状况,群体大小、年龄的动物,以前堕胎的历史,和访问的啮齿动物的农场被确定作为一个潜在的危险因素l . hardjo疾病发生。因此,限制啮齿动物接触牲畜饲料和水以及良好的卫生习惯和饲养管理应该采取。

1。介绍

钩端螺旋体病是一种普遍的疾病的动物,也是全球分布的人畜共患病(1]。全球疾病分布由于大型哺乳动物宿主的港口,从他们的肾小管排泄代理(2]。钩端螺旋体病的流行病学的中心点是肾的状态载体,动物有其肾小管由leptospirae殖民,这反过来会在尿液中排出污染环境(3]。钩端螺旋体病牛具有重要的经济影响在受感染的农场,导致生殖损失由于不孕,流产,死产,薄弱的后代,和牛奶产量下降和增长率4]。

牛钩端螺旋体病的危险因素可能包括群体大小、放养密度和群管理、共享与其他地区放牧感染牛、猪、和羊,存在被污染的水源,使用受感染的牛,和年龄的动物5]。钩端螺旋体感染传播的核心因素是航母的存在动物,生存环境的适用性的leptospires,和人之间的相互作用,动物和环境6]。

钩端螺旋体病的诊断取决于可用的样本和时间阶段的疾病(7]。钩端螺旋体病血清学是最常用的诊断方法(8]。ELISA是最广泛使用的分析方法之一,发生抗原抗体反应,检测到感兴趣的分析物的酶系统[记者9]。相比,它的特点是灵敏度高、特异性的显微镜凝集试验(垫)、技术标准。不同于垫,ELISA可以区分个体免疫球蛋白类,因此可以用来检测感染早期阶段以及老感染(7]。间接ELISA,样品被分析为一个特定的抗原坚持微量滴定板的井,紧随其后的是一个解决方案non-reacting蛋白质如牛血清白蛋白(BSA)来阻止任何地区的井不涂有抗原(10]。

理解钩端螺旋体病的流行病学特征是一个关键的步骤,设计干预措施减少疾病传播的风险(11]。

在埃塞俄比亚,钩端螺旋体病是一种相对不知名的疾病虽然已经报道发生在家养动物。

Jimma区被认为是区域森林咖啡存在,它也有很多牛人的潮湿环境。尽管之前的研究由严et al。12在埃塞俄比亚证实的存在钩端螺旋体种虫害在动物和人类,没有了解疾病的患病率研究中设置。因此,本研究将确定的血清学流行l . hardjo在选定的奶牛场和首次Jimma城里。因此,本研究可以补充seroprevalence信息的缺乏,与发生的相关危险因素l . hardjo在乳制品农场动物产于特别是Jimma城里,也导致了政府战略应对全国五个人畜共患疾病,包括钩端螺旋体病。

2。目标

(1)目标是确定seroprevalence和相关的风险因素钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo(l . hardjo)在奶牛场和Jimma城里,埃塞俄比亚西南部。

3所示。材料和方法

3.1。研究区域的描述

这项研究是在进行Jimma小镇(图1)选择乳制品农场从2019年11月到2020年5月Jimma Oromia区区域状态,从亚的斯亚贝巴的距离355公里,这个国家的首都,埃塞俄比亚西南部。7°之间的区域位于41“N纬度和36°50 E经度和海拔1704 m。a . s . l。该地区的气候是热带湿润气候特点是暴雨,从每年1200 - 2000毫米不等。一年一度的最小和最大温度范围从6°C和31°C,分别整体平均温度大约18.5°C。在该地区的农业生产系统和作物和畜牧生产系统。尽管该地区是很出名的咖啡生产、畜牧生产仍然是最重要的农业活动(13]。

区是埃塞俄比亚最大的牲畜数量的所有者之一,大约有2212962头牛、866561只羊、457311只山羊,96782匹马、17644头骡子,驴77767匹,从1951129家禽,546722块蜂房(14]。

