文摘
这项工作试图验证反相ion-interaction量化硝酸盐含量的高效液相色谱法提取和原料黄anisata(Willd)。钩。f . Benth交货。叶子。三种提取方法(即。,decoction, infusion, and ultrasound-assisted extraction) were investigated and compared. Furthermore, the effect of the solid-to-solvent ratio and defatting was also evaluated. The validation result showed that the high-performance liquid chromatographic method had a linear response (R2在一系列1-50 = 0.9999)μ克/毫升。定量的检测极限和限制是0.25μ和0.75克/毫升μ分别g / mL。此外,该方法具体,精确和准确。验证方法是适合硝酸盐含量的测定c . anisata叶子。注入nondefatted样本使用solid-to-solvent比1:10给原料中的硝酸盐含量最高,0.251±0.003%。在脱脂样本的情况下,汤提供了硝酸盐含量最高,0.309±0.001%。增加solid-to-solvent比和脱脂的硝酸盐含量有巨大影响c . anisata叶子从煎煮提取。我们所知,这是第一个报告,用反相ion-interaction量化的硝酸盐含量的高效液相色谱法c . anisata叶子。此外,作者认为,可以用硝酸作为质量控制标准的标记c . anisata叶子的提取和原材料。
1。介绍
提取是一个重要的步骤在植物成分的分析和调查的生物和药理作用。适当的萃取技术提供了所需的植物生物活性化合物的含量高以及防止不稳定化合物的分解(1]。根据煎煮和输液,有古典萃取技术通常使用传统药物由于他们是简单和容易的方法。煎煮和注入适合提取热稳定的化合物(2]。Ultrasound-assisted提取(阿联酋)或声波降解法是一种现代提取技术。这是为减少开发时间、精力,和溶剂消耗3,4]。萃取技术中发挥着重要作用的结果如活性化合物的产量和内容。所以选择萃取过程被认为是一个重要的一步。
黄anisata(Willd)。钩。f . Benth交货。在家庭芸香料植物。c . anisata叶子拥有一些生物活性包括止痛剂(5,抗糖尿病的6,7,抗炎8,9,抗疟5),抗菌7,10- - - - - -13),抗氧化剂(7,14],退热剂[8),细胞毒性10),和杀灭幼虫15- - - - - -19]。c . anisata叶子富含挥发油,挥发油成分通常是研究。报告(E)茴香脑的挥发油的主要成分c . anisata(20.,21]。然而,有些品种含有甲基胡椒酚作为主要成分(20.,22]。
吸烟会导致世界各地的健康问题。在2011年,使用烟草每年导致约六百万人死亡。当前的趋势表明,烟草使用在2030年将每年杀死超过八百万人死亡(23]。吸烟会导致许多疾病,比如。,cancers, respiratory diseases, cardiovascular diseases, oral diseases, impaired vision, bone fractures, and diabetes [24]。1965 - 2014年期间,吸烟和暴露于二手烟造成大约2100万人过早死亡(25]。许多现代医药产品开发支持戒烟。然而,一些草本植物也用作戒烟一个援助。在泰国,c . anisata叶被用作类似于著名的戒烟戒烟援助援助植物:Vernonia灰质(l)更少。以前,诉灰质硝酸被报道含有盐,可以产生舌头麻木和导致更少的香烟嗅觉和味觉(26,27]。然而,硝酸盐含量c . anisata叶子还没有报道。我们预计,c . anisata叶子也可能含有硝酸盐相似诉灰质。此外,高硝酸盐含量与植物的质量用于戒烟。因此,可以选择硝酸盐含量作为质量控制标准的标记c . anisata树叶用于戒烟。