文摘

牛结核病的控制和非典型mycobacterioses牛在发展中国家很重要,但存在的困难,因为野生动物水库。在牛的农场在坦桑尼亚,分枝杆菌被发现在645年7.3%的小型哺乳动物和牛奶。牛的农场被分成“反应”和“nonreacting”农场,基于结核菌素测试,和更多的分枝杆菌存在于反应中收集的食虫动物农场相比nonreacting农场。多分枝杆菌也出现在食虫动物和啮齿动物。所有分枝杆菌检测到文化和PCR小型哺乳动物的非典型分枝杆菌。分析存在的分枝杆菌与牛的农场的反应堆状态不排除小型哺乳动物之间传播和牛但表明传染给牛从另一个更可能的感染源。然而,由于高患病率的分枝杆菌在一些小型哺乳动物,这些被感染的动物可以给人类带来危险,特别是在艾滋病毒感染率高的地区在坦桑尼亚的情况一样。

1。介绍

属分枝杆菌包括超过140种命名目前公认的(1),其中几个致病性;大多数环境分枝杆菌可能会导致机会性感染。负责一些重要疾病的病原物种在人类和动物在发达国家和发展中国家,即肺结核(TB),麻风病,布鲁里溃疡2]。分枝杆菌感染的易感性等基础疾病患者可以提高人类免疫缺陷virus-acquired免疫缺陷综合症(艾滋病)、结节病、矽肺、肺气肿。与越来越多的艾滋病患者在非洲,结核病和其他分枝杆菌疾病,在某种程度上造成的,例如,m . avium复杂,是发病率和死亡率的一个重要原因3]。等牛分枝杆菌病牛结核病(BTB)所致牛结核分枝杆菌和非典型mycobacterioses(例如,类结核所致m . avium无性系种群。副结核)也会严重影响公众健康和经济(4- - - - - -6]。因此,BTB的控制和非典型mycobacterioses是很重要的。在国家野生动物水库牛分枝杆菌,BTB牛更难以控制。在英国、新西兰、美国和非洲,许多动物被发现感染了,作为一个水库牛分枝杆菌,即欧洲獾(梅莱斯梅莱斯),brushtail负鼠(而),白尾鹿(Odocoileus virginianus)和野牛(野牛野牛),非洲水牛(Syncerus caf),分别7]。

没有多少研究了野生动物水库牛分枝杆菌在撒哈拉以南非洲和研究主要集中在的存在牛分枝杆菌在南非(8- - - - - -11]。2005年,坦桑尼亚牛分枝杆菌是在自由放养的野生动物,即在角马,遮阳帽,轻捻角羚,在塞伦盖蒂国家公园和狮子,坦桑尼亚国家公园,和坦桑尼亚的恩戈罗恩戈罗火山口12]。普遍存在的更多信息牛分枝杆菌在坦桑尼亚的牛感染。这个流行范围在0.2%和14%之间的非典型mycobacterioses在牛在0%和13.0%之间6,13- - - - - -17]。

同时,其他致病性分枝杆菌物种包括m . microti,m . avium,m . marinum被发现在野生动物18- - - - - -21]。虽然这些分枝杆菌毒性对人类较低,导致人类感染或疾病,尤其是当人类immunocompromized [3,22,23]。这样,动物可以传播人类分枝杆菌(24]。

直到现在,研究在水库上执行状态的啮齿动物和食虫动物分枝杆菌(19,21,25- - - - - -27]尽管它们宿主病原体引起的疾病在人类和牲畜28,29日钩端螺旋体病等)、瘟疫和弓形体病(30.]。牛的农场可以倾向于啮齿动物的侵扰,因为丰富的大量的避难所,水,和食物(31日),因此增加的速度直接或间接接触啮齿动物和牛和疾病传播的风险。此外,啮齿动物敏感实验感染牛分枝杆菌,可引起疾病,例如,牛分枝杆菌和m . avium无性系种群。副结核(32,33),最近的研究表明,非洲啮齿动物和食虫动物可以携带的分枝杆菌m . avium,复杂的(21,26]。在发达地区(英国和新西兰),啮齿动物和食虫动物被发现携带牛分枝杆菌(29日,34,35但是估计传播风险很低(20.,36]。然而,在非洲,其他啮齿动物和食虫动物物种现在和虫疾病的风险(包括人类和牛)之间的高接触率更高,因为人类,牲畜和啮齿动物。

