文摘
总共有143牛结核分枝杆菌分离的猪,从最具生产力的猪在阿根廷,被spoligotyping类型。鉴定了22个不同的spoligotypes, 133(93%)隔离被分成12个集群。其中一个SB0140设计,是最常见的,因为它拥有83(58%)隔离。这spoligotype分组362(43%)的841个从以前输入牛和隔离,因此,构成我国最常见。此外,135年(94%)相同的隔离透露spoligotypes牛、流行病学联系。另一方面,有七个小说spoligotypes,六也独特,因为他们只有一个隔离。本研究旨在确定的spoligotypes牛分枝杆菌孤立从猪为更好地理解牛结核病的分布在阿根廷的主要生产地区。
1。介绍
牛结核病(BTB)是一个主要的牲畜疾病在拉丁美洲。大约70%的牲畜饲养在疾病发病率高的地区,近17%的地区几乎没有肺结核(1]。
在阿根廷,1969年至2004年,每年平均1000万牛的尸体被提交给官方兽医检验。在那段时期,动物谴责结核病的百分比从6.7%下降到1.2%1]。关于人类肺结核、造成的疾病牛结核分枝杆菌而引起的结核分枝杆菌在临床上难以区分。最近的研究描述了一个发病率从0.7%到6.2%不等在阿根廷的主要牛奶地区大多数患者密切相关农村活动,和更低的国家流行2]。从1980年到2003年,结核病的发病率在圣达菲,省21%的全国奶牛和国内的牛奶产量的34%,从48.1下降到20.7每100000人(1]。然而,由于病例数牛分枝杆菌保持稳定,从而提出相对稳定感染的风险(1]。在布宜诺斯艾利斯市的穆尼斯医院的比例牛分枝杆菌与艾滋病毒感染有关的情况下不明显在1981 - 1991年间从0.95%下降到0.22%在2000 - 2006之间,而在艾滋病毒/艾滋病组下降更明显(0.83%到0.58%)3]。第一种情况下的人际传播牛分枝杆菌在阿根廷最近描述(4]。
在美国,BTB是最常见的传染病,牛和猪之间的十八世纪和十九世纪的开始,和生产造成的损失高于所有其他疾病分组(5]。
猪是容易结核分枝杆菌,牛分枝杆菌,m . avium复杂的。在阿根廷,结核病的发病率和患病率信息猪稀缺。然而,牛分枝杆菌被认为是感染的主要原因。病变的患病率在屠宰场的南美大草原Humeda地区三个量执行1986年,1995年和1997年分别为6.4%,1.2%,和0.1%,分别牛分枝杆菌是细菌最常见孤立在三个案例6]。在BTB尚未根除的国家,如在阿根廷,猪经常感染牛通过口服途径摄入的牛奶或其他奶制品(6,7]。因此,在阿根廷,猪结核进行了平行观察当地的牛下降(1,6,8因为根除BTB的牛是主要的行动,避免传染给猪和其他主机。因此,猪谴责结核病的比例从8.4下降到0.7%在1969年和2005年之间9]。这种疾病的全景也归因于繁殖系统的现代化和集约化,这提高了猪的健康状况(9,10]。此外,2009年2月,猪被合并牛结核病的国家控制和根除计划,实现自1999年以来牛(11,12]。这新决议认为那些牛群-皮肤试验结果与产后抑郁症每年一次和缺乏结核病感染的病变在屠宰场的尸体检查是免费的(11]。虽然皮肤试验与产后抑郁症的用处有限个体动物的诊断,这是一个很好的工具来检测感染群(13]。
在阿根廷大约80%的猪生产主要集中在中部地区(布宜诺斯艾利斯,圣达菲,科尔多瓦省),这与玉米产量密切相关,因为猪是主要喂食玉米(65%)和大豆面粉(25%)。
分子流行病学是一个有用的工具,它有助于理解的动态分布和不同的主机之间的BTB蔓延。的一种技术,改进和简化的打字结核分枝杆菌复杂spoligotyping [14]。Spoligotyping与反向pcr方法补充线污点杂交,重组的多态性后果的直接重复(DR)地区,组成完美的直接36个基点重复和可变间距器(14]。的组合的存在和没有每个43代表间隔序列,有斑点,代表一个spoligotype。