我们所知,没有报告的高效液相色谱(HPLC)法定量的硝酸盐含量c . anisata叶子。因此,这项工作的目的是定量的硝酸盐含量c . anisata叶子用反相高效液相色谱法ion-interaction进行验证。的硝酸盐含量c . anisata叶子中提取不同的技术和solid-to-solvent比率比较。此外,nondefatted的硝酸盐含量和脱脂c . anisata叶子也比较确定最佳提取条件,提供了硝酸盐的含量最高。作者认为硝酸可以作为质量控制的标准标记c . anisata叶子的提取和原材料。此外,可以选择合适的提取方法及提取条件提取c . anisata叶子进一步改善产品开发。
2。材料和方法
2.1。材料
硝酸钠(纯度99%)和85%磷酸从卡洛Erba购买试剂、法国。从Sigma-Aldrich Octylamine购买,美国。己烷(AR级)从Duksan购买纯化学物质,韩国。甲醇(高效液相色谱级)从Honeywell-Burdick &购买杰克逊,美国。
2.2。植物样品
c . anisata(Willd)。钩。f . Benth交货。树叶从唱布利省2018年11月。植物样品被确认,以确保正确的物种椅子教授博士Nijsiri Ruangrungsi、生药学、药学院,兰实大学。凭证标本。cm - ca003 - 1 - 11 - 2018沉积在药物和草药产品研发中心,兰实大学药学院。
2.3。提取过程
c . anisata叶子晒干和地面使用磨床。Nondefatted和脱脂c . anisata叶粉(即使用三种不同的提取技术。、煎煮、输液,阿联酋)。脱脂样本脱脂己烷:100克c . anisata叶粉与500毫升己烷混合,用了30分钟。这是脱脂的新己烷三次。然后,脱脂c . anisata叶粉干在前2 h提取环境条件;脱脂和nondefatted样品的含水率测量水分分析仪为11.27±0.03%和10.77±0.17%,分别。煎煮,沸腾的水了c . anisata叶粉,煮15分钟。在注入的情况下,加入沸水c . anisata叶粉和被允许站在环境温度为15分钟。在阿联酋的情况下,在环境温度是添加到水c . anisata叶粉,用在超声波浴(40 kHz频率,功率500 W,温度≤30°C),持续15分钟。每种提取技术进行三次。三个滤液池和冻干。当solid-to-solvent比1:10,执行5克c . anisata叶粉和50毫升溶剂的使用。相比之下,5克c . anisata叶粉和100毫升的溶剂被用于solid-to-solvent比率1:20。然而,solid-to-solvent比1:10 nondefatted示例应用,虽然solid-to-solvent比1:20应用nondefatted和脱脂的样本。结果提取之前保存在干燥器使用。
2.4。硝酸的分析内容和方法验证
硝酸盐含量的高效液相色谱法用于分析是改编自程和曾28和周et al。29日]。他们用这种方法来确定蔬菜罐头果汁和蔬菜硝酸盐含量。高效液相色谱条件用于硝酸盐含量的分析c . anisata根据我们之前的工作执行30.,31日]。反相ion-interaction高效液相色谱法应用于这项工作。权力平等主义的系统上执行一个王牌Generix列(150×4.6毫米,身份证。,5μ米)与温度控制在25°C。0.01 octylammonium正磷酸盐(pH值7.0)作为流动相。这是由溶解在30% v / v 1.3 g octylamine甲醇,pH值调整到7.0 10%磷酸,以及调整量与30% v / v 1000毫升甲醇。流动相的流速为0.8毫升/分钟。注射体积是10μl .检测波长为213 nm。注射后的样品进行了分析标准的解决方案提供了可再生的保留时间和峰面积。在提取和硝酸的内容c . anisata叶粉(它被称为c . anisata原材料)硝酸校准曲线的标准计算。
