禽副粘病毒Serotype-1:回顾疾病分布、临床症状和实验室诊断

文摘

禽副粘病毒serotype-1 (APMV-1)能够感染多种鸟类物种导致广泛的临床症状。易于传播,使得病毒传播全世界不同程度的毒性取决于病毒株和主机物种。分类系统设计集团隔离基于他们的基因组成。融合基因的裂解位点的遗传成分毒性中发挥着重要作用。存在多个基本氨基酸裂解位点允许酶融合蛋白的乳沟让致命的病毒传播系统。诊断测试,包括病毒隔离,实时逆转录PCR和测序,用于病毒的特点,确定毒性菌株。遗传多样性在APMV-1演示需要持续的监控可能出现的变化需要修改分子诊断测试化验来维持其效用。

1。介绍

禽副粘病毒serotype-1 (APMV-1)是副粘病毒科的一员,致命的病原体鸡新城疫(盾)。禽流感病毒能够感染所有订单的物种,和毒性菌株可引起明显的临床症状。由于易感宿主的广泛范围,病毒已经能够建立全球本身。感染致命的压力导致了自1926年以来,一些动物共患病(1- - - - - -3]。这种疾病可能有破坏性影响家禽行业由于高发病率和死亡率与毒性相关的病毒株(4- - - - - -6]。盾的临床症状包括产蛋量下降,呼吸窘迫,精神萎靡,虚弱,和中枢神经系统症状2]。疫苗接种程序存在于美国(美国),但在感染和传播病毒继续复制从被感染的家禽接种疫苗。目前越南盾我们是免费的,但介绍疾病的继续是一个主要关心农业社区(2]。

非法输入受感染的鸟类是越南盾的主要模式之一介绍到美国。诊断测试和快速检测是重要的措施来阻止疾病的爆发。实时逆转录聚合酶链反应(rrt - pcr)是一种快速诊断测试检测APMV-1 RNA。病毒隔离在胚胎的鸡蛋是病毒的“黄金标准”的方法识别但需要5到10天来获取一个隔离。当前美国农业部(USDA)验证rrt - pcr分析使用国家兽医服务实验室(NVSL)旨在检测矩阵APMV-1的大多数菌株的基因4,7- - - - - -10]。等的研究表明,一些菌株APMV-1血统6(一级)和一些鸽子地利亚(PPMV-1)没有检测到底漆/探针集本试验中使用(7,8]。

矩阵rrt - pcr检测能够检测APMV-1 RNA在3小时的样品在实验室收据。NVSL使用这是一个重要的筛选试验报告结果允许快速的周转时间。缺乏检测矩阵分析可能导致7-to-14-day延迟报告检测的病毒。发展的rrt - pcr分析可以检测广泛的APMV-1将增加NVSL和实验室诊断能力的国家动物卫生实验室网络(NAHLN)在美国。

当APMV-1 RNA检测到矩阵rrt - pcr分析,要求额外的测试标本来确定如果RNA起源于一个致命的毒株。USDA-validated融合基因rrt - pcr分析是一个致病型试验用于检测vNDV菌株。这种分析可以快速识别vNDV也在3小时内的样本的收据。融合基因rrt - pcr分析NAHLN NVSL和使用实验室的vNDV菌株也局限于它能够检测到。鸬鹚vNDV PPMV-1菌株没有检测到使用该融合基因检测(7,11]。尽管鸬鹚vNDV PPMV-1并不是高度传染性家禽、快速检测诊断APMV-1感染仍然是重要的。rrt - pcr分析特定的发展这些菌株将允许实验室容易区分鸬鹚vNDV或PPMV-1菌株具有高度传染性的vNDV家禽。

2。分类

有9种血清型的禽副粘病毒(APMV-1 APMV-9)能够感染鸟类物种(2,12- - - - - -14]。鸡新城疫病毒(NDV)落入禽副粘病毒血清型1 (APMV-1)。APMV-1属于家庭的秩序mononegavirales副黏液病毒科(2,12,15,16]。这个家庭分为两个亚科黏液和Pneumovirinae。副粘病毒家族包括许多重要的人类和动物病原体导致严重疾病如麻疹、腮腺炎、亨德拉,尼帕,人类呼吸道合胞体病毒、人类副流感病毒病毒1 - 4,仙台病毒,副流感病毒病毒5日NDV感染。重排副粘病毒科的国际委员会在1993年病毒的分类放置APMV-1Rubulavirus属。从那时起副粘病毒科之间的差异导致的新发展Avulavirus属。

黏液和Pneumovirinae亚科相差几个不同的特点。形态学、肺炎病毒的核衣壳的更窄和基因组编码的蛋白质比地利亚(15- - - - - -18]。肺炎病毒编码表示为一个惟一的SH蛋白II型积分膜蛋白(15,16]。质膜的蛋白质定位,成为包装信封的一部分在释放子代病毒粒子。这些病毒也配件编码蛋白质NS1 NS2连同两个矩阵M2蛋白不同于地利亚的基质蛋白。抗原的地利亚能打和独特的表面抗原网站发现肺炎病毒(17,18]。hemagglutinin-neuraminidase (HN)表面糖蛋白蛋白质地利亚的红血球凝聚和神经氨酸酶的活动,而表面糖蛋白(G)的肺炎病毒没有神经氨酸酶的功能。

APMV-1有基因地图结构类似rubulaviruses初始分类的原因(15,16]。进一步分析发现,不同于其他rubulaviruses, APMV-1缺乏一个C蛋白,一个小疏水性(SH)蛋白质和磷(P)是相对小的15,16,19]。基因间区域也是变量与其他Rubulaviruses相比。一些特性,比如在守恒的基因组核苷酸序列标识目的地和RNA编辑让它看起来类似于Respiroviruses。核苷酸序列不结合Rubulaviruses也Respiroviruses导致下的新分类Avulavirus属。

使用两种不同的分类方案NDV组隔离基于遗传分析(6,8,14,20.,21]。分组之间出现的差异可以使用两个分类方法和基于偏好。奥尔德斯等人提出的一个分类是基于基因型或基因血统分组下血清型1 (APMV-1) [21]。这个分组方案NDV分为六个血统(血统1到6)12]。Sublineages (d)血统3和4中创建,而Sublineages (e)形成在天堂5。这些遗传分组是由血统和sublineage如表示3 a和b。第二种分类方法基于基因组特征和F和L基因的序列分析组隔离成一级或二级而不是血统(4,6,8,20.,22,23]。隔离从类我在美国活禽市场存在,家禽和野生水禽。类我主要是由低毒性隔离,但一个致命的隔离已经包含在分类。类病毒有一个世界范围内的分布和进一步分为九个基因型。隔离在课堂上分组我最长APMV-1基因组15198个核苷酸。类我隔离通常不向世界动物卫生组织由于其低毒性报告的名称。

隔离导致所有四个动物共患病从1920年到现在被列为二类(20.]。二类病毒通常从家禽、宠物鸟,野生水禽。二类病毒是我第九通过进一步分为基因型。基因型我通过静脉和第九已经在15186个核苷酸长度略短的基因组。这些基因型被认为是“早期”由于他们身份在1930年和1960年之间。基因型V通过八世和X有中等长度的基因组在15192年,被认为是“末”1960年之后,由于他们的身份。所有vNDV被列为二类除了一个隔离导致澳大利亚从1998年到2000年爆发。这种隔离是决心来源于低毒性菌株的NDV在致病性(LoNDV),增加循环通过家禽4,6,20.]。这也许可以解释分类在课堂上我所有其他LoNDV隔离。

LaSota、B1和Villegas-Glisson /佐治亚大学(VG / GA)列为二类疫苗病毒株,基因型二世(6,23]。嗜神经型NDV velogenic (vnNDV)鸡肉/德州GB / 1948也是一个成员的基因型II表明广泛的分离,可以分配给一个基因型。通过八世由基因型V只有vNDV隔离和世界范围内的分布。1971年和2002年1971年和1993年加利福尼亚和佛罗里达暴发是由基因型V (6,11,23]。鸬鹚vNDV分类在基因型V,虽然PPMV-1分类下subgenotype振动器所有其他类II基因型包括分离的病毒来自美国以外。

