结核分枝杆菌耐药性的模式从肺结核病人隔离

文摘

背景。结核病是一个全球性的流行病。所有结核病控制项目不成功是由于多药耐药性的出现结核分枝杆菌菌株。本研究的目的是检测的速度MDR-MTB印度的一部分。方法。一百三十年结核分枝杆菌临床分离菌株患者治疗和MPT64抗原检测确认为MTB的进行药敏检测对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇MBBact自动化系统。结果。32是mdr (25.61%)。31.2%,28%,17.6%,21.6%是耐异烟肼,RIF、乙胺丁醇、链霉素,分别。耐异烟肼或利福平是20.8%和13.88%,分别。异烟肼和利福平耐药性隔离在18.05%。结论。耐药性率高的病人之前,谁一直在不规则治疗。

1。介绍

结核病死亡的第二大原因是全球传染病在人类免疫缺陷病毒(HIV)。尽管免费供应的药物,在2011年全球140万结核病死亡发生。最近,世界卫生组织估计,3.7%的耐多药结核病例。耐多药结核病全球平均利率是20%。大约9%的这些病例也对至少一个注射二线抗结核的药物。这些菌株被称为广泛耐药结核病(XDR)情况下(1]。在二十世纪中期,肺结核率在欧洲和北美下降在一定程度上,它被认为是彻底根除。卫生保健提供者开始宣布结核病是根除。结核病疗养院被关闭。但结核分枝杆菌反弹在1980年代复仇和传播世界各地。邪恶的结核病和艾滋病之间的联系进一步不仅结核病率,而且死亡率增加。结核分枝杆菌的耐药性(博士)是一个人造的问题。违约的病人,药物质量差和缺乏认识导致结核病管理的严峻现状。1993年,增加患的报告指出,从美国2)和世卫组织宣布结核病全球紧急(3]。

谁是千禧年发展目标在2015年前减少结核病已经失败了。结核分枝杆菌的耐药性是人造的,是次优方案的结果和治疗中断(4]。MTB菌株表现出耐异烟肼和利福平,两个主要的一线药物,被指定为患菌株。这些需要长期治疗耐多药菌株使用二线药物都是剧毒和不那么有效5,6]。世卫组织与国际防痨和肺部疾病联盟(IUATLD)于1990年启动一个全球结核病监测计划采取的全球耐药结核患病率打开全球监测中心作为国家推荐实验室结核病(srl) [7]。这些中心的责任是患结核分枝杆菌的耐药性情况数据收集两种类型,主要或天生的阻力和次要或获得性耐药。获得性耐药是由于很多原因,违约的病人是一个原因。结核分枝杆菌的主要阻力和获得性耐药菌株是结核病控制项目有效性的指标(过去的和正在进行的)。分布和耐多药和广泛耐药结核病率不均匀。他们在不同的地方,不同地区和国家。这是第一个研究试图检测结核分枝杆菌的体外耐药模式隔离覆盖人口十数百万使用MBBacT自动化培养和药敏测试系统。

2。材料和方法

2.1。研究背景

本研究在js教学医院完成,迈索尔,卡纳塔克邦,这是一个推荐进行DST中心从2011年4月到2012年5月。

2.2。研究人群

130例痰涂片阳性病例20岁及以上包括病例20岁以下和痰涂片阴性病例被排除在外。所有这些以前治疗130例结核病中心然后被js分枝杆菌培养和药敏测试。这些主要包括患者治疗在这个中心或其他健康中心从邻国实现直接观察治疗患者(点)策略或监督下由私人从业者。大多数的私人从业者并不遵循RNTCP DST指南,因此患者复发或违约(历史的以前的治疗)或一直痰后积极≥5 m的DST ATT被称为。约104(80%)例失败,13(10%)复发,剩余13(10%)治疗后违约。患者的痰样本收集开始前再处理。

清晨咯血痰样本收集到无菌容器连续两天。涂片所收集到的样本和染色制成Ziehl Neelsen(锌)染色。抗酸杆菌涂片筛选(AFB)和积极的涂片分级按修订后的国家结核病控制规划(RNTCP)指南8]。

2.3。痰标本的处理的方法的修改彼托夫

5毫升的痰标本被转移到离心管和双无菌4%氢氧化钠(氢氧化钠)的体积增加了无菌。这是混合好,放在孵化器在37°C 15分钟。20分钟后,离心管从孵化器和15毫升无菌蒸馏水(SDW)补充道。然后在3000离心机g 15分钟。上清液被丢弃的慢慢进一个容器有5%苯酚溶液。颗粒被SDW在3000日圆g 15分钟和上层的丢弃。沉积物后来用于接种到MBBacT培养瓶。

2.4。MBBacT自动化系统

原则:如果在测试样品微生物存在,有限公司₂生产生物代谢基质的培养基。颜色的气体渗透传感器安装底部的每个培养瓶改为亮绿色/黄色。

2.5。议员培养瓶

它包含10毫升的媒体和一个内部传感器,检测有限公司₂作为微生物的增长指标。

2.6。MBBacT抗生素补充装备

它由抗生素补充和调整液体。抗生素补充与10毫升的重组调整液前使用。一旦重组,它有一个7天的保质期。调整液包含组件以确保最佳的增长分枝杆菌在痰液样本。MBBacT文化瓶子和抗生素补充装备是冷藏(2 - 8°C),平衡至室温(30分钟)之前使用。

