文摘
表皮生长因子(EGF)是一种重要的细胞因子,在生育中扮演一个角色。众所周知,EGF影响男性和女性生殖,但其影响精子参数并不完全理解。到现在,EGF对ram精子运动参数的影响还没有被出版。射精后24日我们分析运动性参数48和72小时的EGF。添加EGF ram冷冻精子的浓度0,100,200,400 ng·毫升−1。分析是实现利用计算机辅助精液分析(CASA)汉密尔顿刺运动性分析仪(第7版)。30分钟后EGF的作用已经明显的孵化。显著的影响在ram观察精子的运动性和进步运动培养48 h后EGF浓度更高。我们的结果表明,表皮生长因子影响精子的运动性参数取决于浓度和曝光时间。
1。介绍
表皮生长因子(EGF)已被证明有一个角色在男性以及女性哺乳动物生殖1,2]。表皮生长因子被发现在老鼠和人类精浆(3,4]。EGF可能施加的影响直接通过EGF受体acrosomal地区已发现的精子5从各种哺乳动物物种,包括人类,老鼠,兔子,牛,鼠6,7]。下在体外条件,表皮生长因子调节精子获能、顶体反应和能动性在老鼠,牛,和人类精子8- - - - - -11]。在在活的有机体内实验管理的EGF改善大鼠附睾的精子含量和能动性12]。切除颌下腺(EGF的来源生产)在成熟的雄性小鼠血浆EGF导致重大损失,导致明显降低,精子在睾丸和精子在附睾成熟13]。这些观察表明EGF的作用在调节精子的功能。
然而,知识EGF影响精子的特征是不一致的。因此,纳兹和卡普兰(11在人类精子表明EGF降低精子的普及率和改变精子能动性特征。然而,其他研究团队报道没有EGF对人类精子的运动性的影响(9,14]。这场争论可能解释为不同实验设置被纳兹和卡普兰(11),孵化短期内的精子。
此外,没有报道EGF对ram精子运动特征的影响。在我们的工作中,我们专注于评估EGF的作用总精子能动性和进步的能动性的ram。精子细胞的能动性可能测量使用主观和客观评价。客观评价精子的运动性的CASA精子可以更好地预测提供更准确的评估进一步生育率比视觉评估。我们评估EGF作用的动力学参数的能动性和进步运动的ram精子几天后存储在冷却条件。ram精子的运动性的评估参数实现了使用计算机辅助精子分析(CASA)。
2。实验程序
所有的实验都是用新鲜的ram精子进行。的精液收集East-Friesian (VF)和Lacaune (Lc)公羊使用人工阴道。公羊是统一的营养条件下保持在一个当地的农场。体积浓度和精子活动,评估后不久集合。从公羊都汇集在一起射精heterospermia为了避免个人影响的ram和用于分析。射精在Triladyl稀释(Minitub Tiefenbach,德国)蛋黄含有20%,乳糖和6%的甘油。精液是冷却5 - 7°C,送到实验室,保存在冰箱一周。样品被分成四个组,每个1毫升的射精,随后EGF(重组;Sigma-Aldrich,布拉迪斯拉发,斯洛伐克)添加浓度的100年,200年和400年ng·毫升−1,而对照组没有包含ng EGF(0·毫升−1)。射精后24日我们分析运动性参数48和72小时的EGF。分析是实现利用计算机辅助精子分析(CASA)汉密尔顿刺运动性分析仪(第7版)。我们分析,不同浓度的EGF对ram精子能动性和进步运动,以及动力学的影响EGF后除了为不同时间段(0、0.5和2 h)。
在三个复制实验已经完成。结果被双向方差分析统计评估测试和图形处理使用SigmaPlot图形软件windows(版本9.01)。
3所示。结果
表皮生长因子影响精子的运动性的观测参数后0.5小时的潜伏期。EGF的表达效应在这个时间点观察到200 ng的浓度毫升−1,总运动性(对照组)从86.3%上升到96.7%。2小时孵化后,表皮生长因子的刺激效果是可见的浓度100 ng毫升−1。进一步提升EGF浓度超过200 ng毫升−1不是有效的在任何时间间隔的精子孵化的EGF(图1)。
EGF cooling-stored精子的运动性的影响后,24日,如图48或72小时2。轻微但不显著增加总能动性24小时后观察到浓度的200和400 ng毫升−1。观察EGF浓度明显高于能动性在48小时后的精子储存,尽管精子的运动性对照组相比降低了精子的24小时间隔存储。72 h后冷却存储、总精子的运动性相比大幅减少24或48小时间隔,并没有影响的EGF浓度观察(图2)。
