文摘
分枝杆菌celatum缓慢增长的潜在致病性分枝杆菌第一次描述了在人类中,被视为人类感染的常见原因,虽然能够诱导入侵宿主免疫功能不全的疾病。据报道,由于严重的疾病m . celatum也可能发生在那些无明显的免疫缺陷。在动物中,一个m . celatum有关的疾病只在三种情况下被描述:在国内雪貂(两次Mustela putorius furo)和一次白尾咬鹃(咬鹃冬青)。在本文中,我们报告的第一检测m . celatum在国内猪(野猪有明显)和狍(Capreolus Capreolus)。人类的一个全国性的概述m . celatum感染记录在斯洛文尼亚在2000年和2010年之间。肺疾病由于m . celatum是一个病人,历史上公认的既存的肺部疾病。
1。介绍
m . celatum缓慢增长的潜在致病性分枝杆菌,在1993年首次描述的人类(1]。其生化特性和菌落形态是相似的m . avium复杂的,m . xenopi,m . malmoense和m . shimoidei(1]。三种类型的m . celatum已确定的基础上吗16 s rDNA序列异质性(1,2,有两个不同的可能性16 s rRNA基因在基因组已经表示(3]。诊断的m . celatum可以作为生物可以挑战误判为结核分枝杆菌由于假阳性核酸探针测试结果(4- - - - - -6]。明确的识别,因此,由霉菌酸提供高性能液相色谱或核酸测序1,2]。
m . celatum是一种不常见的导致人类感染,但它可能诱发入侵宿主免疫功能不全的疾病。据报道导致主要在人受到感染艾滋病(7- - - - - -11]。然而,越来越多的报道表明,由于严重的疾病m . celatum也可能发生在非吗艾滋病毒来华的患者(6,12- - - - - -18]。
迄今为止,只有三个病例m . celatum动物感染已报告:一分之二国内雪貂(Mustela putorius furo)[19,20.)和一分之一白尾咬鹃(咬鹃冬青)[21]。
在目前的工作中,我们的第一检测报告m . celatum在国内猪(野猪有明显)和狍(Capreolus Capreolus)。此外,全国人类的概述m . celatum感染记录在斯洛文尼亚在2000年和2010年之间。
2。材料和方法
2.1。动物隔离
并于2000年获得了第一个孤立的集合淋巴结标本猪()。在颌下淋巴结肉芽肿改变是可见的在常规结核病监测在屠宰场。第二隔离于2010年获得狍在肺结核在野生动物研究的范围。没有观察到结核病的严重病变特征从狍(表采集的标本1)。
2.2。人类的分离
共有21个m . celatum隔离从7例(两个男性,5个女性)记录在斯洛文尼亚的时期从2000年到2010年。艾滋病毒地位受影响的人是未知的,除了一个患者被确认艾滋病毒负(表2(b))。根据低患病率艾滋病2009年(< 0.1%)[23在斯洛文尼亚和病人的年龄,艾滋病毒感染被认为是不太可能对大多数他们。收集所有的隔离和确定在国家参考实验室的分枝杆菌大学诊所Golnik范围的常规诊断肺结核杆菌复合菌群和疾病造成的非结核分枝杆菌的人类。除了一个,所有的隔离都从痰标本培养。概述人类隔离包括在这项研究显示在表中2(b)。
2.3。组织病理学
猪淋巴结标本受到Ziehl-Neelsen(锌)和hematoxylin-eosin染色的组织病理学检查。
2.4。细菌学和识别(动物隔离)
标本涂片是锌染色和显微镜下检查抗酸的细菌(AFB)的存在。动物组织标本的处理根据协议所描述的肯特和库比卡24)和接种到下列选择性媒体:Lowenstein-Jensen(一个斜补充丙酮酸和一个偏补充与甘油),Stonebrink,麦德布鲁克7 h10洗液MGIT(分枝杆菌生长指示管,正欲,美国)。细菌生长的涂片锌彩色确认他们由空军基地。识别的分离是基于表型特点和分子方法的结合。增长率,成长在不同的温度下,殖民地形态都被记录下来。根据表型特征,分离出受到PCR扩增目标的插入序列特征m . avium。从选中的殖民地受到DNA提取1245年和法文300年PCR扩增采用底漆集和前面描述的协议(25,26]。此外,杂交试验使用基因型分枝杆菌厘米和文化识别工具(海Lifescience,德国)执行根据制造商的指示。猪隔离受到16 s rDNA测序中心国家参考分枝杆菌的研究中心Borstel在德国。确定狍隔离的系统发育关系,使用mycobacteria-specific PCR引物对285/264的目标16 s rRNA基因(27]。核糖体PCR扩增子从琼脂糖凝胶电泳分离后纯化使用PureLink快速凝胶萃取设备(美国表达载体)后,制造商的指示和测序在两个方向(Macrogen、韩国)。检索到的序列片段被提交给megablast分类通过NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。
