的可溶性Plasminogen活化剂受体作为监测肺结核TB-AFB（+）患者治疗进展的生物标志物

抽象的

可溶性的作用可溶性尿激酶类型纤溶酶原激活物受体(suPAR)作为结核治疗活性肺结核- afb(+)患者疗效的生物标志物。20例肺结核- afb(+)患者参与了一项为期6个月的队列研究。采用ELISA法检测治疗前、治疗后2个月、4个月、6个月血浆suPAR水平。同时测量临床参数。结果显示所有病人()的血浆suPAR水平在治疗前最高(中位数为12.775 ng/mL)，并显著降低(< . 05,)治疗2个月(中位数为8.019 ng/mL)和4个月(中位数为5.771 ng/mL)。然而，治疗6个月后仅轻微下降(中位数5.009 ng/mL)，接近对照组水平(中位数4.772 ng/mL)。有趣的是，suPAR水平的显著降低与治疗效果平行，并与其他临床和实验室参数相关，即患者主诉减少，BMI (），胸廓成像改进，痰转化，递减ESR（）和单核细胞计数（)，但胸部影像学病灶宽度除外。综上所述，superar水平可反映结核治疗进展情况。

1.背景

控制的成功肺结核（TB）在很大程度上取决于适当的诊断，正确的治疗，治疗监测和评估。特别是在治疗中，长期治疗可能会对患者的依从性产生不利影响，并导致推荐治疗程序的失效。这促请了一个严格的监测程序，可以显示比正常治疗早期治疗进度（最小6个月）。在过去的十年中，已经集中研究了几个生物学标记。这些标记可能有助于提高临床试验的质量;因此，能够开发和验证新的治疗策略。

研究最深入的生物标记之一是尿激酶纤溶酶原激活物受体(uPAR)，丝氨酸蛋白酶的细胞受体尿激酶纤溶酶原激活剂(uPA)。UPAR可以被许多蛋白酶从细胞表面切割出来，如糜蛋白酶、磷脂酶C和uPA，从而产生一种具有内在趋化特性的可溶性受体(suPAR) [1，2］．一项研究表明，与涂片阴性患者相比，涂片显微阳性阳性患者的肺结核患者的肺结核患者升高的SUPAR水平升高了升高的患者[3.］．SuPAR是一种炎症生物标志物，因此对结核病不是特异性的，但它会因几种感染性疾病和s而升高，以反映疾病的严重程度，因此可能被用作预后工具。然而，关于suPAR作为肺外结核预后标志物的研究还知之甚少[4］．

假设血清suPAR水平反映了治疗的进展，我们前瞻性地研究了血清suPAR水平是否可以用于监测肺结核- afb(+)患者的治疗。本研究测量肺结核肺患者治疗6个月期间的suPAR水平，并与其他常规实验室评估指标(BMI、单核细胞计数、血沉、胸片显像)进行比较。

2.材料和方法

２.１.主题

该研究在马甘开展，在2008年至2009年期间，TB阳性阳性的新涂片或培养物的患病率为107 / 100.000人口。对于该研究，5个肺结核蛋白皮肤测试阳性健康群落对照和20个阳性，新诊断肺结核病用痰液 - （酸快速杆菌）阳性患者均已注册。包容性标准是肺结核分类患者，定期服用药物，是男性和女性在15-50岁之间，有BMI（体重指数）16、同意作为本次研究的主体，并签署知情同意书。排除标准为合并其他疾病(重症细菌性肺炎、HIV-AIDS、心脏病、糖尿病、心脏和肾脏问题)的结核病患者、额外肺结核患者、孕妇和有精神问题的患者。

这些患者接受了印度尼西亚国家结核病规划根据世卫组织结核病指南建议的6个月(26周)直接观察短期抗结核治疗。

2．2.结核病的治疗

药物方案由固定的重量依赖性组合，inh（320-400mg /天），利福平（480-600mg /天），乙胺醇（800-1200mg /天）和吡嗪酰胺（1000-1250mg /日期）为期两年的密集阶段，其次是利福平和INH为四个月的延期阶段。

2.3。常规检查

在进行临床和实验室检查、体重指数、单核细胞计数和红细胞沉降率(ESR)之前，患者进行主诉。所有病例均根据印尼医院的标准程序进行测量[5］．

2.4。胸片疾病分级

在治疗前拍摄标准的前后和侧位胸片，并由肺科医生阅读。评分包括以下类别:(i)最小的病变,也就是说,损伤宽度小于区域局限于正中线,先端和前肋脉,纸牌病变可以无处不在,而且没有腔发现,(ii)温和的先进,也就是说,腔的宽度小于1叶,和如果有腔,应该不止一个叶。(iii)远前病变的宽度大于轻微和中度病变，如有空洞，则不应超过4cm。

