文摘

的可溶性尿激酶纤溶酶原激活物受体(suPAR)已被证明是一个强有力的预后生物标志物对肺结核(TB)。在目前的研究中,概要文件的肺结核病人血浆suPAR水平高的多药耐药性的风险进行了分析并与耐多药耐药(MDR)一样的病人。包括四十患者前瞻性,包括10个耐多药结核病患者和30为耐多药结核病患者高危,进行临床评价。血浆suPAR水平测量使用ELISA (SUPARnostic、丹麦)和细菌培养除了药敏测试执行。所有患者疑似耐多药结核病组演示suPAR水平要明显高于健康TB-negative组(1.79 ng / mL)。在耐多药结核病的高危三组,只有复发组(7.87 ng / mL)证明suPAR水平可比与耐多药结核病患者(7.67 ng / mL)。suPAR水平两个月负抗酸的细菌转化组(9.29 ng / mL)高于积极控制,而水平组组成的治疗失败患者(5.32 ng / mL)较低。我们的研究结果有力地表明,suPAR水平支持快速筛选怀疑耐多药结核病患者,但不能区分群体。

1。背景

几十年来,结核病已经在印度尼西亚造成人员死亡的主要传染病之一。目前,形势恶化是由于耐多药结核病(mdr - TB)的出现,占4%到5%的结核病例。耐多药结核病是一个条件结核分枝杆菌(Mtb)成为最强大的一线抗结核药物(如抗。异烟肼(异烟肼)和利福平)(1]。不完整的和不恰当的标准强化阶段治疗被认为是因素导致耐多药结核病。有几个场景结核病患者有可能成为多药耐药性包括高危负抗酸的细菌(AFB)转换两个月后,治疗失败和复发。

到目前为止,最常见的测试诊断多药耐药性是谁推荐的药敏试验(DST),这需要两个月完成(2]。代理的使用免疫预后标记多药耐药性的结核病患者高危能够预测多药耐药性预计将有利于减少药敏测试的持续时间(3]。同样,生物标志物,准确预测高风险多药耐药性早些时候在特定的个体可能会促使DST的起始。生物标志物的潜在作用在常规临床护理最近提出(3]。一个这样的标志是可溶性尿激酶纤溶酶原激活物受体(suPAR)的受体丝氨酸蛋白酶尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)。这个分子在先天和适应性免疫过程中发挥作用通过纤维蛋白溶解通路。木糖醇,先天免疫系统的细胞因子刺激uPA分泌的多种细胞类型包括单核细胞和中性粒细胞(4]。等离子体suPAR水平可能反映健康状况包括正常的生物过程,感染,或治疗进展。suPAR水平上升的结核病患者通过治疗和减少进展(5]。最近的研究对预后的力量suPAR中也得到了证实假设结核病阴性患者(6]。

我们之前的研究表明,suPAR可以作为生物标志物监测治疗的进步TB-AFB(+)患者(7]。本研究的目的是观察的形象在肺结核病人高危suPAR水平多药耐药性包括那些与负面的空军基地转换两个月,治疗失败和复发,并比较它与多药耐药性的发生率。这类患者可能会对利福平和异烟肼耐药。因此,病人还测试了他们对抗生素的敏感性。

2。材料和方法

2.1。主题

示例包括10个耐多药结核病患者和30多药耐药性结核病患者高危。十个健康的病人作为消极的控制从赛弗瓦尔博士招募了医院,玛琅,印度尼西亚。耐多药结核病患者分为怀疑,包括消极的空军基地转换后两个月的强化阶段治疗,复发和治疗失败组。所有的病人,除了健康对照组,满足以下入选标准:有肺结核,定期服药,男性或女性15至50岁,身体质量指数(BMI) > 16公斤/米2,同意是一个主题的研究,并提供知情同意。结核病患者与其他疾病,如严重的细菌性肺炎,艾滋病、心脏病、糖尿病、心脏病、肾病、或肺外结核,怀孕的患者和精神病患者被排除在研究的问题。

所有的病人,除了TB-AFB(−)转换,收到直接观察,六个月(26周),短程抗结核治疗推荐的印尼国家结核病项目,基于世卫组织结核病指南(8]。

2.2。结核病的治疗

空军基地转换两个月后,患者治疗失败组,药物疗法包括固定、weight-dependent结合异烟肼(320 - 400毫克/天)、利福平(480 - 600毫克/天)、乙胺丁醇(800 - 1200 mg /天)和吡嗪酰胺(1000 - 1250毫克/天)为期两个月的强化阶段治疗,其次是在四个月的利福平和异烟肼延续阶段。对于治疗失败组,空军基地的病人显示积极的5月底和6个月的治疗。

2.3。常规检查

一些常规临床和实验室调查按照标准程序进行在印尼进行医院(9]。其中包括病人投诉(即。,history), X-ray, BMI, lesion width, erythrocyte sedimentation rate (ESR), bacterial culture, and DSTs. Chest X-rays were taken before therapy began and included standard posteroanterior and lateral views, the results of which were reviewed by a pulmonologist. Lesion width was measured according to chest X-ray grading of disease (i: minimal lesion ie, lesion width less than area restricted to median line, apex and front costae, solitary lesion located anywhere and no cavity found; ii: moderate advanced ie, width of cavity is less than one lobe, if a cavity is present, should be in no more than one lobe; iii: far advanced corresponding to a lesion width greater than minimal and moderate lesions and, if with cavity, should not exceed a width of 4 cm).

