P-Cadherin表达猫科动物乳腺组织

文摘

寻找分子标记在猫科动物乳腺,即粘附分子属于钙粘蛋白家族,是非常有用的理解的乳房癌在猫科动物和人类的发展。研究P-cadherin猫科动物乳腺中表达,正常的61个样本()、增生性()、肿瘤()猫科动物乳腺组织检查。在正常和增生的乳腺组织和良性肿瘤,P-cadherin immunolabelling仅限于肌上皮细胞。然而,在恶性肿瘤,有一个异常上皮P-cadherin immunoexpression在64.1% ()的情况下,膜和/或胞质分布的模式。上皮之间的显著关系被视为P-cadherin表达式和恶性乳腺病变()。同样在恶性乳腺肿瘤,有统计上显著的关系异常P-cadherin immunoexpression和组织学分级()。异常上皮P-cadherin表情似乎在猫科动物乳腺恶性肿瘤有关。确认这项调查的结果,进一步研究更大的样本和后续的研究是必要的。

1。介绍

钙粘着蛋白基本膜糖蛋白,调解calcium-dependent细胞粘附[1- - - - - -4)和中扮演重要角色的形成和维护正常组织架构(2- - - - - -4]。胎盘钙粘蛋白(P-cadherin)是一个经典钙粘蛋白(5肌上皮细胞表达的)(6- - - - - -11人类和犬乳腺。P-cadherin表达的变化被观察和与人类乳房致癌作用[10,12- - - - - -17]。

乳腺肿瘤是第三个猫科动物中最常见的肿瘤。他们与人类乳腺肿瘤显示相似之处,包括组织学特征和临床进化,因此已经被提议作为一个优秀的动物模型研究乳腺致癌作用(18]。

目前工作检查P-cadherin猫科动物乳腺组织中的免疫反应性及其与组织学分级的关系和类型的猫科动物乳腺肿瘤。

2。材料和方法

2.1。标本

猫科动物乳腺增生(),良性乳腺肿瘤()、恶性乳腺肿瘤(),淋巴结转移()从档案获得样本的兽医病理学实验室”皇家研究院Ciencias基于亚伯萨拉查“葡萄牙波尔图大学的,正常乳腺的样品()收集尸体剖检在同一个实验室。从手术切除乳腺病变最初收集的猫科动物乳腺质量。组织在10%缓冲福尔马林固定,脱水和嵌入在石蜡。部分3μ米厚被削减从每一块和苏木精和伊红染色(他)常规组织学检查,或加工和免疫组织化学染色。

2.2。组织学检查

病变是由两个独立的病理学家分类(FG和ML)从他彩色部分,使用世界卫生组织标准的分类肿瘤在家养动物19)(表1)。如果一个示例包含多个类型的模式,分类是根据主导模式,所显示Misdorp et al ., (19]。

恶性上皮肿瘤分级根据布鲁姆和理查德森的Elston-Ellis修改评分系统(诺丁汉分级系统)人类乳房癌(20.]。组织学分级的评估是基于三个形态特征:小管形成,核多形性、有丝分裂计数。每个特性评估,取得了规模的1 - 3(轻微、中度或显著)可能共有3 - 9点。对于每个肿瘤,总分显示组织学年级(1 - 3)。组织年级被任意分配的总积分:1级(差异化)3、4或5分;2级(中度分化)6或7分;和三年级(低分化)(表8或9点2)。

2.3。免疫组织化学

对连续3 P-cadherin immunoexpression评估μ米的部分每个样本Dako真正的毛细管显微镜载玻片的差距,代码。S2024 (75μ米)。部分是干一夜之间在烤箱56°C。组织deparaffinized,水化,EDTA处理缓冲区(酶引用没有。00 - 5500,EDTA溶液pH值8日20 x集中)2周期10分钟900 W的微波炉抗原检索。免疫组织化学分析是使用修改后的执行avidin-biotin-peroxidase复杂(ABC)方法与商业检测系统(Dako实际检测系统链霉亲和素过氧化物酶合Dako真正的检测系统,过氧化物酶/轻拍+,兔子/鼠标,代码K5001)。幻灯片是在幻灯片自动染色系统开发(DAKO TechMateTM 500 + Biotek解决方案)的组织病理学实验室”西班牙葡萄牙Oncologia de Coimbra的旧金山有教养的”,Coimbra的葡萄牙。一个特定的鼠标反人类的单克隆抗体对P-cadherin使用。抗体(稀释1:50)是针对这个粘附分子的细胞外领域(克隆56,BD转导实验室,列克星敦肯塔基州,美国)。

