文摘
临床病例的维生素E缺乏诊断在骆驼科,可能表明这些物种hay-based饮食中维生素E不足更敏感比其他反刍动物和马物种。在牛,胆固醇报道影响维生素E浓度。为了评估维生素E缺乏在骆驼科,血液样本的采集和存储的影响前处理是必要的。报告影响因素不同的维生素E和胆固醇在血液样本,关于样品处理和诊断实验室不同指令。血液收集健康羊驼和加工条件下包括暴露在荧光灯、血清和红细胞接触,管塞接触,温度,和溶血。血清维生素E和胆固醇浓度测量。统计分析发现,维生素E浓度下降与长期接触管塞和增加溶血。维生素E浓度变化被认为与其他因素,但并不显著。时间前血清分离和个体动物变异被发现改变样本中的胆固醇浓度,然而这发现是临床的。维生素E和胆固醇浓度之间没有相关信息,可能是由于缺乏变化的胆固醇。
1。介绍
维生素E是一种重要的营养全身许多重要的抗氧化功能。这种维生素存在于细胞膜和细胞内和细胞外液。缺陷可以在各种各样的医疗条件1]。肌肉和神经系统最常见的影响;然而,环境影响免疫系统和生殖系统报告(2,3]。哺乳动物不能合成维生素E,食草动物的最丰富的来源是新鲜绿色牧草(4,5]。一旦减少饲料,干燥,包装为干草,维生素E浓度在几天内迅速减少低于营养需求和动物喂食干草需要额外补充(4- - - - - -6]。
临床和亚临床缺乏维生素E可以诊断动物在任何有限的地理位置获取新鲜的草料,在很多地方已经看到在美国由于严重干旱。缺陷也可以增加加剧了细胞的要求由于代谢氧化压力和最常表现为肌肉疾病(如营养肌病和营养肌肉萎缩症)和神经病变(如膈麻痹和马运动神经元病)(7- - - - - -9]。Ill-thrift和生殖问题也被记录(10,11]。骆驼科在美国许多地区在dry-lot操作和美联储严格hay-based饮食。例膈麻痹和持续低维生素E浓度一直在观察这些动物与那些生长在pasture-based操作([9)和个人沟通)。
维生素E人和一些动物物种的研究已确定,样品处理因素潜在的改变血清维生素E浓度。这些因素包括接触血液管塞,时间和温度之前分离的血清红细胞的溶血和血液样本(12- - - - - -16]。另外由于自然脂溶性的维生素E,维生素E的比率,胆固醇是现在一些参考实验室评估17- - - - - -19]。人类和牛胆固醇浓度下被描述为稳定这些存储参数(20.,21]。
适当的收集和存储方法,以减少对维生素E和胆固醇浓度的影响没有骆驼科血清样本的验证。血液采集从骆驼科可以是一个挑战性的过程和溶血可能比其他物种更常见。在现场收集的情况下,管通常不会立即停止旋转,可能比推荐诊断实验室,保持温暖和血液经常接触橡皮管塞。骆驼科红血球较小和椭圆形状与其他哺乳动物的红细胞表面相比,和红细胞表面的不同生理功能的影响和潜在影响维生素E和胆固醇需要验证。此外,尽管研究表明紫外线不影响维生素E水平,一些实验室仍在存储和运输过程中要求的样品没有曝光。
本研究的目的是确定样品处理条件,温度,时间,接触管塞,光照影响血清维生素E和胆固醇浓度。溶血的影响血清维生素E和胆固醇含量也进行了研究。
2。材料和方法
2.1。动物
本研究通过科罗拉多州立大学(CSU)机构动物使用和保健委员会。两个看似健康的男性被阉割的成年羊驼(大约2岁)被用于样本收集。动物们被安置在一个户外的钢笔和美联储草花粉没有进一步的补充维生素或矿物质。血液采集,动物被限制在一个羊驼槽。cranioventral方面的脖子夹删除6平方厘米面积皮肤中的纤维在右颈静脉。皮肤无菌准备14号,7.62厘米静脉导管(米拉国际有限公司12价格大道,厄兰格,肯塔基州,美国)。血液收集12毫升注射器直接从导管。大约220毫升的血液收集从每个动物和立即均匀分为54-4毫升nonanticoagulant(红色)血液收集管(和公司正欲,Inc . Sandy, UT,美国)。
2.2。样品处理
接触荧光房间光线的影响,与红色的橡皮管塞,持续时间(1,4,24小时)的存储,和温度(室温(25°C)或制冷(4°C)),直到血清分离测试使用部分因子设计。光的效果没有评估样品置于冷藏。所有处理组合对每个动物进行了一式三份。治疗后,血清收集管在1000×g离心后的10分钟。血清然后转移到冰箱2毫升瓶和储存在−20°C到维生素E和胆固醇进行了分析。使用高压液相色谱测定维生素E浓度(水域474扫描荧光检测器,水公司,34枫树街,米尔福德,妈,美国)CSU兽医诊断实验室。这个分析仪校准使用制造商推荐和执行之间的每一批样品评估的维生素E浓度。胆固醇浓度测定CSU临床病理学实验室使用日立917化学分析仪(美国日立高新技术公司。美国CT瓦林福德)由制造商的指导方针。