因此,本研究的目的是评估啮齿动物/食虫动物宿主的可能性牛分枝杆菌和其他分枝杆菌在坦桑尼亚,牛(和人)可能被感染。我们搜集了小型哺乳动物与一个已知的结核菌素牛农场的地位。唯一比较皮内注射结核菌素试验(SCITT)可以检测牛接触牛分枝杆菌以及非典型分枝杆菌(37,38]。积极SCITT测试可以为暴露在分枝杆菌作为指示。通过针对小型哺乳动物收集牛农场住房动物与已知的反应堆状态,我们可以得到的传输方向或其他来源的参与(s)感染的总结如表1。

2。材料和方法

2.1。捕获网站

总共有26个牛农场选择Morogoro周围,一个中等城市达累斯萨拉姆以西200公里处(37.26 - -37.49°E;6.18 - -6.52°。这些农场可以分为两个反应堆类型基于单一比较皮内注射结核菌素试验(SCITT)进行牛驻留在农场在2005年和2006年(14]。对于所有的动物来说,目前“反应堆现状”捕获发生是已知的。捕获的2005年,“未来反应堆状态”的农场是已知的(即。,2006年的SCITT-results)。捕获的2006年,“过去的反应堆地位”的农场是已知的(即。,2005年的SCITT-results)。其他捕获网站包括草地在屠宰场,莫洛戈罗省和四分之一莫洛戈罗省高患病率的分枝杆菌在啮齿动物和食虫动物观察在先前的研究中,也就是说,Mwembesongo [21]。

捕获发生在2005年和2006年的湿和干燥的季节。

2.2。样品收集

三种类型的生活使用陷阱:谢尔曼LFA住陷阱,箱子陷阱,和大钢丝笼陷阱(21]。花生酱与玉米麸皮和新鲜的玉米穗轴被用作诱饵(21]。

动物被加工后在实验室标准协议所描述的Durnez et al。21]。简单地说,这些动物安乐死与氯仿、和外部特征和测量体重和head-body长度等记录。在验尸,部分肝脏,脾脏,肺、肠系膜淋巴结和外部损伤如果存在被分枝杆菌的检测。尸体被保存在福尔马林,送到安特卫普大学的进一步鉴定物种水平:初级鉴定证实,头骨被识别动物物种和清洁水平。

2.3。样品池和分枝杆菌的探测和识别

样本汇集在一个分层的方式:相同的器官是汇集每一到六个人相同的物种被困在同一诱捕网站。池过程的流程图如图1。动物的数量在一个池取决于捕捉每个物种数量在捕获网站(导致每池1到6的动物)。这样,645个动物被集中到307年组的个体。对于每一组,四个不同的器官匀浆收集从每只动物分别集中,导致1228年池进行测试。样品是用来测试的子集是否池筛查和个人给可比患病率估计。在这个样本子集,汇集结果和个人的结果。

分析了池分枝杆菌的存在的文化和PCR(之前所述21]。简而言之,减少过度生长的器官是均质和净化nonmycobacterial生物(39之前),接种在培养基(Lowenstein-Jensen、Stonebrink Lowenstein-paratuberculosis介质(40)并进行了DNA提取(中描述41(中描述)和聚合酶链反应(14与抑制检查)。

种植在37摄氏度(39十到十二个月。

分枝杆菌孤立的文化是检查酸利用Ziehl-Neelsen染色牢度(锌),确定了解生化方法和测序16 S rRNA基因(42]。

2.4。牛奶样品的收集和分析

每个捕获阶段,从每一个产奶牛牛农场小型哺乳动物被困的地方,牛奶样本(1到10毫升每头牛)收集。牛奶样本保存在−20°C和分析在比利时文化和PCR被Durnez et al。14]。

2.5。数据分析

对于混合样品的结果,数据分析是基于似然比的使用测试(服务)通常池测试的参数模型。池筛选抽样模型基本上是伯努利试验的成功概率在哪里池的大小和吗是感兴趣的人群中感染率。用的随机变量是游泳池的测试的结果,值1如果池是积极和0如果池是负的。