2.7。接种

议员培养瓶消毒酒精垫和被允许干燥。无菌0.5毫升的重组抗生素补充添加到每个培养瓶。粉红色色调在中表明,调整液已经添加成功。0.5毫升氢氧化钠净化痰样本接种和加载到工具。

2.8。解释

在萎靡不振的仪表显示积极的瓶子时,锌涂片检测空军基地完成。如果nonmycobacterial生物被克染色,整个瓶子的内容是通过另一个净化再生过程和接种到新的培养瓶或丢弃,文化的另一个标本。瓶标记-只有在42天。接种MBBacT文化瓶热压处理过的前处理。

2.9。结核分枝杆菌的鉴定

结核分枝杆菌的鉴定是由抗原物质MPT64检测试纸检测测试,由SD Bioline制造、韩国(9]。

2.10。SD Bioline结核病Ag MPT64

鼠单克隆anti-MPT64固定化在硝化纤维膜作为捕获材料(测试线)。胶体金颗粒被用于抗原捕获和检测到一个三明治类型分析。只有控制带显示阴性结果的存在。2彩色的乐队在结果窗口中,无论哪一个乐队最先出现,表明一个积极的结果。如果控制乐队是不可见的,测试是无效的(9]。

2.11。DST在MBBacT

处理AST:比例方法用于确定DST按RNTCP指南(8]。MTB H37Rv应变作为控制压力。六瓶过程被要求为每个MBBacT阳性样本。四瓶贴上,我,R, E(链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇)。一个瓶子贴上直接控制(DC)和其他比例控制(PC)。0.5毫升的恢复流体(包含营养增强的增长分枝杆菌)被添加到所有六瓶无菌。0.5毫升的相应的抗生素被添加到流程瓶贴上,我,R, E无菌。增加了0.5毫升无菌蒸馏直接控制和比例控制无菌。

剂来源:0.5毫升的标记MBBacT积极培养瓶被称为种子瓶。这对AST“种子”瓶被处理。

所有药物都是化学纯粉形式,存储在干燥器−20°C作为推荐的制造商(HiMedia)。药物浓度使用异烟肼0.2 mg / L, RIF 40 mg / L, EMB 2 mg / L, SM 3 mg / L和溶解在去离子水。股票的解决方案都是消毒0.22通过膜过滤μ米孔隙大小和存储在小整除−80°C。冷冻解冻后立即用药物解决方案,其余都被丢弃而不再存储在冰箱里。准备工作的解决方案是刚从股票的解决方案。

2.12。培养液的准备包含瓶子和直接控制的药物

种子瓶涡团。3毫升的培养液从这个瓶子被撤回到无菌宝石瓶,2 - 3毫米的玻璃珠。打破是涡团,标准化1 mac Farland。0.5毫升标准化剂添加到流程的瓶子贴上年代,我,R, E和无菌直接控制。

2.13。比例控制培养液的准备

0.1毫升的培养液是取自积极MBBacT瓶和添加到9.9毫升无菌蒸馏水稀释(1/100)。0.5毫升剂加入比例控制瓶无菌。瓶子被加载到MBBacT。

2.14。阅读和解释的结果

当仪器表示积极的瓶子,瓶子被根据过程。测试是无效的,如果直流和电脑没有标记阳性15天内。如果2天内标记阳性或更少,那么污染或快速增长的空军基地被怀疑这瓶亚文化,如果需要重复进行了检测。如果确定直流和PC正1天内对方就表示,1/100稀释不能正常完成。

如果包含瓶子的抗生素标记阳性后PC瓶,那么测试生物被认为是敏感标记积极提供直流瓶子。如果包含瓶子的抗生素标记阳性在电脑前瓶子,然后提供的测试生物被认为是抗直流瓶标记阳性。

数据录入和分析进行了使用SPSS版本17。x平方分布和比例无论必要的。值< 0.05被认为是具有统计学意义。研究计划是经过医学教师伦理审查委员会批准。

3所示。结果

130例痰涂片阳性病例,78人(60%)是男性,52人(40%)是女性。130隔离,1(0.76%)被污染和1(0.76%)没有产量的增长分枝杆菌。文化通过MBBacT方法的平均周转时间是5到7天。所有剩余128隔离被确定为MTB MPT64抗原检测试验,并提出对陛下DST药物。DST在3 128分离结果无效。

表1:在剩余125隔离,72(57.6%)对一个或更多的药物。RIF耐异烟肼、EMB和SM是31.2%,28%,17.6%,和21.6%,分别为(,CI 95%)。