互补的单克隆抗体的上皮和肌上皮表型的细胞用于连续串行部分选定的样本。一个特定的鼠标反人类的单克隆抗体对细胞角蛋白AE1 / AE3 (AE1 / AE3 Chemicon国际泰梅库拉,美国),稀释1:1500年,作为上皮标记。一个特定的鼠标反人类的单克隆抗体对p63蛋白(克隆4 a4,实验室公司愿景——NeoMarkers弗里蒙特,美国),稀释1:150年,被用作肌上皮标记。为这些抗体抗原检索是由微波炉2周期治疗10分钟在900 W 10 nM柠檬酸缓冲,pH值6.0。

人类乳头用作P-cadherin积极控制和p63蛋白抗体。人类的阑尾是用作AE1 / AE3积极控制抗体。消极的控制,主要的抗体被老鼠IgG1所取代。相邻的正常乳腺组织或皮肤被用作内部积极控制。

2.4。评价P-Cadherin Immunolabelling

P-cadherin表达式在猫科动物乳腺组织的评估是基于一种半定量的分析(8),根据免疫反应性的导管上皮细胞的比例,与细胞的膜性和/或cytoplasmatic模式分布(异常模式)。建立了以下成绩进行分类组织异常immunoexpression: 0: < 10%阳性细胞(负值P-cadherin疣状);1:10 - 25%阳性细胞;2:26 - 50%阳性细胞;3:阳性细胞> 50%。

2.5。统计方法

应急表和似然比卡方检验,用SAS / STAT, 1989 (SAS研究所Inc .,卡里、数控、美国),是在所有情况下,意义。

3所示。结果

3.1。P-Cadherin表达式

免疫组织化学结果总结在表P-cadherin表达式3。

在正常乳腺不会分泌乳汁,P-cadherin immunolabelling仅限于肌上皮细胞(图1)。增生性乳腺组织显示P-cadherin immunoexpression限于肌上皮细胞(图2),类似于模式观察在正常乳腺不会分泌乳汁。

在良性肿瘤,P-cadherin immunoexpression限于肌上皮细胞,而在恶性肿瘤中观察到的细胞腔的上皮细胞(膜和/或胞质)。这种异常表达在三分之二的恶性乳腺肿瘤,和三分之二()积极的在超过四分之一的immunolabelling细胞(数字3和4)。细胞质immunolabelling经常显示一个细粒度的模式(图5)。在八个恶性乳腺肿瘤,P-cadherin疣状不同于地区和更大的强度和更高的阳性细胞数量的边缘肿瘤(图6)。固体和tubulopapillary恶性肿瘤显示P-cadherin的异常表达,而单筛状癌显示负P-cadherin疣状。

三个淋巴结转移进行了研究(从1级两个tubulopapillary癌和一个从三年级固体癌)。一个从固体转移癌表达P-cadherin显示10 - 25%的细胞,而在原发性肿瘤50%以上的细胞免疫反应性的。初级tubulopapillary P-cadherin阳性细胞癌有10 - 25%,而超过50%的肿瘤细胞在淋巴结和其他节点表示P-cadherin 25 - 50%。因此从tubulopapillary癌淋巴结转移有更高的异常P-cadherin immunoexpression比原发性肿瘤,而在固体癌则正好相反。

在正常和增生性乳腺良性乳腺肿瘤有积极immunolabelling AE1 / AE3和p63,显示两种不同的细胞表型,上皮和肌上皮分别。恶性乳腺肿瘤中只有一种类型的细胞,在细胞腔的上皮细胞显示AE1 / AE3免疫反应性和p63没有免疫反应性。

3.2。异常P-Cadherin表达之间的关系,肿瘤组织学分类,等级

良性和恶性肿瘤分化显著异常P-cadherin immunoexpression ()(表4)。没有显著的统计关系P-cadherin immunoexpression观察恶性肿瘤组织学类型,但一个重要的统计关系观察P-cadherin immunoexpression和恶性肿瘤的组织学分级()(表5)。所有三年级恶性肿瘤(低分化)显示超过25% P-cadherin immunopositivity虽然大多数等级1和2显示不到25% P-cadherin immunopositivity。

4所示。讨论

钙粘蛋白是细胞粘附分子重要的形态发生和维护正常组织架构。控制细胞粘附和能动性的重要机制之一负责的肿瘤的发生和发展21]。P-cadherin是经典钙粘着蛋白已经涉及人类乳腺致癌作用。几项研究与生物侵犯immunoexpression演示了一个协会(10,12,14- - - - - -17,22),因为P-cadherin经常在高档肿瘤被认为是在人类乳腺癌预后不良的一个标志(12,17,23]。P-cadherin被描述为癌细胞迁移和入侵的诱导物;似乎这个过程相关的分子机制和信号由P-cadherin近膜域矩阵metalloproteases P-cadherin可溶性形式和分泌的(23- - - - - -25]。