因此,概率模型描述的抽样概率质量函数

这个模型已经有很长的历史在统计文献[43- - - - - -47),在所有这些文件中详细描述。不同大小的调查员收集池,池,经过测试知道结果的价值,用。因此,对于任何一个池,给两人,唯一的未知数的值是在模型中。评估的标准方法最大似然法(48]。这取决于在这种情况下的似然函数 在哪里是池的数量进行测试。最大似然估计(标定)发现通过最大化的函数。我们注意到不需要任何特殊调整池大小的不平等,因为这是一个功能,是模型的一部分。这个抽样模型是构建任何标准的似然比的基础类型测试。测试一个或两个方式设计是由取代由一个线性模型在感兴趣的因素。在这种情况下,编码方案类似于细胞编码标准方差分析是方便。似然比检验方法标准的技术统计。这些测试的实际实现的细节在本例中是计算复杂,需要大量的数学,但没有添加到本文的主题。计算了使用一个定制的FORTRAN程序下运行Windows开发的女士(c . r . Katholi)作者之一。评估的核心是优化软件使用,在这种情况下,程序NLPQLP [49- - - - - -51]。

kappa-test(使用SPSS 16.0)被用来比较个人的结果和混合样品的分析。

3所示。结果

3.1。捕获的结果

被困的动物数量在这项研究中每个物种在表列出2。

3.2。分枝杆菌的结果

3.2.1之上。池患病率的比较评估和个人患病率估算

对于文化和PCR,各自Kappa-values,比较的结果集中样本和个体样本,分别为0.691和0.876,表明高一致性。对于文化,估计患病率与池患病率估计为6.8% (95% CI: 2.8% - -13.3%),而与个别测试患病率约为7.6% (95% CI: 3.5% - -14.0%)。对于PCR,这些估计肥胖盛行程度分别为3.3% (95% CI: 0.8% - -8.2%)和3.8% (95% CI: 1.2% - -8.8%)。

3.2.2。分枝杆菌中发现啮齿动物和食虫类

分枝杆菌阳性组的数量和估计患病率表中列出2分枝杆菌的鉴定表3。共有44组的307年文化或PCR检测分枝杆菌,这使得总估计患病率为7.3%。分枝杆菌的发病率估计c .老鼠是高于m . natalensis(),在r .鼠属(观察),而无显著差异c . hirta()。c . hirta也进行分枝杆菌比r .鼠属(观察),而没有区别m . natalensis()。m . natalensis分枝杆菌明显多于r .鼠属()。

当测试不同器官,肝脏被发现至少与分枝杆菌感染,而肺是最容易包含分枝杆菌(页面的检验统计量;)。分枝杆菌的积极性,每个动物物种的不同器官在桌子上4。

总共33组233组动物困在牛的农场分枝杆菌阳性,据估计患病率为7.0%。因为我们之间的关系很感兴趣SCITT农场的反应堆状态(现在、过去或将来)和分枝杆菌在啮齿动物和食虫动物,目前的分析,过去、未来反应堆状态的农场,当足够的数据是可用的。结果总结在表5。

此外,双向方差分析分析显示无效的季节(干或湿)分枝杆菌的流行在啮齿动物和食虫动物RR和NR农场(数据没有显示)。单向方差分析分析表明,没有差别在农场的分枝杆菌的流行改变反应堆状态(NR RR或RR NR)在研究过程中与农场的反应堆状态保持不变(NR或RR)(数据没有显示)。

分枝杆菌的流行在啮齿动物和食虫动物困在屠宰场Mwembesongo是列在表中5。之间的患病率无显著差异被发现啮齿动物和食虫动物被困在这些网站上。当比较分枝杆菌的流行在屠宰场的动物被困,困在NR和RR农场(反应堆现状),观察显著差异()和显著交互双向方差分析()。食虫类,发病率明显高于在屠宰场与NR农场(观察),而没有区别与RR农场()。过去或未来的反应堆没有区别观察状态的农场。也没有区别之间观察到的分枝杆菌的流行在啮齿动物困在Mwembesongo和NR和RR农场。