3所示。发现禽副粘病毒Serotype-1

的恶性NDV首次被发现在Java中,印度尼西亚,1926年在英格兰和纽卡斯尔地区(1- - - - - -3,20.,24]。历史数据表明,在家禽中暴发盾与极为相似的症状可能是目前在韩国1926年之前,也早在1896年在苏格兰。汉森说,有三个假说来解释在东南亚的越南盾突然出现(25]。首先,越南盾可能是流行在东南亚和仅仅成为一个问题,当家禽成为商业化(1,25]。第二个理论是盾出现在鸟类生活在热带雨林,被人引入家禽类似于今天的热带鸟类传播疾病的运动。第三个解释是一个主要的突变发生在前体致病性病毒允许变化从低毒性高毒性。可以感染所有订单的鸟类物种,APMV-1已经能够传遍世界导致四个动物共患病(1,4,14,26- - - - - -28]。最初的动物共患病花了20年发展非常缓慢蔓延整个世界(1]。美国(美国)可能没有参与第一个动物共患病但并不那么幸运在第二次动物共患病。第二个疫情传播速度快得多,只有4年传遍世界。全球化和各种运输方式的发展导致疾病传播率的增加在第二,第三,第四动物共患病发生在1960年,1970年代末和1980年代,分别。

“纽卡斯尔疾病”这个术语是由柯南道尔作为一个临时名称来区别于其他疾病时(1,2]。名字是从未改变,但APMV-1已成为与NDV替代术语交替使用4,8]。尽管是APMV-1的同义词,一词“NDV”最近进化描述疾病的更致命的形式而APMV-1包含所有菌株血清型1包括无症状、低毒性、高毒性菌株。实质性APMV-1进化形成了一个独立的进化枝毒性NDV在2003年发现的11]。强毒株的NDV出现1995年和2000年之间影响Double-Crested鸬鹚在加拿大。这种压力导致显著的死亡率少年鸬鹚和其他鸟类物种构成风险包括家禽。

鸽子paramyxovirus-1 (PPMV-1)是另一个应变的APMV-1起源于鸽子(1,3,26]。中东地区发现了这只变种的NDV在第三动物共患病在1970年代。像NDV前面所提到的,这种疾病容易传播,现在全球分布。1984年,病毒的传播从鸽子变成家禽在英国。污染饲料的鸽子粪便导致23日爆发在商业鸡。这些疫情表明病毒有能力复制在其他鸟类物种和引起感染。这种疾病不再是局限于野生鸽子和可能的经济损失。鸽子PPMV-1疾病自1980年代以来一直是一个持续的动物共患病(1,2]。它仍然是一个流行的疾病在一些国家由于缺乏疫苗接种,住房方法和赛鸽运动。

4所示。世界分布

世界动物卫生组织(国际des既往办公室组织定义可报告的NDV作为APMV-1感染鸟类符合以下标准确定毒性:颅内致病性指数(ICPI)陈小鸡是大于或等于0.7或羧基F (C)的终点站₂蛋白质包含多个基本氨基酸和苯丙氨酸在117 F的残渣₁蛋白n端(1- - - - - -3,7,29日,30.]。至少三个赖氨酸或精氨酸残基的存在位置113年和116年之间定义术语“多个基本的氨基酸。“很难跟踪越南盾的地理分布在世界各地由于有限的向国际兽疫局报告。一些国家只报告当疾病出现在商业家禽而不是在后院爆发时的羊群。使用活疫苗也可以干扰的能力区分当前感染疫苗部分由于活病毒疫苗中使用的各种各样的压力。

传染病之一继续定期出现在中美洲和南美洲,非洲,欧洲和亚洲,而零星的传染病之一发生在(1]。增加在西欧爆发开始于1990年代。几株显示负责这些通过系统发育和抗原评估疫情。后院家禽仍然是常见的感染在欧洲国家包括在1991 - 1995年和2000年爆发。以下爆发发生在1995年和1999年之间:18日在丹麦,27日在北爱尔兰,两个在芬兰,一个在瑞典,一个在爱尔兰共和国,一个在挪威。几个暴发发生在澳大利亚包括1932年,1998年、1999年和2000年。这些暴发的爱尔兰共和国(1990)和澳大利亚(1998 - 2000)被证明来自增加毒性从低毒性和盾在家禽(复制后4,6,20.]。2008年疫情报告在多米尼加共和国,伯利兹、秘鲁、芬兰、德国和日本(6]。尽管缺乏向国际兽疫局报告,NDV仍然是一个流行的疾病在非洲和亚洲的部分地区。

5。在美国爆发

疾病被称为“pneumoencephalitis”,血清学和APMV-1,被发现在美国在1930年代(1,2,23]。作为疾病发生的动物共患病,关在笼子里的进口和珍奇的鸟类进入加利福尼亚爆发在1970年引起的(1- - - - - -3,31日]。进口鸟已经成为严格的监管,减少疾病的发生。尽管进口检疫程序,异国鸟类仍定期走私进入中国。毒性NDV往往是孤立的从非法进口和隔离鸟类。1991年六个州受盾从非法进口的宠物鸟2]。幸运的是这种疾病没有传染给家禽中爆发。

斗鸡的做法也导致越南盾引入到美国(2]。1975年、1998年和2002 - 2003年游戏家禽是三个独立的越南盾的爆发的原因。2002 - 2003年疫情导致加州最重要的经济损失导致超过300万只禽鸟的灭绝2671商业table-egg前提包括21层的羊群2,23,32]。运输受感染的鸟类或受污染的材料和遗传性疾病导致后续爆发在内华达州,亚利桑那州和德克萨斯州。努力根除疾病成本美国估计有180到3.6亿美元。协调帮助根除努力,最终在2003年爆发。从那时起,美国一直在家禽中自由盾(4]。

目前低毒性菌株的APMV-1流行在美国(4,23]。lentogenic多数现场隔离,但毒性暴发株NDV导致double-crested鸬鹚[2,3,11]。虽然成人鸬鹚被认为是病毒的自然宿主vNDV,少年鸬鹚是高度敏感的疾病。在1990年和1992年越南盾鸬鹚在double-crested鸬鹚和鹈鹕引起死亡事件。隔离从流行在美国中北部和南加州列为velogenic亲神经的病毒,意味着这些致命的毒株引起的临床疾病的神经系统3]。爆发也发生在2008年和2010年(33]。这些vNDV株通常限于鸬鹚,但在1992年爆发的越南盾鸬鹚发生在火鸡在北达科他2]。复发的疾病在家禽以来没有见过。鸬鹚vNDV是世界动物卫生组织由于ICPI较高可报告的价值和存在的多个基本融合基因的氨基酸裂解位点(11]。所有其他毒性株NDV被认为是美国导致外来术语“异国情调的纽卡斯尔疾病”(结束)6,23,27]。加州在2002年爆发的一个例子的广泛使用术语“结束”。

PPMV-1首次被引入美国的同时,1984年英国爆发(3,26]。今年在纽约最初的隔离之后,NVSL收集了34个额外的隔离PPMV-1主要来自美国东部。病毒传遍美国。并与野生和家养的鸽子。德克萨斯州和乔治亚州在1998年经历了严重的疾病,导致问题的引入商业鸡类似于在英国爆发。至此,自然传播PPMV-1国内鸡没有发生在美国。(3]。PPMV-1仍然是在野生和赛鸽流行在美国,和鸽子也被证明港口。鸽子已经成为PPMV-1的自然宿主11]。