2.4。微生物研究方法

观察结核分枝杆菌的可行性,确定基本的抗结核药物,每组患者的痰样本收集。口水在0.9%氯化钠溶液和集中,洗和沉积物随后Lowenstein-Jensen培养基培养。DST是执行与至少两个抗结核药物利福平和异烟肼,使用细菌学的绝对浓度法(9]。

2.5。样品处理

3毫升血液样本是来自新病人静脉穿刺前启动二线抗结核药物治疗所引导的人(8]。血清是离心机在4°C (6000×g) 10分钟,分为整除0.5毫升,然后储存在−80°C。

2.6。酶联免疫吸附试验(ELISA)

血清水平的suPAR测量在重复使用商用ELISA包根据生产的协议(suPARnostic, ViroGates / S,哥本哈根,丹麦)(10]。样品的光学密度在450 nm阅读使用生物技术标,波长校正设定在650海里。各自的测量结果进行了分析使用SPSS 3.4版(美国IBM公司)。

2.7。统计分析

所有使用SPSS软件进行统计分析。进行了多元分析使用SPSS版本16(美国IBM公司)。组织和控制之间的差异进行了分析使用单向方差分析。

2.8。道德

本研究通过Syaiful瓦尔公立医院的伦理委员会,Brawijaya大学,印度尼西亚。所有的病人提供书面知情同意。

3所示。结果

3.1。病人的特点

31日组成的研究最初包括41例肺结核病人高危的多药耐药性和10个耐多药结核病患者。在研究过程中,然而,一个病人获得性肺炎和随后被排除在外。表1总结了基于标准的患者的临床特征为耐多药结核病组以及多药耐药性的高危群体。一半(50%)的病人在目前的研究中有一个低体重指数或体重(体重指数< 18公斤/米2),而只有少数(8%)保持体重(体重指数> 22公斤/米2)。体重不足患者组中均匀分布,耐多药结核病组之间没有显著差异BMI和多药耐药性(高危组 )。

表1
特点,结核病高危患者的多药耐药性(MDR)和耐药结核病。

胸部x光检查显示,病变区域对应于最先进的类别最常发生在耐多药结核病患者组(100%)。相比之下,多药耐药性的高危组显示病变宽度的变化:高度发达的病变(60%到70%),适度先进病变(20%对30%),最小的病变(10%)。

ESR通常是高活动性结核病患者,尽管一个正常的ESR并不排除结核(2]。令人惊讶的是,esr耐多药结核病患者没有显著不同于那些在复发组和两个空军基地转换组( )。事实上,治疗失败组展示了esr最低。

3.2。suPAR测量

多药耐药性结核病患者的高危suPAR水平要明显高于健康纯化蛋白derivative-negative(即。、控制)组(1.78 ng / mL) ( )。然而,当suPAR水平之间的比较耐多药结核病组(7.63 ng / mL)和那些疑似结核病组,复发组只显示比较结果(7.85 ng / mL)。病人在两个月负空军基地转换组suPAR最高水平(9.24 ng / mL),而患者治疗失败组证明显著降低suPAR浓度(5.04 ng / mL) ( )。

鉴于每一组疑似耐多药患者中耐多药和culture-negative个人(表1从整个组),suPAR值根据类型的文化增长和DST(图分析1)。这种方法导致了一个有趣的结果。文化——和DST-positive结核病患者显示suPAR但统计学上显著差异水平较低(7.85 ng / mL)与培养阳性相比,DST-negative病人,这意味着他们对一线抗结核药物敏感或耐利福平或异烟肼(non-MDR) (8.03 ng / mL) ( )。然而,等离子体的平均浓度suPAR culture-negative患者(5.54 ng / mL)显著低于Mtb-positive文化MDR (7.85 ng / mL)以及Mtb-positive文化non-MDR (8.03 ng / mL)患者( )。最后,文化的患者分枝杆菌除了结核病(莫特)suPAR水平没有显著差异(6.48 ng / mL)相比培养阳性和culture-negative组( )。


