组织病理学发现Immunohistological肉芽肿组织的染色反应与结核病有关

文摘

目的。结核分枝杆菌(MTB)的组织学诊断仍然是一个诊断挑战,尽管不同的方法。免疫组织化学(包含IHC)不仅可以证实肉芽肿组织参与,但也可以证明MTB抗原immunolocalization。本研究试图澄清与pAbBCG结核分枝杆菌的免疫组织化学染色的细节。材料/方法。23 Ziehl-Neelsen结核肉芽肿组织样本进行了研究,证实免疫组织化学(包含IHC)与pAbBCG染色。样本选择的档案部门的病理学、国家研究所的肺结核和肺部疾病,德黑兰,伊朗。结果。在所有样品中包含IHC染色呈阳性,而Ziehl-Neelsen是积极的在9例23 (39.1%)。组织类型是胸膜组织、淋巴结和肺组织。包含IHC显示积极的粗颗粒状细胞质和圆的,支离破碎的杆状的染色。在这项研究中,上皮细胞显示肉芽肿的外围染色更积极而非肉芽肿的中心。也有阳性染色在内皮细胞,成纤维细胞,浆细胞,淋巴细胞,巨噬细胞肉芽肿。结论。考虑的标准积极的免疫组织化学染色的结核肉芽肿反应,这种染色不仅突出了分枝杆菌组织诊断抗原的存在,而且还将形态学定位分布在不同的细胞。

1。介绍

组织学诊断结核病一直是解剖病理学的一个重要问题。另一方面,肺外结核包括10 - 15%的结核分枝杆菌感染。后,艾滋病毒流行率增加,肺外结核也在不断增加(1,2]。

考虑到限制的敏感性和特异性Ziehl-Neelsen染色(3)、分枝杆菌评估、分枝杆菌培养,分子和血清学技术(4- - - - - -6],histomorphological分析似乎是唯一可行的技术领域的诊断结核病在一些病人7,8]。

肉芽肿反应,在某些情况下,nongranulomatous反应如泡沫状巨噬细胞的存在(9]或分枝杆菌梭形细胞pseudotumour [10在某些类型的结核分枝杆菌感染表明只有在结核杆菌的存在已被证实的组织。最近,它已经表明PCR结果是可以接受的只有结核杆菌的存在可以证实组织(11]。

检测串珠杆菌(通常观察到的坏死区)Ziehl-Neelsen染色的组织标本(12]表明协会的组织与分枝杆菌感染的反应。然而,Ziehl-Neelsen污点的敏感度相对较低为结核分枝杆菌检测灵敏度范围0 - 44%的感染(13]。此外,存在一个最小10⁴杆菌/每个幻灯片需要达到诊断。

考虑Ziehl-Neelsen染色的机理及其敏感性和特异性较低,这种染色技术有限的诊断价值和能力不足的病理生理学评估Mtb抗原的组织。寻找分枝杆菌抗原使用包含IHC是一种公认的技术和特殊的应用研究项目。这项技术是基于生产各种多克隆和单克隆抗体在组织反应。几项研究已经报道的敏感性,这种技术可以检测分枝杆菌抗原的100%到64。有限数量的研究在深度讨论积极组织染色法对Mtb [14]。然而,这些技术只简要提到的病理学参考书和教材不提供形态学评估标准对包含IHC染色的肉芽肿反应。

最近的研究变量形态学的结核杆菌强调包含IHC的重要性在寻找不同的结核抗原的组织形态学变化。

本研究比较了两种技术的敏感性和特异性Ziehl-Neelsen结核病的诊断和包含IHC染色领域。也评估价值的准确的描述包含IHC染色与pAbBCG组织肉芽肿反应由于结核病诊断方面,immunolocalization,结核杆菌的形态学技术。

2。材料和方法

共有50个病人同时接受活检和组织文化与2005 - 2009年期间积极组织培养Mtb MRC部门选择Masih Daneshvari医院。使用这个医院病理部门的档案,这是一个转诊中心病理肺部病变,他走时的幻灯片所选择的病人进行了评估。例少量肉芽肿病变或组织体积被排除在研究之外。最终,23日23结核病患者足够的组织的组织样本的数量和肉芽肿是选择不同的染色技术。从病理学特点和类型的样本检索报告。石蜡包埋块染色使用Ziehl-Neelsen和包含IHC染色。7控制组织的病理标本也从档案中选择部门。这些标本由于异物肉芽肿反应,真菌或包虫囊肿。这些标本也染色类似于上述样本。Mycobacteriology Masih Daneshvari医院研究中心的国家参考中心和教育合作中心是世卫组织东地中海区域办事处。 The study conducted after Masih Daneshvari Hospital ethic committee.

