文摘
在两年的时间里在格林纳达66例犬脓皮病,西印度群岛,进行有氧文化以确定涉及的细菌和抗菌素耐药性的模式。116年的总细菌隔离,绝大多数属于革兰氏阳性物种,最常见的是通过生物化学和分子生物识别方法葡萄球菌pseudintermedius。此外,识别的葡萄球菌schleiferi亚种coagulans证实了孤立分子的方法。葡萄球菌的分离都是容易beta-lactam药物:amoxicillin-clavulanic酸,cefovecin,头孢西丁,cefpodoxime,头孢菌素。他们也容易氯霉素和enrofloxacin。四环素抗性最高。甲氧西林耐药没有检测到任何孤立的美国pseudintermedius或在美国schleiferi。在革兰氏阴性菌中,最常见的物种肺炎克雷伯菌,紧随其后的是鲍曼不动杆菌/ calcoaceticus。唯一药物是enrofloxacin革兰氏阴性隔离都敏感。这份报告首次确认的存在美国pseudintermedius和美国schleiferi亚种coagulans狗在格林纳达、脓皮病和葡萄球菌分离株的易感性的大多数beta-lactam药物用于兽医实践。
1。介绍
脓皮病、皮肤细菌感染是最常见的皮肤问题中遇到的狗(1]。品种包括浅表脓皮病、脓疱、丘疹、红斑、焦结硬皮,瘙痒和深部脓皮病疖和排水大片。虽然革兰氏阳性细菌,如葡萄球菌、通常参与浅表脓皮病,革兰氏阴性细菌可以引起继发感染,尤其是在深部脓皮病的情况下(2]。基于历史和经验诊断脓皮病体检是紧随其后的是免费测试,如革兰氏染色法和文化,最可靠的结果从一个完整的脓疱(分析内容3]。通常涉及抗菌药物治疗。培养和抗生素敏感性试验所示情况时不响应初步治疗和强制治疗深部脓皮病(4]。此外,信息主要生物与脓皮病和对常用抗菌药物的敏感性模式非常有用的经验治疗。最常用的药物实验系统性治疗犬脓皮病是amoxicillin-clavulanic酸和头孢菌素(5]。
直到最近,葡萄球菌中间部被认为是最常见的生物与犬脓皮病(3]。事实上,隔离最初表型鉴定美国的中间部可以从三个不同的种类:美国的中间部,葡萄球菌pseudintermedius,葡萄球菌delphini(6]。确定这些物种的鉴定、分子诊断方法,如聚合酶链反应(PCR)技术,是必需的(7]。给狗的各种来源,从当地Pompeks和Pothounds岛上原始宠物带到岛上从多个地点在美国,它是重要的学习例犬脓皮病的细菌耐药性及其模式在格林纳达。病原体和耐药性结果数据将形成一个背景建立建议谨慎使用抗菌素的同伴动物(8,9]。
本研究的目的是确定与脓皮病相关的细菌在格林纳达家犬,特别是关于的发生美国pseudintermedius和新兴病原体葡萄球菌schleiferi,并确定抗菌素耐药性的程度。虽然这是推测,大多数脓皮病病例会由于葡萄球菌,发生其他抗菌素耐药性革兰氏阳性和革兰氏阴性物种及其模式也进行了研究。结果从这些数据可能会帮助选择适当的抗菌素治疗方案。
2。材料和方法
2.1。样品收集
样本获得从66年3月之间家犬诊断出患有脓皮病,2010,和2012年2月。所有病例在2年期间展示包括在这项研究中。狗被诊断为圣乔治大学小动物医院,格林纳达的防止虐待动物协会(GSPCA),和另一个兽医实践在格林纳达圣乔治的教区,西印度群岛。客户端拥有所有的狗,他们的年龄从6周不同的14年,平均为2.6岁。大多数的狗杂种(48/66)。其他包括Pompek (6), Pothound(3),斗牛(2),一个7品种/类型。脓疱内容或棉签应用于溃疡病变获得无菌,使用携带布莱尔传输拭子(Becton, Dickinson和公司,火花,医学博士,美国)。运输拭子被储存在4°C在24 h后立即收集和培养。
2.2。细菌培养
所有样品都是镀在血液和MacConkey琼脂和耗氧孵化37°C 72 h。文化板块进行日常殖民地的数量和类型。样品2 72 h后殖民地或更少被认为是负面的。细菌生长分为纯或混合。细菌最初根据菌落形态鉴定;革兰氏染色剂;和其他的初步测试方法,包括过氧化氢酶、凝固酶和氧化酶测试(10]。细菌的进一步分类涉及使用API细菌鉴定条(bioMerieux Inc .、杜伦、数控、美国),多重PCR和测序。API条无法区分美国的中间部,美国pseudintermedius,美国delphini。
2.3。DNA隔离
