文摘
考虑到肾多巴胺的关键作用在管状钠处理,我们假设c型利钠肽(CNP)和Ang -(1 - 7)可能调节肾多巴胺可用性在管状细胞,导致Na+K+腺苷三磷酸酶抑制。结果表明,CNP并没有影响3在肾组织或Na H-dopamine要领+K+腺苷三磷酸酶活动;与此同时,Ang -(1 - 7)能够增加3H-dopamine吸收和减少Na+K+肾皮质中atp酶活性。Ang -(1 - 7)和多巴胺减少进一步Na+K+atp酶活性表现出添加剂对钠泵的影响。此外,氢化可的松逆转Ang -(1 - 7)多巴胺酶过度抑制,表明这种抑制作用密切相关,Ang -(1 - 7)刺激肾多巴胺吸收。anantin和cANP (4-23-amide)不修改CNP的影响3H-dopamine通过管状细胞吸收。Mas受体拮抗剂,- 779,封锁了增加了Ang - (1 - 7)3H-dopamine吸收。刺激引起的吸收Ang -(1 - 7)在洛沙坦的存在更为明显,表明Ang -(1 - 7)的抑制作用AT1受体3H-dopamine吸收。通过增加多巴胺的生物利用度在管状细胞,Ang -(1 - 7)增强了Na+K+atp酶活性抑制,导致其利钠、利尿效果。
1。介绍
肾多巴胺钠处理中发挥着关键作用以达到一个正常的盐和水平衡1]。多巴胺是肾近端小管细胞合成和释放管腔作为旁分泌激素促进尿钠排泄通过抑制一些钠转运蛋白如顶端Na+/小时+换热器3,Na+/π转运蛋白,Na+/转运蛋白,基底和Na+- k+atp酶(2,3]。
多种血管活性的肽调节血压水平通过调制的肾功能。通过这种方式,利钠肽系统的成员,如心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)、c型利钠肽(CNP)和urodilatin (URO),调节肾脏钠排泄对维持细胞外卷4]。CNP,最初在猪的大脑是一个孤立的22-amino酸肽,具有高同源性与ANP和法国巴黎,和缺乏carboxyterminal扩展同时呈现在肽(5]。虽然中国石油则主要由血管内皮细胞产生,也表达了在一些组织和细胞,包括肾脏(6,7]。CNP对其行动通过特定的绑定B型利钠肽受体(NPR-B),增加靶细胞的胞内cGMP水平(8]。在过去的几年,一些研究已经证明了肾CNP (4]。NPR-B受体表达在不同的段沿肾元(9]。Igaki等人,范教授等人报道,CNP的注入大鼠尿钠排泄和部分增加钠的排泄10,11]。CNP的尿排泄增加心力衰竭患者,建议一个可能的肾CNP合成的调节系统体积状态(4]。
Ang -(1 - 7)是一个代表了主要成分的生物活性heptapeptide压板和保护手臂的肾素血管紧张素系统(12]。除了众所周知的行为是对心血管系统保护代理,Ang -(1 - 7)展品反对行动,血管紧张素ⅱ(Angⅱ),促进尿钠排泄和利尿(12,13]。Ang -(1 - 7)肾脏的影响主要是由Mas受体,尽管有些行为可能发生通过AT1或at₂受体(14]。Mas mRNA和Mas受体已发现主要由不同的技术在近端小管细胞(13]。实验证据表明政府Ang -(1 - 7)增加了尿流率和钠排泄(15,16]。这些利钠、利尿肽可能是介导的行为规范的活动在近端小管钠转运蛋白,包括Na+- k+atp酶(15]。
肾多巴胺可能来自神经元和extraneuronal来源。extraneuronal源包括多巴胺的吸收血液和管状液体,其中有机阳离子转运蛋白(10月和OCTNs)发挥重要作用[17]。我们先前已经表明,ANP和URO,通过刺激多巴胺吸收,有利于多巴胺细胞内积累进而导致的过度抑制Na+K+腺苷三磷酸酶活性(18,19]。这个过程是由NPR-A-cGMP-PKG介导的细胞内途径(20.,21]。生理拮抗剂,Angⅱ展品相反的效果通过AT1R和PKA和营第二信使[22,23]。