226牛奶样品收集在同一个农场动物被困,6个(2.7%)被文化和分枝杆菌阳性12例(5.3%)通过PCR。表列出了分枝杆菌的识别6。

4所示。讨论

这项研究是第一个调查收集的分枝杆菌存在于啮齿类动物和食虫动物在农场与结核菌素牛的反应堆状态驻留在这些农场。本研究的基本原理是病原体感染宿主多个物种,对于许多致病性分枝杆菌一样,可能会遇到在几个主机数量,其中一些可能是感染水库(53]。然而,这意味着感染野生动物种群的存在并不能证明动物物种是一个水库的传染病4]。水库上获得更多的信息可能状态的某些主机,主机的数据存在的感染,因此,分析与数据在目标人群的感染。在这方面,重要的是要承认的存在不同的主机类型;维护主机,单独感染可以通过种内的持续传播,感染和溢出主机上,不会无限期持续,除非再感染从另一个物种。维护和溢出主机可能导致其他物种感染,但这种差异是重要的宿主物种被认为是当控制(4]。

一般来说,啮齿动物和食虫动物可以接触到分枝杆菌通过环境喂食,与泥土接触,接触野生和家养动物或人类的粪便。这些分枝杆菌可以通过这些动物的胃不消化,因为它们是抗酸。致病性和机会分枝杆菌可以通过胃和生存在组织和器官。通过这种方式,他们可以长距离传播这些动物的迁移(27),即使他们不维护水库的一部分,他们可以运输主机扮演一个角色。

4.1。没有证据表明啮齿动物和食虫动物宿主牛分枝杆菌或m . avium无性系种群。副结核

在先前的研究在英国和新西兰的数据大相径庭牛分枝杆菌在啮齿动物和食虫动物范围从0.4至2.8%,从1.2到5%,分别为(20.,29日,34,35,54]。m . avium无性系种群。副结核还发现之前在啮齿动物和食虫动物在捷克共和国和希腊肥胖盛行程度从1.3%,5.9%,从1.7%降至2.6%,分别55,56]。

在目前的研究中,啮齿动物和食虫动物是牛农场收集的,其中一些牛感染牛分枝杆菌和/或非典型mycobacterioses [14]。尽管我们没有发现牛分枝杆菌或m . avium无性系种群。副结核小型哺乳动物被困在牛的农场,莫洛戈罗省非洲啮齿动物或食虫动物仍然可以为这些分枝杆菌水库。因为它已经在先前的研究[20.),对一些物种,肯定不够的动物被困得出这样的结论:他们不携带牛分枝杆菌或m . avium无性系种群。副结核,见宽的零的置信区间估计的一些物种在桌子上2。此外,尽管我们使用不同类型和大小的陷阱,一些种类的啮齿动物和食虫动物不会被这些陷阱,因为它们的大小。例如,大多数的鼩鼱物种太小引发本研究中使用的陷阱。因此,我们可能会错过一些重要的物种。

两个物种被困在相当数量,也就是说,r .鼠属和m . natalensis置信区间表明他们不发挥重要作用的载体牛分枝杆菌或m . avium无性系种群。副结核在研究区。一种密切相关r .鼠属,r形,对感染实验不敏感牛分枝杆菌(32尽管它被发现携带牛分枝杆菌在英国(34,35),但在低数据大相径庭(1.2 -2.2%)。

4.2。啮齿动物和食虫动物找其他分枝杆菌

在牛结核菌素测试显示高患病率的非典型mycobacterioses在坦桑尼亚的牛14]。非典型分枝杆菌,如m . avium无性系种群。副结核,也可以影响牛农业生产(5),提供经济激励,以阻止他们的牛。因此,本研究中所有的啮齿动物和食虫动物样本收集也分析非典型分枝杆菌的存在。

分析数据大相径庭的分枝杆菌在啮齿动物和食虫动物在农场的反应堆地位的小型哺乳动物收集给我们一个指示是否小型哺乳动物和牛可能之间的传输,或者另一个感染源必须参与。

4.2.1。准备啮齿动物

为m . natalensis在分枝杆菌的流行没有区别不同的农业类型现在,未来,过去的反应堆状态。另一个感染源因此应该对牛和可用m . natalensis与分枝杆菌感染。其他来源可能是另一个野生或家养动物,环境,或人类。

一些孤立的分枝杆菌,即m . chelonae,m . intracellulare和m . szulgai已知病原体对人类,导致肺病,柔软的皮肤,或传播感染在免疫活性的(m . intracellulare)、immunocompromized或倾向的患者(m . chelonae和m . szulgai)[52]。影响牛的健康或牛奶产量并不清楚,然而,尽管他们已经从牛在几个孤立的研究(14,57,58]。大部分的分枝杆菌检测m . natalensis肺或肠系膜淋巴结中发现,所以他们可能是由动物粪便或呼吸道分泌物排出。在目前的研究中,没有粪便标本检查,但是我们在贝宁,15.5%的小哺乳动物的粪便含有分枝杆菌(26]。