方法验证了对几个变量包括线性、范围、特异性、检测极限(LOD)和定量限度(定量限),精度和准确性。根据线性储备溶液的硝酸浓度1毫克/毫升准备使用水作为溶剂。稀释成浓度范围为50,25日,10日5和1μ克/毫升。他们过滤了采用高效液相色谱法测定和分析。特异性是由紫外光谱的比较标准的硝酸盐和硝酸盐c . anisata提取在上坡,顶部,下坡的高峰。特定的高效液相色谱法(HPLC),紫外光谱都是类似的。LOD和定量限的分析计算基于标准差(SD)回归直线的截距和斜率在前面描述的校准曲线的工作(31日]。精密的分析报告为百分比相对盘中SD (RSD为百分比)和interday分析。三硝酸浓度的解决方案准备,5,10,25岁μ克/毫升。他们通过高效液相色谱法分析:分析报道当天盘中精度和分析在连续三天报告为interday精度。百分比为盘中和interday精度应小于2%和5%,分别。最后,精度是决定使用标准的技术。硝酸溶液浓度的5,10,25岁μ加入一定量g / mLc . anisata提取与一个已知浓度的硝酸(5μg / mL)。在这种情况下,最终浓度的硝酸混合物是10,15日和30日μ克/毫升。他们是由高效液相色谱分析,每个浓度水平计算的回收率。
3所示。结果
高效液相色谱法用于这项工作以前用来确定蔬菜汁的硝酸盐含量(28)、蔬菜(29日],硝酸钠漱口水(30.,31日]。根据这项工作,高效液相色谱方法也被应用于确定硝酸盐含量c . anisata叶子。图1显示了标准的高效液相色谱色谱硝酸盐和nondefatted脱脂c . anisata叶子从不同的萃取技术提取获得。高效液相色谱色谱的类似的模式是发现nondefatted和脱脂的样本。图2显示了一个校准曲线的硝酸1-50的测试范围μ克/毫升。线性方程和R2也会显示出来。根据特异性,紫外光谱标准的硝酸盐和硝酸盐c . anisata提取在上坡,顶部,下坡的峰图所示3。紫外线光谱标准的硝酸盐和硝酸盐c . anisata提取相似,所以这个结果表明,特定的高效液相色谱法(HPLC)。LOD和定量限计算基于SD回归直线的截距和斜率的校准曲线是0.25μ和0.75克/毫升μ分别g / mL。表1显示分析的精密度和准确度。RSD =盘中百分比和interday精度小于2%。这个结果表明,高效液相色谱法精确。此外,分析的准确性表示为百分数复苏表明,接近100%,表明硝酸是准确的高效液相色谱法进行分析。
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提取收益率nondefatted和脱脂c . anisata叶子在30 - 50%的范围。提取的产量nondefattedc . anisata叶子从煎煮、输液和阿联酋使用solid-to-solvent比1:10 37.1%,35.6%,和33.9%,分别。使用solid-to-solvent比1:20了提取率为37.2%,36.2%,和36.8%,分别。据脱脂的团体,他们的提取率为50.6%,37.8%,和34.2%,分别。图4显示了提取方法的影响,solid-to-solvent比率,和脱脂的硝酸盐含量c . anisata叶提取和原材料。注入nondefattedc . anisata叶子用solid-to-solvent比1:10提供了提取相比,硝酸含量最高的阿联酋和汤(图4(一)蓝色酒吧)。三种提取方法中,煎煮提取硝酸的最低水平。这个订单是相似的硝酸盐含量原料(图4 (b)蓝色酒吧)。nondefatted的硝酸盐含量的顺序c . anisata叶子中提取使用solid-to-solvent比1:20相似的提取和原材料。阿联酋提供略高硝酸盐含量相比,注入和煎煮,分别(图4、橙色酒吧)。根据脱脂样本,阿联酋硝酸提取提供了最高的内容相比,注入和煎煮,分别(图4(一)灰色酒吧)。然而,硝酸盐含量的原料显示最高的价值汤组相比,注入和UAE组,分别为(图4 (b)灰色酒吧)。转换中硝酸盐含量的提取原料中的硝酸盐含量是依赖于萃取率。在这种情况下,最高提取收益率被煎煮提取脱脂样品中发现,这些样本还提供了原料硝酸含量最高。