考虑到中国出版集团和Ang -(1 - 7)发挥利钠、利尿行动,我们假设这些肽可能调节多巴胺吸收的管状细胞,控制其绑定D1受体的生物利用度。因此,这两种血管活性的多肽可能与多巴胺提高抑制Na+K+atp酶活性,促进尿钠排泄。从这个意义上讲,本研究的目的是调查是否CNP和Ang -(1 - 7)可以调节多巴胺吸收和Na+,K+腺苷三磷酸酶活性在肾组织样本。
2。材料和方法
2.1。动物
男性Sprague-Dawley老鼠(10 - 12周大,体重250 - 350克)被安置在控制温度(23±2°C),每天12小时的光暗周期(从早上07:00至07:00灯点)和免费的自来水标准的鼠粮(Cooperacion SRL、阿根廷),直到一天的实验。实验按照国际指导原则和当地规定有关的实验室动物保健和使用生物医学研究以及动物“生物医学研究国际伦理指导原则”建立的帮助(国际医学科学组织理事会)。批准的协议是机构的实验室动物保健和使用委员会布宜诺斯艾利斯大学的制药和生物化学学院(号码:2100 - 15,0035638/15)。所有手术乙基氨基甲酸乙酯麻醉下进行,所有的努力都是尽量减少痛苦。
2.2。药物和解决方案
以下实验中使用的药物和解决方案:3H-dopamine和28.0 Ci /更易与特定的活动(美国新英格兰的核,波士顿,MA);CNP、氢化可的松、nomifensine anantin des (Gln 18-Ser 19-Gly 20-Leu 21-Gly 22)心房利钠肽片段4-23-amide, Ang -(1 - 7),洛沙坦,a - 779, PD123319,卡比多巴,咪唑,ATP(三磷酸腺苷5′),牛seroalbumin分数V(科恩和Folin活性来自Sigma-Aldrich, Inc .,圣路易斯,密苏里州,美国。EcoLite液体闪烁,来自ICN制药公司,加州,美国。
标准克雷布斯碳酸氢盐(SKB)解决以下成分(mM)作为培养介质:118氯化钠;4.7氯化钾;1.2 MgSO4h·72O;1.0不2阿宝4;2.4 CaCl2;0.004 EDTA;11.1葡萄糖;0.11抗坏血酸;26.0 NaHCO3。
2.3。程序
老鼠与10% w / v乙基氨基甲酸乙酯麻醉(1.2毫克/公斤体重,i.p)。肾脏被移除和清洗新鲜SKB去除残留的血液,然后切片肾皮质和髓质,剁碎,重(大约40毫克)。
2.4。的决心3H-Dopamine吸收
3由美国[H-dopamine吸收测量如前所述20.]。短暂,组织被放置在2.0毫升SKB Dubnoff孵化器孵化介质,preincubated在37°C, pH值7.40,都洋溢着95%的气体混合物O2和5%的公司215分钟;nomifensine (50μ米)添加预培养介质中,以避免神经多巴胺吸收。此后,组织被转移到新鲜SKB和孵化,在相似的条件下,与0.625μCi /毫升3H-dopamine(22.32海里),50μM nomifensine,不同的抑制剂,持续15分钟。时间后,CNP或Ang -(1 - 7)添加到中、孵化持续了30分钟。对照组没有孵化的肽。下面的实验进行了肾皮质的样本。
2.5。中国出版集团和Ang -(1 - 7)的影响3H-Dopamine吸收
量效曲线CNP, Ang -(1 - 7)(下午1点到100海里)进行检查他们的影响3H-dopamine吸收。以下组进行了研究:控制和孵化,10和100点和1,10,100海里的CNP或Ang - (1 - 7)。
