文摘
在benign-mixed癌肿瘤(CBMT)是常见的母犬乳腺和由恶性上皮良性间叶细胞元素之间。本研究调查的形态方面29 CBMT immunophenotypical概要文件,通过使用一个免疫组织化学小组基于五分子markers-estrogen受体(ER)、孕激素受体(PR),人类表皮生长因子受体2 (HER2)、细胞角蛋白5 (CK5),和人类表皮生长因子受体(EGFR)。从这些,CBMT分为四个亚型:鲁米那,腔的B, HER2-like,官腔,正常。”原位“和浸润性癌的组件进行了分析和比较。组织学评分我观察癌16例(55.2%)肿瘤,分析了二级在10例(34.5%),和三级3例(10.3%)。浸润性癌的组件显示,更加频繁,鲁米那(12/29例,41.4%),其次是官腔表型(8/29例,27.6%)。有高immunophenotypical概要文件之间的一致性原位和浸润性癌的组件(kappa系数0.816,)。我们的结论是,CBMT主要特性的低度恶性肿瘤。各种immunophenotypic资料表明这些病变的起源在多个细胞类型(鲁米那和肌上皮)。
1。介绍
乳腺是女性最常见的肿瘤的狗,和乳腺癌症死亡的主要原因之一是这些动物(1,2]。这些肿瘤人类乳腺肿瘤有相似之处,因此,他们etiopathogeny极大的兴趣(和生物特性3,4]。
混合瘤(MTs)组织学上表现为上皮成分的混合物(导管和/或腺泡细胞和肌上皮细胞)在一个明显的间质基质能够生产各种大量的黏液样,软骨样的,和骨骼组织。这些肿瘤可以benign-mixed肿瘤或发生恶变,导致癌benign-mixed肿瘤(CBMTs) [5,6]。
几个研究betweenprognostic investigatedthe关系因素和乳房carcinomasin雌性狗,但小knownabout生物行为和prognosisof这些肿瘤(7,8]。
乳腺癌的分子分类系统采用是一个有价值的工具,用于评估预后和调查犬和人类肿瘤类型之间的相似之处。根据条,至少五个不同的分子亚型人类乳房癌,基于基因表达分析:luminalA, luminalB, HER2,官腔,andnormal类型癌,所有whichdiffer theirpathological和临床资料(9,10]。然而,很少有研究乳腺肿瘤的分子特征的女性狗(11,12]。
在目前的研究中,浸润性癌的形态学和immunophenotypic功能组件CBMT女性的狗进行了分析和比较原位癌组件。从这些结果,我们决定研究肿瘤的immunophenotypic概要文件。
2。材料和方法
2.1。样本的选择
二十9 ()组织样本的CBMT从女狗(多个品种),获得大学兽医学院医院接受手术联邦de米纳斯吉拉斯(EV / UFMG),巴西贝洛奥里藏特市。程序中执行本研究动物实验伦理委员会提交和批准的机构(CETEA / UFMG)协议。123/2009。
病变的形态学标准用于诊断提出了Misdorp et al。13]。入选标准是石蜡块从每个案例的完整性和之前在benign-mixed癌肿瘤的诊断。排除标准包括石蜡块,损伤诊断怀疑,其他诊断、样品展示固定和加工工件。所有样品都受到常规组织学处理技术和嵌入在石蜡块。连续六次组织学部分(4米)石蜡块被削减的每种情况下,以前认为是病变的代表。苏木精和伊红染色(圆))上执行的第一部分,然后进行肿瘤分类的协议Misdorp et al。13]。后面的部分被用于免疫组织化学。
恶性上皮成分,观察以下参数:组织学分级15),有丝分裂指数(表1),tumoral坏死,出现原位(恶性的)增殖和基质和血管侵犯的存在。基质入侵时被诊断为肿瘤达到或超过了基质混合瘤的研究。肿瘤栓子的存在空间内建立了由内皮血管侵犯。恶性上皮组件原位分类根据会议共识性导管癌的分类原位(16]。据Lagios病变是毕业(17在高,中间,和较低的度。这些标准也符合最近出版的共识在兽医癌症3]。
基质中的组件,以下参数评估:存在基质元素(软骨样的黏液样基质,软骨、骨组织和骨髓)和调查的恶性肿瘤的形态学特征。每种情况下被两个病理学家检查,和不和谐的结果进行了讨论与第三病理学家的共识。
2.2。免疫组织化学
连续4米部分被切割和安装在使硅烷化幻灯片。组织部分乙醇分级deparaffinized和水化。ER、PR受体和CK5抗原被使用柠檬酸缓冲(pH值6.0)和加热四分钟的帕斯卡压力室(DAKO)。幻灯片是在3%过氧化氢浸泡30分钟(洗三次澡10分钟),确保内源性过氧化物酶阻断。组织学部分在潮湿的孵化室18个小时主要抗体。抗原被发现使用Novolink系统马克斯聚合物(莱卡)30分钟37°C。