3.2。研究动物和他们的管理

目标研究人口组成明显健康动物的奶牛场管理密集型和半精耕细作的生产系统。根据标准Zuberbuhler et al。15),管理系统分为半精耕细作的管理系统,包括所有的动物来保持室内和室外,同时强化管理系统涵盖了所有的动物都被关在封闭系统和浓缩饲料以及混合饲料。牛正在研究由外来和当地土著瘤牛的雌性动物与不同年龄大于6个月。

3.3。研究设计

进行了横断面研究,经过测试半结构式问卷调查收集数据在研究区相关的危险因素。

3.4。样本容量确定和采样技术

样本大小的计算是基于50%患病率的假设(因为没有研究l . hardjo在该地区),95% CI和d= 0.05精度(16]。 在哪里n=样本量,z=信心统计,=预期患病率d=想要的绝对精确。

因此,计算样本大小是384牛。

抽样框架和采样策略确定如下。

奶牛农场的列表是来自官方记录由Jimma都市农业和自然资源从奶牛场老板办公室和列表的动物。基于动物的数量,农场被分成三个类别;小规模(≤10头牛),中等规模(> 10 - 20头牛),和大规模的(> 20头牛)17]。分层随机抽样过程被用于选择奶牛场和研究动物被简单随机抽样方法选择根据他们的耳朵标签(彩票方法)。基于其代表性11、5、3从大型动物被取样,中期,分别和小规模的农场。

3.5。数据和样品收集

3.5.1。问卷调查

一个预先测试过的半结构式问卷旨在收集信息因素被认为影响的传播和流行l . hardjo感染个体农场动物和水平。农民的问卷调查,提出了考虑一般疾病的迹象。开启和关闭结束的问题是使用农场主人的动物被取样。因此,77名农场主采访的相关危险因素。以下数据收集个体动物属性:品种、年龄、平价、群体大小、卫生状况的农场的房子和管理系统。基于其生物相关性,年龄是分成三类:0.50 - < 3年,3-6years > 6年根据他们的出生日期记录和牙科喷发(18]。

此外,信息在农场如群大小、访问的啮齿动物农场,管理系统,流产史,农场的房子的卫生状况,引入新的动物农场(替代小母牛)(yes / no)收集。卫生状况的农场的房子被归类为基于粪便处理清洁/不清洁,排水和谷仓通风而访问啮齿动物的农场被归类为礼物/没有基于存在缺乏动物饲料存储(杂志)附近的农场和响应的受访者。

3.5.2。血液样本采集过程

动物被限制动物处理程序,大约10毫升的血液样本收集从每只动物的颈静脉使用真空采血管管和18 - 20计皮下注射针头后用酒精清洁区域。每个样本每个动物标记通过使用代码描述特定的动物和农场。对应于每个样本,年龄和品种的动物和其他风险因素的发生l . hardjo收集和注册在一个单独的书。样品被运往Jimma大学兽医微生物学实验室,利用冷却箱兽医学院。

然后,一夜之间血液样本一直在室温下允许凝血。在第二天早上,清晰地分离血清约2毫升提供了识别的cryovials正好。获得的血清储存在−20°C到运往国家兽医研究所和间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)。

3.6。实验室测试程序(血清学)

3.6.1。间接酶联免疫吸附剂测定(I-ELISA)

的PrioCHECK钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo(L.hardjo)抗体(Ab)是一种间接ELISA和检测Abl . hardjo在牛。描述的测试执行Scolamacchia et al。19),根据制造商的建议。首先,100µl ELISA缓冲分发到所有井的测试板通过使用多通道吸管,和测试板是由塑料密封板封口机和培养1小时37°C。建议保持后,ELISA缓冲区被丢弃,测试板与洗涤溶液洗6次,然后晒干。然后,三个参考血清(积极控制、消极控制和弱阳性控制)被稀释1:20稀释,10µl 190年测试血清稀释µl (ELISA缓冲区。100年µl (ELISA缓冲区分配井一个1,B1的测试板(空白)。90年µl (ELISA缓冲区分配井C1到H1。

