与性有关的血液参数和Organosomatic指数的差异Oreochromis niloticus暴露于黄曲霉毒素B₁饮食

文摘

一个24周进行了饲养试验来评估是否雄性和雌性Oreochromis niloticus展示他们的血液反应和organosomatic指数的差异饮食空军基地₁污染。一式三份的o . niloticus(初始体重:24.1±0.6 g)和四个饮食喂养(1 - 4)饮食包含0,20,200年和2000年μ克空军基地₁公斤⁻¹。明显降低( )在血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、红细胞比容(Hct)空军基地₁暴露组,记录在2000年的最低水平μ克空军基地₁公斤⁻¹治疗。显著增加的意思是白细胞(WBC),中性粒细胞和淋巴细胞在空军基地₁暴露组。没有与性有关的差异红细胞,白细胞,淋巴细胞,单核细胞和中性粒细胞水平观察。然而,血红蛋白和血细胞比容值女性o . niloticus明显低于男性吗o . niloticus。Organosomatic指数显示,相对肝脏,肾脏,脾脏重量显著增加( 在空军基地₁补充组比对照组。然而,黄曲霉素organosomatic指数的影响并不依赖于性,而是取决于剂量的黄曲霉素的饮食。这些结果提供有用的信息来监控男性和女性的健康状况的变化o . niloticus。

1。介绍

Oreochromis niloticus目前的主要养殖鱼类在东非(占75%),他们贡献了大部分的鱼,年产量约3400吨(69.9%)(1]。在o . niloticus,饮食主要是制定使用高水平的粮食和植物蛋白质和被黄曲霉毒素污染的风险高2]。黄曲霉毒素(AF),一个强有力的霉菌毒素产生的黄曲霉和曲霉属真菌寄生,水产养殖生产中是一个顶级的挑战由于蔬菜来源在鱼饲料使用的不断增加3]。黄曲霉毒素污染的鱼引起贫血、出血、肝损伤,减重,易受二级传染病和缓慢减少饲养鱼类资源质量,因此代表了一个重大的挑战在水产养殖4,5]。

信息在各种内脏器官的感染、坏死、炎症和压力因素的存在通常是由血液参数(6,7]。这些参数相关的血液和造血器官(8]。血液作为病理反射器的状态动物暴露在有毒的和其他条件;动物有良好的血液成分可能表现出更好的性能(9,10]。研究养殖鱼类的生理和血液学的特点是一个重要的工具在促进水产养殖系统中,特别是关于健康与感染的检测或强调鱼(11,12]。此外,罗纳德和布鲁斯13)描述organosomatic体重指数器官的比例;衡量一个器官与身体质量可以直接连接到化学毒性作用的靶器官(14]。最常用的organosomatic指数gonadosomatic指数(GSI),脾体指数(RSI),肾体指数(KSI), hepatosomatic指数(HSI) [15,16]。这些organosomatic指数可能提供更具体的信息相关的功能选择器官(15]。

黄曲霉素的毒性作用在动物饲料和持续时间取决于剂量的毒素暴露,以及性别和年龄(17- - - - - -19]。与性有关的黄曲霉毒素耐受性差异报告了猪、肉鸡、老鼠和这些研究报道,男性比女性更容易受到黄曲霉素(20.- - - - - -22]。尽管大量的研究黄曲霉毒素对血液学和organosomatic指数的影响的不同种类的鱼,没有研究调查是否雄性和雌性o . niloticus表现出不同的血液反应和organosomatic指数饮食空军基地₁污染。因此,本研究评估与性有关的血液的反应和organosomatic指数的差异o . niloticus暴露于一个黄曲霉毒素B₁受污染的食物。

2。材料和方法

2.1。实验鱼和过程

总共有300o . niloticus重达24.1±0.6 g获得国家水产养殖研发中心(NARDTC) Sagana,肯尼亚。鱼适应于控制饮食的试验条件和美联储15天。总共有300o . niloticus被分成12组25鱼。每个治疗分为3复制25鱼每关在笼子里。明显鱼喂饱食一天两次在0900年和1500年人力资源。减少饲料浪费,小球慢慢喂鱼。实验进行了12个笼子(1米³)放置在三个不同的池塘(40×20米)。

