抽象性
受自然感染人群接触各种其他病原体后诊断出波宾肺结核本研究描述接触牛的细胞免疫响应mycobctiuma子类paratuberculosis和mycobctiuma子类avium并特别提到例前验尸mycoctiumbovis诊断测试新军 响应热血后发现地图接触群中峰值,比maa接触群更持久响应净蛋白衍生物(PPDa、PPDb和PPDj)与PPDa和PPDj关系最密切偶而在地图受感染牛群中看到PPDb偏向响应与PPDa比较表示某些地图受感染牛群可能被误分类M.bovis系统使用试剂测试受感染PPDj使用时未见此偏差SICCT结果与相关感染一致,所有小牛本可归为皮肤测试负值
开工导 言
mycobctiuma子类paratuberculosismap呈阳性菌素 强氏病因子牛范围广广,包括牛、绵羊、山羊、鹿和兔子之类非反目动物一号..识别传输路线通过吸食受污染牛奶或共生和子宫[2..感染可以通过免疫系统清除或进至子临床或临床疾病进化为疾病的动物比例可能因宿主、感染剂量和接触年龄而异3-5..牛头数月最易感染,尽管老动物可受感染5-7..3-5年感染后通常不出现诊断符号4,6..临床标志包括慢性肠炎、腹泻、减肥和最终死亡8使它成为动物健康、福利和生产率的重要约束直接成本难以测量,然而,在奶牛群中估计亚临床感染可抑制10%的牛奶生产九九,10..但是,如果感染混淆了诊断其他疾病,例如M.bovis公司国家实际感染代价可能被严重低估
早期地图诊断难度很大,因为牛开发抗体响应或临床信号开发耗时长,因此许多受感染动物仍留在农场内,在那里很容易脱机并可能感染他人。当前抗体血清测试在敏感度和特性方面大相径庭,难以比较11-13..完全排序地图基因组14正在发现新抗原,可提高系统测试性能15..金素诊断组织/法斯文化,虽然准确性强,但需要数月完成,在预感受感染动物中可能不敏感16////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////替代诊断工具测量单细胞早期免疫响应17..在许多国家,这已被常用结合皮肤测试诊断牛BTB感染,并获国际诊断局识别诊断M.bovis系统受感染者18号..数项研究证明IFN南锥体检测早期地图感染比抗体测试有效19号,20码..诊断测试的局限性之一是 与其他 Mycobactria交互作用后 可能出现的误诊断Álvarez等显示双重地图M.bovis系统牛感染会降低IFN敏感度南锥体测试检测bTB21号..消除交叉反作用性可能变得至关重要,开发更具体的测试方法,例如,在FN-FN-I南锥体解析帮助区分M.bovis系统和地图受感染22号,23号..
地图牛感染全球虽已进行多项研究以确定一个国家内流行程度,但由于使用的方法不同,而且研究测试牛群不反映总体人口,这些研究不易比较。欧洲国家内牛群水平流行率估计介于3%至68%之间[24码..英国政府2009年报告估计强氏牛群流行率为34.7%(95%c25码..有鉴于此,强氏病很可能存在于目前所有BTB国家中BovineTB消除程序严重依赖诊断工具准确识别受影响动物并区分动物与接触环境近效动物多数当前诊断测试依赖净蛋白衍生物M.bovis系统PPDb和Maa目前的bTB消除程序比较单交式子宫颈比较网膜皮肤测试中延迟型超敏化反应因为这些产品粗糙、特征差,可随厂商而异26地图 MaaM.bovis系统mycobacteria基因相似27号极有可能带地图受感染者对可能同时影响当前测试敏感度和特性的试剂或试剂作出响应21号,23号..