2002年的农业生物恐怖主义保护法案建立了严格的指导方针和程序控制占有,使用和转让生物制剂,对动物健康构成威胁32,34,35]。鸡新城疫是列表的所有毒性菌株生物制剂分为选择代理的代码下联邦法规(6,19,32,34]。必须遵循严格的处理程序在处理这个代理。隔离或收购vNDV必须立即报告给动植物卫生检验署(APHIS)和/或疾病控制和预防中心(CDC)。为了处理vNDV在美国,一个设施必须注册与蚜虫或疾病预防控制中心。隔离vNDV是世界动物卫生组织和可报告可能会导致国际贸易限制;因此,无病状态需要维护家禽出口从美国1,3,6,8,24]。

6。病毒蛋白

APMV-1笼罩,多形性,nonsegmented消极意义上讲,单链RNA病毒,这大约是15.2 kb (2,3,15,16,36]。基因组编码6包括核衣壳蛋白(NP)、磷(P),矩阵(M),融合(F), hemagglutinin-neuraminidase (HN),和依赖RNA的RNA聚合酶(L)。病毒粒子组成一个稳定的核衣壳组成的核心NP蛋白绑定到基因组和antigenomic RNA (14- - - - - -16,37,38]。L P和蛋白质结合核衣壳核心合成形成后不久核糖核蛋白(RNP)复杂。这RNP复杂成为模板依赖RNA的RNA聚合酶转录的蛋白质。L蛋白结合的基因组RNA 3′RNP中的条目站点使用起止复杂和6个蛋白基因转录机制。在该机制中L蛋白启动转录和转录后释放RNP复杂基因的核苷酸的副粘病毒科总是等于6个核苷酸的倍数。这转录要求被称为“六规则”(14,37]。

转录创建一个梯度的信使核糖核酸(mRNA)蛋白转录为了从3′-NP-P-M-F-HN-L-5′。蛋白基因3′末端结果接近在一个更高的蛋白质的生产。的黏液病毒亚科需要基因组长度的倍数六核苷酸有效复制。NP单元必须接触6个核苷酸,称为“六规则”(14,37]。转变在NP亚基基因启动子或antigenomic RNA结果转变立场导致错误或低效的复制。

ND病毒粒子包含两种类型的表面糖蛋白,F蛋白和HN蛋白(2,15,16,38- - - - - -43]。F蛋白是一个类我融合糖蛋白合成为一种完整的膜蛋白。蛋白质翻译后,三个相同的多肽链组装成homotrimers。碳水化合物链转译后的添加到homotrimers生物活性。宿主蛋白酶必须打通前体蛋白为了成为生物活性。

F蛋白的裂解位点velogenic和大分子菌株(包括PPMV-1和鸬鹚vNDV)包含一个furin识别网站有多个基本氨基酸(精氨酸、赖氨酸)周围的谷氨酰胺在114 F(糖基的位置₂亚基)和苯丙氨酸在117 F (n端位置₁亚基)[2,15,16,40,42,43]。高效的F乳沟₀蛋白质和NDV菌株的毒力依赖于一个或两个精氨酸的存在在112年和115年职位和/或苯丙氨酸在117位置。主机无处不在的胞内蛋白酶能够打通trans-Golgi F蛋白的膜由于多元氨基酸的存在。抵达后在质膜,这些F蛋白已经处于活跃状态。激活后homotrimers通过胞外分泌病毒表面。c端地区创建跨膜域定位在质膜蛋白质,包含融合肽的球状的头从质膜的表面延伸到细胞外空间启动与宿主细胞膜融合。低毒性菌株没有多个基本氨基酸F蛋白裂解位点。相反,他们有一个基本的氨基酸和亮氨酸在117位置。由于这些差异F蛋白trans-Golgi裂解膜不像他们在vNDV mNDV菌株。F蛋白仍处于非活动状态,当他们到达等离子体膜。

F蛋白的合成发生在急诊室作为一个不活跃的F₀前体(42,44]。激活F蛋白F₀必须裂解功能F₂和F₁多肽,使子代病毒的传染性。这些多肽必须绑定到病毒表面通过二硫键使感染性病毒颗粒。这两个疏水区域的F₁多肽是氨基端融合肽和跨膜域。F₁多肽还包含两个七个疏水重复区域指定HRA和HRB。

在最初的翻译F蛋白折叠成一种亚稳态之前融合(42,44]。大规模的构象变化一旦融合被激活。这些构象变化进展下一个能量梯度形成一个稳定的postfusion构象。活跃的F₁多肽介导病毒和宿主细胞膜脂质膜之间的融合。膜融合允许病毒基因组进入宿主细胞,病毒复制的起始。

第二表面膜糖蛋白是II型积分,蛋白质。HN蛋白跨膜区域,与F蛋白,位于伴地区的蛋白质(42,44]。疏水区域约25个氨基酸长度锚蛋白在病毒膜和作为一个信号序列。HN蛋白促进融合的病毒和宿主细胞膜通过与F蛋白相互作用[45,46]。它能够使红血球凝聚细胞结合唾液酸(SA)受体(42,44,45]。神经氨酸酶病毒HN蛋白可以打通SA)结构的复制后释放。HN蛋白也已被证明能够在组织中发挥作用取向独立于F蛋白的氨基酸序列(45]。

复制NDV首先附件病毒宿主细胞膜。HN蛋白结合SA细胞膜表面的受体使F蛋白更接近宿主细胞(42,44,45]。HN与SA受体被认为启动所需的构象变化激活F蛋白。图1Bissonnette et al .,提供的是一个模型描述膜融合事件(44]。在融合事件F₁多肽进行额外的构象变化公开HRA和HRB区域(42,44]。这两个疏水区域的F₁多肽行为绑定病毒宿主细胞膜膜。氨基融合肽连接到宿主细胞膜,而跨膜域锚病毒膜。6-helix包(6 hb)夫妇免费蛋白质重折叠时释放出能量,当两个膜融合。最后一个F蛋白的构象状态是最稳定的形式,是不可逆的44]。

膜融合发生在中性pH值,但融合激活的确切机制尚不清楚38,39,42,47,48]。公认的步骤在病毒膜融合事件开始对接的宿主细胞膜。这种对接事件发生时通过HN蛋白之间的相互作用和SA受体。F蛋白被激活的膜的方法,和膜融合之间的孔隙形成膜(38,39,43,48- - - - - -50]。

F蛋白发生膜融合的仅是不够的(38,39,43,46,48- - - - - -50]。Coexpression HN附件蛋白最初认为是需要促进融合。附件SA的HN蛋白受体可能不需要启动F蛋白的激活。NDV隔离,突变HN蛋白已被证明的附件功能继续促进融合。它也表明,缺乏co-expression HN蛋白可以与一些F蛋白融合事件发生。附件的激活事件本身可能不支持融合的过程。NDV HN突变体已被证明无法促进融合而附件功能仍然完好无损。附件的蛋白质必须来自同一病毒融合蛋白以融合事件发生(38,39,43,48- - - - - -50]。

NP、P和L在复制和传染性蛋白质也发挥了作用。所有三个病毒合成所需的蛋白质(15- - - - - -18]。NP蛋白作为网站病毒RNA基因组RNA合成和捕捉到核衣壳在复制保护它免受降解。免费的NP蛋白在细胞内的浓度在限制中发挥作用的转录和复制的速率。P和L蛋白nucleocapsid-associated需要蛋白质和酶的活动。P蛋白直接参与新生链组装和结合L蛋白NP-bound模板RNA形成RNP复杂。病毒复制依赖于所有三个蛋白质产生感染性病毒颗粒。