生物技术研究所的spoligotyping数据库(BI)落脚,阿根廷,包含spoligotypes 1188牛分枝杆菌隔离不同的主机从阿根廷自1996年以来类型,构成了一个有价值的分子流行病学信息来源可能有助于对牛结核病的根除项目作出贡献。
这项工作的目的是确定的牛分枝杆菌spoligotypes循环从主猪在猪生产地区的阿根廷。
2。材料和方法
总共143的隔离牛分枝杆菌得到从淋巴结和内脏样品与肺结核的文化兼容的病变从猪从布宜诺斯艾利斯(),科尔多瓦()、恩特()、拉潘帕(),门多萨(),圣达菲()省(图1),方便取样。样本从兽医检验获得的35000头猪,2007年7月至2008年11月。屠宰场被加入采样位于梅洛,莫雷诺,布宜诺斯艾利斯省Tandil城市。样本′s方法和培养的净化使用彼托夫Lowenstein-Jensen在37°C和Stonebrink媒体60天(15]。分离出的细菌类型进行基于文化传媒,孵化温度、生长时间、菌落形态、和Ziehl-Neelsen污渍。
每一个牛分枝杆菌应变是分离出独立的动物并无明显的流行病学联系。殖民地的铂环量转移到一个包含250个微型离心机管μL 96°C的蒸馏水和加热45分钟。殖民地在12000转10分钟,然后离心,5μL的上层清液用于PCR扩增博士地区。Spoligotyping [14)是由使用spoligotyping工具包(等基因Biosolutions帐面价值,Ocimun Biosolutions公司Ijsselstein、荷兰)。结核分枝杆菌H37Rv(写明ATCC 27294)和牛分枝杆菌卡介苗(BCG)(写明ATCC 27289)作为参考菌株在每个spoligotyping实验。spoligotype模式进行的聚类分析与BioNumerics软件(Windows NT 2.5版本;应用数学、yves gijarth,创立比利时)。分类系数是用来计算spoligotype模式的相似性,和UPGMA(未加权的pair-group方法与算术平均值)方法应用于计算系统树图。集群隔离被定义为两个或两个以上牛分枝杆菌菌株与spoligotypes相同。不同spoligotypes比较反对那些包含在BI数据库,和每个被分配一个号码(某人代码)根据国际兽医实验室机构的数据库(VLA),英国(托管在苏塞克斯大学的服务器,http://www.mbovis.org/)。当spoligotype不是发现在这些数据库中,它被认为是小说spoligotype。Spoligotypes Spoligotypes只有一个隔离被认为是独一无二的。歧视性的指数(D)所描述的猎手和加斯顿和辛普森公式所表达的16)计算确定歧视性的力量spoligotyping在每个省(http://insilico.ehu.es/)[17]。
3所示。结果
所有的隔离分析()缺乏间距器3、9、16和39,43岁的特点牛分枝杆菌菌株。22个不同spoligotypes被发现在143年牛分枝杆菌隔离研究(图2和表1)。一百三十三人(93%)菌株在12个集群分组;其中一个(SB1779)小说spoligotype因为它没有之前报道中分离出的其他主机从阿根廷或VLA数据库。集群的主要涉及83(58%)隔离和显示spoligotype SB0140紧随其后spoligotype SB0130 12(8.4%)隔离。其余spoligotypes分组7个或更少的隔离。10(7%)隔离是独特的,其中7人也小说(SB0849、SB1600 SB1652, SB1784, SB1786, SB1782,和SB1779)(图2和表1)。此外,集群的小说spoligotype (SB1779)举行了两次隔离城市的Rio Cuarto Viamonte将军,在科尔多瓦省,大约150公里。全球歧视性spoligotyping的力量在这个研究是0.65。这个指数也分别为每个省(表计算1),0.62,0.80,0.60,0.40,布宜诺斯艾利斯,科尔多瓦,分别恩和圣达菲。这些省份提供隔离。这些结果与集群的大小和spoligotypes的数量。