溶血的影响血清维生素E和胆固醇浓度评价红细胞表面的血清样本,然后接受3冻融循环被Hooser et al。13]。40毫升全血收集从每个羊驼,分为1 - 4毫升EDTA管和蓝鸟队毫升红前血清管。整个血液的红细胞浓度是由微观评价血细胞计数器。血清凝管被允许1小时在室温和血清收集如上所述。血清分离和分成2毫升每个羊驼整除。红细胞从整个血液样本被添加到整除的血清准备浓度约为0(-控制),1×1061×1071×108,1×109加拿大皇家银行/毫升。CSU临床病理学实验室参考红细胞计数骆驼科大约是11.3到17.6×109加拿大皇家银行/毫升。这个协议导致相对百分比溶血从约0.01到10%。为每个动物样本准备一式三份。管是存储直立和冻结在−20°C 24小时和在室温下解冻(25°C) 3周期。样本然后离心机如上所述,血清分离去除剩余的红细胞碎片和储存在−20°C到处理。血清样本提交CSU临床病理学实验室确定定量溶血分数使用日立917化学分析仪由制造商的指导方针。维生素E和胆固醇含量也决定对这些样品如上所述。
2.3。统计分析
接触荧光的影响个人的羊驼,房间光线,接触橡胶管塞、存储时间血清分离之前,期间和温度存储在血清维生素E浓度进行了分析通过方差分析使用的漠视,SAS程序(SAS研究所有限公司、卡里、数控、美国)- - - - - -值< 0.05被认为是显著的。血清维生素E和胆固醇的关系在诱导与溶血样本是由线性回归评估使用SAS的CORR过程。
3所示。结果与讨论
意思是维生素E浓度为每一个样品从每个羊驼展示在表处理技术1。所有一式三份样品的平均SD为5.4μg / dL。维生素E浓度被发现明显不同,由于管位置;没有其他处理条件对维生素E浓度产生影响。图1展示了一个强烈的负相关(在诱导溶血指数和维生素E) ()。胆固醇浓度为每一个样品从每个羊驼展示在表处理技术2。胆固醇浓度明显被发现不同个体动物血清分离前和时间。一个弱负相关()之间被认为胆固醇浓度和诱导溶血指数()(图不包括)。
接触红色的橡皮塞,维生素E浓度降低,这可能会导致一个错误的解释缺乏维生素E。这一变化的原因是未知的,但可能是由于反应与红色的橡胶,随后利用或氧化unmeasureable形式的维生素E (12]。在这项研究中没有其他样品处理条件评估对维生素E浓度的变化有显著的影响;因此维护样本管在一个直立的位置之前的分析是重要的获取最准确的血清维生素E浓度。尽管荧光不存在显著影响维生素E浓度,紫外线的影响没有评估,因此建议限制暴露于紫外线不能从本研究假设的临床意义。
维生素E浓度使用高压液相色谱进行了一式三份。大变化测定维生素E浓度之间被一式三份评估相同的血清样本。高压液相色谱法检测维生素E在DL-alpha生育酚形式,可以很容易变性在准备和分析导致浓度相同的血清样本之间的不一致。此外,体积小的血清为每个测试为了执行这个测试提交一式三份,可能导致不均匀样本中的维生素E含量。其他可能的变化引入的多步过程包括准备样品进行分析以及个人实验室技术人员准备样品的差异。
在这个实验中,通过颈静脉导管收集血液样本以减少溶血在原始样本。在人工诱导溶血样本,只有温和的总值明显溶血指数被发现在羊驼血清维生素E浓度,减少与其他物种的研究[13]。因此溶血时应该最小化可能在收集和维生素E的分析前处理样品,以确保最准确的结果。时间前血清分离被发现影响胆固醇的浓度,然而,这一发现并没有临床相关的由于小数值之间的差异意味着胆固醇浓度时间的结果。而引起的溶血指数之间的观察弱负相关和胆固醇浓度,一般来说,胆固醇被发现在样品处理参数很稳定。有趣的是,一个大型胆固醇浓度的变化是观察动物个体之间。在其他物种错误水平升高的血清维生素E是观察在高脂肪动员由于维生素E和胆固醇浓度之间的正相关关系17,18,21- - - - - -23]。相反,错误的低水平在低脂肪动员。如果骆驼科做经验胆固醇波动,这可能是一个重要因素的准确识别维生素E在骆驼科的地位。需要进一步的数据完全评估这种关系。
4所示。结论
这些结果表明,减少溶血在样本收集和直立储存之前分析维生素E将提供一个更准确的评价在羊驼。虽然胆固醇变化被认为与某些处理参数,没有临床相关。关于维生素E在羊驼是需要额外的研究更好地评估所需营养不足和建立的影响。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
科罗拉多州立大学兽医医学和生物医学科学学院与大学所提供的额外的资金资助这项研究通过农业部动物卫生和疾病研究委员会资助。