7所示。病毒复制

融合事件导致孔隙形成允许病毒核衣壳复杂进入宿主细胞(2,38,43,48- - - - - -50]。宿主细胞胞浆内的所有病毒复制事件发生。由于RNA基因组是消极意义上讲,需要依赖RNA的RNA聚合酶(L)进入细胞的基因组RNA的转录发生。积极意义RNA中间体形成充当信使RNA使用宿主细胞蛋白质翻译机器来翻译。病毒蛋白是病毒粒子形成的细胞膜运输。宿主细胞膜成为修改形成了新的病毒信封。新膜内的核衣壳蛋白结合形成RNP复杂。公布的新病毒粒子通过宿主细胞膜出芽。在病毒组装病毒糖蛋白可能表达宿主细胞表面膜。F蛋白的积累和HN附件感染细胞表面蛋白启动融合相邻细胞之间形成多核体(43,44,48]。F蛋白已被证明是能够启动合胞体形成的援助HN蛋白(44,48]。

8。传输

主要的传播途径是通过食用材料污染的粪便或吸入含有生物滴(1- - - - - -3,24,51]。病毒复制的呼吸道受感染的鸟类可以传播病毒的鼻涕。当病毒到达易感鸟类的粘膜,病毒很可能达到上呼吸道。复制新感染呼吸道的鸟类允许潜在暴露更多的易感鸟类和病毒容易通过群传播。这一传播方式的成功取决于环境温度和湿度和雾化液滴中包含的病毒载量。从1970年到1971年在英格兰和北爱尔兰爆发在1973年是由呼吸道吸入污染的水滴。病毒也能复制在肠道,然后可以在粪便中排出。它已经表明,大量的病毒通常在NDV-infected鸟类的粪便排泄。

病毒传播的几种方法与NDV的引入新的前提。直接摄入排泄物污染的饲料或水提供了一个高病毒负载易感鸟类(1,2,24]。这是证明了PPMV-1传输鸡,1984年发生在英国。进口生病的宠物或奇特的鸟类,商业家禽和鸟类游戏或运动赛鸽运动允许超远距离传播的病毒。广泛的动物包括爬行动物和人类可以NDV并且能够将病毒感染其他脆弱的动物。病毒粒子已被证明进入蛋壳后它已产生了潜在的病毒的传播在运输表或孵化的蛋。居住或减毒疫苗也可能的感染源,如果准备使用的病毒疫苗不是正常死亡或疫苗是污染。疫苗接种和授精人员以及兽医已被证明传播疾病从农场到农场由于不当的清洁和消毒设备。

活禽市场也可以导致持久性和病毒的传播。这些市场可能不会遵循适当的清洁和消毒技术允许环境污染的可能性。活禽市场面临来自多个源的鸟类。这些鸟类传播病毒的风险,因为他们离开这个市场。低毒性株NDV一直定期NVSL[从野生鸟类中分离出来了52]。野生鸟类迁徙已被证明传输NDV放养家禽通过直接接触或通过污染的饲料或水(1,2]。1997年,十一在家禽中暴发NDV在英国是野生鸟类的运动有关。Double-crested鸬鹚盾也被指责为鸬鹚的传播新前提在迁移。病毒能够坚持成人鸬鹚的自然宿主允许流行病发生在羽翼未丰的鸬鹚,极易受这株NDV [2,33]。

商业家禽的生物安全设施是一个重要的步骤在预防NDV的传播和巨大的经济损失。建议家禽农场和孵化场不应该在靠近彼此保护高度易感小鸟(1]。家禽农场和羊群的房子也应该互相分开,以避免污染转移之间的物质前提。运动设备和材料之间的农场应该限制和彻底的清洗和消毒。人类也可能港结膜囊的病毒导致结膜炎和可能传播病毒(1,24,51]。并不建议人们之间移动的前提,除非相应的生物安全程序。分离农场基于物种很重要,防止外来疾病的介绍新的鸟类物种。供水应清洁,不应该来自地表水候鸟有可能污染水源。

9。发病机理

病毒的致病性取决于多个因素,包括主机物种,年龄、免疫状态、继发感染、压力、环境条件、病毒传播的数量,和应变的传播途径,但最重要的是感染病毒(1,2]。鸡比其他物种更敏感,而鸭子往往没有临床症状;因此,水禽被认为是NDV的自然宿主。乳沟F蛋白在病毒复制的主机在病毒的毒性中起着重要作用[1,2,40,48,53]。Velogenic和大分子株NDV能复制系统由于F蛋白的活动状态。不幸vNDV mNDV,菌株不能区分基于F蛋白裂解位点的氨基酸序列。由于缺少多个基本氨基酸低毒性菌株,F蛋白必须由分泌trypsin-like蛋白酶裂解,仅限于在呼吸道和胃肠道粘膜膜。低毒性菌株不能复制系统由于这些trypsin-like蛋白酶的有限的可用性。的例子vNDV, mNDV LoNDV裂解位点序列如表所示1。

HN蛋白已被证明的长度也影响致病性(13,41]。HN₀前体蛋白由616个氨基酸残基的无毒菌株NDV包括阿尔斯特和D26 [41]。这个活动环₀转化为一个活跃的蛋白质通过蛋白水解的乳沟几个核苷酸糖基。其它NDV菌株的开放阅读框包括停止密码子上游导致571年和577年的活性蛋白质氨基酸的长度。缩短HN活性蛋白质发挥一些作用毒性但不是完全理解。

的巨噬细胞在感染NDV鸡的免疫系统产生I型和II型干扰素(IFN) [3]。10基因编码鸡I型干扰素(ChIFN1)只有一个基因负责鸡II型干扰素(ChIFN2)。NDV能复制在这些巨噬细胞尽管免疫系统的反应。外周血淋巴细胞和异嗜性的诱导细胞凋亡时感染了病毒。巨噬细胞的呼吸系统感染NDV显示减少的火鸡吞噬和bacteriocidal能力(3]。自然免疫刺激家禽可能不足以控制疾病取决于感染病毒。控制策略需要预防严重疾病的发展。

10。临床症状

潜伏期感染疾病的发展变化的时间从2到15天取决于几个因素(2,12]。病毒的致病性、主机物种和年龄、宿主免疫状态、继发感染、压力、环境条件、数量的病毒传播,传播途径都能扮演一个角色在决定疾病的严重程度和孵化的长度。疾病严重程度导致了NDV分类隔离在三个不同的致病型(1- - - - - -3,12,53- - - - - -55]。感染lentogenic NDV隔离范围可以从nonapparent在成年鸡轻微呼吸道或消化道疾病。当复制是局限于胃肠道,通常分为无症状感染肠由于缺乏呼吸道症状。年轻易感鸟类可能产生更严重的呼吸道疾病,可以导致死亡,因为对继发感染的易感性增加。LoNDV分为lentogenic NDV,通常用作疫苗生产来源。大分子(mNDV)隔离被认为是中间的毒性。感染通常是系统性的,并可能导致一个非致命的呼吸道疾病的发展。产蛋量下降中可以看到层mNDV感染。很少的神经系统症状可以开发,但感染后死亡率通常较低。鸽子副粘病毒分离株通常下跌mNDV分类由于他们中间毒性和神经系统症状。

高毒性velogenic(盾)病毒系统,会导致高发病率和死亡率。受感染的鸟类物种等因素,年龄、合并感染与其他生物,路线的接触,病毒剂量,压力,和个人的免疫状态确定疾病严重程度(2,12]。Velogenic嗜内脏型ND (vvND)导致胃肠道粘膜的急性感染导致出血性病变和死亡(1,2,12,30.]。临床症状可能开始虚弱,呼吸的频率增加,精神萎靡,虚脱。在感染过程中,绿色腹泻、肌肉震颤、肢体瘫痪可能是明显的。水肿可能出现在头部尤其是眼睛周围。在高度敏感的羊群,死亡率可高达100%。

Velogenic亲神经的NDV (vnNDV)隔离不复制的胃肠粘膜像vvNDV1,2,12,30.]。主要感染导致呼吸窘迫其次是神经系统疾病。产蛋量下降也看到这株vNDV。发病率与vvND类似,约100%,但死亡率更低。死亡率在成年鸟通常只有50%,但在年轻的鸡可以高达90%。鸬鹚vNDV属于vnNDV分类由于严重神经症状和高死亡率在少年鸬鹚3]。临床症状在火鸡可能比在鸡那么严重。游戏鸟类也敏感,偶尔爆发发生在这些物种。平胸类的更容易受到疾病发展,水禽通常耐药(1,2,12]。