HER2和EGFR抗原检索使用解决方案检索(DAKO),在pH值6.0 20分钟在98°C水浴。内源性过氧化物酶被浸泡在3%的过氧化氢,持续15分钟。样品在潮湿的孵化室14个小时(一夜),初级抗体和放大与推进合链接(DAKO)。
为所有幻灯片,3、3′-diaminobenzidine(涂)作为发色体。部分和迈耶的苏木精复染色,脱水,并安装在合成培养基。表2列出了主要抗体的特点。犬乳腺肿瘤样本,来表达所有的标记,被用作积极控制。消极的控制通过省略主要抗体。
细胞被认为是为ER和PR阳性标记5%以上的细胞核染色时(18]。HER2标记后模式建立的美国临床肿瘤学会/美国大学病理学[19]。情况下被认为是表皮生长因子受体阳性10%以上的细胞膜染色时(20.]。CK5表达取得了积极如果任何(弱或强)胞质和/或膜tumoral观察细胞(21]。
分子样品分析的概要文件定义如下:腔的一个(ER +和/或公关+,HER2−,表皮生长因子受体,和CK5);腔的B (ER +和/或公关+,HER2 +,表皮生长因子受体,和CK5);HER2-like (ER−和公关−,HER2 +,表皮生长因子受体,和CK5);官腔(ER−和/或公关−,HER2−,表皮生长因子受体,和/或CK5 +);正常(-所有标记)[22]。
2.3。统计分析
一起建立样本的分子资料情况下,绝对和相对的一个描述性的分析频率的形态和表型特征。
费舍尔的确切概率测试()是用来测试可能的研究特征之间的联系。分析分子概要文件之间的一致性原位组件和侵入性组件进行了使用kappa统计指数和kappa显著性检验。传统的5%水平的意义被用来定义统计学意义()。分析使用占据9.0软件(StataCorp LP)。
3所示。结果
3.1。形态
CBMTs犬乳腺被定义为癌的细胞发生在benign-mixed肿瘤(5,6]。癌的诊断主要基于非典型上皮细胞的焦点的存在,经常展示渗透性的增长表现为集群的存在肿瘤细胞渗透基质。的存在原位(恶性的、非侵入性的)组件是评估。一个原位恶性上皮成分被发现在15的29个样品(51.7%)。其中九个是固体的组织学类型(60%),三是固体/筛状(20%),两人micropapillary(13.3%),和一个样本是乳头状/ micropapillary (6.7%)。最常见的组织学评分是II (73.3%;11例)和我(20%;三个案例)。
大多数侵袭性癌的组织学分级低(16/29样品;55.2%)和低细胞有丝分裂指数(21/29样品;72.4%)如表所示3和4,分别。
焦和离散观察坏死7例(24.1%)。除1例(3.4%),没有血管侵犯和鳞状上皮化生指出样本。没有观察到恶性转化的基质成分任何病变。黏液样基质明显10例(34.5%)和黏液样/软骨样的矩阵在19例(65.5%)。在基质成分,只有一间充质矩阵(黏液样或myxochondroid) 19(65.6%)中观察到的样本;矩阵和软骨观察四个样品(13.8%);矩阵,软骨和骨骼的三个样品(10.3%);矩阵、软骨和骨和骨髓(表三(10.3%)样品5)。
概要文件之间没有明显的统计协会证明上皮中标识组件和基质模式(黏液样和黏液样/软骨样的)(),或上皮组件的配置文件和基质之间的元素()。
3.2。免疫组织化学简介
在原位恶性上皮成分,细胞腔的概要占60%的肿瘤15例(9),其次是HER2-like概要(20%;3例),腔内B概要(13.3%;两种情况),基底概要(6.7%;一个样本),根据标准采用分子分析。
在浸润性癌,细胞腔的一个概要文件是主要的,占41.4%(12的29例),其次是官腔概要(27.6%;8例),她2概要(17.2%;5例),腔内B概要(13.8%;四个样品)(表6)。侵入性的组件,肌上皮细胞标记CK5和/或EGFR表达27例。15个样品(51.7%的病例)标记阳性,10例(3.4%)阳性CK5孤独,和两个(6.9%)呈阳性EGFR。之间没有显著相关性immunophenotypical概要文件的混合肿瘤的侵袭性恶性上皮成分和组织学分级()或细胞有丝分裂指数()。图1研究显示了一些资料。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(我)
(j)
(k)
(左)
(m)
(n)
(o)
(p)
(问)
(右)
(年代)
(t)