在实验过程中,水质参数如下:温度24.2 - -26.8°C,溶解氧pH值7.5 - -7.65,4.6 - -6.3毫克L⁻¹,总碱度146.65 - -225.95毫克L⁻¹和盐度0.03 - -0.05。审判持续了24周。女性和男性在每个实验单位每月检查确定数量,重量,长度,和任何生理变化。二十鱼从每个笼子附近随机采样后1天的食物不足的结束实验。

2.2。实验的饮食

空军基地的纯结晶粉末₁从Libios化学公司购买,法国爱德蒙米舍莱街。空军基地₁(5毫克)溶解在100毫升的甲醇形成原液含有0.05毫克空军基地₁毫升⁻¹的甲醇。四个实验饮食(饮食1到4)制定包含0,20,200年和2000年μ克空军基地₁公斤⁻¹饮食。控制饮食饮食1,没有补充化学空军基地₁。

所有食物处理的帮助大约32%水分和颗粒状的绞肉机,紧随其后的是4小时的干燥气流烤箱60°C,直到水分含量小于10%。干球(5毫米直径)存储在−20°C,直到美联储。表1显示了组成和养分含量的饮食。

给定的毒素水平终于反复核对使用酶联免疫吸附试验(ELISA)(美国VT BioTek仪器有限公司)。

2.3。相对器官重量

在24周的实验结束时,鱼网状减少压力,很仔细,鱼测量(总长度)与一个ichthyometer(±1厘米精度)和体重。在这之后,鱼被麻醉碳酸氢钠和牺牲。肝脏、脾脏和肾脏移除很仔细,重。

organosomatic指数的肝脏、脾脏和肾脏计算20鱼据多根,可以(23)获得器官重量的比率为鱼体重。

2.4。血液参数分析

从尾静脉血液标本被在肝素化管和离心10分钟3500克;血清样本分离和储存在−20°C到分析。等参数的分析血清丙氨酸转氨酶(ALT)测定使用自动分析仪(贝克曼库尔特DU @ 530,自动生化分析仪,美国)。

血红蛋白(Hb)浓度是评估沙利的血红蛋白计(24)和红细胞比容(Hct)浓度是决定使用microhematocrit方法(25]。红细胞(RBC)、白细胞(WBC)计数使用改进的纽鲍尔血细胞计数器(25),对于微分白细胞计数,刚做好的血涂片染色改性染色的染色(26),在显微镜下观察到。平均微粒体积(MCV)、平均微粒血红蛋白(MCH)和平均微粒血红蛋白浓度(MCHC)所计算•马哈福兹,谢里夫(27]。

2.5。组织病理学过程

从每个治疗,10个鱼牺牲获得肝脏标本进行组织学和组织分析。Bouin解决方案是用来存储样本的第一个24小时,然后样本存储在70%的乙醇。组织样本在分级脱水乙醇系列和嵌入在石蜡之前处理。组织块随后被切割和苏木精和伊红染色28),然后在显微镜下检查常见和/或重大病变和相关的组织病理学变化的黄曲霉毒素中毒29日]。

2.6。数据分析

数据分析使用双向方差分析对黄曲霉毒素的主要影响,性,和他们的交互使用一般线性模型程序SPSS(16.0版)。重要手段( 使用图基的测试)分离。提出了数据作为±SEM方法。

3所示。结果

3.1。相对器官重量和生理反应

内部器官指数的数据测试o . niloticus是在表2。黄曲霉毒素B₁显著增加恒生指数,KSI, SSI ( )。恒生指数,KSI, SSI对照组值最低(0.88 g、0.15 g和0.05 g, resp)相比,饮食4(2.97,0.42,和0.34 g,职责)。恒生指数和KSI显著增加饮食2、3和4但SSI增加饮食3和4。恒生指数,KSI, SSI并没有发现黄曲霉毒素B反应的性别差异₁(表2)。

黄曲霉毒素B₁也明显增加血清ALT肝酶的活动( )。控制组的老鼠表现出低活性的ALT肝酶(41.96 UL⁻¹4)相比,在饮食(50.69 UL⁻¹)。血清ALT并没有发现性别差异,以应对空军基地₁。