11。疫苗接种

接种疫苗对NDV起源于使用灭活在鸡感染菌株被证明提供保护(2,3]。无法生产安全有效疫苗导致停药的大规模生产。能力减弱vNDV,由艾耶和多布森在1930年启用mNDV疫苗开发(2]。灭活疫苗也依靠在美国当NDV是在1930年引进的2,3]。氢氧化铝灭活疫苗病毒吸附涉及。这些类型的疫苗在欧洲普遍使用,直到1970年代第三动物共患病。灭活疫苗的表现是不够的,动物共患病期间使用活疫苗疫苗接种程序实现。大分子Roakin温和Hitchner B1和LaSota菌株发展成今天活病毒疫苗和继续使用生产生活和灭活疫苗(1,2,30.]。现代石油乳剂代替氢氧化铝灭活疫苗使用导致疫苗更成功。油乳剂作为佐剂刺激炎症免疫反应(39]。缺乏一种佐剂灭活疫苗不会诱发早期免疫反应需要刺激抗体的产生。需要佐剂免疫系统的抗原,抗原定位到接种的网站,或直接刺激先天免疫反应。氢氧化铝沉淀抗原接种的现场,而石油乳剂直接刺激免疫反应。

疫苗接种对NDV广泛地实施在美国,和其他国家一样疫苗生产是严格控制的2,6]。世界动物卫生组织疫苗生产指定生活指南和灭活病毒疫苗(必须进行广泛的试验2,30.]。主的种子活病毒疫苗必须有一个ICPI值小于0.4,如果不少于10⁷50%意味着鸡蛋感染剂量(宰牲节₅₀)接种在鸟儿或小于0.5如果不少于10个⁸开斋节₅₀在鸟儿接种。同样主灭活病毒的种子必须有一个ICPI值小于0.7,如果不少于10⁸开斋节₅₀在鸟儿接种。

活病毒疫苗可以分成lentogenic和大分子团体(1,2,30.]。免疫反应被证明能增加的致病性活病毒疫苗增加。提供最好的保护疫苗项目采用的方法与日益进步的疫苗包括逐次升压疫苗毒性菌株(1,2,30.]。另一种方法始于低毒性活病毒疫苗接种之后,连续使用毒性更强的灭活病毒疫苗(1,2,30.]。这种方法相结合的灭活和活病毒疫苗会导致刺激细胞介导的,天生的,和体液免疫反应,提高保护。活病毒疫苗通常是冻干的尿囊液由感染胚胎的鸡蛋。活疫苗包括易于管理的优势,便宜的生产,易于应用。活病毒刺激细胞介导的免疫反应导致疫苗接种后迅速保护。活病毒能够传输保护鸟类之间可以很容易在一群中传播。这也导致缺点由于潜在的活病毒疫苗产生临床症状群中又容易传播。母亲的抗体可以阻止活病毒疫苗免疫年轻的鸟类。细胞介导免疫反应由感染活病毒并不提供完整的保护的挑战。这提供了一个额外的缺点活病毒疫苗。

Lentogenic活病毒疫苗是由鼻内接种,滴眼剂,或喙浸2,3,30.,51]。管理大分子活病毒疫苗更劳动密集型和包括wing-web刺伤或肌内注射。添加的浓度控制疫苗疫苗接种的饮用水是一个流行的方法。喷雾和气溶胶也是一个受欢迎的方法对于疫苗的应用程序,但气溶胶粒子的大小必须控制,允许适当的吸入。这种方法通常用于中等剂量的疫苗,以避免严重的反应。理想疫苗可能导致“滚动反应”,ND可能导致一群鸟类之间的传播的疾病导致增加呼吸道疾病(6]。也有可能从野生鸟类LoND引入尚未接种群可能导致相同的“滚动的反应。”

灭活疫苗生产使用相同的方法活病毒疫苗,但是病毒尿囊液中使用beta-propiolactone或福尔马林灭活2,3,30.]。最初氢氧化铝佐剂(现在油乳剂)添加到灭活病毒刺激免疫系统。一些病毒是目前用于生产灭活疫苗包括阿尔斯特2 c, Hitchner B1, LaSota,昆士兰/ V4, F, Roakin [2,3,20.,30.]。灭活疫苗管理仅限于肌内或皮下注射。存储的灭活疫苗比活病毒疫苗容易因为病毒的生存能力不需要维护。劳动密集型生产灭活疫苗由于失活和测试所需的步骤,以确保彻底失活了。油乳剂灭活疫苗可用于陈小鸡,因为母亲的抗体不影响疫苗的效率。之间有42天戒断期期的疫苗接种和屠宰供人类消费在美国,构成了肉仔鸡由于其寿命短的问题。无论使用哪种类型的疫苗,鸟类仍然能够成为感染NDV和其他人可以传播疾病2,5,6]。因为疫苗不能预防疾病传播,它的角色是有限的维护个人的鸟从重大疾病提供保护性抗体,可以快速响应的引入ND病毒(2,5,6]。

F和HN表面糖蛋白可以引出一个保护性的体液免疫反应(3,5,30.,39,51]。许多研究人员正在使用重组病毒表达这些蛋白质疫苗生产。Fowlpox牛痘,鸽痘,马立克氏病病毒、逆转录病毒,杆状病毒都被用作表达重组载体F和HN蛋白(3]。疱疹病毒重组表达F和HN蛋白已经成功地保护了火鸡。坂口等人表示,F蛋白(lentogenic D26使用重组马立克氏病病毒(5,56]。森等人使用F蛋白的重组杆状病毒表达D26,和李等人用重组杆状病毒表达LaSota F和HN蛋白和vvNDV Kr-005/00 [5,57]。这些亚基标记疫苗可以提供有效的抗体生产而放贷的能力区分自然NDV感染和疫苗接种(5,20.]。研究是新兴发展的基因和抗原匹配疫苗旨在消除病毒脱落在感染菌株相同的基因型或抗原特征(6]。裸DNA质粒也被开发来表达F蛋白疫苗(3]。

接种疫苗可能导致选择性压力导致新株NDV的外观6,23]。墨西哥和韩国正在经历选择压力或无效疫苗接种的影响。两国持续爆发的越南盾在后院羊群well-vaccinated鸟类与高水平的开发产蛋量下降的保护性抗体缺乏临床症状。疫苗接种PPMV-1赛鸽是常见的做法在许多国家。暴露在未接种疫苗的野生鸽子打开疾病传播的可能性。

12。诊断/控制

12.1。症状/体征

诊断疾病的开始评估临床症状和体征。在鸡盾象征的症状包括虚脱,激怒的羽毛,抑郁、腿和翅膀瘫痪,或其他神经信号与高死亡率达到100%完全易感禽群(1,2,12]。该领域的临床症状可能不是一个可靠的病毒的毒力测量。实验室诊断是必要的确认和致病型NDV排除其他可能引起类似症状的疾病包括高致病性禽流感病毒。

12.2。病理学

如前所述的应变和路线感染起到了很大的作用在临床症状和病变的发展。感染动物共患病vvND通常与肠壁或淋巴组织的坏死导致出血性病变前胃的粘膜,盲肠,十二指肠、空肠和回肠(1,2,12,51]。鸟类显示神经症状没有病理损伤中枢神经系统。总值呼吸道的损伤可能包括呼吸道粘膜出血,airsacculitis气管和拥堵但并不总是观察。继发性细菌感染是一个重要的问题,可能会导致增厚与鼻黏膜炎的气囊或干酪的分泌物。其他器官感染可能被降低结膜出血,脾paratracheal水肿和坏死。盾铺设家禽感染可能证明弛缓性和退行性卵泡,出血的生殖器官包括卵泡和蛋黄在腹腔1,2,12]。