2．5．采样处理

研究材料是从新患者获得3毫升血液标本，通过注射针头在抗结核病药物治疗后的抗结核诊断之前使用注射针来获得抗结核诊断，基于世卫组织指南（2HRHZE / 4H3R3）[5，6］．血清通过4°C离心(6000 x g) 7分钟分离，500 mL在−80°C保存。

2.6。酶联免疫乳药伏特测定

根据制造商（Suparnostic，Airogate A / S，哥本哈根，丹麦）使用市售的ELISA试剂盒进行血清SUPAR测量。7］．使用Biotech Micro Blate Reader设置为450nm的Blence Micro Blate Reader进行板读数，该波长校正设定为650nm。使用SPSS版本3.4软件确定各自分析的浓度。

2.7。统计分析

suPAR上的所有统计分析均使用SPSS软件版本和统计编程语言进行。采用纵向模型分析、双变量分析、多变量分析和线性回归进行统计分析，这些分析采用SAS 9.13 (SAS Institute, Cary, NC, USA)和SPSS 16 (SPSS Inc, Chicago, IL)程序进行。

采用单因素方差分析分析患者与对照组之间的差异。免疫参数和疾病程度之间的关联使用Mann Whitney进行评估-测试。一种价值的被认为重要。

2.8。道德

从所有参与者获得书面同意。该研究由伦理委员会，Brawijaya大学Safif Anwar公立医院批准。

3.结果

在6个月的治疗期间观察了20名活动性肺结核患者。20例患者的特点见表1．

符合纳入和排除标准的女性肺结核患者人数(50%)与男性肺结核患者人数(50%)相等。本研究按年龄分布，结核患者以19-30岁人群为主。

suPAR浓度测定显示，感染患者治疗前suPAR水平较高(中位12.775 ng/mL)，但suPAR水平显著下降()，治疗2个月(中位数为8.019 ng/mL)， 4个月(中位数为5.771 ng/mL)。然而，在治疗的第6个月，尽管达到了显著水平(中位数5.009 ng/mL)，但只有轻微的下降(图)1(一)）.这些几乎与健康对照组（中位数4.772 ng / ml）类似。

关于临床症状(表2)、慢性咳嗽是最常见的主诉，但也有食欲减退、低热、气短、出血和胸痛。治疗第2个月和第6个月后，一些患者仍抱怨咳嗽、气短和胸痛。关于痰转化，治疗前，所有患者(）Sputum-AFB（+），但在为期两月的治疗后，十五名患者转向AFB（ - ），并在六个月的治疗结束时，所有患者均显示痰转化。在观察期间，大多数患者（19）显示出高水平的ESR，它显着下降（价值)。ESR通常在活动过程中增加，但正常的ESR并不排除结核病的诊断[5］．在本文中，治疗前ESR中位数最高为84.2 mm/h，治疗2个月后降至44.1 mm/h。治疗6个月后ESR水平最低(19.3 mm/h)。(图1 (b)) suPAR与ESR之间存在显著相关(价值)，具有很强的相关系数(）.

单核细胞计数也有同样的趋势。治疗前单核细胞计数浓度最高，中位为847细胞/mm^3.）但它显着下降（)后(中位662细胞/mm^3.)和6个月治疗(中位497细胞/毫米^3.)(图1 (c)）.suPAR水平下降显著相关()，随着单核细胞数量的减少(价值）.治疗前观察到轻度单核细胞增多，治疗期间计数下降。正常情况下，血液中单核细胞计数在cell /毫米^3.．

相比之下，结核病患者的BMI逐渐但显著上升(）两次（中位数19.18 kg / m²)和六个月的治疗。治疗结束时，所有患者的体重均达到最高的BMI平均值(中位数为20.36 kg/m)²）.(图1 (d)）.有显著的相关性(价值虽然弱（)， suPAR随BMI增加而降低。

最后，被诊断为有活性肺结核病的患者的胸廓成像显示出远远晚期病变（)、中度晚期病变()，最小病变(）.然而，在治疗前后结核病患者的胸廓成像的病变宽度之间没有显着相关性（表3.）.