然后10µl(1: 20参考血清稀释1(积极控制)分发井C1,D1。10µl(1: 20参考血清稀释2井(负控制)分发E1,F1。10µl(1: 20参考血清稀释3(弱阳性控制)分发井G1,H1。90年µl (ELISA缓冲区被分发,然后再10µl(稀释测试血清分发在每个测试板除了控制井的井。然后,测试板密封,轻轻摇动,孵化为1小时37°C。后60分钟,内容是丢弃,测试板洗6次清洗解决方案和干了。

此后,100年µl(稀释共轭的解决方案是在每个分配好,测试板密封和孵化为1小时37°C的第三轮后内容丢弃和测试板洗6次清洗解决方案。接下来,100年µl的chromagen (TMG)衬底分发到所有井和孵化在室温下15分钟。15分钟后,100年µl停止的解决方案是添加到井,和测试板混合井的内容感到不安。然后,观察颜色变化,光密度(OD)井测量的ELISA读者在450 nm的15分钟内停止显色。平均OD_450年价值的空白井(一个1,B1)和纠正OD_450年所有样本计算的价值。然后,百分比积极性(PP)是由以下公式计算:

最后,血清样本页的< 20%,20 - 45%,> 45%是解释为负的,不确定的(可能存在抗体),和积极的l . hardjo特殊抗体,分别。

3.7。数据管理和分析

从问卷调查获得的数据和实验室结果记录,存储在Microsoft Excel和转移到占据版本12统计软件进行分析。数据编码和分析使用描述性和分析统计数据。所有的384个样本进行测试l . hardjo通过使用I-ELISA。两个流行病学参数生成,即个体动物seroprevalence患病率和农业水平。个体动物seroprevalence计算阳性动物的数量除以总数量的动物测试。同样,群计算水平普遍积极的农场的数量除以总数量的农场筛选。结果之间的联系(l . hardjo血清阳性)和解释变量(风险因素)对所有单位的分析研究了利用二元逻辑回归模型。之间的关联强度的结果(l . hardjo血清阳性)和解释变量是评估使用调整后的优势比(或)。单变量逻辑回归分析用于选择各个解释变量可能预测结果变量在模型中。所有noncollinear效应和风险因素值≤0.25的单变量逻辑回归分析进行多变量逻辑回归分析控制模型中混杂的效果。

4所示。结果

4.1。问卷调查

68年有169个奶牛场(28日大,介质,和73小范围)和周围Jimma城镇总牛2261人口。因此,77名农场主采访的相关危险因素。总,51例(66.23%)和26(33.77%)受访者实践强化和半精耕细作管理系统,分别。在采访老板12(15.58%),30(38.96%),其中35例(45.46%)管理大,分别为中小规模的农场。一般来说,管理系统的频率分布,农场规模(大小),访问的啮齿动物农场,流产史,农场的房子卫生规范和引进新的农场动物是总结表1。

4.2。整体Seroprevalence

4.2.1。准备个体动物Seroprevalence水平l . hardjo

384份血清样本,94 (24.48%;95%置信区间:20.18 - -28.78%)血清反应阳性的反对l . hardjo特殊抗体。根据单变量逻辑回归分析的相关危险因素l . hardjo血清阳性个体动物级别(表2)年龄、卫生状况的农场,管理系统,和群大小显著相关(< 0.05)和血清阳性的研究领域。但品种和奇偶性没有显著相关(> 0.05)。

4.2.2。农场水平普遍l . hardjo

77农场包括在这项研究中,57 (74.03%;95%置信区间:64.23% - -83.82%)阳性l . hardjo特殊抗体。在这项研究中,与半精耕细作的农场管理系统有显著(= 0.004)患病率更高(96.15%;95%置信区间:88.76 - -103.55%)比集约管理的农场(62.75%;95%置信区间:49.48 - -76.01%)。同样,农场水平单变量logistic回归分析显示,历史的堕胎,农场的房子的卫生状况和访问的啮齿动物农场被发现与农场的积极性,密切相关l . hardjo(< 0.05),而群体大小和引入新的动物农场显示微不足道协会(> 0.05)l . hardjo疾病发生(表3)。

