文摘
正确的样本体积和时间存储前分析是重要的考虑病人的血浆葡萄糖浓度估计。本研究以确定样品体积变化和时间延迟的影响在健康成人血糖结果的分析。共有30个人20至30岁被选作研究。收集血液样本分别为三个fluoride-oxalate集合管。结果显示,样品体积变化从2.0毫升fluoride-oxalate管1.0毫升和3.0毫升不显著影响血浆葡萄糖浓度(> 0.05)。然而,样本的血浆葡萄糖浓度显著降低延迟分析。平均空腹血浆葡萄糖浓度的分析后一个小时的收集和分析三个小时后集合没有明显不同(> 0.05)。平均空腹血糖浓度之间收集后一小时和5小时时间点(< 0.001)之间,三个小时和5小时后收集(= 0.014)明显不同。总之,过度充盈和填充不足(2.0±1.0毫升)fluoride-oxalate管没有显著影响血糖的结果。如果样品在三小时的收集、分析与时间有关的改变也没有统计学意义。
1。介绍
糖尿病是一种非传染性主要由高血糖为特征的代谢性疾病。目前,它已经成为世界上一种常见的公共卫生问题以及在斯里兰卡。在2014年,估计糖尿病患者约4.22亿1]。国际糖尿病联合会预测糖尿病会影响2040年全世界有6.42亿人(1]。根据最近由世界卫生组织发布报告,糖尿病引起的死亡人数在2016年斯里兰卡是10130(总死亡人数的7%)2]。因此,早期诊断糖尿病的重要管理其严重程度,防止相关并发症的发生。
目前,血浆葡萄糖是最常见的一种临床实验室诊断测试(3]。总工作量的化学病理实验室、-40%与30%葡萄糖浓度的估计4]。尽管糖化血红蛋白和血浆葡萄糖测试都是主张糖尿病的诊断,最常用的主要实验室测试仍然是空腹血糖在斯里兰卡设置。此外,实验室接收请求随机血糖,餐后血糖,口服葡萄糖耐量测试。血浆葡萄糖分析使用半自动的全自动分析仪或spectrophotometrically基于可用的设施在一个给定的实验室。葡萄糖oxidase-peroxidase和己糖激酶是常用的酶葡萄糖的方法分析这些平台(5- - - - - -7]。
普遍,血液被收集到一个实际上管对血浆葡萄糖估计antiglycolytic代理。当前组合包括氟化钠/草酸钾,柠檬酸钠缓冲的功能,结合/草酸钾氟化钠或柠檬酸和EDTA为血浆葡萄糖水平的评估8]。尽管使用血清葡萄糖可以测量通过收集血液平原管,研究证明,在血浆葡萄糖浓度高于血清中由于低含水量在等离子体3]。获得一个准确的血糖结果的估计价值,最好是使用粉末形式含抗凝管防止dilutional液体抗凝血效果。根据文献,混合液态钠100µL fluoride-potassium草酸在2.7毫升的血液会导致3.7%的稀释(9]。
然而,最关键的点样本收集收集管中的体外抑制糖酵解。在斯里兰卡的临床实践中,氟化钠/草酸钾管作为集合管对葡萄糖浓度的估计。氟化结合无机磷酸盐结合镁离子的形成fluorophosphates烯醇酶的酶(3]。然后,它抑制了烯醇酶的作用,因此抑制糖酵解的晚了一步。结果,血糖水平稳定。尽管氟是一种抑制剂,行动不是在体外直接抑制糖酵解(10]。当样品保存一小时,在室温下,5% - -7%的葡萄糖是减少每小时以前的观测(11]。
根据抗凝剂的数量,有一个推荐的血容量填充到管。氟化物血液的比率是2毫克/毫升。草酸的血液比可以在1 - 2毫克/毫升。不正确的样本体积是一个重要的参数接受或拒绝标准(12]。在斯里兰卡医院的设置中,未充满的管比过度充盈共同管的血浆葡萄糖水平的估计。这是由于问题困难患者静脉穿刺或不足的血如果多个测试必须执行。如果推荐的体积改变,糖酵解抑制可能不是最优的。因此,重要的是要保持正确的体积比准确的血液抗凝血浆葡萄糖估计。