本文的目的是评估牛实验受Maa或Map感染的CMI响应M.bovis系统诊断学
二叉材料方法
2.1.动物实验设计
所有小牛都使用男性Friesian-HolsteinsM.bovis系统地图免费集合并测试接触M.bovis系统地图 Maa使用IFN南锥体发布前检测在整个实验中,小牛都安插在安全二级封闭设施中并每周采血第一次实验中12小牛约16周(15至18周)受地图感染并保留39周后验尸28码..二次实验中,6小牛约20周(从19周到22周不等)受Maa感染,然后保留64周后验尸两组都保留最长时间实际可能存放在二级封闭设施中第三次实验中,12小牛18周时受Maa感染(从17至19周不等),并在验尸前保留8周所有实验都符合英国内政部批准的许可条件并接受定期检查。
2.2.投放小牛
Map使用菌株是当地低通量牛排菌株Grant皇后大学Belfast使用NCT8559Maa文化7H9Midbrook媒体补充OADC和MycobactinJ使用生长日志阶段采集的培养物制作每一信库拉并使用湿权法计算计数29..因诺库拉重新悬浮缓冲盐碱和小牛口服感染牛排管理8CFU地图实验1九九实验2和3中的CFUma在无其他证据的情况下 10九九选择CFU为Maa剂量以确保充分的免疫响应
2.3FNF-南锥体发布解析
血液样本取自循环喷射管1小时内运到实验室4点对血立即用PBS(零控制)、Avien净化蛋白衍生物(PPDa)华府g/ml最终集中度(兽医实验室)8点时牛排净化蛋白衍生物华府g/ml最终富集度和bookin净化蛋白衍生物华府g/ml最终集中度(中央兽医学院)2分ESAT-6华府g/ml最终集中度(StatensSerum学院)和pokeweed二叉虫(Sigma)24小时后取出等离子并用三文治ELISA测试南锥体博维加姆Prionics新军南锥体释放值表示净OD北爱尔兰动物归为btb阳性动物的截值是pdbOD减PBSOD大于0.1和pdbOD+PDA切分方法用于下列结果和讨论
2.4.SICCT测试
单行对比宫颈管测试3个隐蔽网站对每只动物剪切并用书眉测量皮肤厚度并注入100华府LPDA(VLA)、PPDB(VLA)和PPDJ(CVI)管检查每个注入网站以确保交错交付72小时后测量每个网站的皮肤厚度动物使用标准测试标准分类为bTB皮肤测试阳性,如果皮肤对PPDb至少比PPDa多5毫米所有注入量测均由同一个人执行以限制运算符变异
2.5统计学
GenStat十二版数据分析皮肤测试反应对比使用Kolmogorov-Smirnov测试的受感染群PPDA和PPDB比较PPDA和PPDJ比较PPDJ关联系数IFN-南锥体三管响应估计使用Kendall级关联系数图使用FigSys制作
3级结果
3.1.实验1-Map染色
实验一的目的是让12小牛接触已知量的地图并测量IFN-南锥体发布试管内使用抗原刺激PBMS研究CMI响应简言之,所有小牛都引出CMI响应图1(a)显示平均值IFN南锥体响应PPDa,b和jtruclins图显示管间高度复用性,所有三者都显示与Highl-FN-FN-FER峰值相近响应模式南锥体14周至25周感染后响应实现全管比较IFN-南锥体响应关系极大 PPDA和PPDJ响应关系最密切12小区中6小区时点对PPDa有偏差2(a)表示这些动物偶而使用北爱尔兰当前使用截值误分类为bTB阳性(见C节)2.3详解)8%事件本会误分类为一种动物(K)占多数(时间分数的44%)寄生虫出血后 动物会检测阴性重要的是,如果PPDb和PPDj比较总百分率小于5%2(b))通常最大免疫响应与PPDj并发后发PPDa和PPDb无小牛使用SICCT误分类3(a)PPDa和PPDj皮肤反应没有重大差分,PPDA和PPDb有重大差分 )
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(a)
(b)
(c)
3.2实验2-Maa染色
实验2的目的是让六小牛接触已知剂量Maa并测量IFN-南锥体发布试管内使用抗原刺激PBMS研究CMI响应Maa群小牛指IFN南锥体响应与地图组不同初始释放IFN快速响应南锥体PDDa,b和jbruclins峰值4周5周1(b))并下降到低水平 接近实验尾双螺旋素高度相关 并持续偏向响应PPDA最大响应PPDB最低响应PPDBSICCT测试结果也证实了这一点3(b)显示没有小牛分类错误和PDDa诱导比PDDj和PPDb最大延迟型超敏化反应