从所有隔离表型鉴定细菌的DNA美国的中间部提取使用DNeasy血液和组织工具包(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)和制造商的革兰氏阳性的协议。改性,初步孵化酶裂解缓冲进行,由20毫克/毫升溶菌酶(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)和1.2% Triton x - 100(σ)磷酸盐,pH值7.4。DNA内容由NanoDrop2000C检查(热科学、威尔明顿,美国)。DNA是转发到兽医教学医院微生物实验室在俄亥俄州立大学兽医学院的,哥伦布,哦,美国。
2.4。多重聚合酶链反应
如前所述(执行多重聚合酶链反应11]。多重PCR利用表达载体铂Mastermix(美国纽约生活技术,大岛屿)在25µL总量的反应。包括控制多重PCR金黄色葡萄球菌(写明ATCC 29213)(美国类型文化集合,马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国),美国pseudintermedius(液化沼气22221)(液化沼气细菌收集、微生物实验室、绅士,比利时),和美国的中间部(写明ATCC 29663)。的结果美国schleiferi亚种coagulans是基于比较乐队的大小相对于DNA梯和其他控制葡萄球菌。
2.5。测序的rpoB基因片段
身份的确认美国schleiferi无性系种群。coagulans,单个孤立被测序片段的检测rpoB如前所述(基因12]。此外该方法被应用于一个已被隔离美国的中间部通过API,但确定为金黄色葡萄球菌多重PCR。测序结果确定使用国家生物技术信息中心基本局部比对搜索工具(爆炸)对高度相似的序列(megablast)和蛋白质(blastp)使用对应的数据库。
2.6。抗菌药物敏感性试验
药敏测试进行隔离使用磁盘Mueller-Hinton琼脂扩散法,推荐临床和实验室标准研究所(CLSI)和区域大小解释每CLSI指南(13]。抗菌药物用于治疗革兰氏阳性分离株,磁盘的效能如下:amoxicillin-clavulanic酸(30µg),氨苄青霉素(10µcefovecin(30克)µcefpodoxime (10 g)µg)、头孢西丁(30µg),头孢菌素(30µ氯霉素(30克)µg)、克林霉素(2µenrofloxacin(5克)µ红霉素(30克)µg)、庆大霉素(10µ新霉素(30克)µ10 g)、青霉素(单位),sulfamethoxazole-trimethoprim (25µg),四环素(30µg)。enrofloxacin,区域大小解释每CLSI细菌从动物指南(14]。所有抗菌磁盘,除了cefovecin正欲获得,迪金森和公司。Cefovecin磁盘获得辉瑞动物保健(纽约,纽约,美国)。按照制造商的指示,隔离给予生长抑菌圈直径小于或等于19毫米cefovecin被认为是抗。革兰氏阴性隔离测试只针对amoxicillin-clavulanic酸、氨苄青霉素、头孢菌素、enrofloxacin,庆大霉素,新霉素,sulfamethoxazole-trimethoprim,四环素,磁盘的效能与上述相同。
所有美国pseudintermedius和单一美国schleiferi无性系种群。coagulans隔离测试使用2甲氧西林耐药性的方法。区域经济增长的抑制作用对一个新青二1≤17毫米µg磁盘被认为是表明抵抗Bemis推荐的et al。15和黄金等。16]。增长对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ID chromagar (bioMerieux)是第二个测试按照推荐使用Horstmann et al。17]。测试是根据制造商的方向和狄亨概述Diederen et al。18]。
2.7。抗菌药物使用的历史
历史之前的抗菌素使用脓皮病病例收集,当这些都是可用的。
3所示。结果
3.1。细菌鉴定
总共有116个细菌隔离从66年获得犬脓皮病病例。隔离每箱的数量范围从1菌落类型(纯培养)4殖民地类型(混合感染)。21岁的66例(31.8%)获得纯培养。总数的116隔离,62(53.5%)革兰氏阳性和革兰氏阴性54 (46.5%)。细菌分布表提供隔离1。