4.2.3。潜在危险因素

变量与一个≤0.25的单变量分析包含在最终的多变量逻辑回归模型。因此,年龄、品种、平价、管理系统,卫生状况的农场的房子,从个体和群体大小动物水平的风险因素包括在最终的逻辑回归模型。关于农场水平风险因素管理系统,群体大小、访问的啮齿动物农场,堕胎的历史,和卫生状况的农舍被选为最终的模型。在最后的分析中,动物血清阳性被管理系统的影响更大,卫生状况的农场的房子,群体大小、年龄和以前堕胎(表的历史4)。访问农场的啮齿动物也显著相关l . hardjo血清阳性。因此,多变量逻辑回归分析描述l . hardjo血清阳性发现8.30 (95% CI 1.87 - -36.89)倍的动物年龄> 6年比年龄0.5 - < 3年。Seroprevalence,记录了牛大(35.11%),中(21.58%)群大小显示显著差异(< 0.05)和血清阳性的优势比2.32和2.18倍更有可能感染l . hardjo分别比动物的小群的大小。血清阳性的l . hardjo显著相关(= 0.008)的农场有以前的历史比没有堕胎。同样,血清阳性生物体的显著相关(= 0.001)与动物比集中管理半精耕细作。

5。讨论

在目前的研究中,共有384份血清样本收集从选定的奶牛场和Jimma城里反的检测钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo(l . hardjo)抗体的间接ELISA。作为研究的一个限制,间接ELISA反应过程和需要额外的孵化一步大也可能发生二次抗体,导致非特异性信号。

结果显示,共有94个血清呈阳性(动物级别seroprevalence 24.48% (95% CI: 20.18% - -28.78%))。这个结果是同意的结果Odontsetseg et al。20.)(23.50%)在蒙古,Schoonman Swai [21)(30.30%)在坦桑尼亚,Gamage et al。22)(20.30%)在斯里兰卡和Subharat et al。23)在澳大利亚(27.4%)。同样,目前的发现与之前的研究结果一致,塔代伊et al。24)(19.30%)在未接种疫苗的动物的哥伦比亚奶牛场,伊斯梅尔et al。25)(26.25%)在约旦,Tabatabaeizadeh et al。26)(19.10%)在伊朗,Ngbede et al。27)(25%和23.90%)在不同的奶牛场Zaria(尼日利亚),Balamurugan et al。28)(23.68%)在恰蒂斯加尔邦的印度,伊斯梅尔et al。25)(28.75%)在约旦和希尔帕et al。(29日)(19.92%)在印度那格浦尔奶牛场。

相比之下,迄今为止的seroprevalence更高l . hardjo据报道在一些国家在墨西哥(88.20%30.),87%在印度31日),45.60%在新西兰32在巴基斯坦),42.27% (33]。然而,较低的结果记录在美国(15%)(34],伊朗Urmia (8.38%) [35)等印度旁遮普(3.70%)、古吉拉特邦(13.50%)、哈里亚纳邦(4.46%)、Telangana(4%),恰尔肯德邦(10%)(28],Lalitpur、尼泊尔(3.75%)[36),在马达加斯加中部和北部(13.90%)(37]。还有另一项研究通过Ramyasree et al。38]报告结果(12.98%)降低奶牛场的安得拉邦,印度。

这个伟大的seroprevalence利率的变化l . hardjo全世界最有可能是由于地理位置的变化,管理系统、管理实践,不同品种的动物,自然免疫力和抗病研究人群(21,33]。

