抗炎活性艾属寻常的叶子,来自三个不同海拔的尼泊尔

文摘

本研究旨在评估和比较体内慢性抗炎功效,从乙酸乙酯和ethanolic提取的艾属寻常的叶,生长在三个不同海拔在尼泊尔,formalin-induced爪子水肿在瑞士白化病老鼠。水肿是诱导的小鼠爪子管理0.2%福尔马林注入。吲哚美辛被用作标准药物浓度的5毫克/公斤的体重。乙酸乙酯和ethanolic叶萃取精华、浓度的200毫克/公斤和400毫克/公斤,被用作测试药物。标准药物提取都注射福尔马林前30分钟服用。爪厚度测量(0,1,2,3,24日,48岁的福尔马林和72小时后注射,使用游标卡尺。观察到,乙酸乙酯和ethanolic提取的高度表现出显著的抑制爪子水肿( )福尔马林诱导。最大活动显示了400毫克/公斤的植物叶子提取物来自温带,54.05%的爪子水肿抑制,它几乎是类似于标准的抑制药物(56.75%)。此外,ethanolic提取被发现更有效的比乙酸乙酯提取所有的植物样本。结果表明,抗炎效果答:寻常的树叶随海拔高度的增加,这种植物可以作为一个有用的医学治疗慢性炎症。

1。介绍

炎症是哺乳动物细胞/组织的局部保护性反应过敏或化学刺激、伤害和感染。炎症的发展增加各种内源性生物分子水平,包括一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)、前列腺素E2(铂族元素₂),细胞因子(1]。取决于类型的刺激和炎症反应的功效移除受损组织和有害刺激,炎症可能是急性或慢性的(2]。巨噬细胞在炎症的主要防御机制的特点是抗菌药物和细胞信号分子的释放。然而,膨胀通过巨噬细胞释放细胞因子可导致宿主细胞损伤,导致不同的疾病,如风湿、脑炎、肺炎、食管炎、癌症、心脏病、和纤维化(3- - - - - -6]。目前,麻醉剂如阿片类止痛剂或非甾体类抗炎药物如糖皮质激素,水杨酸盐已经被用于疼痛和炎症条件的管理。然而,他们表现出严重不良和毒性作用。此外,小说发展的总体成本的一个合成药物是非常高的。因此,筛选潜在的抗炎药有更少的副作用天然植物来源是另一种方式解决这个问题5]。

艾属寻常的l,also known as mugwort, is a perennial long-stemmed shrub belonging to the family Compositae. It comprises hardy herbs and shrubs known for their volatile oils. It is native to temperate Europe, Asia, and northern Africa, but is also present in North America as an invasive weed [7]。在阿育吠陀,答:寻常的是一个来源的药物“nagdaun毒蛇咬伤的解药。“传统上空中的部分答:寻常的被广泛用作驱虫剂,杀菌,抗痉挛,治疗糖尿病药,抗癫痫,打虫药,antiepilepsy,抗抑郁药(8,9]。根有不同的用途,作为精神神经症的补药,抑郁,自主神经官能症、易怒、烦躁不安、失眠、焦虑。在中国,答:寻常的主要用于艾灸。答:寻常的被认为是刺激血液流动,气在特定的点在皮肤上,有时穴位(10]。的不同部分答:寻常的据报道有广泛的生物活动,如抗菌、抗高血压、抗痉挛药和支气管扩张剂,王亚南,抗抑郁,黄嘌呤氧化酶抑制剂,抗氧化11]。抗炎活性的研究区域变化这种植物尚未进行。因此,本研究旨在进行体内抗炎活性的比较研究答:寻常的从三个不同的地理区域。

2。材料和方法

2.1。化学物质需要

吲哚美辛从共和国购买实验室pvt Ltd .,加德满都。甲醛(热费希尔科学,India Pvt . Ltd .)孟买),乙酸乙酯,乙醇(Hangshu Kangyvan化学、中国),和水与蒸馏水工厂准备在实验室。