免疫组织化学染色,3 - 4微米部分从组织块和孵化削减在室温下过夜。deparaffinization和与99 - 70%酒精固定后,标本与蒸馏水冲洗和PBS。为了消除内源性过氧化物酶、甲醇和3% H₂O₂被用于10分钟。

检索和冷却后的组织,他们清洗用蒸馏水和PBS和抗血清标本被封锁。抗体制备与渐变20 +三羟甲基氨基甲烷(默克公司1.088387)液1:1000稀释。在第一阶段,主要抗体(DAKO,代码没有。B 0124) (pAbBCG)是在室温下反应在潮湿环境中30分钟后,冲洗PBS的标本,和二级抗体(想象K5007)补充道。与发色体染色后,苏木精是用作染料的对比。对于每一个染色,一个负面的和一个积极的控制也被考虑。染色是细颗粒状细胞质,粗颗粒胞质和芽孢杆菌染色。不同区域和细胞组织标本进行评估;类型的肉芽肿(有或没有坏死)和存在multi-nuclear巨头细胞,上皮细胞,坏死区,淋巴细胞,浆细胞,peri-granuloma巨噬细胞和成纤维细胞,perigranuloma内皮细胞被初级和高级病理学家评估。染色阳性染色被定义为上皮样细胞肉芽肿的10%。 For other types of cells, any form of staining was considered as positive.

根据标准协议执行Ziehl-Neelsen染色。总之,组织标本deparaffinized和冲洗连续稀释的酒精(乙醇96%到70%)。热固定后,标本用carbol洋红4分钟和HCL孵化。对比染色是20年代使用亮绿。冲洗后,样品被允许在室温下干燥。

3所示。结果

共有23例进行了评估,其中17(73.9%)是男性。类型的组织在替补的情况下是胸膜(9例,39.1%),淋巴结(颈、腋窝和胸)(9例,39.1%)和肺组织(5例,21.7%)。肉芽肿,在形式的坏死性肉芽肿组织不善,是9例(39.1%),坏死组织肉芽肿在5例(21.7%)、坏死性nonpoorly组织肉芽肿4例(17.3%),和non-necrotizing组织肉芽肿中观察到3例(13%)。在所有活检样本,包含IHC染色产生积极的结果细和粗颗粒类上皮细胞胞质和圆杆状的染色(数字1和2)。其他细胞的染色也积极的在不同百分比。这些形状变量从分散的杆菌抗原灰尘。卵圆形,圆形的形状也被观察到。肉芽肿反应在对照组(这都是non-TB),包含IHC染色只是形式的细颗粒类上皮细胞胞质染色和焦染色也出现在其他细胞外的肉芽肿。粗颗粒状胞质染色、分散或圆杆状的染色,在任何情况下没有观察到。Ziehl-Neelsen染色的控制情况下是负面的。在测试病人,9 23(39.1%)有积极的Ziehl-Neelsen染色。表1显示了积极成果,比较pAbBCG和Ziehl-Neelsen的敏感性和特异性。

在所有23例,粗颗粒胞质染色和染色完整杆菌较低程度的细颗粒在上皮细胞胞质染色观察。根据细胞类型,积极包含IHC染色观察内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞、巨细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、浆细胞,2(8.7%),19例(82.6%),3例(13%),5例(21.7%),1例(4.3%),8例(34.8%),1例(4.3%),分别为(图3)。坏死区也积极在包含IHC染色5例(21.7%)。在这项研究中,类上皮细胞肉芽肿更积极的外围染色比中心或相邻的上皮细胞坏死区。

4所示。讨论

Ziehl-Neelsen染色方法的诊断结核病是正例确诊结核病感染病例的三分之一。检测组织幻灯片的结核病仍然是基于组织模式的肉芽肿有几个鉴别诊断具有不同的治疗13]。