此外,周转时间在血浆葡萄糖估计也是一个重要的因素。长期接触的等离子体与细胞的一部分血液导致血浆葡萄糖水平由于利用率降低红细胞,白细胞,血小板。根据标准操作程序采用本地,血浆葡萄糖估计应该执行后两个小时内样本的收集,和样品制备(从细胞分离血浆)为分析应该执行在一小时内收集的13]。很难在一小时内运输和准备样品分析收集样本时卫星收集中心。我们在此确定样本体积变化和时间延迟的影响在健康成人血糖结果的分析。
2。材料和方法
σ2 - 5离心机机(σLaborzentrifugen GmbH, Osterode哈尔茨,德国),视觉kmc - 1300 v涡混合物(视觉科学,京畿道、韩国)和日本岛津公司uv - 1800分光光度计(日本岛津公司公司(日本)被用于样品制备和吸光度测量,分别。
商用山东Chengwu(中国)fluoride-oxalate集合管(首选制造商的体积−2.0毫升)被用来收集参与者的血液。
2.1。研究协议
血液收集来自30个参与者(15名健康男性和15名健康女性)年龄在20到30年,后8 - 10小时的禁食。任何个人服用任何药物,静脉困难访问或诊断为糖尿病,被排除在研究之外。所有获得书面同意后收集的血液样本。抽血根据执行标准操作程序的培训护理人员。
2.2。道德的考虑
道德伦理审查委员会的批准了盟军的健康科学学院,大学Ruhuna,斯里兰卡(参考号:14.02.2018:013)。
每个参与者禁食8 - 10小时前收集的血液。6.5毫升的血液来自每个人分发到三fluoride-oxalate集合管1.0毫升,分别2.0毫升和3.0毫升。轻轻地样本混合。在40 - 50分钟的收集、样本在3000转离心5分钟获得等离子体,和一个整除被管的葡萄糖在每个计算分析。空腹血浆葡萄糖浓度估计1小时后,3个小时,5小时集合根据葡萄糖oxidase-peroxidase方法使用商用光度酶分析工具包(英国Biorex诊断)14]。每一天,准备两个级别的内部质量控制样品(正常和高)运行检查结果的精度。
一卷十毫升(10µL)的血浆样品或标准与1.0毫升的葡萄糖混合试剂和孵化5分钟37°C。每个样品的吸光度测量使用分光光度计在500海里。血浆葡萄糖浓度测定。
2.3。统计分析
使用适当的统计测试数据进行了分析;由方差分析方法比较(方差分析)其次是图基HSD用于多个比较。的值< 0.05被认为是具有统计学意义。方差分析的假设被验证p价值观和塔基HSD是有效的(补充材料,数字1- - - - - -3)。使用IBM SPSS数据分析进行了20个软件版本。
3所示。结果
分析阶段被定义为“1小时,1.0毫升;1小时,2.0毫升;1小时,3.0毫升;3小时,1.0毫升;3小时,2.0毫升;3小时,3.0毫升;5个小时,1.0毫升;5个小时,2.0毫升;5个小时,3.0毫升。”是指血浆葡萄糖值的所有阶段相比,在0.05的显著性水平。 The mean plasma glucose concentration in different phases in analysis is mentioned in Table1。
总结每个阶段的平均值的百分比差异分析如图1。
目前的调查结果显示,不同的卷组之间没有统计上的显著差异在同一分析时间(= 0.535),在分析时间和样本体积(时间卷)(= 0.818)。然而,当考虑样品分析时间在一个固定的体积,有显著统计学差异分析(< 0.05)。
平均空腹血浆葡萄糖浓度的分析后一个小时的收集和分析三个小时后集合没有明显不同(> 0.05)。平均空腹血糖浓度之间收集后一小时和5小时时间点(< 0.001)之间,三个小时和5小时后收集(< 0.001)明显不同(表2)。
4所示。讨论