4。讨论

多年来，结核病一直是印度尼西亚第三大传染病。缺乏监测结核病治疗进展的准确方法可能是造成这一问题的原因之一。本研究旨在探讨suPAR作为肺结核- afb(+)患者的生物标志物的可能性，因此，对于大多数可能不需要6个月治疗期的患者，允许对治疗方案进行分层，并可能缩短治疗时间，而对于那些应答不良和复发风险增加的患者，则可以强化治疗方案。

令人惊讶的是，总的来说，活动性肺结核患者的suPAR水平范围(8.539 ng/mL - 28.000 ng/mL)与非洲人相当不同，后者的范围在0.9 ng/mL至45 ng/mL之间[2］．这些是否受基因影响，还需要进一步研究。结果发现治疗前suPAR水平升高，治疗2个月和4个月后显著下降。Eugen-Olsen等人的研究也发现，治疗应答者在接受8个月的结核病治疗后suPAR降低[3.］．增加的超级级别预处理可能是将巨噬细胞调入支气管的结果，并增加由活性感染引起的免疫活化和炎症增加。单核细胞的粘附和迁移涉及UPAR和整合蛋白之间的功能性相互作用[8］．然而，根据ESR的下降，六个月治疗期间Supar的减少趋势显着，只与单核细胞计数明显相关。我们只发现了在抗结核药物治疗期间不时下降的处理前的轻型单胞菌，同样存在于之前发现[9结果显示，29% ~ 60%的结核病患者出现轻度绝对或相对单核细胞增多症。考虑到suPAR附着在单核细胞和巨噬细胞上，并在细胞迁移中发挥作用[10然而，似乎在这项研究中，Supar的水平没有反映单胞萝卜的数量。血液中的Supar可能与单胞菌症的过程无需统计学上的释放。

前两个月在前两个月的急性降低与BMI提高弱相关。TB患者食欲的提高可能是由于TNF-alpha释放的降低[11］．这些作用会影响筛选至TH2的免疫状态条件，导致TH1的压力或巨噬细胞上的TH1信号转导抗性的压力肺结核杆菌和感染严重程度[8］．

在初始相位治疗结束时，有五名患者尚未经历痰转化，但在延续阶段结束时，所有患者都接受了痰转化。患者的痰液转化发生在75％-85％的病例中，在2个月治疗后和六个月治疗后96％的病例[9］．虽然suPAR水平的下降与痰转化的趋势相似，但很难将痰转化与血中suPAR水平联系起来，因为suPAR不是直接的产物分枝杆菌．

具有AFB痰（+）的活性肺结核（+）的患者主要在肺结核患者中发现，具有远高病灶的患者，其次是中度晚期病变，然后是最小的病变。肺病变被认为是用于诊断和监测治疗结果的关键参数。随着疾病的进展，它导致案例软体软化，形成含有很多的腔玉米菌菌和支气管壁侵蚀，然后被迫通过咳嗽出来[12］．研究表明，胸部成像可以在抗结核药物治疗的1到3个月发生，90%的病例在6个月后病情好转或稳定[9］．然而，在治疗6个月后，仍有1例患者发生了肺破坏和变宽肺不张．在本研究中，远晚期病变、中晚期病变和微小病变患者的suPAR水平无显著差异。这与之前的发现形成了对比[13]其中Supar水平随着病变的宽度而显着相关。为了我们的知识，这些可能是由于使用不同方法测量病变。

我们发现了一个有趣的现象，在一个肺结核粟粒型患者中suPAR的水平要高得多(28.000 ng/mL)。肺结核粟粒型是一种严重类型的肺结核，由于血液原扩散过程影响肺的所有部分[10］．这一病例是否反映了血原传播引起的疾病的严重程度还需要进一步的研究来证实。

这是在印度尼西亚进行的第一项研究，研究抗结核药物治疗期间的suPAR水平。本研究旨在获得suPAR作为辅助药物的适用用途，以监测治疗效果。在目前的研究中，所有20名患者都对结核病治疗有临床反应。治疗的积极效果也反映在通过suPAR水平测量的炎症状态的降低。因此，我们得出结论，降低suPAR水平可能反映了治疗效果，但需要进一步研究对结核病治疗无反应的结核病患者，以确定suPAR是否仍保持高水平，例如在结核病-耐多药患者中。

5.结论

有活性AFB（+）的肺结核患者的Supar水平降低是治疗疗效的表现。在治疗前的TB患者中，Supar水平近三次升高，在前两个月的治疗后急剧下降，然后逐渐减少直至第六个月治疗结束，与健康对照的超标水平相当。Supar水平的减少趋势与其他临床和实验室参数相关，即患者投诉的消失，BMI的增加，ESR的下降，单核细胞数量较少。然而，Supar浓度没有反映胸廓成像上的肺部病变宽度;因此，Supar不能用作唯一的生物标志物，以监测治疗的功效。

致谢

这项研究得到了Brawijaya大学医学院的支持。作者感谢suPARnostic, ViroGates A/S, Copenhagen, Denmark为试剂盒提供了优惠价格。特别感谢丹麦的Jesper Eugene-Olsen博士编辑了这篇论文。

参考

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