文摘
健康的分布和闭锁的毛囊的卵巢表面改进Valachian母羊17日,24日,32天产后在本研究报告。健康的毛囊的数量是24天产后和他们的平均直径倾向于增加到32天(),最大的直径5毫米。78 - 81%的闭锁的卵泡直径≥3毫米观察卵泡细胞凋亡开始在位于滤泡腔。闭锁的早期卵泡的特点是有丝分裂的图片。在母羊产后24天,小递减滤泡囊肿被观察到。承包闭锁的特点是增厚膜interna甚至到190年μm。孕激素和oestradiol-17浓度维持在相对较低的水平,但与产后几天之间没有显著差异。
1。介绍
Folliculogenesis进展母羊同样在奶牛产后的(1- - - - - -3]。在我们的纬度(48°0 40′′′N),分娩后的第一个排卵是由许多因素和可能发生的60 - 70天产羔后最早,但通常出现在秋季交配季节。只有几百卵泡成熟的整个生命周期的母羊和其他人进行闭锁,发生在99.9%的哺乳动物(4- - - - - -7]。在广大的哺乳动物卵泡闭锁的主要是诱导细胞程序性死亡或凋亡变化趋势和鞘细胞。细胞凋亡的特征是internucleosomal DNA碎片,减少细胞群,冒泡的细胞质膜,形成凋亡的身体(8]。粒状的细胞的凋亡与失衡雌二醇和孕酮(E2↓P4卵泡液(↑)9- - - - - -11),这刺激了闭锁形成(7,12]。IGF-I的浓度是关键因素决定是否卵泡成熟或经历闭锁9,10,13]。有三种基本类型的闭锁cattle-early中描述,明确,晚14- - - - - -16]。马里昂et al。14显示一些变化趋势、膜层增厚在各种类型的闭锁牛,但没有报告的母羊。本研究的目的是观察健康的分布和闭锁的卵巢卵泡的母羊在春天产后时期,并确定这些参数与增稠的淀粉粒和膜层的健康毛囊和特定类型的闭锁和血液中激素浓度(孕激素——雌二醇)。
2。材料和方法
2.1。动物
实验进行了一个农场在低Tatras地区,斯洛伐克共和国(48°0 40′′′N / 19 0°30′′′E,海拔600 - 1000米)改善Vallachian母羊的繁殖在春天干燥后产后时期17(休息日),24天(),32天()。一些从每组选出卵巢切除术的母羊。母羊的4到10岁,体内介质条件(BCS 2.5 - -3.5),体重45 - 50公斤。在冬天,母羊草青贮饲料,喂养草甸干草和玉米毅力人均750克。岩盐、矿物舔,和水随意。伦理委员会批准的所有程序都是大学的兽医、制药、Košice,斯洛伐克共和国。
2.2。血液采集和激素分析
血液被收集在17天,24岁,从颈静脉和32分娩后经常到5毫升试管和允许代表凝结在室温(18 - 22°C),然后在3000 rpm离心机15分钟。血清是冰冻−20°C,后用于评估孕酮的浓度和oestradiol-17。在血清孕酮的浓度进行了评估采用RIA法(RIA黄体酮REF IM1188;贝克曼库尔特有限公司ISO 9001 IMMUNOTECH,美国)。样本评估在重复。孕激素的分析灵敏度(检测极限)0.03 ng / mL,和intraassay inter-assay变异系数≤5.4%,≤9.1%,分别。结果表示在ng / mL。-雌二醇浓度在血清进行了评估采用RIA法(RIA雌二醇REF IM1663;贝克曼库尔特有限公司ISO 9001 IMMUNOTECH,美国)。灵敏度分析是4 pg / mL和intra-assay inter-assay变异系数分别为≤15.1%,≤14.4%。结果表示在pg / mL。
2.3。卵巢抽样
剖腹手术与卵巢切除术在田间试验进行了17天,分娩后24、32。食物的动物被剥夺了手术前12 - 18小时。全身麻醉诱导与戊巴比妥钠(17]。据报道之前[剖腹手术过程18]。卵巢被小心地拉到手术伤口和组织学处理。
2.4。组织学处理
卵巢被切成更小的部分,固定在10%福尔马林中和Ca2有限公司3。然后他们在1% KOH溶液溶解在80%乙醇洗了5小时,紧随其后的是水洗1小时。固定和洗卵巢部分排水在越来越线的乙醇,过饱和与水杨酸甲酯和苯石蜡包埋在石蜡和切割在5 - 7。部分卵巢组织的沾Mayer苏木精和伊红和一些祈祷的召唤。染色过程进行了按照Vacek [19]。彩色部分是固定在加拿大香脂。
2.5。图像处理