考试也通过组织病理学收益率各种描述性的病变影响菌株的毒力和路线的介绍。微观损伤可能包括细胞浸润、水肿、充血、坏死。神经病变是由性脑脊髓炎和神经元的变性、淋巴细胞浸润、肥厚性内皮细胞。这些病变通常发现在小脑,中脑,脊髓,髓质和脑干。完全丧失的纤毛呼吸道感染可以发生在几天内。在感染的早期阶段,淋巴细胞和巨噬细胞浸润是常见的上呼吸道粘膜的充血和水肿。

致命的毒株可能导致出血的血管在多个器官尤其是肠道。浆膜粘膜表面显示明显坏死肠道淋巴聚集。坏死中可以看到盲肠的扁桃体,单核细胞增生明显在肝脏和其他器官。脾脏和胸腺的生发中心显示局部空泡形成和淋巴细胞破坏。出血也可以发生在心脏,胆囊,皮肤,眼睑结膜炎。金合欢树的瘀点和梳子和面部水肿期间常见的感染。诊断不应该基于特殊的病变或临床症状,因为这些类型的症状和病变并不特定于任何NDV的应变。一些病变可能与低毒性菌株感染,症状可能类似与致命性更强的菌株。病理学是一个有用的工具来指导疾病的诊断,但它不能单独使用来诊断和考虑这些类型的病变并非NDV独有的感染。

12.3。血清学的技术

检测抗体主要是用来评估过去的感染或接种疫苗的免疫反应(1,2,12,30.,51]。通常较高的抗体效价最近后会被感染。有几种诊断测试包括病毒中和小鸡胚胎,斑块中和,hemagglutination-inhibition(你好),单一径向免疫扩散,琼脂凝胶免疫扩散(AGID)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。ELISA和你好测试测量浓度的能力。的ELISA由微量滴定板NDV抗原附加到每个的底部。除了包含anti-NDV血清抗体产生抗原抗体结合的抗体检测对鸡使用抗体产生的另一个物种。抗体酶是共轭anti-chicken当anti-NDV现在和绑定到NDV抗体抗原,酶绑定到anti-chicken抗体催化的颜色变化。这可以通过查看读取板或使用分光光度计定量。连续稀释的anti-NDV血清抗体测试可以用来确定效价。

嗨测试也表现在微量滴定板(12,30.,58]。嗨OIE标准方法采用v形底微量滴定板连续稀释血清试样的两倍稀释使用磷酸缓冲盐(PBS)。一个已知数量的NDV抗原(通常4红血球凝聚单元)被添加到每个孵化允许抗原抗体结合。1%的悬浮红细胞(红血球)被添加到每个又孵化。血凝素蛋白在信封上NDV结合红细胞的称为红细胞凝集。游离抗原在嗨测试能够使红血球凝聚的红细胞没有anti-NDV抗体导致弥漫性红颜色在整个。在anti-NDV抗体,抗原不允许红血球凝聚RBC是因为血凝素蛋白必将被anti-NDV抗体。红细胞的适应不同的颗粒在井底,在45°角,倾斜板将导致一个泪珠模式在井抗原完全抑制。每个血清样本的泪珠模式应该比一个已知抗体控制稀释使用相同的前面描述的方法。

NVSL雇佣了一个稍微不同的版本的嗨测试方法。U-bottom微量滴定板使用,而不是v形底板块(59]。NDV抗原被添加到板,抗原的血清稀释直接离开了PBS的试验井的必要性。悬浮红细胞的准备0.5%而不是1%的悬浮液中使用的标准方法。血清HI效价两种方法确定通过测试的最高稀释血清的倒数就是能完全抑制红细胞凝集的红细胞的1,2,12,30.,58,59]。测试血清可能会导致非特异性凝集的红细胞与鸡红细胞吸附去除血清凝集素的血清测试之前应该做。

12.4。病毒隔离

病毒通常可以隔绝气管/口咽拭子,从活禽粪便或泄殖腔拭子,或死禽的组织收集从受影响的器官1,2,12,51,60]。肠组织和气管是最可能的器官含有病毒,但其他器官演示临床体征可以用于病毒隔离。PPMV-1复制大脑中引起神经症状。脑组织可以用于隔离,但不推荐池大脑与其他组织。也不推荐池气管和粪便组织(60]。棉签收集病毒传输媒体,如脑心浸液肉汤(BHI)。拭子是将病毒颗粒释放到乌鲁木齐媒体然后拧的内部管所以拭子可以删除之前运输的实验室。删除拭子阻止媒体被吸收,允许更多的媒体用于病毒分离和分子检测。

抵达后在实验室,组织均质20%重量/体积等悬挂在抗生素媒体BHI肉汤。拭子媒体和组织匀浆离心机分离的更重的元素在上层的病毒颗粒。上层清液擦洗的一部分被添加到混合抗生素和孵化了至少一个小时,除去细菌的污染。拭子或组织悬架用于接种一种文化系统如鸡胚胎肾(CEK)细胞,鸡胚胎成纤维细胞(CEF)细胞,或specific-pathogen-free (SPF)胚胎的鸡蛋1,2,12,60]。SPF演鸡蛋是最常用的文化系统。

当SPF鸡蛋不可用,鸡蛋可以使用从羊群没有NDV抗体。鸡蛋孵化9 - 11天接种前37°C。四到五个鸡蛋被接种到0.2毫升到0.3毫升的尿囊腔antibiotic-treated悬挂和孵化至少四天37°C在潮湿的孵化器。接种鸡蛋每天检查胚胎死亡率。尿囊/羊水(空军联队)是从死胚胎死在同一天内减少红细胞溶血的鸡蛋。潜伏期的尽头,生活在4°C杀死胚胎冷冻胚胎和空军联队是收获。

空军联队的活病毒是由红血球凝聚(HA)测试。如前所述,NDV红细胞结合血凝素表面糖蛋白的导致红血球凝聚。在HA测试PBS添加到所有井的微量滴定板和收获空军联队在板连续稀释是双重的。加拿大皇家银行的添加,使孵化大约30分钟,和板倾斜来评估井存在与否的泪珠模式。井泪珠形成不含任何或足够的病毒抗原凝集红细胞。井表现出红血球凝聚分散红颜色在整个。这个红色是由于红细胞的凝集和抗原形成晶格。

不红血球凝聚病毒阳性的标本应通过胚胎通过至少一个更多的时间。鸬鹚vNDV并不总是证明红血球凝聚红细胞的能力。更换鸡红细胞的红细胞与土耳其在测试病毒感染时可能是有益的空军联队隔绝鸬鹚的物种。即使土耳其红细胞是利用病毒的HA活动仍然很低使HA评估这株NDV测试不可靠。细菌可能会导致红细胞凝集导致假阳性结果。空军联队的污染应该评估使用文化方法如24小时孵化血琼脂板上。污染可以通过筛选空军联队450纳米膜,再通过在胚胎。

红血球凝聚病毒可以通过HI试验具体评估APMV-1 [1- - - - - -3,12,61年]。U-bottom微量滴定板设置使用方法类似于前面描述的血清标本。未知的空军联队稀释至4公顷的单位和添加到每个盘子的一行。一个已知的参考抗原也添加到井的一行。APMV-1-positive多克隆抗体稀释到一个已知浓度连续稀释的双重的整个行空军联队。空军联队和抗体可以孵化30分钟然后0.5%的悬浮红细胞的添加到每个。额外的20分钟的孵化后,在45°角板倾斜,泪珠形成评估使用相同的前面描述的方法。单克隆抗体(mAb)也可以用于嗨测试识别抗原组包括PPMV-1, mAb B79与几乎所有NDV除了反应类我隔离,其他lentogenic马伯(如AVS-1和15 c4),和vNDV (mAb 10 d11c) (2,3,6,12,26,62年]。额外的描述需要评估的毒性分离为了发展在疫情控制措施。