solid-to-solvent比率的硝酸盐含量的影响c . anisata叶提取和原材料。在图4的solid-to-solvent比率1:10 - 1:20调查;蓝色酒吧和橙色条每个提取方法进行了比较。增加汤的溶剂比和阿联酋的硝酸盐含量增加c . anisata叶提取物和原材料,而稍微降低了硝酸内容从注入获得。最后评价因素是脱脂c . anisata离开之前提取。所以,橙色的酒吧和灰色酒吧比较(图4)。c . anisata含有油滴在它的叶子可能会减少硝酸盐的溶解度,亲水性物质。硝酸脱脂也许提高了提取效率c . anisata叶子。图4(一)表明,减脂可以稍微增加硝酸盐含量提取获得注入和阿联酋,但是它与通过煎煮。根据原料硝酸含量,脱脂对硝酸盐含量有很大积极影响煎煮。脱脂略影响输液,但这并不影响阿联酋(图4 (b))。
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4所示。讨论
作者成功地验证反相ion-interaction量化的硝酸盐含量的高效液相色谱法c . anisata叶子。这是第一次工作报告硝酸盐的测定方法c . anisata利用反相高效液相色谱法ion-interaction叶子。这个方法显示线性响应和具体,精确、准确的风格。此外,这种方法很容易和快速28,29日,32]。这种方法的优点是稳定和效率高的列和缺乏有机固定相的再生(32]。所以,它可以应用到其他植物硝酸盐含量的定量或产品。
除了c . anisata,诉灰质和m . siamensis还含有硝酸。诉灰质茎提取物和叶提取物含有的硝酸盐含量21%和19%,分别为(33),高于c . anisata进行这项工作。Wongsasjanan et al。34)评估的影响收获时期的硝酸盐含量m . siamensis叶子。他们发现硝酸盐含量45天m . siamensis叶子是最大的相比,在60天,30天的树叶,7.50 mg / L, 7.15 mg / L,分别和6.87 mg / L。我们计算从本文中所示的数据提取的30天,45天,60天组含有硝酸盐的0.344%,0.375%,和0.358%,分别。相同的同事也调查了肥料的硝酸盐含量的影响m . siamensis叶子。他们报告说,60天的叶提取物m . siamensis集团获得了化学肥料含有的硝酸盐含量7.32 mg / L。的提取m . siamensis接受自然肥料,没有肥料含有硝酸盐的6.22 mg / L和6.11 mg / L (35),这相当于0.366%,0.311%,和0.301%,分别。中硝酸盐含量m . siamensis叶提取是低于c . anisata叶提取报告我们的工作。
植物生物活性化合物的提取方法提取影响。不同的提取技术提供单个化合物的不同内容以及他们的生理或药理活性。Kaneria et al。36)表明,提取技术和抗氧化化合物的溶剂类型影响内容和石榴叶和茎的抗氧化活性。连续冷渗滤、个人冷渗滤和汤比较。连续冷却渗流与丙酮提取物总酚类化合物的含量最高。相比之下,煎煮和个人冷渗滤使用水可以提取总酚类化合物的类似的内容。此外,总酚类化合物的内容与石榴叶和茎提取物的抗氧化活性。提取方法的效果和溶剂类型对酚类化合物和抗氧化活性也被调查苍耳子strumarium叶子。三种提取方法比较(即。,static maceration, dynamic maceration, and Soxhlet extraction). Results showed that the extraction method affected the extraction yield, total phenolic content, antioxidant activity, and content of individual phenolic compounds (i.e., chlorogenic acid, ferulic acid, and反式肉桂酸)(37]。此外,提取技术和溶剂类型也影响萃取率、总酚含量、withanolide内容,12-deoxy withastramonolide内容,和根的抗氧化活性Withania somnifera(38]。挥发性油Tetraclinis关节动物叶子也提取方法的影响。挥发性油t .关节动物叶子从微波hydrodistillation包含更多的含氧化合物,而传统hydrodistillation给更多的碳氢化合物。此外,挥发油获得微波hydrodistillation显示优越的抗氧化活性和抗炎活动相比,从传统hydrodistillation [39]。