为r .鼠属分枝杆菌的检出率很低(2.8%),无分枝杆菌属于人类的风险组2(表3),类似m . natalensis农业类型,没有区别。然而,有趣的是,m . nonchromogenicum和m . goodii于2005年首次发现在吗r .鼠属被困在一个农场,后来被发现在2006年牛住在同一个农场的牛奶(表3和6)。这可能意味着r .鼠属排泄这些分枝杆菌,例如,作为传输主机,这些分枝杆菌在环境或守恒的很好,这些分枝杆菌是保存在另一个国内或野生动物宿主,牛和r .鼠属可以拿起分枝杆菌溢出主机。为m . nonchromogenicum,感染源可能是环境(52]。的地位和自然宿主m . goodii然而,还不清楚,但它会导致人类感染(59和野生动物60]。

依照一项研究[21),分枝杆菌被发现在的患病率最高c .老鼠(23.9%)比其他啮齿动物m . intracellulare和相关的分枝杆菌为主要分枝杆菌中发现这个物种。分枝杆菌患病率的差异在这个动物物种之间的反应和nonreacting农场不显著,可能是因为数量少c .老鼠被困在这些牛的农场()。的患病率升高可能表明人类的潜在风险,因为大部分被感染的动物被困在或在Mwembesongo人类住所附近。

大型啮齿动物物种之间的数据大相径庭的不同之处可能是由于不同的行为、栖息地和食物偏好。表7总结了主要动物物种的栖息地和食物偏好困在这个研究。尽管它们的栖息地范围不同,他们都在相同的环境中收集周围的牛农场和人类的住所。m . natalensis r .鼠属和c .老鼠都是杂食性,吃什么他们会发现在一个人造的环境。主要的区别在于,c .老鼠使用他们的脸颊袋携带食物和床上用品材料,他们定期执行粪食性(61年];这样,他们可以更频繁的接触与分枝杆菌。

4.2.2。食虫动物

啮齿动物和食虫动物之间的不同分枝杆菌的流行也观察到类似于之前的研究(21]。这种差异只是观察到反应农场而不是nonreacting农场。食虫动物可能通过清除接分枝杆菌环境行为(27]。粪食性和吃新鲜杀害动物(表7)患病率升高的可能的解释。分枝杆菌肥胖盛行程度的差异还发现在这些动物之间的反应和nonreacting农场:反应堆现状,反应中可观察到更高的患病率比nonreacting农场,这是一个论点为食虫动物常见的感染源和牛。过去反应堆状态,观察一个更高的患病率在nonreacting反应相比农场,也表明牛可能是不食虫动物的感染源。

大部分的食虫动物中发现的分枝杆菌c . hirta有可能对人类致病性(表吗3),其中大部分的一部分m . avium,复杂(m . intracellulare,m .嵌合体,m . colombiense)[52]。

在这项研究中,收集的其他食虫动物刺猬,也被认为是运营商的致病性分枝杆菌(29日,62年,63年]虽然只有欧洲刺猬在这个背景下研究了。在目前的研究中,2 4刺猬(答:albiventris)进行分枝杆菌,但这些分枝杆菌可能不致病。

4.2.3。器官

在一般情况下,肺是最容易包含分枝杆菌,紧随其后的是肠系膜淋巴结、脾脏和肝脏。这是符合分枝杆菌的传播通过气溶胶和消化。在两种情况下,分枝杆菌培养从病变:m .土从一个肿胀的脚r .鼠属和一个分枝杆菌相关m . intracellulare肿胀的淋巴结c .老鼠。在其他的动物展示分枝杆菌,没有宏观pathomorphological病变的观察和对大多数隔离观察只有一个殖民地文化、殖民而非感染。

分枝杆菌被发现在所有四个器官,考虑目前了解疾病的啮齿动物和疾病的传播一般(64年],分枝杆菌的传播几个方面:通过与啮齿动物排泄物直接接触,通过与啮齿动物排泄物摄入受污染的食物或水,通过摄入动物本身,通过吸入雾化啮齿动物排泄物,啮齿动物咬伤,或者通过体外寄生虫。