卵巢部分进行了研究使用PC系统图像处理LUCIA-G version 4.71连接到一个朋友基因学CCD相机cc - 8603与蔡司光学显微镜Axiolab设备(德国卡尔蔡司有限公司)。每20节评估。窦的毛囊数量和大小的表面进行了研究,健康和各种类型的闭锁的毛囊(早期的闭锁;定atresia-collapsing,收缩,囊性;晚闭锁)根据马里昂等描述的标准。14)被检测到。变化趋势和膜层厚度在健康、闭锁的早期,收缩和闭锁的毛囊崩溃计算从五个测量特定层的垂直于基底膜。一层年末闭锁的毛囊出现混合并没有区分,所以这些毛囊被排除在测量。与囊性卵泡闭锁被排除在外,因为很薄的膜层(< 30)和减少淀粉粒质层一行连接成一个链。
2.6。统计分析
孕激素的浓度和oestradiol-17在血清、大小和数量的健康和闭锁的毛囊和变化趋势和膜层厚度统计评估基于算术平均值及其S.E.天之间的差异比较采用单向方差分析与图基的期末测验(GraphPad Prism 3.0为Windows, GraphPad软件,圣地亚哥加州美国)。统计学意义上标星和定义为标记。
3所示。结果
孕酮和oestradiol-17浓度维持在相对较低的水平,产后几天没有显著差异(表1)。
意思是毛囊及毛囊总数< 3毫米和≥3毫米直径如表所示2。毛囊及毛囊总数< 3毫米直径发现卵巢表面往往会增加到32天产后,但差异不显著(),类似的毛囊数量≥3毫米,这是更高的24天产后。
健康和闭锁的毛囊的分布在母羊天17日,24日和32产后总结在表所示3和图1。健康的毛囊数量之间没有明显差异,不同类别的闭锁相比天()。然而,有35%的毛囊,经历了晚闭锁(;图132天)产后相比之下,17至24天。闭锁的速度没有显著变化之间的天(;每天17 - 82%,24 - 84%和32 - 89%)。健康的毛囊(数据的数量3,4)高24天产后及其平均直径倾向于增加到32天(),最大的直径5毫米。早期的闭锁(图532天)往往更高,的最大大小与这种类型的闭锁卵泡5.3毫米在24天。崩溃闭锁(图7)达到最多24天,同样为承包闭锁(图6)。只有一个囊性卵泡(图8在24天)的回归与一个直径4.31毫米,直径2.8毫米。没有卵泡直径≥3毫米的观察与标志的闭锁在任何学习的日子。
健康的分布和闭锁的毛囊< 3毫米和≥3毫米直径在产后母羊天17日,24日,32图所示2。
粒状的厚度和膜层的健康和闭锁的毛囊如表所示4。闭锁的类型之间没有明显差异,层和产后。厚度的层在健康毛囊没有差别。
4所示。讨论
闭锁尤其特定的卵母细胞的退化,滤泡细胞增生外壁interna细胞(4,20.]。固缩的粒状的细胞核出现和卵母细胞失去了一轮,大幅区分开的形状。的透明带崩溃。变性的滤泡细胞染色质溶解,chromatorhexis,脂肪,和玻璃样变性的卵质8]。滤泡腔填充成纤维细胞渗透膜层。基底膜形成一个透明区。卵泡的遗迹是由膜包围的interna细胞,而假设的特点epitheloid细胞(4,20.]。在母羊,大约50 - 80%的早期卵泡直径3 - 4毫米,明确,后期闭锁[20.,21]。在目前的研究中,78 - 81%的闭锁的卵泡直径≥3毫米是观察,细胞凋亡开始在滤泡细胞位于滤泡腔。这是一致的观测Irving-Rodgers et al。22),他认为这种“腔闭锁”在大多数卵泡直径。本研究的结果同意作者(23- - - - - -25),描述的有丝分裂闭锁卵泡早期照片。在母羊产后24天,小递减滤泡囊肿与典型的滤泡细胞观察形成的珍珠和鞘interna < 30μ米所描述的马里昂et al。14在奶牛卵巢)。这些作者还指出,承包闭锁的特点是增厚膜interna (150μ米),伴随着缩短和舍入的所有商标注册用商品与国际分类尼斯协定细胞和腺内部细胞的消失。在目前的研究中,鞘interna是190年均匀μ米厚。最后,所有类型的闭锁的毛囊的通用终端特征(4,9,10,14迟来的闭锁和消失。
5。结论
卵巢的母羊在分娩后的第一个月是在相对的不作为,但是毛囊可能发展,成熟,并形成黄体发情期间,但是较小的尺寸。的卵泡的闭锁阶段的招聘与选拔和健康卵泡的大小与产后的长度增加。
确认
作者感谢Jana大韩航空'atova样本集合和组织学处理她的援助。这项工作是支持的项目的应用研究AV 4/0113/06,授予教育部科学研究和斯洛伐克共和国织女星1/0860/09运动。