在这项研究中,患病率为74.03% (95% CI: 64.23% - -83.82%)l . hardjo感染被发现在农场水平伴随着发现韦伯斯特和麦克唐纳(39)和Schafbauer et al。37)在英格兰和马达加斯加中部和北部,农场的流行率水平l . hardjo数据分别为72%和74%。相反,它是患病率高于农场水平记录在美国(42%)(40)、阿尔及利亚(31.25%)(41)、西班牙(11%)(42)和泰国(28.60%)(43),低于瑞安et al。44(82.29)在爱尔兰,坎波斯et al。45)(100%)在巴西,伊斯梅尔et al。25)(92.30%)在约旦奶牛场。

有统计上显著的协会(= 0.001;或= 4.25;气²= 31.94)和血清阳性之间的管理系统l . hardjo在目前的研究。分析显示,雌性动物在半精耕细作管理系统有显著的风险成为血清反应阳性的感染。这个结果符合先前的发现Yatbantoong和Chaiyarat43)在泰国奶牛场半精耕细作处理动物显著相关的l . hardjo感染。这可能归因于管理实践和不良的受感染动物cograzing[期间增加污染环境的风险46]。它也承认,分享牧场增加的风险钩端螺旋体传播如前面已经观察到(45]。

在这项研究中,血清阳性的l . hardjo显著相关(= 0.001;或= 0.35;气²= 13.05)与不洁净的农场比归类为清洁房子和他们的动物在农场和个体动物的水平。这些发现与之前报道的伊斯梅尔等工作。25]报告之间的显著差异在疾病血清阳性洁净和不洁净的农场。这与恶劣的卫生条件和卫生习惯在某些奶牛场与拥挤的人群33]。它也知道,恶劣的卫生条件是核心因素,有利钩端螺旋体病的传播47,48)和卫生的动物栖息地管理疾病[4]。

多变量逻辑回归分析显示,年长的牛8倍相比,血清反应阳性的年轻动物(= 0.005;或= 8.30;气²= 8.35)。目前的发现对年龄明智的患病率是依照萨拉斯的早期研究49),莱希et al。50和普雷斯科特et al。51)观察了在旧牛血清阳性。它还同意Behera等的工作。52]报告增加反的检测l . hardjo抗体在年龄组o > 5年比< 6个月大年龄组在Odisha和西孟加拉邦,印度。根据黑et al。53),牛在统计学上显著的时代与感染有关钩端螺旋体spp。这一结果也符合先前的发现在伊朗和其他国家,对钩端螺旋体病血清阳性动物年龄的增加增加(54,55]。

这可能归因于暴露的持续时间和毅力年龄动物病原体的抗体(56]。实际上,阳性率下降年轻国内牛被报道国内牛(低于老57]。然而,它不同于以前的研究报告(在土耳其,年龄不是一个重要因素58,59在特立尼达。

在当前的研究中,以前的历史堕胎在农场水平也与高风险的疾病发生有关l . hardjo(= 0.008;或= 8.37;气²= 12.75)。这个结果与之前的工作由Balamurugan et al。28]报告重大关联之前的历史堕胎和疾病的发生。它也同意伊斯梅尔的发现等。25)表示大量的农场与先前的堕胎发现感染的历史l . hardjo。这可以被看作是一个广泛的证据l . hardjo作为一个人口研究牛流产的原因。此外,在某些情况下,钩端螺旋体病的主要表现是由于堕胎l . hardjo在牛(流产的主要原因60]。相比之下,Yatbantoong和Chaiyarat [43]报道无关紧要的联系之前的历史堕胎和疾病的发生。

动物从大型群大小明显成为血清反应阳性的风险更高l . hardjo感染(OR = 2.32;= 0.02;气²= 13.30)。这是与以前的结果一致的巴哈马et al。61年在西马来西亚,Tabatabaeizadeh et al。26在伊朗,Benseghir et al。41在阿尔及利亚,Yatbantoong和Chaiyarat43在泰国]。本协会的原因很可能与暴露的风险增加,传输和持久性的感染在较大的群(62年,63年]。积极联系群大小和积极的存在动物一直在报道之前l . hardjo感染牛(64年,65年]。群大小的动物也被证明是风险因素钩端螺旋体感染(44,66年]。