通常,更多的溶剂的使用可能会增加植物生物活性化合物的提取率和内容。然而,更多的溶剂的使用可能会增加成本和时间从提取溶剂的消除。solid-to-solvent比率的影响(1:5 - 1:20)被调查的总酚含量和总类黄酮含量积雪草的。最优solid-to-solvent比例是1:15。进一步增加溶剂的比例没有显著增加总酚含量或总类黄酮含量40]。solid-to-solvent比率1:20可以最大化的总酚含量和总类黄酮含量菲niruri(41]。Radojkovićet al。42)优化solid-to-solvent率的提取黑桑叶。solid-to-solvent比例是不同的从1:10 - 1:30。他们发现solid-to-solvent比1:20可以提取的最大总酚类化合物类似于总类黄酮含量。Zubairi et al。43)建议增加溶剂比例对鱼藤酮的含量起到了积极的影响鱼藤酮elliptica的根源。结果表明,增加溶剂的比例从1:3.3 - 1:10产生更多的鱼藤酮内容。结果是类似于报告Predescu et al。44];增加溶剂的比例从1:5 - 1:10给更多的总酚含量和总类黄酮含量的犬蔷薇水果、沙棘果实和山楂的果实。此外,说等。45)透露,solid-to-solvent比1:10更适合提取维生素C从香蕉皮比solid-to-solvent比1:4.5和1.5。这些结果和我们的工作,增加溶剂的比例可以增加煎煮和阿联酋组织硝酸盐含量。
脱脂可能是有用的在亲水化合物的提取从植物减少疏水性的矩阵。然而,脱脂使用己烷等有机溶剂可能会破坏或可以提取一些植物的生物活性化合物。Saikusa et al。46)建议脱脂可以减少大米胚芽的酸败。与己烷并不影响脱脂γ大米胚芽中氨基丁酸酸积累,但与乙醇降低了γ氨基丁酸酸含量。Buitimea-Cantua et al。47)报道,脱脂的高粱与己烷麸皮分数可能减少酚类化合物相比nondefatted组。他们描述,脱脂能够溶解非极性高粱麸皮分数的酚类化合物。我们的工作发现,脱脂对注入的影响更少对煎煮和阿联酋但显示一个伟大的影响。这种现象可以用脱脂的事实描述可以消除石油成分c . anisata硝酸叶粉,所以可以很容易地从低疏水植物中提取矩阵。
5。结论
反相高效液相色谱法ion-interaction系统验证。它显示一个线性响应,具体,精确,并准确。这是用于分析的硝酸盐含量的提取和原材料c . anisata叶子。注入nondefatted样本使用solid-to-solvent比1:10提供了最高的硝酸盐含量提取和原材料。三种提取方法中脱脂样本,汤是最好的提取方法,提取硝酸盐含量最高。增加溶剂比例可以增加硝酸盐含量在煎煮和阿联酋。脱脂对输液和阿联酋的影响更少但显示影响煎煮。总的说来,反相ion-interaction高效液相色谱法可以应用于硝酸的分析内容。此外,这项工作支持,硝酸可以作为一个标准的标记提取的质量控制,原材料,或者戒烟产品c . anisata。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者要感谢药学院,兰实大学设施的支持。作者也承认Ajarn Nirun Vipunngeun提供c . anisata用于这项工作和坎尼卡Kittiyarangsit小姐和小姐Kittaporn Santichat研究援助。作者感谢教授j·e·莫顿学院制药、马里兰大学巴尔的摩,美国对他的评论和援助在阅读和编辑稿件。