2.2。仪器

他们高压釜(s . m .科学仪器(P)有限公司、印度),旋转蒸发器(R-210/215, BUCHI Labortechnik AG)、瑞士),数字资产(ATX224、日本岛津公司公司、菲律宾)、磨床和蒸馏水(DW)植物、干热灭菌器(s . m .科学仪器(P)有限公司、印度),孵化器(s . m .科学仪器(P)有限公司)、冰箱(GL-M492YLG)和超声发生器(INDOSATI科学仪器(P),德里)。

2.3。植物材料

植物部分收集来自三个不同地区的尼泊尔,即Tamnagar, Rupandehi(热带地区,海拔350米),Dhanchaur Arghakhanchi(亚热带地区,高出海平面1829米),和Khalanga Jumla(温带地区,海拔2518米)。植物材料被坎帕沙克Nath先生分类学的确定,Prithivi Narayan校园,布汶大学尼泊尔(识别字母数字(FR-2015/26))与文献比较。凭证标本的鉴定植物被保存在深红色技术学院生药学实验室(凭证标本号:CCT-HRB-2018/169)。植物材料的详细信息收集表1。


收集时间	植物的名字	本地名称	部分使用	收藏的网站

2018年6月	答:寻常的	Tite pati	叶子	Rupandehi、Arghakhanchi Jumla

2.4。植物提取物的制备

工厂部分收集、清理和转换为适当的阴干后细粉。双冷浸渍提取过程是由不同地区200 g的叶子,和1000毫升的乙酸乙酯和乙醇浸泡在不同的锥形烧瓶与偶尔摇晃72小时。液体是紧张和过滤。这个过程是反复双浸渍和滤液混合然后干用旋转真空蒸发器的温度40°C。提取是放置在玻璃小瓶和采掘收益率确定。所有的密封的瓶在4°C到保存在冰箱里。

2.5。动物和伦理批准使用

进行动物实验,瑞士白化小鼠的体重25 - 35 g。所有的老鼠都不断提供标准的饲料和水随意。他们适应内部清洁聚丙烯保持统一的室温(22±1°C),与常规的12/12 h黑暗/光周期直到完成实验。在实验分析之前,所有的动物都适应于实验室条件。实验过程、动物处理和护理进行了尼泊尔据官方伦理指南(12- - - - - -14]。所有实验老鼠35%的股份有限公司₂安乐死在完成分析。实验验证了协议博卡拉大学的机构审查委员会(参考号:130-089-076)。

2.6。急性毒性研究

小鼠急性毒性研究采用的经济合作与发展组织(OECD)指南42515]。共15组瑞士白化病老鼠,每组包含五个老鼠(n= 5),形成。其中,一个是正常对照组和14个测试组。提供的正常对照组用生理盐水和所有测试组提供植物提取物(500、1000和2000毫克/公斤,订单)在10毫升/公斤。任何不良症状和死亡率监测每1 h在接下来6 h和总体重测量1天,治疗后7和14。

2.7。抗炎活性试验

2.7.1。管理测试样本

测试提取被暂停,80年0.5%的补间解决方案(16]。

2.7.2。福尔马林溶液的制备(16]

为此,2毫升的甲醛涌入了100毫升容量瓶和稀释的100毫升用蒸馏水准备2% v / v新鲜的福尔马林溶液。

2.7.3。Formalin-Induced水肿在老鼠的爪子

抗炎活性评价采用先前建立formalin-induced爪子水肿的方法(7,16- - - - - -18]。瑞士白化小鼠分为15组(每组5动物)。动物的所有组注射0.2毫升的2% v / v福尔马林,正确的后爪,准备用蒸馏水。组我动物(正常控制)收到500μL 0.5%的渐变80只。第二组动物(福尔马林控制)收到蒸馏水订单。福尔马林注入之前,30分钟。标准参照组,第三组是鉴于以上水溶液中吲哚美辛(5毫克/公斤),注射福尔马林前30分钟。组IV和V收到汇票ethanolic提取的答:寻常的热带地区,200毫克/公斤和400毫克/公斤渐变80年的0.5%,分别。第七组六世和收到的乙酸乙酯提取物答:寻常的热带地区,200毫克/公斤和400毫克/公斤渐变80年的0.5%,分别。团体第八和第九收到汇票ethanolic提取的答:寻常的的亚热带地区,200毫克/公斤和400毫克/公斤渐变80年的0.5%,分别。组X和XI收到汇票乙酸乙酯提取的一个。寻常的亚热带地区,200毫克/公斤和400毫克/公斤80渐变的0.5%。组十二和十三收到订单。ethanolic提取的答:寻常的的温带地区,200毫克/公斤和400毫克/公斤渐变80年的0.5%,分别。组十四和十五收到汇票乙酸乙酯提取的答:寻常的的温带地区,200毫克/公斤和400毫克/公斤渐变80年的0.5%,分别。