聚类图分组spoligotypes分成两个主要的家庭设计的A和B,相关相似性高于90%和93%,分别为(图2)。包含两个最频繁的spoligotypes从阿根廷(SB0140和SB0130)在每个家庭是这些家庭的主要特征。此外,70%和23%的隔离是分组家庭A和B,分别。
4所示。讨论
5研究的6个省位于最具生产力的猪在阿根廷。当我们在BI spoligotypes数据库相比,我们发现,135年(94%)隔离透露spoligotypes一样牛隔离,显示一个流行病学联系。此外,七22个(32%)的spoligotypes中发现猪隔离被检测到牛分枝杆菌人类的隔离。相反,七(31.8%)spoligotypes没有以前检测到牛或其他来自阿根廷。此外,这些spoligotypes没有报道VLA数据库。这一发现可能是由于阿根廷的部分筛选BTB的牛或存在的牛分枝杆菌克隆之间的循环只猪。Parra et al。18还描述了猪spoligotypes不发现之前在其他主机。
集群的主要检测(SB0140)分组841牛的43%牛分枝杆菌隔离来自阿根廷类型在1996年和2009年之间(19,20.]。这个spoligotype也经常在澳大利亚和新西兰,,喜欢阿根廷,介绍几个牛品种在19世纪的英国,这个spoligotype也普遍(21]。此外,spoligotype SB0140在布宜诺斯艾利斯最常见(60.6%),科尔多瓦(43.2%)、恩特(66.7%),和圣达菲(78.3%)。这两个省份牛分枝杆菌隔离从猪。此外,这种spoligotype分组32.5,38.9,62.5,和52.5%的牛隔离这些省份,分别。这些省份集中大部分奶牛场来自阿根廷。集群的隔离被描述为一个积极的迹象BTB的传播(19]。Spoligotype SB0153, 68%其他类型有关,不是家庭A和B和集成的先前发现只有总额的2.7%牛分枝杆菌隔离来自阿根廷。奇怪的是,34%的牛分枝杆菌隔离与spoligotype SB0153属于人类。
考虑大多数病变的定位采样的消化道猪(数据未显示),我们建议感染通过消化路线。这可能是由于这样的事实,在阿根廷猪饮食通常是补充与其他牛奶或乳制品更没有热处理。
其他作者也发现牛分枝杆菌spoligotypes牛在国内猪和其他主机(红鹿和野猪),这表明物种之间传播(18,22,23]。
Spoligotyping是最好的选择对大规模筛选研究的分布结核分枝杆菌复杂的菌株(14)和全球使用第一个选项输入方法牛分枝杆菌。此外,这种技术是有用的识别不同的主机物种的新类型(24,25)和检测初步结核病物种之间的传播。为了跟踪传动链,有必要进行补充研究使用歧视性的打字方法如VNTRs[描述的最近26- - - - - -29日]。
未来的研究必须针对评估这些菌株的毒力和健身猪隔绝,因为不同主机之间传输物种可以选择性力量增加微生物的毒性。在之前的工作在一个小鼠模型进行肺结核,我们证明了一个特定的牛分枝杆菌应变与一头野猪相比是最致命的牛分枝杆菌AN5参考应变和其他孤立从牛和人类30.]。
考虑的发生率牛分枝杆菌在人类和牲畜疾病的患病率,尤其是在省,大部分奶牛,猪可以额外的演员在牛结核病的传播链对人类和牲畜。这种潜在的溢出控制通过最近的猪牛结核病的国家控制和根除计划阿根廷。
5。结论
大多数spoligotypes(68%)发现在牛猪之前也被检测到。有七个小说spoligotype发现只在猪。最常见的spoligotype之间牛分枝杆菌隔离研究从猪(SB0140)也是最普遍的牛从阿根廷。
这项工作是第一次大规模分子类型的研究牛分枝杆菌隔离从猪在阿根廷和有助于更好的理解我国结核病在猪的特点。
确认
这项工作是支持由阿根廷国家农业技术研究所(INTA)和布宜诺斯艾利斯大学的兽医学院。作者感谢瓦罗查她优秀的技术帮助。a . a . Cataldi是一个职业的成员国家研究委员会(CONICET)来自阿根廷。