表2显示了72耐药分离株的耐药模式。单一耐药在31(25.61%),任何两个22(18.18%)的耐药性,任何三个耐药性14(11.57%),和所有四个耐药性在5(4.13%)被发现。MDR在32例(25.61%)被发现。在monoresistance异烟肼15(20.8%)被发现的比例最高,其次是RIF 10(13.88%),在polyresistant菌株,发现最高比例的异烟肼+ 13 (18.05%)(RIF组合值< 0.05,95% CI)。

4所示。讨论

耐药结核病的治疗获得由于管理不善或传播感染耐药结核病患者。许多其他研究发现历史与风险相关的抗结核的治疗一直耐多药结核病[9]。

整体耐多药率观察到在这个研究是32 (25.61%)。我们的研究结果与其他研究整合报告的昌迪加尔(27.6%)(10),泰米尔纳德邦(25%)(11),孟买(25.25%)(12),和古吉拉特邦(30.2%)13]。但更高的利率在德拉敦(57.22%)(14德里)和53.6% (15)和最低Sewagram Wardha (9.2 - -9.6%)16,17]。高患的设置是可以理解的,因为这是一个转诊中心分枝杆菌培养和药敏测试,因此接收大量样本的慢性病人。

抵抗是见过的最高的异烟肼(31.2%)是最受欢迎的药物利福平(28%)紧随其后,链霉素(21.6%)、乙胺丁醇(17.6%)。类似的耐药模式Vijay等人在班加罗尔称异烟肼(27.4%)、RIF (15.5%)、SM(23%),和EMB (6.6%)18]。塞提报告的耐药模式等人从以前治疗的病人的昌迪加尔异烟肼(46.9%)、RIF (27.6), SM(22.22%),和EMB (10%)10]。电阻莉娜等人从孟买报道在以前治疗的病人显示异烟肼(30.41%)、RIF (58.55%)、SM(46.95%),和EMB (3.67%)12]。

耐异烟肼31.2%在这项研究中被发现。类似的发现为维贾伊等人从班加罗尔(27.4%)18)和大坝等人从德里(20.18%)19]。为其它Paramasivan仍然较高的耐异烟肼等人从泰米尔纳德邦(81%)20.),从昌迪加尔塞提等人(46.9%)(10),并从Raichur Gopi等人(52.3%)(21]。这个高电阻可能是因为糟糕的合规的患者及其广泛使用在治疗肺结核。

利福平耐药性在我们的研究中是28%。电阻的RIF被认为是替代标记耐多药结核病的检测。类似的研究结果报道Paramasivan等人从泰米尔纳德邦(25%)11),从昌迪加尔塞提等人(27.6%)(10)、耆那教等人从新德里(33.3%)17]。报告仍然较高的RIF阻力Rawat等人从北阿坎德邦(57.22%)、(14从哈里亚纳邦,Janmeja和拉吉(49%)(22),并从Raichur Paramasivan等人(100%)(20.]。高电阻的原因可能是由于不规则的使用在其他条件如麻风、不明原因发热的年青一代()和利什曼病。

在这项研究中对链霉素耐药被发现21.6%,由维贾伊等人一致报告从班加罗尔(23%)18)和Rawat等人从北阿坎德邦(22.22%)(14]。电阻对乙胺丁醇17.6%表示在我们的研究中。类似的确证的耐药模式被认为在研究Negi等人从德里(20.65%)23)和Rawat等人从北阿坎德邦(10%)(14]。

在这项研究中异烟肼monoresistance高(20.8%)被发现。我们的结果与报告整合由昌迪加尔塞提等人(14.3%)(10)和拉玛钱德朗等人从古吉拉特邦(11.7%)24]。这可能是由于异烟肼预防性治疗(IPT)给没有排除活动性结核病在艾滋病毒阳性患者。IPT可以增加耐药结核病的机会(25]。

低效率在结核控制规划和不规则抗结核的药物使用导致耐药菌株的积累和乘法支持显著增加抗药性撤退。因为在医院的选择性偏差,缺乏疾病和感染艾滋病毒和健壮的回顾数据限制了我们的研究。

本研究最重要的限制之一是以前的治疗历史,人口,和其他数据如IPT,等二线药敏信息喹诺酮没有可供分析,限制我们的能力,得出具体的结论。其他限制数据,它们不能代表整个社区,仅限于一个医院。基于社区多中心的一项研究,其中包括全国各地并使用各种药物,需要描述的真正流行患在印度。

5。结论

治疗肺结核的主要问题是多药耐药性。可以减少患出现耐药性检测模式和与第二行antituberculous药物治疗在适当的方案以失败和复发情况。耐多药率在我们的研究中明显高于治疗失败相比,复发和治疗后,默认情况下,潜在的治疗失败的早期识别需要尽早安排培养和药物敏感性试验和启动适当的治疗。

重点应放在提示检出率,常规和有质量保证的DST设施对于高风险患者,提示抗结核药物管理,加强协调非政府组织(ngo)和私人从业者RNTCP按照守则。额外的研究检测耐药模式的需要小时划分风险因素,制定未来计划高患结核病管理设置。

确认

作者想表达他们的感谢所有的参与者的合作和参与者躺在巨大的信心。

引用

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