所有的精华都注射福尔马林前30分钟服用。治疗持续连续三天在一个固定的时间,但只在第一天注射福尔马林。老鼠的爪子卷是用游标卡尺测量和观察到的1 h, 2小时,3 h, 24小时、48小时、72 h后注射福尔马林。水肿的抑制百分比计算如下:

2.8。统计分析

计算的平均水肿消炎是基于数值数据的表达意味着±SD和被双尾学生的评估t以及使用Microsoft excel。结果与对照组相比。一个被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。萃取屈服值

的萃取率答:寻常的树叶在乙酸乙酯和乙醇不同气候区域的表2。


序列号	植物	位置	萃取率(%)
序列号	植物	位置	乙醇提取物(%)	乙酸乙酯提取物(%)

1	答:寻常的	Tamnar, Rupandehi	6.64	9.21
2	答:寻常的	Dhanchaur, Arghakhanchi	6.62	8.17
3	答:寻常的	Khalanga, Jumla	6.51	8.13

3.2。急性毒性试验

持续的监控后实验动物,没有观察到毒性。没有一个团体报道后死亡率不同剂量(0.2,0.4,0.8,1克/公斤)的植物提取摄入。毒性症状如坐在角落里和爪子舔只沉淀的剂量1000毫克/公斤体重。

3.3。抗炎活性

表3和图1引发的后果抗炎性质,通过口头的乙酸乙酯和ethanolic分数答:寻常的三个不同海拔地区,相比标准药物吲哚美辛,formalin-induced老鼠爪子水肿。注射福尔马林诱发小鼠进步爪子水肿达到最大值72 h。在正常对照组的情况下我,爪子被发现的厚度几乎不变72 h,而福尔马林对照组二世展出爪子的厚度的增加每小时是重要的。在所有团体治疗的标准药物和植物提取物,观察爪厚度降低连续口服后立即。减少水肿与时间成比例增加。ethanolic提取物的抗炎活性被发现更有效的比乙酸乙酯提取所有工厂样品在不同海拔的剂量依赖性的方式。如图2,最高的活动显示ethanolic提取的答:寻常的从温带地区。从时间进程曲线(48和72小时),AVTEAE治疗(400毫克/公斤)显示一个非凡的效果( )与最大抑制炎症活动54.05%在48和72 h,这几乎是类似于标准药物吲哚美辛。除此之外,管理的乙酸乙酯部分(400毫克/公斤)在同一高度表现出温和的效果( )最大抑制炎症活动48.64%在48和72 h。吲哚美辛(5毫克/公斤)执行最重要和最大抗炎效果56.76%在48和72 h。同样,从亚热带地区ethanolic叶提取物(AVSTREE)和热带地区(AVTEE)显示爪子水肿抑制了51.35%和45.94%,分别在48和72 h。的抗炎反应的比较答:寻常的ethanolic和乙酸乙酯提取,从三个不同的海拔,如图2通过绘制一个条形图,所有提取得到的剂量400毫克/公斤。


组	剂量(毫升/公斤)的订单。	爪厚度变化(mm)±SD抑制(%)
组	剂量(毫升/公斤)的订单。	0小时	1小时	2小时	3个小时	24小时	48小时	72小时