4.3。池筛选方法

该研究使用集中筛选方法分析标本时为了节省时间和资源。我们已经表明,尽管有轻微低估时流行的池筛选用于分枝杆菌检测,95%的置信区间与个体筛选一样宽。这个之前已经报道过Vansteelandt et al。65年病毒检测。随着池以分层的方式进行,每个栖息地,每个器官和物种,没有损失的信息因为几个假设仍然可以被测试。如果池会以不同的方式完成的,例如,汇集所有的器官一样的动物已经被一些研究者完成(20.,66年),我们就会失去信息,网站的感染或殖民。因此,我们强烈建议分层池筛选方法在分枝杆菌储层研究。

4.4。PCR检测分枝杆菌与文化

只有7个池、PCR和文化结果是一致的。这可能是由于不同灵敏度的方法(67年):检测结核分枝杆菌在临床样本,PCR不如文化敏感(68年]。这也是对分枝杆菌。尽管特定的16 s rDNA PCR检测分枝杆菌非常有用在不同样本,它不是敏感的文化,因为它的目标只发生一次或两次在分枝杆菌染色体69年]。事实上,五的八个池多个殖民地成长在文化、也为PCR阳性(见补充表S1,可以发现doi: 10.4061 / 2011/495074)。

第二个不一致的原因是这一事实的方法目标其他分枝杆菌;例如,不是所有的分枝杆菌生长的温度接种媒体保持(52),而PCR目标也死分枝杆菌的DNA(要么死于动物的免疫系统,在传输或存储,或者在去污)(70年]。这种矛盾在先前的研究和讨论(21,26]。

4.5。分枝杆菌的小型哺乳动物对人类传播的风险

对典型的流行mycobacterioses人口在坦桑尼亚。然而,Kazwala et al。71年)报道,分枝杆菌分离株的16%肺外的人类样本在坦桑尼亚牛分枝杆菌非典型分枝杆菌占13.6%,而Mfinanga et al。72年]表明,10.8%的分枝杆菌分离株来自肺外的人类样本牛分枝杆菌非典型分枝杆菌占47.7%。这表明,虽然几乎没有什么可用的数据,人类病例BTB和非典型分枝杆菌病出现在坦桑尼亚。最近,另外三例侵袭性非典型分枝杆菌病在坦桑尼亚被描述由艾滋病毒阳性患者m . sherrisii和m . avium复杂的(73年]。在ITM,我们有记录的m . intracellulare,m .土,m . arupense,m . colombiense,m . kumamotonense从临床分离样品在坦桑尼亚虽然这些分枝杆菌分离株的临床意义尚不清楚。分枝杆菌孤立的人类,m . intracellulare,m . colombiense,m .土在目前的研究中发现小型哺乳动物。在一项研究在同一地区在坦桑尼亚,我们也发现m . intracellulare和m . arupense(21]。尽管艾滋病毒流行率已经下降缓慢在坦桑尼亚,它仍然在2005年和2006年达到了6.2%和6%,分别为(74年]。2009年,艾滋病毒流行率已下降到5.6%,但这仍然意味着大部分坦桑尼亚人口更为敏感与这些非典型分枝杆菌感染。本研究中所有的啮齿动物和食虫动物收集在靠近人类住所,这意味着受感染动物可以给人类带来危险,降低免疫系统。

5。结论

目前的研究是第一次调查的分枝杆菌在啮齿动物和食虫动物与牛的反应堆状况收集他们的农场。分析存在的分枝杆菌与牛的农场的反应堆状态不排除小型哺乳动物之间传播和牛但表明传染给牛从另一个更可能的感染源。然而,由于潜在的致病性分枝杆菌的高流行在一些小型哺乳动物,也就是说,在c .老鼠和c . hirta受感染的动物可以给人类带来危险,特别是在艾滋病毒感染率高的地区在坦桑尼亚的情况一样。

确认

这项研究受到了博士学位授予佛兰德大学间的委员会,发展合作的总局(比利时布鲁塞尔),Damien基金会和欧盟(Ratzooman项目,INCO-Dev ica - ct - 2002 - 10056)。作者感谢Krista Fissette, Pim De Rijk, Nele Boeykens优秀的技术援助和安和苏阿害虫管理中心的工作人员和安和苏阿兽医和公共卫生部门的现场工作期间的支持。

补充材料