时间进程曲线进行了研究CNP和Ang -(1 - 7)的影响3H-dopamine吸收在不同的时间(5、10、15、20和30分钟)。以下组进行了研究:控制和孵化100海里的CNP或100海里Ang - (1 - 7)。
调查CNP和Ang -(1 - 7)的影响3H-dopamine吸收在肾脏的不同区域,3H-dopamine吸收在肾皮质和髓质样本确定以下组:控制和孵化100海里的CNP或100海里Ang - (1 - 7)。
2.6。识别CNP和Ang -(1 - 7)受体
下面的组织进行了研究,以分析如果NPR-A或NPR-C受体参与CNP的影响3H-dopamine吸收:(a)和(b)控制和孵化100 nM CNP;(c) 100海里anantin(具体NPR-A受体阻滞剂);(d) 100 nM anantin + 100 nM CNP;(e) 100海里cANP (4-23-amide)(具体NPR-C受体激动剂);(f) 100海里cANP (4-23-amide) + 100 nM CNP。
分析如果AT1R、AT2R或Mas受体参与Ang -(1 - 7)的影响3H-dopamine吸收,下面的组织进行了研究:(a)和(b)控制和孵化100 nM Ang - (1 - 7);(c) 100 nM - 779(具体Mas受体阻滞剂);(d) 100 nM - 779 + 100 nM Ang - (1 - 7);(e) 100海里PD123319(具体AT2R拦截器);(f) 100海里PD123319 + 100 nM Ang - (1 - 7);(g) 100海里洛沙坦(具体AT1R拦截器);(h) 100洛沙坦+ 100 nM Ang - (1 - 7)。
在潜伏期结束,组织与冷洗SKB的解决方案,在3期5分钟,然后用2.5毫升的10%三氯乙酸均质。匀浆是离心机在5000 rpm(1700克)在4°C 30分钟和氚上层清液的活动通常是由闪烁计数方法。的结果3H-dopamine表示为d.p.m吸收。/ g的新鲜组织。
2.7。CNP和Ang -(1 - 7)对Na+K+腺苷三磷酸酶活性
测试是否产生的多巴胺增加肾CNP Ang -(1 - 7)可以与Na的变化有关+K+atp酶活性,以下实验进行的nomifensine(避免多巴胺神经元摄取)和卡比多巴(避免多巴胺合成)。卡比多巴是管理在活的有机体内(200μ克/公斤,i.p。,24和2 h before sacrifice) and在体外(100米在中,预培养和潜伏期)。CNP以及Ang -(1 - 7)影响测试的存在和在没有无线电标记多巴胺和nonneuronal多巴胺摄取抑制剂氢化可的松。
以下组进行了研究:控制(a)和(b)与100年孵化μ米卡比多巴。第二组在100年μ米卡比多巴(c): 1μM多巴胺;(d) 100 nM CNP;(e) 100海里Ang - (1 - 7);(f) 100μM氢化可的松;100 (g)μM氢化可的松+ 1μM多巴胺;(h) 100海里CNP + 1μM多巴胺;(我)100海里Ang - (1 - 7) + 1μM多巴胺;(j) 100 nM CNP + 1μ多巴胺+ 100μM氢化可的松;(k) 100海里CNP + 1μ多巴胺+ 100μ氢化可的松。
如前所述组织孵化了30分钟,然后均质(1:10重量/体积)在25毫米imidazole-1毫米edta - 0.25蔗糖溶液和离心机在5000 rpm(1700克)在4°C,持续15分钟。Na+K+腺苷三磷酸酶活性在上层的化验如前所述[20.]。腺苷三磷酸酶活性测定的比色测定释放正磷酸盐(24,25]。蛋白质浓度测定方法的洛瑞et al。26]。结果是Na的百分数表示+K+腺苷三磷酸酶活性,考虑控制值100%。
2.8。统计分析