根据Mathiase Levett [67年),人口规模的农场是主要因素确定钩端螺旋体病的来源。多数大型奶牛场了患病率高钩端螺旋体感染报道的巴哈马et al。61年]。测量卫生和卫生设施的大型奶牛场贫穷相比小型奶牛场和拥挤的人口有助于迅速蔓延感染,这些可能是潜在的风险因素钩端螺旋体病的患病率更高。

在这项研究中,有统计上的显著差异(= 0.03;或= 0.17;气²= 10.94)l . hardjo感染农场之间获得的啮齿动物和那些没有。这一发现是依照以前的工作在朋地进行毛孢子菌病,墨西哥,Platts-Mills et al。68年)得出结论,啮齿动物在奶牛场的可用性可能是疾病的高发病率的原因之一。这可能是由于这样的事实:啮齿动物视为leptospires的主要储层(4]。

Athanazio et al。69年)还表示动物的尿液,主要是啮齿动物,这可能成为无症状携带者,构成的水库钩端螺旋体在自然界中。

对比的结果Yatbantoong和Chaiyarat43]报告重大协会引入新的动物农场和疾病之间发生,在这项研究中引入新的动物农场(无关紧要的相关= 0.68;或= 0.77;气²= 0.17)l . hardjo疾病发生。这是由于这样的事实,新引进的动物农场可能是免费的l . hardjo在当前的研究中。

据统计,没有显著差异(= 0.19;或= 1.45;气²不同品种之间= 1.71)l . hardjo在当前的研究。这是按照首脑的工作等。33)进行l . hardjo在孟加拉国吉大港的奶牛,报道无关紧要的协会。同样,这也与之前的研究相一致的Rajala et al。70年在塔吉克斯坦,Benseghir, et al。(41在阿尔及利亚,Ngwa et al。71年]在喀麦隆获得微不足道的区别不同品种l . hardjo感染。与之相反,巴哈马et al。61年]报道之间的显著差异的不同品种对血清阳性感染显示干旱大师而Kedah-Kelantan患病率最高(一个土著品种)钩端螺旋体感染的发生率最低。

试图知道平价的影响,统计上没有显著差异(= 0.17;或= 1.65;气²= 3.29)之间的各种平价的奶牛和血清阳性l . hardjo。这个结果是按照先前的研究在seroprevalence和风险因素l . hardjo感染奶牛在约旦由伊斯梅尔et al。25]报告无关紧要的平价和血清阳性感染之间的联系。在这项研究中,农场规模也是无关紧要的关联(= 0.20;或= 2.95;气²= 4.20)l . hardjo感染农场级别的协议与先前发现的首脑et al。33在孟加拉国吉大港的奶牛,的]。

6。结论和建议

整体seroprevalence 24.48%和74.03%钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo分别观察个体动物和群水平在本研究领域。管理系统的动物,农场的卫生状况,群体大小、年龄的动物,之前流产史和访问的啮齿动物的农场被确定作为一个潜在的危险因素钩端螺旋体interrogans血清组Sejroe型Hardjo疾病发生。另一方面,品种,平价和引进新的动物血清阳性的农场是无关紧要的l . hardjo在这项研究中。目前的发现表明,钩端螺旋体病所致l . hardjo非常流行在选定的奶牛场Jimma城里,埃塞俄比亚西南部。

因此,我们建议在农场卫生实践的实现减少感染的传播,以及接种疫苗的使用在动物处于危险之中。我们也推荐在动物全国各地广泛调查评估钩端螺旋体病的患病率在埃塞俄比亚。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从作者在收到请求。

伦理批准

Jimma大学授权田野调查。

同意

这项研究的目的显然是牛老板和兽医官员解释说,通过口头同意和知情同意大学技术委员会。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

所有作者的贡献在技术上和身体上,但Garoma Desa和约瑟夫·Deneke贡献更多。

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