图1
测量血浆可溶性尿激酶纤溶酶原激活物受体(suPAR)基于文化水平增长和药敏。

4所示。讨论

在目前的研究中,所有的多药耐药性结核病患者的高危共享特征也被发现在耐多药结核病患者,包括低BMI和高ESR。的BMI值在所有结核病组表明,BMI低于正常不是一个耐多药结核病患者的特征,因为它也是流行的多药耐药性的结核病高危患者以及那些TB-AFB (+) (9]。缺乏足够的营养状况和营养不良可能是一个风险因素导致结核病感染的结果减少辅助T细胞1反应[11,12]。低体重指数的另一个原因可能是结核病患者演示厌食症和食欲下降,这是符合一般条件出现在慢性和先进的疾病。的ESR值复发患者,令人惊讶的是,类似与耐多药结核病患者。尽管ESR并不被认为是一个特定的结核病的标志,它已被证明是一个有效的炎性标记在活动性结核病13]。

测量suPAR水平已被证明在肺结核病人反映病理状态,使应用程序在临床疾病进展相关的设置。我们报告的概要suPAR水平三组结核病患者在高耐多药结核病(即风险。转换,两个月负空军基地,治疗失败和复发)。在耐多药结核病的高危三组,只有复发组的人表现出suPAR水平比得上耐多药结核病患者(7.67 ng / mL)。其他组(负空军基地转换两个月后和治疗失败)显示高或低水平随后(9.29 ng / mL和5.32 ng / mL,职责)。鉴于患者复发组完全治愈结核病的相当长时间然后重新激活,目前的研究结果表明,suPAR水平相当稳定保持在复发患者的血浆。一个可能的解释是,一小部分Mtb结核病复发患者巨噬细胞的存活一线抗结核治疗,持续的不确定的时间长度,随后再度出现在宿主免疫抑制(14]。这最好的与文化相关测试,多达50%的结核分枝杆菌细菌是积极的,尽管monoresistant抗结核药物。这些微生物属于少数杆状的亚种群,坚持生物膜(15]。这样的亚种群多药耐药性的细菌可以开发(16,17]。就不足为奇的DST表示,20%的患者复发组演示MDR-positive文化。此外,由于suPAR水平之间培养阳性耐多药和non-MDR组在统计学上没有不同,这些由70%的最终值的suPAR复发组。结核分枝杆菌的原因(s)为什么耐抗结核药物引起可比suPAR水平相比nativeMtb是未知的。Kiran et al。18)发现了一个轻微的耐多药结核病患者的淋巴细胞数量减少。然而CD19的水平(+)B淋巴细胞的抗体生产和负责激活受体CD23在耐多药结核病组无意义的减少,从而影响体液和细胞免疫,这效果比TB-AFB更深刻的耐多药结核病组(+)组。一项由Eugen-Olsen et al。5)表明,血suPAR水平与痰液中细菌的数量和支气管内的5]。

平均suPAR水平两个空军基地-转换组患者(9.29 ng / mL)略,但明显高于在耐多药结核病患者组,表明病理过程继续进行,可能由于一个族群的生存的细菌。这些细菌持续存在潜在病灶内包含在肉芽肿和大空腔的痰15]。结核分枝杆菌作为一般规则,在两个月内可以根除抗结核药物治疗方案(17]。这也是目前的研究中,所示的文化增长是负的70%。令人惊讶的是,suPAR水平仍然很高,和20%的文化MDR是积极的,这可能发生由于细菌不能确定使用抗酸的测试(19]。“隐形”分枝杆菌在一项研究也证实Al-Moamary et al。20.),在63%到73%的空军基地展示了消极的文化(+)患者。这些研究表明,除了改善临床和x射线,另一个准确的预后标记必须做出决定是否应该终止或继续治疗。尽管文化测试负(即经过2个月的治疗。,bacteria did not grow), we suggest that because suPAR levels remained high, continuation of treatment with anti-TB regimens is warranted.

治疗失败组显示suPAR最低水平,但这些水平仍相当与治愈结核病患者从先前的研究(5.32 ng / mL和5.09 ng / mL) (7]。尽管有40%的病变宽度严重类别,只有10%的病人MDR-positive文化,与40%文化积极虽然monoresistant或对一种抗结核药物敏感。这表明响应和公开的第一线治疗没有改善;因此,耐多药结核病患者的肺部损害继续进步,变得更加普遍。六个月后,损伤宽度保持不变。

迄今为止,文化增长和DST的唯一方法能够区分多药耐药性从可疑的多药耐药性。小说发现suPAR水平能反映免疫状态不同的多药耐药性的结核病患者高危组增加了文学。虽然suPAR水平无法区分耐多药结核病患者和疑似耐多药患者,结核病患者治疗后抗结核药物敏感性证明suPAR水平> 5 ng / mL保证数据的性能。

5。结论

我们的研究结果表明,测量suPAR水平可以用来筛选结核病患者治疗后多药耐药性的风险很高。然而,这不能区分标志疑似多药耐药性和耐多药结核病患者。预计更大规模的研究来确认为耐多药结核病患者的预后价值MDR的风险很高。

承认

作者感谢suPARNOSTIC inc .)给特殊价格工具,使他们能够进行。这项研究由医学院,Brawijaya大学。谢谢你的月亮,医学博士,Rahadi, MD that provided samples and Fitri for technical assistant.