浸润性癌而言,情况下的原位组件被确定()、鲁米那immunophenotypical概要文件占50%的情况下,官腔概要文件占35.8%,B细胞腔的占7.1%,HER2-like剖面明显在样本的7.1%。kappa系数显示高immunophenotypical概要文件之间的一致性原位恶性上皮组件和侵袭性恶性上皮组件(kappa系数= 0.816,)(表7)。
4所示。讨论
癌的形态学分析29例混合瘤组织学主要从女性狗显示低品位和细胞有丝分裂指数低。浸润性癌组织学分级的主要(55.2%)。我们的研究结果一致与Karayannopoulou et al。23),这也显示出优势CBMT轻度癌。类似的数据是由南美洲等报道。14]。他们发现,75%的病例组织学年级我和80%的这些后五年生存率的预后。其他发现可能表明低攻击性的CBMT形态特征,包括缺乏血管侵犯和小坏死(焦和温和的24.1%的情况下)。进一步研究CBMT透露类似的结果(12,24]。
的利率immunophenotypic癌的组件的配置文件(腔的- 41.4%;基底——比如- 27.6%)类似报道其他免疫组织化学研究在各种乳腺肿瘤在女性狗(a - 44.8%,官腔29.2%)(11]。天使等人表明,最常见的immunophenotypic腔的b - 48%,其次是官腔(28%)(25]。这些发现表明,CBMT是肿瘤的异质群体各种immunoprofiles。小差异可能解释为使用不同的免疫组织化学研究小组(25]。
天使等。25]immunophenotypic概要文件之间的相关性和乳房癌组织学分级的女性狗狗,但这并没有明显的在这个研究。一个可能的解释这些结果的差异是各种各样的组织学类型的癌参与这项研究。
免疫组织化学分析证明了概要文件的肿瘤的异质性,即腔的41.1%和官腔27.6%的病例。腔的概要在人类被描述为组织学亚型相关低品位和优秀的预后(9]。
CBMT女狗与癌ex-pleomorphic腺瘤(CXPA)人类的唾腺[7]。癌的恶性上皮成分ex-pleomorphic唾液腺的腺瘤可以分为两个主要团体:与腔的分化癌(导管上皮细胞),例如,腺癌不是另有规定(NOS)和癌nonluminal肌上皮分化,为例,腺样囊性癌(26]。有趣的是,细胞腔的肿瘤的比例的唾液腺CXPA发现作者(75.0%)相似的组合配置文件(腔的A、B和HER2-like = 72.4%)确定在本研究中。各种immunophenotypic概要文件中观察到本研究能反映不同起源的恶性上皮细胞/肌上皮细胞。
一个有趣的问题是表皮生长因子受体在细胞腔的积极性(8例,阳性病例的47%)和B(2例,11.8%的阳性病例)immunoprofiles,由于这是一个良性肌上皮细胞标记礼物。在讨论表皮生长因子受体的表达在狗的乳腺肿瘤,γet al。27]建议的积极性标志意味着immunophenotypic概要文件维护原始肌上皮细胞。新解释这一现象将在上皮细胞EGFR的upregulation(腔)作为恶性肿瘤演化的过程(24]。
鲁米那是更频繁的immunoprofile原位组成部分CBMT (60%)。这一发现与研究是一致的原位在人类癌组织学低等级相应的浸润性癌组件(28]。有高分子概要文件之间的协议原位在CBMT和浸润性癌组件。
分级的方法用于人类癌是可再生的,和类似的模型是兽医研究发现(6,29日]。的识别和诊断乳腺上皮内病变在兽医病理学在最近的文学主题,对这些病变的识别邻近浸润性癌,或使用它作为实验模型的前景对这些病变的发病机理及预后(30.- - - - - -32]。
使用免疫组织化学研究小组在女性乳房癌的分子表征狗很少,结果似乎不一致,而人类癌的临床病理学特征。数据是相互矛盾的,因为研究显示更好的癌患者的存活率概要HER2-like和分子之间没有相关的概要和组织学类型(11,25]。这种相互矛盾的数据表明,更复杂的研究需要更大样本评估相同类型的癌,为了表明治疗策略和定义研究的实验模型。
5。结论
我们得出结论,CBMT主要是腔内immunophenotype和一般节目形态特征与更好的预后相关犬乳腺肿瘤。各种immunophenotypic资料表明这些病变的起源在多个细胞类型(鲁米那和肌上皮)。在大多数情况下,可以确定上皮内nepolasia毗邻浸润性癌。此外,原位癌的研究也有类似的入侵同行immunophenotypic概要文件。
确认
这项工作一直在经济上支持“Fundacao德帕罗尽管·德·米纳斯吉拉斯”(FAPEMIG),和“慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府”(CNPq),”de Aperfeicoamento Coordenacao de Pessoal de含量比”(披肩),巴西。