3.2。血液学的特点

包含不同的饮食中黄曲霉毒素含量显著( )影响红细胞在两种性别中,最高的价值相比,对照组(2.96)空军基地₁补充饮食(1.98,1.43,1.01,饮食2、3和4,resp)。表3。

有明显降低Hct和Hb两性o . niloticus在饮食2、3和4控制相比(表3)。Hct下降了30.00、24.50和20.25%(饮食2、3和4,resp)。对照组相比值(38.50%)在表3。然而,MCV和妇幼保健的雄性和雌性鱼显著( 在空军基地)更高₁比在控制饮食补充饮食。最高的MCV记录鱼再辅以饮食4 (198.7μ米³),而对照组(129.8的最低记录μ米³)。没有显著差异在红细胞和MCHC两性之间。男性和女性之间的统计比较o . niloticus揭示了Hb的显著差异( )、Hct ( )”( )和妇幼保健( )表3。女o . niloticus再辅以饮食2、3和4记录低Hb(7.52, 4.05,和3.55 gdL⁻¹)比男o . niloticusgdL(7.72、4.27和3.67⁻¹)。

鱼的总白细胞计数的男女从饮食3高于对照组是由于淋巴细胞和中性粒细胞的增加。绝对的单核细胞计数的鱼喂食了空军基地₁补充饮食远低于对照组(表2)。没有显著性差异( 白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞在所有治疗。血细胞比容值呈现很强的正相关与鱼的长度( , )。随着黄曲霉素剂量的增加,鱼的长度明显减小(表3)。

3.3。组织病理学

组织病理学检查显示,从控制治疗鱼肝脏正常肝细胞排列在骨小梁形成向心正弦信号(图1(一))。然而,肝细胞没有明显的小梁安排鱼再辅以饮食2、灶状淋巴细胞浸润的存在包括血管周的区域(图1 (b))。肝细胞显示出血性和脂肪坏死,液泡化和出血(图就证明了这一点1 (c))。在外表上有些细胞颗粒,核肿大的坏死(图的说明1 (c)和1 (d))。肝脏病理变化的严重程度较低和高剂量的黄曲霉毒素B₁。与低剂量治疗肝脏,有坏死的早期迹象,正常的细胞液泡化核(图所示1 (c))。在高剂量的肝,有晚期坏死表示通过细胞核增大,核溶解,细胞质解体(图1 (d))。

4所示。讨论

在这项研究中,我们评估了与性有关的血液反应和organosomatic指数的差异o . niloticus暴露于黄曲霉毒素受污染的饮食,发现性别差异。

在目前的研究中,红细胞,Hct, Hb、MCHC水平显著降低( 在高的空军基地₁暴露组与对照组。在空军基地₁暴露组,o . niloticus患有贫血的条件,揭示了明显降低红细胞和Hb。Hct,减少红细胞和血红蛋白可能是由于等因素抑制蛋白质合成,红细胞生成,hemosynthesis和渗透调节的功能障碍由于压抑活动的几个酶参与血红素生物合成(27黄曲霉素[]和造血细胞缺陷30.]。我们的结果证实的研究•马哈福兹,谢里夫(27)和Jantrarotai洛弗尔(31日),观察血红蛋白浓度和红细胞数量减少o . niloticus和通道鲶鱼暴露于空军基地₁饮食。

目前的研究还评估无论男性还是女性o . niloticus展览的差异在他们的血液反应暴露在空军基地₁饮食。因为男性monosex罗非鱼的广泛使用,性别差异在血液参数决定如果男性o . niloticus当暴露于空军基地更耐药₁饮食。根据我们的结果,没有观察到与性有关的红细胞和MCHC水平的差异。然而,血红蛋白和血细胞比容值男性明显高于女性o . niloticus。我们怀疑的差异可能不是因为空军基地的毒性效应₁但由于新陈代谢率越高的男性相比,女性或sex-differential氧需求,这需要进一步调查。