2.5。细菌学和识别(人类的分离)
标本人类金胺染色和荧光显微镜检查的空军基地。所有标本处理根据处女[描述的协议28)和接种两个固体介质上(Lowenstein-Jensen和Stonebrink)和BACTEC MGIT 960液体介质(美国,正欲)。以下研究表型特征:增长率,生长在不同的温度下,显微镜检查的菌落形态麦德布鲁克7 h10琼脂板,和生化活动。生化测试总结在表执行3。识别基因型分枝杆菌厘米和文化识别工具(海Lifescience,德国)也进行,遵循制造商的指示。详细给出了识别测试用于人类隔离表2(b)。
3所示。结果
3.1。猪隔离
五项接种细菌生长出现在三个媒体(表1)。增长19天之后首次检测到液体介质;9天后,光滑的丝状(图1)黄色色素殖民地出现在固体培养基。聚合酶链反应测试m . avium给了负面结果。最初,隔离被确认为属的一个成员分枝杆菌诊断测试在我们的实验室调查时并没有使复合菌群鉴定各种非结核分枝杆菌物种水平。2003年,基因型分枝杆菌文化识别工具被引入实验室日常工作改进的分枝杆菌鉴定的工具。由于回顾性调查,猪隔离被确认为m . celatum并被送往国家参考中心Borstel分枝杆菌的研究中心,德国为DNA测序证实了孤立的身份(数据类型没有可用)。猪淋巴结标本的组织病理学检查显示锌-部分incalcinated压缩肉芽肿。
3.2。狍隔离
细菌生长后发生34天在三个媒体接种淋巴结材料。聚合酶链反应测试m . avium是负的。使用基因型分枝杆菌厘米文化识别工具和DNA测序,确定为隔离m . celatum。测序显示重复electropherogram山峰后报道214年位置插入额外的T (3]。明确排序模式得到手动修正后显示两种不同的存在16 s rRNA(即基因副本。,type 1 and type 3) in the genome ofm . celatum(表1)。
3.3。人类的分离
金胺染色产生积极的结果在五21的标本m . celatum后来培养。所有涂片阳性标本属于一个肺病患者由于m . celatum。绝大多数的隔离在液体培养基中成长;在21日的情况下,液体介质是唯一发现细菌生长的介质。殖民地,出现在固体介质小而光滑。直到2003年底,识别是基于表型方法(立体显微镜下菌落形态、生化测试)。然而,他们没有足够的歧视和隔离标识为nonchromogenic分枝杆菌。调查隔离的生化特性如表所示3并列入第一批符合特征描述的物种1]。基因型分枝杆菌厘米和文化识别工具被引入日常工作,2004年以来一直用于所有分枝杆菌分离株调查物种的识别水平。未知的分枝杆菌物种的分离培养的2000年和2003年之间被确定在回顾。细菌和分子调查的结果总结了人类隔离表2(b)。
4所示。讨论
在第一个报告m . celatum在动物中,有机体被确认为肉芽肿性传播感染的病原学的代理。发现相关的感染范围从古典结核性与明确的肉芽肿病变白尾咬鹃(21)定义糟糕的肉芽肿所描述的雪貂(19]。病变出现在咬鹃是相同的类似古典禽流感mycobacteriosis所致m . avium(21]。感染的途径并不是决定虽然由吸入呼吸道病变显示传输(19,21]。感染源也是未知;然而,正如大多数分枝杆菌是无处不在的环境腐生菌(29日),暴露于土壤或水似乎是最可能的来源。的存在m . celatum在环境中已经证明了其从生物膜隔离在一个水族馆30.)的检测m . celatum——从土壤中DNA序列(31日]。最后论文m . celatum感染动物的脾炎在雪貂的担忧。常见的m . celatum在雪貂可以解释的假设,他们更容易受到分枝杆菌感染许多分枝杆菌,例如,牛分枝杆菌,m . microti,m . avium,m .三层,m . fortuitum,m . florentinum,m . interjectum,m . intracellulare从这个动物物种(被孤立32- - - - - -34]。
在动物标本调查在这项研究中,没有检测到锌空军基地组织涂片染色。以前的论文m . celatum感染动物报告积极涂片镜检,但低的空军基地数量记录在某些情况下(20.,21]。细菌的生长时间从猪和狍在增长时报》报道。细菌生长猪的淋巴结标本后首次检测到19天的孵化的液体培养基中。光滑的丝状和黄色色素殖民地后28天出现在坚实的媒体之一。细菌生长的狍淋巴结标本中检测出液体和两个固体媒体后34天。相比之下,在雪貂与传播m . celatum感染,可见黄色殖民地后十天(19]虽然小光滑和苍白的殖民地从雪貂脾炎出现八周后(20.]。m . celatum类型显示在咬鹃动物包括1型(21在雪貂)和3型传播疾病(19]在雪貂的类型确定脾炎亲缘密切的人类m . celatum菌株类型1和3 (20.]。我们从狍子存在两种不同的分离16 s rRNA类型的基因副本,1和3。