I-normal控制	500年µl	1.5±0.01	1.5±0.02	1.5±0.02	1.5±0.01	1.5±0.01	1.6±0.02	1.6±0.02

II-formalin控制	2毫升/公斤	2.4±0.03	4.6±0.05	4.6±0.05,	4.6±0.05,	4.0±0.04	3.7±0.04	3.7±0.04

III-indomethacin	5毫克/公斤	1.7±0.04 29.16±1.6%	3.0±0.03 34.78±0.6%	2.7±0.08 41.30±1.7%	2.6±0.03 43.48±0.6%	2.1±0.05 47.50±1.2%	1.6±0.05 56.75±1.3%	1.6±0.06 56.75±1.6%

IV-AVTREE	200毫克/公斤	2.2±0.05 8.33±2.0%	4.3±0.07 6.52±1.5%	3.7±0.05 19.56±1.0%	3.2±0.03 30.43±0.6%	2.7±0.06 32.50±1.5%	2.2±0.05 40.54±1.3%	2.2±0.07 40.54±1.9%

V-AVTREE	400毫克/公斤	2.0±0.07 16.66±2.9%	3.54±0.04 23.04±0.8%	3.2±0.09 30.43±1.9%	3.0±0.06 34.78±1.3%	2.5±0.08 37.50±2.0%	2.0±0.05 45.94±1.3%	2.0±0.09 45.94±2.4%

VI-AVTREAE	200毫克/公斤	2.4±0.08 0±0.8%	4.5±0.05 2.17±1.0%	4.4±0.06 4.35±1.3%	3.4±0.02 26.08±0.4%	3.0±0.07 25.0±1.7%	2.5±0.07 32.43±1.9%	2.3±0.08 37.83±2.1%

VII-AVTREAE	400毫克/公斤	2.2±0.05 8.33±2.0%	4.3±0.02 6.52±0.4%	3.5±0.07 23.91±1.5%	3.2±0.06 30.43±1.3%	2.8±0.06 30.0±1.5%	2.2±0.06 40.54±1.6%	2.2±0.05 40.54±1.3%

VIII-AVSTREE	200毫克/公斤	2.0±0.01 16.66±0.4%	3.7±0.03 19.56±0.6%	3.2±0.03 30.43±0.6%	3.0±0.07 34.78±1.5%	2.5±0.05 37.5±1.2%	2.0±0.07 45.94±1.9%	2.0±0.05 45.94±1.3%

IX-AVSTREE	400毫克/公斤	1.8±0.02 25.0±0.8%	3.3±0.05 28.26±1.0%	3.0±0.03 34.78±0.6%	2.8±0.06 39.13±1.3%	2.3±0.04 42.5±1.0%	1.8±0.07 51.35±1.9%	1.8±0.03 51.35±0.8%

X-AVSTREAE	200毫克/公斤	2.0±0.05 16.66±2.0%	4.0±0.07 13.04±1.5%	3.5±0.07 23.91±1.5%	3.2±0.03 30.43±0.6%	2.7±0.06 32.5±1.5%	2.5±0.08 32.43±2.2%	2.1±0.05 43.24±1.3%

XI-AVSTREAE	400毫克/公斤	1.8±0.03 25.0±1.2%	3.7±0.04 19.56±0.9%	3.2±0.03 30.43±0.6%	3.0±0.03 34.78±0.6%	2.5±0.04 37.5±1.00%	2.3±0.09 37.84±2.4%	2.0±0.08 45.94±2.2%

XII-AVTEE	200毫克/公斤	1.9±0.01 20.83±0.4%	3.6±0.07 21.74±1.5%	3.2±0.01 30.43±0.2%	3.0±0.02 34.78±0.4%	2.5±0.06 37.5±1.5%	1.9±0.06 48.64±1.6%	1.9±0.03 48.64±0.8%

XIII-AVTEE	400毫克/公斤	1.7±0.06 29.16±2.5%	3.2±0.06, 30.43±1.3%	2.9±0.03 36.95±0.6%	2.8±0.04 39.13±1.3%	2.2±0.09 45.0±2.2%	1.7±0.05 54.05±1.3%	1.7±0.04 54.05±1.1%