12.5。描述

历史上三在活的有机体内方法被用来确定致病性(2,3,12,30.,63年,64年]。这些方法包括(1)平均死亡时间在胚胎的鸡蛋(联合化疗),(2)静脉致病性指数(IVPI),和(3)ICPI。串行执行联合化疗过程时,10倍稀释的干净的空军联队准备和每个稀释接种到五9-to-11-day-old胚胎的鸡胚尿囊的路线(65年]。接种时间记录。第二组在相同的方式作为第一个接种,接种时间再次记录下来。鸡蛋在孵化37°C和蜡烛,一天两次,一次在一天的开始,一次在一天结束的时候。检验质量和孵化过程一直持续到所有胚胎死亡,可能需要7天。最小致死量(MLD)被认为是最高的稀释,杀死了所有5个胚胎。所有五个胚胎死亡的时间在小时MLD的每组平均,联合化疗。

IVPI测试需要无菌病毒感染空军联队与HA效价大于1:16 (12,30.,64年]。空军联队是稀释1:10在无菌生理盐水,和0.1毫升静脉注射接种到10六SPF鸡。小鸟每天都检查了为期10天的时间,每一只鸟会根据以下的观察:0,如果鸟是正常的,如果鸟表明疾病的迹象,2如果鸟是重病,3,如果鸟已经死了。如果一只鸟死了,它必须被记录为3对每个观察剩余的10天时间。IVPI是计算每个观测的意思是为每个单独的鸟在10天内。指数的范围可以从0.00意义没有鸟类生病或死亡在观察期间3.00意味着病毒杀死了所有十鸟在接种后的第一个24小时。ICPI是公认的在活的有机体内方法确定致病性NDV根据OIE标准(1- - - - - -3,12,30.]。如前所述的ICPI大于或等于0.7的毒性标准要求报告NDV世界动物卫生组织。表1显示ICPI、联合化疗和IVPI致病性指数特征明显9 ND病毒。

任何ICPI值高于0.7分类在大分子毒性范围(2,3]。致命的分离通常从1.54到1.9(最大值为2.0)。鸬鹚vNDV PPMV-1或vNDV隔离恢复psittacine鸟会有高度可变的ICPI值(2,3,6,26]。这些隔离已被证明有ICPI值从0.69到1.45。这些值将它们的大分子范围分类选择代理。额外的这株NDV通道通过胚胎的鸡蛋可能会导致增加ICPI值指示适应家禽。病毒在鸡接种PPMV-1研究取向包括心脏和大脑中通常未见感染psittacines或与其他菌株接种vNDV [26]。由于这些原因psittacine起源NDV PPMV-1传输等家禽仍然是高度有关。

Velogenic株NDV可以分为Velogenic嗜内脏型或Velogenic亲神经的基于intracloacal接种试验的结果(3,28,63年,66年]。intracloacal接种测试还需要无菌病毒感染空军联队稀释1:10在无菌生理盐水。四个six-to-eight-week-old SPF鸡的泄殖腔与稀释剂擦洗。小鸟每天都检查了为期10天的时间。所有死禽尸体剖检和得分如下观察:+ 4时头部和颈部水肿,出血在气管,在整个胃肠道出血和坏死病变时现在和+ 3 + 1存在于呼吸道和肠道,但严重程度下降。病毒是确定为vvNDV如果一只鸟+ 4病变或至少两只鸟有+ 2 + 3的病变。当鸟类显示神经迹象之前死亡,病毒归类为vnNDV。

胰蛋白酶在细胞培养基的必要性也被用作指示的致病性2,3,6,23,30.]。如前所述,为了使F蛋白变得活跃,它必须被分泌trypsin-like蛋白酶裂解。这些类型的蛋白酶仅限于在呼吸道和胃肠道粘膜膜。低毒性菌株不能复制系统由于这些trypsin-like蛋白酶的有限的可用性。毒性株NDV能复制系统由于存在多个基本融合蛋白裂解位点的氨基酸通过non-trypsin-like蛋白酶更容易裂开。这也是如此在体外分析vNDV哪里能够复制并导致斑块缺乏trypsin-like蛋白酶在细胞培养系统。低毒性菌株细胞培养系统中是有限的,他们可以复制由于缺少trypsin-like蛋白酶。所有NDV隔离都能够复制在CEK细胞可能由于trypsin-like蛋白酶的存在。欧共体语言教学大纲和哺乳动物细胞系细胞培养系统必须与trypsin-like蛋白酶或补充外源性蛋白酶提供的尿囊液,为了让LoNDV复制。

12.6。rrt - pcr,

如部分所述12。4,经典的诊断技术,如病毒隔离和鸡致病性试验可以耗费时间2,6,24,30.,67年]。快速诊断测试如rrt - pcr和测序以确定致病性大大减少所需的时间实施控制措施。分子诊断试剂已经走了很长的路从传统聚合酶链反应(PCR)其次是凝胶电泳扩增子分析当前方法的实时逆转录PCR (rRT)使用一步PCR酶试剂盒(68年]。rt - pcr分析提供快速放大帮助他们成为病毒检测至关重要的诊断工具。消极意义上的本质NDV RNA需要反转录成互补DNA rt - pcr扩增前(互补)。单链RNA逆转录导致单链cDNA使用依赖RNA的DNA聚合酶(68年,69年]。酶技术的发展允许这两个步骤要做在一个管在单一PCR仪器。几个rrt - pcr分析开发了检测NDV包括矩阵的不同基因,融合,依赖RNA的RNA聚合酶。

在rrt - pcr逆转录酶酶的激活在45°C左右发起反转录的RNA互补脱氧核糖核酸(68年- - - - - -70年]。这种酶可以reverse-transcribe大约10分钟。充足的cDNA已经产生时,温度是成长为一个额外的95°C 10分钟导致逆转录酶灭活。酶失活后,仪器进入循环阶段通常包括推进通过三个温度设置。第一温度,通常94°C,使快速变性的双链互补脱氧核糖核酸单链的互补。第二步允许一组核苷酸引物通常位于少于500基地的基因对单链cDNA退火。一个引物结合积极意义链,另结合链的负面意义。实时PCR核苷酸探针也绑定到目标cDNA序列位于两个引物序列之间在这一步。第二步是确定的温度融化的温度不稳定的引物和模板的熔化温度。第三步是通常在72°C,在聚合酶开始引物结合位点和复制cDNA 3′, 5′方向在每个链。 This results in two sets of double-stranded cDNA from each original cDNA strand. These three steps, denaturing, annealing, and amplification, are repeated up to 40 or more times resulting in a doubling of cDNA during each stage.

当实时PCR进入这个循环阶段,调查成为互补脱氧核糖核酸扩增的指示器。TaqMan探测器包含一个荧光记者染料,如6-carboxyfluorescein (FAM), 5′末端和饮料,例如黑洞冷却器,位于3′末端(68年- - - - - -70年]。邻近冷却器的荧光记者从被释放荧光染料减少荧光共振能量转移(FRET)通过空间。聚合酶在基因扩展底漆向地方调查,所在地。聚合酶运行时到探针的荧光染料探针的裂解5′核酸外切酶的活动Taq聚合酶。由于荧光染料是不再接近冷却器,它允许释放荧光。调查从目标链,随后裂解和聚合酶互补脱氧核糖核酸链的其余部分副本。PCR仪器检测荧光的荧光和记录累积循环阶段的进展。荧光检测的数量成正比的荧光团公布在聚合酶核酸外切酶活性。这也是直接正比于互补脱氧核糖核酸复制的数量在每个生产周期由仪器作为传递周期阈值(Ct)的价值。Ct值确定为指数的PCR的循环次数增加cDNA释放荧光检测的副本。