葡萄球菌是最常见的孤立的革兰氏阳性细菌。43隔离的葡萄球菌,18(41.9%)情况下产生一个纯粹的文化和25(58.1%)混合感染。使用多重PCR, 27 29隔离了API的条美国pseudintermedius被确认为美国pseudintermedius,1金黄色葡萄球菌,1美国schleiferi无性系种群。coagulans。的隔离标识为金黄色葡萄球菌表型的属性中间部,受到了rpoB基因测序,确定为美国pseudintermedius。的身份美国schleiferi无性系种群。coagulans隔离也证实了测序。28岁的美国pseudintermedius隔离,11(39.3%)获得纯培养,和17(60.7%)混合感染。
关于剩下的34个革兰氏阳性分离株,有6葡萄球菌hominis,2葡萄球菌lugdunensis,1葡萄球菌capitis,1葡萄球菌epidermidis,1葡萄球菌xylosus,3 unspeciated葡萄球菌。其他革兰氏阳性分离株包括6种和5 unspeciated链球菌,3棒状杆菌属spp。3微球菌spp。, 2芽孢杆菌spp。七这些34革兰氏阳性分离株(20.6%)的恢复在纯文化,包括3美国hominis和2美国lugdunensis。所有的链球菌,棒状杆菌属spp。微球菌spp。,芽孢杆菌隔离来自混合文化。
54岁的革兰氏阴性隔离,最常见的是肺炎克雷伯菌(9隔离),其次是8答:baumannii/calcoaceticus7大肠杆菌6铜绿假单胞菌,5肠杆菌属下水道,5变形杆菌。有两个或更少的分离的革兰氏阴性的物种,包括2假单胞菌oryzihabitans,2Pantoeaspp。革兰氏阴性隔离都是恢复与混合感染病例,除了1答:baumannii / calcoaceticus和2变形杆菌。
3.2。抗菌药物敏感性
所有隔离的葡萄球菌、链球菌和6种主要的革兰氏阴性(组成的k .肺炎,答:baumannii/calcoaceticus,大肠杆菌,铜绿假单胞菌,p .奇异君子兰,大肠下水道)进行抗菌药物敏感性检测。所有测试细菌容易enrofloxacin,和43葡萄球菌的分离容易beta-lactam药物:amoxicillin-clavulanic酸,cefovecin,头孢西丁,cefpodoxime和头孢菌素(表2)。此外,所有分离的葡萄球菌对氯霉素敏感。葡萄球菌lugdunensis,美国capitis,美国epidermidis,美国schleiferi无性系种群。coagulans,年代。xylosus都是容易15药物。葡萄球菌是最常见的耐四环素(30.2%),其次是sulfamethoxazole-trimethoprim (14%);青霉素(11.6%);克林霉素、红霉素、庆大霉素和新霉素(7%);和氨苄西林(2.3%)。只有在多药耐药性是明显美国pseudintermedius隔离(6/28)美国hominis隔离(3/6)。
甲氧西林耐药没有检测到任何29隔离的葡萄球菌检测(28美国pseudintermedius和一个年代。schleiferi)。链球菌11隔离中,电阻最常对新霉素(100%),紧随其后的是四环素(54.5%)、sulfamethoxazole-trimethoprim(27.3%),和庆大霉素(18.2%)。
40的革兰氏阴性隔离测试8药物,抗氨苄西林(75%)最常见,其次是头孢菌素(57.5%)、四环素和amoxicillin-clavulanic酸(35%)、庆大霉素(12.5%)、新霉素和sulfamethaxole-trimethoprim (5%)。多药耐药性是最常见的铜绿假单胞菌耐氨苄西林(100%),特点,amoxicillin-clavulanic酸,和trimethoprim-sulfa,紧随其后答:baumannii/calcoaceticus(62.5%)。多药耐药性是没有看到的大肠杆菌隔离。
只有9犬脓皮病(13.6%)抗菌药物使用以前的历史。四个五个狗以前用头孢氨苄治疗产生的历史美国pseudintermedius,第五链球菌dysgalactiae,都容易头孢菌素和其他头孢菌素。两只狗洁霉素治疗之前,这些没有显示出的葡萄球菌分离株耐头孢菌素,但一个隔离是克林霉素耐药。剩余的2只狗,一个早些时候治疗四环素,tetracycline-resistant阳性美国pseudintermedius,另一个处理amoxicillin-clavulanic酸了美国pseudintermedius容易受到所有药物。
4所示。讨论