本研究旨在确定样本体积变化的影响加上时间延迟的分析在健康成年人血浆葡萄糖浓度。我们的研究结果表明,样本体积变化仅从1毫升3毫升没有贡献统计上的显著差异时测量血浆葡萄糖浓度血液收集fluoride-oxalate管。然而,当样品卷被认为是恒定,在葡萄糖浓度有显著变化的时间点和5个小时之间,三到五小时。
Preanalytical血糖结果的可靠性影响因素最近审查(1]。管的类型和分析的时候由于血液采集的关键因素,这都是与血糖的稳定。管上的辩论与最好的添加剂,以减少糖酵解是仍然悬而未决。直到找到更多的以证据为基础的替代,Pasqualetti et al。1)建议使用fluoride-oxalate管收集血液的血浆葡萄糖。Fluoride-oxalate管是最常见的管中使用本地设置;因此,我们评估了样本容量和时间延迟对葡萄糖的影响稳定。在我们的研究中,参考样本管填满最优卷(2毫升)和分析在一个小时。因此,葡萄糖浓度的变化发生在第一个小时后集合没有评估,这是一个限制在我们的研究中。Dimeski et al。8)显示,有5.4%,7%,和8.5%葡萄糖浓度的变化在一个小时,两个小时,四个小时从0小时。我们的研究显示,3.5%和6.7%在3小时和5小时后集合相对于参考样本(2毫升,1小时)。我们的研究人群包括健康的人。除了一个诊断测试,空腹血浆葡萄糖利用评估2型糖尿病患者的血糖控制在当地设置。因此,它是必要的评估数量和时间延迟的影响在糖尿病患者血糖测定,尚未评估在当前的研究中。
我们研究的新颖性评估葡萄糖的体积变化对稳定性的影响。没有明显的样卷1 - 3毫升之间统计上的显著差异,样例拒绝实践仅仅基于体积需要重新评估,以确定是否有任何临床明显的变化。有时,有疏忽延迟样品运输从病房在医院和诊所。这更多的是一个问题,当样本主要来自收集中心实验室。基于样本体积变化将不必要的拒绝延迟诊断和不便的病人和医生。因此,我们建议更明智地应用程序接受拒绝标准样品体积有关的血糖分析。
大多数的研究已经证明,氟化钠是一种无效的antiglycolytic剂2 - 4小时的样品收集(8,10,11]。然而,实际上很难收集、传输和分析样品在一小时内。下面的建议可以提出减少血浆葡萄糖的影响估计延迟运输,即收集样本的实验室,血浆分离后收集细胞部分,在寒冷的容器和运输,直到发现更强有力的证据关于柠檬酸等antiglycolytic代理。在设施是不切实际的分离血浆和细胞,收集后不久,血糖分析如果至少表现在三个小时内收集,也会减少血糖的变化结果基于我们的研究结果。
5。结论
过度充盈和填充不足(2.0±1.0毫升)fluoride-oxalate管没有显著影响血糖的结果。如果样品分析的三个小时内收集、时间变化也没有统计学意义。
数据可用性
平均值来支持本研究的结果都包含在这篇文章,和原始数据可从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者要感谢D.A.B.N. Gunaratna博士,作物科学、农业、学院Ruhuna大学的指导的统计数据分析和医学实验室的学术和非学术人员部门科学,盟军的健康科学学院,提供实验室设施和技术援助。他们还要感谢盟军的健康科学学院,斯里兰卡,Ruhana大学的金融援助。
补充材料
方差分析的假设被验证p价值观和塔基HSD是有效的。图1。残差的散点图血浆葡萄糖浓度对葡萄糖浓度的预测值。散点图中没有任何特定的模式。各级方差相等(假设1)。上述异方差性测试的重要性> 0.05。因此,对于任何变量(分析时间、样品体积,体积和示例分析时间),在任何水平方差相等。图2。qq情节残余的血浆葡萄糖浓度。图3。去趋势正常qq情节残余的血浆葡萄糖浓度。根据图2和图3,残差正态分布(假设2)。(补充材料)