分枝杆菌抗原和组织形态可以用包含IHC评估技术。消除背景通过适当的技术可以提供100%的特异性如果粗颗粒状细胞质和芽孢杆菌染色。这些结果具有可比性的一项研究的结果高尔和Budhwar报告64 - 100%敏感性为包含IHC和0 - 44%敏感性Ziehl-Neelsen染色(14]。

此外,单克隆抗体测试的结果(15)也显示100%的敏感性,这是符合我们的结果。本协议似乎是由于适当的染色和准确的考虑阳性染色结果。

为了达到适当的染色技术,必须注意稀释和包含IHC技术与多克隆抗体。如果没有足够的注意,细颗粒染色背景会导致假阳性反应提供病理学家不熟悉这项技术。这是在使用这种类型的抗体的主要限制。然而,以防积极性的粗颗粒胞质染色法染色,染色的分散bacillia或彩色杆菌形式,百分比的特异性染色技术是高度增加。应该强调,粗颗粒胞质染色或积极彩色支离破碎细菌中,并未观察到任何程度的控制样本。这些发现符合Madhu高尔和Budhwar,描述小杆状的碎片和抗原粉尘14]。

另一方面,新的发现表明,形态修改结节杆菌的圆形或中间形状甚至在组织可以活的结核杆菌。这个问题已经被很好地描述Velayati et al。16]。在目前的研究中,彩色碎片和其他形状表明结核杆菌在组织的形态学改变。

另一个发现是结核杆菌的存在碎片在巨噬细胞、成纤维细胞、浆细胞、淋巴细胞甚至内皮细胞肉芽肿外表明提到细胞在结核histopathogenesis发挥积极作用。

类似的研究(15]提到分枝杆菌的存在和胞内分枝杆菌材料外的肉芽肿,甚至在巨噬细胞和淋巴细胞碎片在肉芽肿。最近的研究也表明内皮细胞在免疫组织积极作用的反应(17]。此外,浆细胞的作用[18和成纤维细胞19)与结核病的主要细胞细胞介导的免疫反应是一个讨论的问题。

因此,除了积极的淋巴细胞的存在结核杆菌抗原与pAbBCG包含IHC染色,中唯一重要的是我们的研究揭示这些抗原的存在在浆细胞、内皮细胞和成纤维细胞。这个问题需要进一步调查的结核病发病机制。

Ziehl-Neelsen染色灵敏度较低,需要完整的细菌的存在。Logani et al。10)表明,包含IHC染色与pAbBCG产生积极结果即使在组织10杆菌/幻灯片。因此,这项技术可以应用甚至在少量的细菌的情况下由于任何原因(如在paucibacillary肺外结核病)。这种技术可用于结核感染和艾滋病毒的主要阶段作为一个常规病理测试。

我们的研究表明,IHC技术具有较高的敏感性和特异性。它还显示本地化含有结核杆菌的感染结核分枝杆菌的细胞或细胞抗原。它在某种程度上揭示了传播结核杆菌及其在组织抗原。在这项研究中,类上皮细胞肉芽肿的外围是染色更积极比上皮细胞肉芽肿或相邻的中心坏死区。在组织中使用anti-MPT64影响结核肉芽肿,Purohit et al。15)发现上皮细胞坏死区以外的显示比细胞坏死区域内更大的积极性。这一发现与Ziehl-Neelsen染色,主要揭示了完整的细菌的中心坏死区。

这项研究有一些局限性。首先,我们选择23例来自50个标本,文化结核分枝杆菌阳性;因此,研究偏见准确显示敏感性和特异性。其次,pAbBCG结核分枝杆菌多克隆抗体为复杂。虽然我们与Ziehl-Neelsen相比该方法的敏感性和特异性染色,研究的目的是说明immunolocalization Mtb Ag)用于诊断或研究领域,没有对比敏感性与特异性。进一步的研究应该进行可疑组织参与Mtb杆菌通过包含IHC和单克隆抗体的使用。

此外,病理学家必须充分熟悉染色模式,消除背景染色,和类型的选定的抗体。这个方法尤其重要用于结核病高发的国家技术与组织标本的早期诊断价值。在早期诊断,这种技术可以减少相关并发症的发病率和死亡率,降低利率由于结核误诊和虐待。

利益冲突

本研究中没有利益冲突。

引用

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