XIV-AVTEAE	200毫克/公斤	2.0±0.01 16.66±0.4%	3.9±0.02 15.22±0.4%	3.4±0.05 26.08±1.0%	3.0±0.03 34.78±0.6%	2.6±0.04 35.0±1.0%	2.4±0.04 35.13±1.1%	2.0±0.03 45.94±0.8%

XV-AVTEAE	400毫克/公斤	1.8±0.02 25.0±0.8%	3.5±0.01 23.91±0.2%	3.2±0.02 30.43±0.4%	2.9±0.02 36.95±0.4%	2.5±0.03 37.5±1.2%	2.1±0.04 43.24±1.1%	1.9±0.04 48.64±1.1%

所有的结果都表示为意味着±扫描电镜;n= 5。所有的值都显著相比,福尔马林。AVTREE:答:寻常的热带ethanolic提取AVTREAE:答:寻常的热带乙酸乙酯提取物、AVSTREE:答:寻常的亚热带ethanolic提取、AVSTREAE:答:寻常的亚热带乙酸乙酯提取物、AVTEE:答:寻常的温带ethanolic提取,AVTEAE:答:寻常的温和的乙酸乙酯提取物。

4所示。讨论

爪子水肿,诱发小鼠福尔马林的管理,给人类关节炎密切的相似之处。因此,它被认为是一个最合适的技术来筛选可能的药物(慢性炎症16]。福尔马林诱发最初的急性炎性浸润到老鼠的颞下颌关节(颞下颌关节),后来发展成慢性渗透。此外,它会导致持续的细胞增殖和增生的滑膜衬里,最终导致形成的绒毛地区(19]。福尔马林诱发炎症的机制是两相的。在第一阶段,它直接影响诱发神经性疼痛而第二阶段与著名的炎性反应由5 -羟色胺、缓激肽、前列腺素、组胺,和细胞因子(2]。同时,实质性影响的荷尔蒙效应formalin-induced爪子水肿尚未报道(5,16),它允许我们使用瑞士白化小鼠的性在这个研究。在这个实验中,formalin-induced爪子水肿模型来探索和比较抗炎效果的寻常的叶在不同的海拔。如表所示3和图1管理的乙酸乙酯和ethanolic提取物抑制formalin-induced爪子水肿的进步,取决于剂量,显示48和72小时的最大影响。在先前的研究中,治疗的效果答:寻常的叶对急性和亚急性炎症过程已经证明通过使用卡拉胶和棉花球肉芽肿诱导炎症大鼠模型,分别是(5,7]。然而,这项研究对慢性炎症的作用尚未完成。天线部分的methanolic提取答:寻常的发现抑制carrageenan-induced老鼠爪子水肿74%浓度的800毫克/公斤3 h后(7]。同样,methanolic叶提取物在400毫克/公斤的浓度表现出抑制体重的55.3%和66.06%干态和湿棉花球,分别是(7]。根据以前的报告,答:寻常的提取paraoxonase-1酶的活性增加。Paraoxonase-1是一种亲脂性的抗氧化剂成分,从而防止脂质过氧化作用,其血清浓度在炎症有所下降。此外,它还可以降低血清肿瘤坏死因子水平的增加α(20.]。不同种类的生物活性化合物如类黄酮、倍半萜类、精油、丹宁酸、酚类、皂甙存在于答:寻常的可能会产生一种抗炎反应通过抑制前列腺素合成的酶的活性(7]。已经证实,类黄酮可以抑制诱导一氧化氮合酶同分异构体的声明,脂氧合酶,环氧酶、关键酶,参与形成的各种炎症介质(21]。除此之外,他们可以竞争性结合ATP的催化部位,防止监管酶蛋白激酶的活动,减少炎症反应(22]。皂甙可以展示他们的抗炎作用,防止血管舒缓激肽的生物学效应或其他炎症介质,以及前列腺素合成途径的改变(23]。同样,萜类化合物可以抑制炎症反应通过阻碍活动的肿瘤坏死因子(TNF)α环氧酶酶,前列腺素合成、细胞因子(- 2、il - 4和il - 6)和诱导一氧化氮合酶酶(24]。此外,单宁和倍半萜类化合物的抗炎效果,大量出现在答:寻常的,是抑制环氧合酶(cox - 2)与酶(25,26]。此外,这还需要进一步的先进的研究在分子水平上建立抗炎作用的确切机制。