除了TaqMan探针检测方法是可用的,并用于NDV rrt - pcr分析。荧光染料如SYBR绿色或勒克斯可用于rt - pcr检测不需要标记探针(71年]。勒克斯染料用于标签的一个引物3′端附近一个荧光团。3′末端的发夹徒公布的猝灭荧光然后引物结合模板DNA。SYBR绿色插入到dsDNA,释放出荧光dsDNA融化在每个rt - pcr循环。的荧光量正比于样品中DNA的浓度。一些研究SYBR绿色结合融化曲线分析用于区分vNDV LoNDV (72年,73年]。融化曲线分析了插层染料如SYBR绿色或勒克斯fluorogenic引物测量荧光的变化在每个周期,然后可以策划对熔化温度(Tm) (71年- - - - - -73年]。毒性和低毒性菌株在GC含量差异,序列组成,基本不匹配,扩增子长度有助于每个应变的Tm。计算融化曲线可以用来区分菌株(72年,73年]。融化曲线也必须分析识别等非特异性扩增引物二聚体。

融化曲线分析包括引物设计的好处和成本。一套引物可用于区分vNDV LoNDV减少多重引物在一个试验的必要性。成本较低,因为昂贵的荧光标记探针不雇佣和多重引物不需要购买。置入敏感性下降的缺点使用染料如SYBR绿色(71年]。这些染料不绑定到一个探针,因此有能力设置流感到任何dsDNA primer-dimers或非目标扩增子等。分析融化曲线可以主观个人隔离。单个孤立的Tm可能不显著不同,很难区分低毒性和高毒性菌株(72年]。TaqMan探测器已广泛用于rrt - pcr分析检测和分化NDV [4,7,11,13,29日]。这些荧光标记探针的优势绑定到特定区域的扩增子目标减少非特异性荧光的风险。这种类型的检测系统可能需要多个底漆集,有时几种不同TaqMan探测区分LoNDV和vNDV菌株可以昂贵的(72年,73年]。探针也可以降低在其寿命和释放非特异性荧光(71年]。

USDA-validated rrt - pcr分析使用NVSL和NAHLN实验室检测NDV的M和F基因。分析利用TaqMan探针和Taq聚合酶。M基因分析旨在检测大多数APMV-1的矩阵高度保守的基因,主要是二类病毒(4,6- - - - - -8]。这个试验作为筛查工具诊断样本中检测APMV-1或尿囊液接种的胚胎。M基因分析已经成功APMV-1检测包括vNDV、鸬鹚vNDV, PPMV-1,大多数LoNDV。最近的一份刊物金等人表明,M基因分析未能发现73%的类我隔离在2004年和2007年之间4,8]。低毒性类我从水禽分离回收,在美国活禽市场包含在探针结合位点基因变异导致的损失调查绑定。缺乏检测造成重大关注,因为其中一个未被发现的可能性隔离转换从低毒性的毒性。没有检测的新菌株的可能性vNDV可能导致爆发和重大经济损失。发展一个新的M基因的分析能够发现更广泛的APMV-1可以减少失败的可能性诊断新盾爆发。

随后M基因化验标本检测呈阳性的测试由F基因rrt - pcr分析。F基因分析的目的是只检测毒性菌株APMV-1通过绑定F基因的裂解位点(6,7,67年]。这个试验是验证在加州NVSL结束在2002 - 2003年爆发。从那时起,它已经被越南盾的NVSL和NAHLN实验室诊断检测。最近的金等人的分析表明一些PPMV-1菌株不F基因试验检测到的6,7]。不匹配的探针结合位点的一些菌株PPMV-1也归咎于缺乏这些病毒的检测。另一刊物街等人表明F基因化验也无法检测鸬鹚vNDV [11]。无法检测的毒性菌株APMV-1高度有关,因为盾会造成的潜在经济损失介绍。盾虽然PPMV-1和鸬鹚在鸽子和鸬鹚横行,分别检测的应变vNDV是重要的在美国因为应变可能感染家禽的潜力。发展一个新的F基因检测能够检测所有菌株盾vNDV将有利于被动监测工作包括诊断检测禽流感死亡事件和外国动物疾病诊断调查。

12.7。测序

DNA测序用于诊断实验室分析APMV-1分离株的毒力潜力。测序技术起源于桑格等人使用dideoxynucleotide三磷酸(ddNTP)介导的链终止和之一等人使用化学降解法[74年- - - - - -76年]。测序技术已经迅速改善从那时起,和下一代或自动测序技术已经成为标准的实验室分析的基因序列。一般测序发生如下;template-specific引物用于放大cDNA高拷贝数(77年]。放大cDNA添加到第二个PCR反应,DNA聚合酶template-specific引物延伸的只荧光ddNTPs。每个ddNTP添加在链中扩展的荧光检测使用一个自动测序仪。每个核苷酸的位置标识根据引物之间的距离。核苷酸的身份识别DNA链中每个ddNTP注册的个人标签。

据世界动物卫生组织的分子特征可报告的毒性NDV包括多个基本氨基酸的羧基(C)终点站APMV-1 F₂蛋白质和苯丙氨酸的存在在117 F的残渣₁蛋白n端(1- - - - - -3,7,30.]。多个基本氨基酸的存在允许F基因vNDV容易劈裂主机无处不在的胞内蛋白酶贯穿身体的(1,2,30.,78年]。病毒是允许在任何主机复制系统组织导致严重疾病的发展。NVSL存在的多个基本氨基酸检测到F基因的测序一个简短的地区包括裂解位点。由此产生的核苷酸序列转换成氨基酸序列,然后分析了手动评估直接上游的裂解位点氨基酸存在。

通常一个或两对基本的氨基酸,赖氨酸(K)或精氨酸(R)是由苯丙氨酸在117年渣,直接表明毒性或大分子序列(6,13,29日,40]。共识序列毒性和大分子菌株由柯林斯等人^112年R / K-R-Q-R / K-R-F^117年(3,13,40,79年]。在F基因分子分析裂解位点不能区分大分子和毒性菌株。PPMV-1隔离已被证明有两个共识序列之一^112年G-R-Q-K-R-F^117年或^112年R-R-K-K-R-F^117年(6,40,79年,80年]。低毒性菌株通常有一个基本的氨基酸,后跟一个亮氨酸残基117。共识序列低毒性菌株已经确定^112年G / E-K / R-Q-G / E-R-L^117年。氨基酸序列的例子,112年和117年之间的位置特征明显9 APMV-1 FO裂解位点的菌株如表所示1。低毒性菌株从野生鸟类通常在美国孤立,活禽市场,与活病毒和家禽接种疫苗。融合基因测序分析是重要的监测流行低毒性菌株,以确保不存在突变可能导致转换的毒性。

13。结论

APMV-1影响鸟类物种和所有订单的全球分布。疾病严重程度取决于几个因素包括接种的路线,主机物种和致病性的病毒株。毒性菌株可造成重大经济损失的农业社区。保持最新的诊断化验是重要的被动监测包括死亡事件和外国动物疾病诊断调查。相似的临床症状与其他禽类疾病和缓解病毒性传播强调快速诊断的必要性。传统诊断方法如病毒隔离可以耗时导致延迟病毒识别和描述。分子方法包括rrt - pcr检测和测序技术快速识别方法和基于致病型病毒的基因特征。遗传多样性可以限制分子检测的价值如果引物设计没有跟上变化的病毒序列。

小基因组变化产生的复制错误可以导致毒性的改变。介绍融合基因的基本氨基酸裂解位点,例如,格兰特病毒复制系统的能力并能引起严重的疾病。分子变化应该监控分析裂解位点的改变可以识别潜在的毒性增加。测序和rrt - pcr分析仍然是重要的诊断工具监测病毒的变化。分子检测应该不断地修改维护检测所有APMV-1菌株的能力。

区分毒性和低毒性菌株也是很重要的识别和应对致命病毒的介绍到美国。rrt - pcr分析发挥重要作用在APMV-1检测毒性菌株。越南盾的能力来检测诊断实验室介绍在家禽中仍然是一个优先事项。融合基因的发展应继续进行分析的rrt - pcr试验检测所有vNDV菌株的能力。

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