更高的MCV是macrocytic贫血的风向标,而减少MCHC指示性贫血状况是由于缺铁(32,33]。类似于我们的结果,”一个更高和更低的MCHC被观察到o . niloticus暴露在空军基地₁与对照组相比。我们的研究结果也支持的结果Ewuola et al。34和韦弗等。35]发现增加MCV和减少MCHC山羊和猪的美联储的一个空军基地₁受污染的食物。加布里埃尔et al。36)报道,有一个血比容和身体长度之间的关系:长的鱼高比容c . carpio。这意味着迅速增加体重和平均长度和血量都伴随着足够的红细胞生成37]。这与我们的研究结果是一致的o . niloticus暴露在空军基地₁短,因此Hct较低。

在目前的研究中,我们发现白细胞、淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞被空军基地的影响₁剂量而不是性别o . niloticus。值得注意的是,更大的白细胞和淋巴细胞中观察到黄曲霉毒素暴露组,这可能是由于免疫抑制黄曲霉毒素对鱼类的影响。这些结果与•马哈福兹相比,(38)报道,白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞减少o . niloticus美联储有一个空军基地₁补充饮食。然而,我们的研究结果符合的林鸽et al。39)和Jantrarotai洛弗尔(31日),在野生火鸡观察白细胞和淋巴细胞增加使用通道鲶鱼美联储空军基地₁补充饮食。与感染白细胞增加,第一次合作识别病原体作为入侵者并摧毁它。有一个增加白细胞在宿主感染和过敏反应(40]。因此,黄曲霉毒素可能提高测试动物的病原体的入侵,给机会性感染和后续增加白细胞(40]。

在这项研究中,hepatosomatic指数(HSI),肾体指数(KSI),脾体指数(SSI)披露没有黄曲霉毒素B反应的性别差异₁。这些结果与之前的研究一致的布莱登带领一个et al。20.),他们发现,男性和女性的hepatosomatic指数鸡用空军基地₁不依赖于性。恒生指数,KSI, SSI的o . niloticus(两性)空军基地₁补充饮食中发现明显高于对照组。这些研究结果与过去的研究合作,空军基地₁导致了恒生指数的增加和KSI [41- - - - - -45]。此外,血清ALT黄曲霉毒素B反应的性别差异₁。的ALT水平明显高于空军基地被发现₁暴露的鱼。同样,先前的报道表明,空军基地₁导致了恒生指数的增加和增加血浆ALT的活动41- - - - - -43]。海拔在血清ALT活性的细胞损伤和肝组织坏死后曝光的o . niloticus到空军基地₁(46]。这是我们组织学结果,证实了脂肪坏死,出血性坏死,细胞质和细胞核增大并被确定为最普遍的组织学特点鱼用空军基地₁饮食。这些观察结果与先前的组织病理学结果具有可比性的Zychowski et al。47和巴普蒂斯塔等。48]报道肝细胞脂质沉积,出血性坏死,细胞核增大并在老鼠的肝脏和细胞质o . niloticus美联储有黄曲霉素的饮食。

5。结论

的血液和organosomatic指数衡量目前的研究是有用的监测黄曲霉毒素对鱼类的影响。这项工作得出结论,黄曲霉素是男性和女性的剧毒o . niloticus。海拔血清ALT活性和HSI的男性和女性o . niloticus似乎反映肝脏组织病理学改变的空军基地₁暴露的鱼。黄曲霉毒素增加白细胞和淋巴细胞,降低红细胞,Hct, Hb的男性和女性o . niloticus。然而,血红蛋白和血细胞比容值较低的女性o . niloticus比男性o . niloticus。进一步的研究来确定空军基地的作用机制₁在女性和男性o . Niloticus血液系统推荐。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关出版的手稿。

确认

这项研究得到了科学促进发展中国家的妇女组织(OWSD)和坦桑尼亚科学委员会(COSTECH)。作者感谢国家水产养殖研发中心(NARDTC) Sagana,肯尼亚,条款的池塘,笼子里,小鱼。先生的援助Hesbon生理学实验室的奥登戈,安女士Owiti中心的生物技术,和寄生虫学实验室的Peter廷布先生内罗毕大学的承认。作者也感谢彼得先生Muruka,莎莉Mwarumba女士,女士佛罗伦萨Mbugua,以利亚Gichana先生和内森先生Chuma协助NARDTC现场和实验室工作。

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