主要生物活性化合物存在于methanolic和ethanolic提取的答:寻常的是绿原酸的不同衍生品(dicaffeoylquinic酸异构体),类黄酮(衍生品的槲皮素、芦丁和山柰酚)、原儿茶酸、苹果酸、奎尼酸、木酚素、萜类化合物(青蒿酸葡萄糖苷衍生物)(27,28),等等。这些生物活性物质提取乙醇的比例会相对高与乙酸乙酯相比,由于乙醇的极性高于乙酸乙酯(29日]。这可能是可能的更高的抗炎效果的原因答:寻常的ethanolic提取相比,其乙酸乙酯提取物。

没有进行了大量的研究工作,对浓度变化的植物化学成分和药理作用答:寻常的,生长在不同的海拔。在我们的研究中,最低的活动报道的植物低海拔高度的增加而增加。各种因素如遗传、成长阶段,土壤条件,器官形成,解剖部分可能影响药用植物植物化学物质的定量组成,因此他们的药理活性30.,31日]。不同的天气条件和土壤的性质,植物收集(如高度变化),也带来植物化学的成分和浓度的差异(30.- - - - - -33]。精油是主要的生物活性成分存在于所有属的物种艾。精油中出现的数量和质量艾物种总是受海拔和地理条件影响(31日]。根据Abad et al ., 2012年工厂艾果生长在不同海拔的喜马偕尔邦,印度主要精油的浓度存在于它与海拔的变化显示显著的变化。的浓度樟脑、冰片、石竹烯在高最大,中间,和低海拔地区,分别34]。强效抗炎化合物樟脑(35,36在是礼物答:寻常的也(37]。樟脑的抗炎作用的机制是由于其抑制作用生产interleukin-4,白介素2,TNF -α(38]。它可能引起的潜在抑制促炎细胞因子的生产像formyl-methionine-leucine-phenylalanine趋化因子(fMLP),激活多个炎症的信号级联35,39]。在先前的研究中,精油的含量艾herba-alba研究了从四个不同的高度;报道了最大数量的植物样本在海拔最高的(40]。在另一项研究的精油艾果、植物在500米的高度α侧柏酮作为主要化合物,但它是在一个非常小的金额在高海拔植物收集。相比之下,L-linalool是一个主要组件的植物在海拔2000米的地方,而在非常低的浓度检测的低海拔植物(41]。L-Linalool也出现在答:寻常的(36),它是一种强有力的抗炎化合物。这是一个竞争对手的n -甲基- d(门冬氨酸)受体,从而减弱行为在大鼠痛觉过敏和它也可以防止谷氨酸释放的可能的行动,以应对有害躯体刺激(42]。为艾苦艾不同植物的细胞毒性效应在高海拔地区被发现增加了20% - -30%相比,高度较低。植物成分的总量变化从一个到另一个高度,并相应的药理活性植物会改变(43]。从所有这些事实,我们可以得出这样的结论:答:寻常的与高度抗炎化合物浓度的增加,最终导致更高的活动与低海拔地区相比。

5。结论

在这项研究中,的效力答:寻常的叶子针对慢性炎症是合理地使用一个有效的动物实验模型。此外,植物生长在不同海拔地区展览药理作用在不同程度上,也许由于其植物化学的变化。简单的可用性和重要力量答:寻常的用最小的副作用会使这种植物一个适当的候选人小说发展的消炎药。然而,需要进行大规模调查确认提取的效果通过临床前和临床试验的说明确切的机制在分子水平上。

数据可用性

所有的数据用于支持本研究的结果可从掠夺班达里要求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Jitendra Pandey和Sushma尔等同样这项工作。

确认

作者要感谢深红色技术学院Butwal-11, Devinagar, Rupandehi,尼泊尔,技术支持。

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