所有的值表示为±SEM。数据处理中使用GraphPad统计软件(美国圣地亚哥,CA)。学生的t以及,单向方差分析(方差分析)和图基测试通信时进行。值为0.05或更少的被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。CNP的影响和Ang - (1 - 7)3H-Dopamine吸收
图1显示了CNP浓度增加的影响和Ang -(1 - 7)(下午1点到100海里)3在肾皮质H-dopamine吸收。10和100 nM Ang -(1 - 7)显著增加引起的3H-dopamine吸收。然后,我们使用了阈值浓度的100 nM Ang -(1 - 7)继续研究。另一方面,CNP在任何浓度使用未能改变3H-dopamine吸收。
的时间进程3H-dopamine摄取5 - 45分钟显示在图中2。100海里Ang -(1 - 7)增加多巴胺吸收15分钟,这种效应持续了45分钟,最大区别与对照组相比在30分钟。因此,我们进行了进一步的研究3H-dopamine摄取30分钟的潜伏期。相反,CNP并不影响3在任何时候H-dopamine吸收。
图3显示,100 nM Ang -(1 - 7)增加3H-dopamine吸收在肾皮质,但缺乏影响肾髓质。CNP无法修改3H-dopamine吸收肾皮质和髓质。
考虑到ANP和URO增加3H-dopamine吸收在肾皮质18,19),和Angⅱ表现出相反的效果22],我们开始比较这些血管活性的多肽的效力(每个用于克分子数相等的浓度的100 nM和修改多巴胺吸收表示为百分数)在多巴胺吸收效果获得工作CNP, Ang - (1 - 7)。图4说明URO显示最大增加45%和39%的效果和1 - 7和ANP的32%,虽然和二降低多巴胺吸收了29%。CNP并没有显著的影响。
3.2。识别CNP和Ang -(1 - 7)受体
下一个目标是测试CNP对多巴胺吸收的影响是否被激活NPR-B受体介导。自CNP行为主要是通过激活NPR-B受体,我们想抛弃缺乏CNP对多巴胺吸收的影响,如图1可以被激活的NPR-A CNP蒙面。因此,我们测试了CNP的作用3H-dopamine吸收当NPR-A受体选择性NPR-A受体阻滞剂被封锁,100 nM anantin。在图5,它可以观察到,CNP并不影响3H-dopamine吸收,这表明无论是激活NPR-A还是激活的NPR-B CNP会影响这个过程。此外,具体NPR-C受体激动剂,100 nM cANP (4-23-amide),既不改变多巴胺吸收也修改了CNP对多巴胺吸收的影响。
为了确定所涉及的受体亚型的刺激活动Ang - (1 - 7)3H-dopamine吸收在肾皮质,我们继续评估AT1R的参与,AT2R, Mas受体通过使用不同的特定的对手(图6)。选择性Mas受体阻滞剂,100 nM - 779,阻止了100 nM Ang -(1 - 7)对多巴胺吸收的影响,表明Mas受体的参与。相比之下,特定AT2R拮抗剂,100海里PD123319,没有修改的刺激效果Ang -(1 - 7)多巴胺吸收。有趣的是,在100 nM洛沙坦(特定AT1R拮抗剂),Ang -(1 - 7)进一步增加3H-dopamine吸收,暗示可能AT1R的作用除了Mas受体参与。
3.3。CNP和Ang -(1 - 7)对Na+K+腺苷三磷酸酶活性