考虑猫科动物乳腺肿瘤有前途的模型来实现更好的理解人类乳腺致癌,P-cadherin研究在这些肿瘤预后标记。免疫组织化学技术是使用一个自动化的系统执行,根据Cassali et al。26),结果在改善质量、再现性、速度、和标准化。

在目前的研究中,正常和增生的乳腺组织,以及良性病变,显示P-cadherin immunoexpression类似人体乳腺组织中描述(10,12,27),免疫反应性导管和肺泡结构的基底细胞层,肌上皮形态相对应。这是类似于其他作者所描述的模式在正常和增生性犬乳腺组织(8,28]。猫良性肿瘤是阴性上皮P-cadherin表达式(异常模式),在反对犬良性乳腺肿瘤,伽马et al。8观察到一个异常上皮表达43%,10 - 25%免疫反应性的细胞。

P-cadherin不是正常的乳腺上皮细胞的表达。然而猫恶性乳腺肿瘤,这个分子是上皮细胞异常检测。百分之六十四(猫的恶性乳腺肿瘤显示异常P-cadherin导管上皮细胞中表达。这个表达式模式是依照以前的研究人类乳腺癌的10,12- - - - - -14,16,17,29日)和犬乳腺肿瘤(8]。事实上,伽马et al。8)观察到的异常P-cadherin上皮immunoexpression研究犬类恶性肿瘤的64%,占本研究中观察到的类似。在女性(14,17]P-cadherin膜免疫染色模式,通常与胞质染色。

佩拉尔塔太阳系et al ., (29日]表明P-cadherin immunoexpression在人类乳房癌主要是细胞在肿瘤的边缘和入侵的巢穴。同样,在我们的研究中,我们观察到一个更高的P-cadherin表达式外边缘的肿瘤。

P-cadherin一直被视为人类乳腺癌的进展标记(12]。提出了一些理论解释其异常表达(12,29日- - - - - -31日)、潜在的入侵行为的机制P-cadherin-expressing乳腺肿瘤(25]。这immunoexpression乳腺致癌作用的生物意义,然而,仍然知之甚少。

猫正常乳腺,P-cadherin只有肌上皮细胞表达,表明这个分子的存在在猫科动物乳腺恶性肿瘤可能指向一个肌上皮分化。我们使用分子标记p63蛋白来探索这一假设因为p63被描述为一个高度敏感的和特定的肌上皮细胞标记犬(32,33)和人类乳房组织(34,35),而pancytokeratin AE1 / AE3应用作为上皮细胞标记(8,33,36]。

在正常猫科动物乳腺,以及在增生性病变和良性肿瘤,p63和P-cadherin coexpressed相同的细胞,表明P-cadherin被肌上皮细胞在这些组织表达完全。然而,在恶性乳腺肿瘤,P-cadherin阳性细胞为阴性为AE1 / AE3 p63和积极的。这些结果符合那些犬类中描述(8和人类10,12乳腺肿瘤和证明,在猫科动物乳房癌,P-cadherin的表达不能被认为是肌上皮分化的标志。

之间没有关系被视为肿瘤组织学类型和P-cadherin表达式,相反发现犬(8)和人类乳腺肿瘤(10,11]。

在这项研究中,P-cadherin immunoexpression在观察肿瘤上皮细胞只在恶性乳腺肿瘤和异常表达与组织学分级密切相关(犬乳腺肿瘤中描述),(8,9]。事实上,所有三年级癌表达P-cadherin超过一半的细胞。研究在人类乳腺癌表现出显著相关性P-cadherin表达与组织学分级高(10,12- - - - - -17,29日),一项研究[13)透露,大部分P-cadherin表达癌是三年级。

在患有乳腺癌的妇女,P-cadherin的异常表达与激进行为有关14,15和预后差4,11,14,15,17,22,23,29日,37- - - - - -39),因此可能代表一个有前途的抗体治疗目标(22]。

这猫乳房癌研究表明之间的关系异常immunoexpression P-cadherin的恶性表型,组织学分级。然而,这些结果应该与更多的病例和确认,最终定义异常P-cadherin immunoexpression标记生物侵略性和预后指标,有必要研究更大的人口在未来的后续研究。

利益冲突

这是一个原创作品,所以一直没有公布,部分或全部,也不被考虑在其他杂志上出版。此外,其提交这个杂志是经所有作者独自负责的内容和写作论文。

确认

作者感谢弗朗西斯科先生入股事宜(EUVG)提供部分染色。他们感谢IPOCFG与免疫组织化学实验技术人员帮助。他们也感谢西莉亚Lopes (ICBAS-UP)帮助档案材料。特别感谢保罗博士(IPOCFG)宝贵的帮助照片。

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