3cm3实验3破解Maa感染
实验3重复Maa感染的目的是测量IFN南锥体立即响应后接触并包括IFN南锥体峰值图1(c))PDDa、b和j响应与实验2比较为哑音,但这可能反映不同组小牛使用反应模式一致显示新军快速南锥体4周到5周响应中值响应偏差与PPDa和PPDj并发SICCT响应比实验1和2更清晰与PDJ或PPDb相比,大多数小牛表示对PPDA响应强与SICCT最顶点FN-南锥体响应阶段和前2项实验一样,SICCT测试没有误划分小牛感染状况3(c))
3.4.mycoctiumbovis差分化
ESAT-630码,31号...M.肺结核复杂专用抗原在所有三大实验中最时点测试,以检验其差分潜力并确保PPDb响应被看到1(a),1(b)并1(c)非因先前接触M.bovis系统数据未显示动物实验中没有任何一致响应显示PPDb响应是由于接触地图或Maa生物的交互反作用而不是bTB感染支持使用ESAT-6作为较具体的抗原用于BTB诊断
4级讨论
上文描述的一系列实验显示开发受感染模型,定义接触二非扰动类Micocactria、Map和Maa后免疫响应3,29..两种类型都被认为混淆牛中btb诊断特性21号,23号..使用IFN-南锥体发布解析显示细胞介质对三种管试剂PPDa、PPDb和PPDj开发免疫响应新军南锥体与Maa相比,Truculins接触Map群的启动速度较慢,接触后响应持续较长时间并保持高位后下降峰值maa群可以解释生物重新接触动物免疫系统,从而引出更有效的CMI响应,使生物净化然而,从这些结果看,这一点仍然不确定。
已知小牛受地图感染时,可能有缓慢累进式感染,需要数年才能发展成临床状态5-7..随地图感染进展,牛免疫响应日益暴露于细菌抗原中,结果开发出幽默式和细胞式免疫响应32码..相形之下,感染或接触Maa似乎会触发瞬时免疫响应,而在模型中导致IFN峰值南锥体大约5周感染后发布并随后拒绝相形之下,IFN南锥体响应地图大为后期峰值并保持高位39周
全IFN-南锥体PPD响应大相呼应 )最强IFN南锥体PPDj和PPDa关系最弱者介于PPDa和PPDb之间相关关系与自然受感染群中所见关联性一致(数据未显示)。新军南锥体单小数响应显示,如果测试BTB使用目前北爱尔兰IFN-南锥体程序大都为负数时间点划分小数为正数因此,这对当前诊断策略有潜在重要影响,例如大规模筛选地图受感染区域动物可能导致误辨部分动物M.bovis系统受感染者但在每次实验中,所有动物都可正确识别为bTB负值使用流皮肤测试截取多数动物展示皮肤测试反应偏向PPDA后PPDJ和PPDB这可能是因为在CMI峰值响应时测试
认知方面IFN南锥体使用truclins测试M.bovis系统阳性无任何其他感染证据三十三..很大一部分有可能真正受感染或接触,但部分可能受地图感染。大规模现场研究证明 Johne受感染动物M.bovis系统FNF-南锥体测试,如本研究所建议工作显示使用定义更清晰的抗原可成为分解地图受感染者的有效辅助M.bovis系统受感染动物,例如使用ESAT-6
5级结论
本研究显示PPDa、b和j管际相交性极强,并显示CMI接触Maa和Map后响应动能差异诊断性比较测试对动物接触M.avium复杂生物避免误分类M.bovis系统感染状态这一点特别重要,如果动物接触Maa后很快测试地图实验模型突出显示误辨为M.bovis系统地图受感染牛使用PPDA和PPDb因此,额外专用抗原可能必须纳入未来诊断中,例如ESAT-6PPDa诱导Maa和Map受感染牛的皮肤测试响应,应认真考虑田牛测试的分析和解读以避免误诊断地图感染因此,应努力开发比较测试以查明地图封存动物M.bovis-和maa接触动物使用词形特征诊断
感知感知
作者感谢Adam McGready和VSD TB名词类成员协助执行免疫学解析silin处理细菌学 和VSD动物护理员工这项工作由EUparaTB工具项目(FOOD-CT-2006-023106)部分供资,由Agrisearch(项目VSD-D-42-08)和农业和农村发展部(项目0538)追加供资