的意义m . celatum本文中描述的动物感染尚不清楚。的存在和TB-like病变显示的位置m . celatum是一种潜在致病生物的可能被感染的猪每个操作系统。肉芽肿改变像猪感染牛分枝杆菌或m . avium。因此,m . celatum感染可能是重要的角度做出正确的诊断。在狍标本,没有严重病变出现在肝脏和淋巴结;组织病理学检查没有执行。这一发现的m . celatum淋巴结组织可以是一个无处不在的生物性质的结果,这可能是广泛的环境中。在这两种动物物种,隔离的m . celatum是一种罕见的事件。在152个分枝杆菌分离猪从2000年到2010年,绝大多数(92.1%)属于m . avium。几个孤立的分枝杆菌sp。m .土和m . fortuitum也被检测到。m . celatum代表0.67%的隔离。更详细的概述分枝杆菌在动物在斯洛文尼亚最近发表(35]。野生动物的分枝杆菌检出率低。野生动物国家结核病研究开始于2010年。在今年,总共有108种动物不同的采样和八个隔离复合菌群的非结核分枝杆菌检测。两个31狍分枝杆菌呈阳性;一个隔离被确认为m . celatum和另一个分枝杆菌sp。
m . celatum已经主要被认为是肺和传播的病原体感染人类免疫功能不全的(16]。它也可能影响免疫活性的患者(6,12,16];然而,一些作者讨论了相关的宿主防御失败的可能性m . celatum感染建议可能隐藏的免疫缺陷而不是真正的免疫活性(14]。回顾文献有关m . celatum非感染艾滋病毒来华的病人显示八个来自7个国家的报道在过去的16年里6,12- - - - - -18]。9例人之一m . celatum感染,3例患者有肺结核(14,17,18),结核淋巴腺炎和慢性阻塞性肺疾病(15),糖尿病(13),一个是肺移植受体(16)而对于三个病人没有潜在疾病记录(6,12,16]。在所有患者中,m . celatum引起肺部感染儿童除了两例淋巴腺炎(12,16]。抗生素治疗的结果是有利于五,七成人患者在儿童手术(在一个案例中由抗生素治疗)导致疾病的回归(17]。涂片镜检主要是积极的空军基地。隔离的方法用于识别涉及表型和分子方法;确诊是提供的16 s rDNA在大多数情况下测序。
11期间,共有21m . celatum隔离属于七个病人被发现在149000个标本在斯洛文尼亚人调查(表2(a))。m . celatum约占0.82%的复合菌群的分离非结核分枝杆菌鉴定在2000和2010之间。除了一个孤立从支气管送气音,m . celatum隔离从痰培养。涂片镜检(荧光金胺染色)是积极的只有五个口水从一个患者肺m . celatum疾病。剩余的标本不利于空军基地。
的发生m . celatum在五个病人中,单一的痰标本进行调查,可能解释这种生物的存在的环境。这些隔离的发现可以被看作是随机的,没有特别的意义。在一个病人,m . celatum从支气管送气音孤立。由于支气管视为通常无菌网站,隔离的m . celatum从这样一个站点可能表明临床感染的重要性。但是,没有进一步的标本的77岁的病人进行调查。为了满足复合菌群的标准诊断非结核分枝杆菌肺病,由美国胸科学会出版(36),在一年内应采集标本和临床和影像学评估结果应该执行和细菌学的结果。
因此,在m . celatum在斯洛文尼亚隔离从人类中恢复过来,m . celatum感染的临床意义只在一个老年病人(生于1929年)和结核病的历史(1952 - 1954,胸廓成形术治疗)。在2002 - 2003和2005 - 2006年,这个病人治疗也m . avium有关的,m . intracellulare分别与肺病。重复的隔离m . celatum从15个痰标本(其中,五涂片阳性)五年来证实了这个病人的临床感染的重要性。病人第一次接受抗生素治疗在2008年底。治疗的结果是未知的,没有收到样本后疗程的开始。然而,这四个m . celatum分离获得2010年和重复治疗建议肺部感染复发。这个案例表明,一个先前存在的肺病代表一个重要的危险因素m . celatum肺部感染。这可以得出的结论也从原来的病例报道的描述潜在的疾病m . celatum病人常常涉及来华的肺部疾病,最常见的结核(17]。
在结论中,找到的m . celatum在动物和人类环境中显示它的存在。导致猪TB-like病变的能力表明机体潜在致病性动物物种。此外,m . celatum被认为是肺部感染的病因代理人史的病人一个先前存在的肺部疾病。
承认
MilojkaŠetina欣然承认为熟练的技术支持和认真的分枝杆菌分离株的归档。