它已经表明,表型鉴定美国的中间部菌株可能包括不仅如此美国的中间部2株,还其他物种在这个组,即美国pseudintermedius和美国delphini。事实上,大多数的狗的这组已确定美国pseudintermedius,而不是美国的中间部(6,7]。美国pseudintermedius从66例犬脓皮病主要隔离在目前的研究。这是依照最近的一项研究的发现在日本(19),没有一个属于190隔离从犬脓皮病病例美国的中间部或金黄色葡萄球菌物种。
在目前的研究中,一个孤立的表型被API地带美国的中间部被多重PCR和DNA测序确定吗美国schleiferi无性系种群。coagulans。从历史上看,早期的分解动作的美国schleiferi来自1990年在日本犬耳炎的情况下(20.)和2 2002年在欧洲犬脓皮病病例[21]。从那时起,隔离葡萄球菌从狗被报道在其他国家包括美国、和美国schleiferi已经注意到发生在反复出现脓皮病情况下,狗耳炎和脓皮病,看似健康的狗(22]。最近的研究结果表明,2亚种:美国schleiferi无性系种群。coagulans(凝固酶阳性)和无性系种群。schleiferi(凝固酶阴性)不是coagulase-producing菌株的遗传学上截然不同的和可能变化在一个物种(23]。
在这项研究中,11.6%的葡萄球菌耐青霉素,而抗氨苄青霉素只有2.3%。在最近的一项研究[2467年),年代。pseudintermedius隔离形式狗,青霉素耐药性是61%,而氨苄青霉素抗性是40%。甲氧西林耐药性并不测试在他们的研究中,但临床分离株都包括在内。耐药机制可能除了beta-lactamase生产可能起到了重要的作用。修改penicillin-binding蛋白质是越来越重要的另一个机制抗青霉素的25]。还需要进一步的研究来阐明机制。延长治疗犬脓皮病的首选抗生素头孢氨苄,amoxicillin-clavulanic酸,enrofloxacin [1]。所有28美国pseudintermedius隔离在当下研究容易amoxicillin-clavulanic酸、头孢菌素,包括头孢菌素(这表明对头孢氨苄),和enrofloxacin。头孢氨苄杀菌,发展潜力较低的阻力,有最小的副作用(2]。头孢氨苄和cefpodoxime是最常用的药物美国pseudintermedius在犬脓皮病26]。头孢氨苄的使用是合理的,只要脓皮病是由革兰氏阴性细菌不复杂。此外,有限的数据在目前研究抗菌药物使用的历史也显示易感性的所有隔离动物头孢菌素治疗。众所周知,犬脓皮病等革兰氏阴性细菌可能是复杂的大肠杆菌、变形杆菌spp。,假单胞菌spp。3]。品种的狗的作用,高湿度和热在犬脓皮病的革兰氏阴性菌的作用可能是值得研究。品种可能在犬脓皮病的发病机理有关27]。近58%的6本研究最常见的革兰氏阴性物种耐头孢氨苄。是否cephalothin-resistant革兰氏阴性细菌易受其他头孢菌素,如cefovecin在将来的研究中是一个值得研究。在最近的一项研究[28),cefovecin是发现优秀的体外活动对各种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的狗。
Enrofloxacin是有效的对所有测试细菌隔离在目前的研究。enrofloxacin和orbifloxacin 2氟喹诺酮类药物相似的抗菌活性,是安全、有效的治疗浅表和深部脓皮病狗(29日]。氟喹诺酮类原料药也温和immunomodulating属性(30.]。在出版于2006年从加拿大的一项研究中,只有1%的651年美国的中间部隔离从犬耳炎抗enrofloxacin [31日]。
隔离对克林霉素耐药,另一种药物用于治疗葡萄球菌感染在狗32),在目前的研究中被发现。同样是红霉素的情况。大环内酯物抗生素红霉素、泰乐菌素用于治疗脓皮病病例(33]。
5。结论
这份报告首次确认的存在美国pseudintermedius和美国schleiferi无性系种群。coagulans狗在格林纳达、脓皮病和葡萄球菌分离株的易感性大多数beta-lactam药物用于兽医实践。近四分之一的美国pseudintermedius隔离在目前研究显示抗多个药物。监测耐药性趋势是至关重要的新耐药菌株从世界的其他地方可以介绍狗的岛国格林纳达。同样重要的是监督的出现美国schleiferi和其他新物种,以及beta-lactam阻力犬葡萄球菌菌株。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。