进步运动在所有测试组没有显著增加24小时后观察存储ram精子在EGF的存在(图3)。显著增加在进步运动检测EGF浓度与对照组相比观察48 h后精子存储的内存。72 h后存储,显著增加进步的能动性是只有当观察EGF在最高浓度(400 ng毫升−1)应用。
进步运动值低于总精子的运动性;然而,类似的模式曲线的总活性和进步运动对照组可见。然而,这样一个平等的角色的曲线并不表示在两组EGF。在200年和400年的浓度毫升−1EGF、价值观进步运动的位置接近总数的百分比运动性开始从48小时的冷却存储(图4)。
(一)
(b)
(c)
(d)
4所示。讨论
EGF对精子的影响尚未完全阐明。有报告表明EGF浓度在大约100 ng毫升−1影响精子的几个参数不像acrosomal地位,膜的完整性,或运动模式(7]。另一方面,纳兹和卡普兰(11)表明,EGF在较高的浓度,可以抑制精子获能和/或人类精子的顶体反应。Oliva-Hernandez和Perez-Gutierrez7)观察到生殖系统产生的内源性EGF可能增加野猪运动精子顶体反应后的质量。
我们的工作成果确认EGF影响精子的运动性参数取决于暴露于表皮生长因子的浓度和时间。ram最高影响精子的运动性观察EGF浓度更高。表皮生长因子的影响在我们的研究中已经表现出了30分钟后孵化。这些结果与之前的研究一致的纳兹和卡普兰(11),表明EGF并不影响人类精子的运动性浓度低于100 ng毫升−1,当浓度高于100 ng毫升−1显著影响所有运动参数,如速度、线性,打了频率、振幅的横向位移。
在受精过程中精子的运动性的重要性在过去的几十年中已经吸引了相当大的关注。一些研究人员报道生育潜力之间的关系在体外和精子运动参数测量与CASA (15,16]。一些研究[17- - - - - -21)表明,进步精子的运动性的特点与施肥能力和精子的运动性是依赖于线粒体功能。当精子线粒体膜电位增加,精子运动参数和生育潜力也将增加16]。
众所周知,不成熟精子获能处理期间发生精液样本,最终导致生育能力下降相比,新鲜精液样本(22]。高百分比的运动型加工精液中精子样品在我们的测试中可能表明这些精子并没有被稀释和存储的过程中受损。我们的结果表明,表皮生长因子也影响了进步运动,重要的精子受精能力。EGF的作用的重要性也在保留cooling-stored精子的运动性更长一段(72 h)。
质量的评估(速度)的进步的能动性是非常重要的,因为它是一个重要的预后生育因素,尤其是当能动的精子的比例低于40% (23]。客观分析精子的运动性参数导致显著的价值之间的相关性侧头位移(ALH) [24),曲线速度(VCL) [25- - - - - -27),平均路径速度(VAP) [28),线性(林)26),在体外受精。除了VCL VAP,精子hyperactivation已被证明是施肥能力的一个重要标志在体外情况(27,29日- - - - - -31日]。
精子的运动性通常被认为是最重要的一个特征评估的生育潜力射精精子。然而,在公牛,能动的精子的比例无显著相关性评估CASA和59-day NRR(止回率)被发现,而非常重要的相关性被发现当CASA参数描述的速度能动的精子或精子的轨迹线等(包括32]。在早期研究野猪,没有运动参数之间的关系评估CASA和生育的野猪被发现(33,34]。最近,肥力试验结果证明客观衡量公猪精子运动参数之间的相关性和田间授精的结果35]。平井一夫等的研究。36),一个重要的区别在公猪精子的比例等与高或低垃圾大小了。
高百分比的运动型加工精液中精子样本可能表明这些精子并没有被稀释和存储的过程中受损。众所周知,不成熟精子获能处理期间发生精液样本,最终导致生育能力下降相比,新鲜精液样本(22]。
最优值的精子能动性和进步运动是很重要的因素对于成功受精。表皮生长因子影响精子的运动性参数取决于接触EGF浓度和时间。EGF的作用除了cooling-stored ram精子是可见的孵化30分钟后,观察到更多的表达效应浓度200 ng毫升−1。EGF浓度越高(100、200和400 ng毫升−1)显著帮助保留cooling-stored精子能动性和进步运动的时间较长(48小时)。
承认
这项工作是支持的斯洛伐克研发机构根据合同没有。apvv - 0514 - 07。