为了确定是否增加多巴胺的CNP或Ang -(1 - 7)可能修改Na+K+腺苷三磷酸酶活性在肾小管,我们化验CNP的影响和Ang -(1 - 7)单独和与多巴胺酶活性。图7表明,在抑制肾多巴胺合成卡比多巴,Na+K+腺苷三磷酸酶活性与控件组相比增加了56%。在这种情况下,当多巴胺或Ang -(1 - 7),仅添加了酶活性减少约40%和25%,分别虽然当多巴胺和Ang -(1 - 7),同时又增加了进一步大幅降低Na+K+观察腺苷三磷酸酶(大约60%的减少与之相比,卡比多巴组)。另一方面,氢化可的松的加入没有修改本身Na+K+腺苷三磷酸酶活性与卡比多巴治疗组相比,但皮质激素改变多巴胺引发的抑制作用。此外,当多巴胺和Ang -(1 - 7),同时又增加了氢化可的松扭转部分幽默过度抑制多巴胺和Ang -(1 - 7)酶活性。最后,CNP本身并没有显示任何行动Na+K+atp酶活性和不修改多巴胺的酶活性的抑制作用。
4所示。讨论
肾多巴胺能系统是一个当地独立的利钠体系,有助于保持一个正常的钠和水,平衡血压和肾脏氧化还原稳定状态(27]。它调节体内平衡钠通过抑制一些钠转运蛋白,Na+K+腺苷三磷酸酶是其中最重要的酶参与肾脏重吸收钠(17]。然而,注入多巴胺的临床疗效受到质疑的临床研究表明多巴胺缺乏影响促进肾钠和水排泄在病理条件下(28- - - - - -33]。通过这种方式,我们最近报道说,10月的变更在多巴胺管状运输可能会降低多巴胺生物利用度腔和损害多巴胺D1和D2受体之间的相互作用(34]。因此,一个完整的活动所需的10月不仅是引起多巴胺利尿剂和利钠行动时体内接种ANP大鼠还必要发挥其全部利尿剂和利钠作用34]。这些证据的基础上,理解和1 - 7和CNP可以调节多巴胺运输10月在肾小管和多巴胺可用性提供了新的知识的机制,可能损害的利尿利钠作用时多巴胺治疗肾功能衰竭患者的管理。
通过这种方式,我们曾报道,ANP和URO刺激多巴胺吸收的管状细胞在肾脏NPR-A受体与鸟苷酸环化酶和cGMP作为第二信使[20.,21]。生理拮抗剂,Angⅱ展品相反的效果通过AT1R和PKA和营第二信使[23]。我们目前的结果表明,另一个重要的血管活性肽作用,Ang -(1 - 7),也能提高3在肾皮质H-dopamine吸收。观察到30分钟的最大影响孵化浓度为100 nM Ang -(1 - 7)是按照先前实验的结果与其他血管活性的多肽进行ANP, URO, Angⅱ(18,19,22]。考虑到整个肾组织中使用了实验中,多巴胺的神经元摄取被nomifensine。没有证据支持的存在多巴胺在其他extraneuronal网站(如壁血管、肾小球系膜,间质细胞)与多巴胺的管状内容比较多。然后,在我们的准备工作中,只有肾小管结构能够吸收大量的多巴胺。
Ang -(1 - 7)对多巴胺吸收的影响可能是由不同的机制,如转运蛋白的增加,细胞膜电位的变化,和/或改变载波的亲和力。在这个意义上,描述了肾10月运输多巴胺从血液进入肾小管细胞35,36]。这些转运蛋白包括oct - 1、OCT-2, OCT-3主要分布在近端小管细胞的基底膜(37]。10月函数可以由不同的蛋白激酶,因为许多公认的磷酸化网站可以发现在他们的胞内域(35,38]。按照10月的主要定位在肾皮质,我们的研究结果表明,Ang -(1 - 7)的影响3H-dopamine吸收只是观察到肾皮质,但不是在髓质。此外,多巴胺的基础吸收甚至低于肾皮质髓质。
我们也评估是否CNP,利钠肽家族的其他成员,可能效果相似的ANP或URO肾多巴胺吸收。我们的结果表明,CNP无法修改多巴胺吸收甚至在45分钟,也使用高浓度100海里,肾皮质和髓质。这种缺乏CNP对多巴胺吸收的影响可能与不同的可能性:CNP发挥其生物效应的选择性激活NPR-B受体(肾脏中表达较低的比例),从而增加cGMP代在靶细胞(39]。在肾脏,CNP代cGMP刺激低于ANP (40,41]。因此,缺乏应对CNP的刺激可能是由于一个内在NPR-B鸟苷酸环化酶活性低或低的这些受体在肾42,43]。通过这种方式,这些可能性的政府支持的高CNP,达到高循环水平的肽,与观察病理生理范围,缺乏对肾血流动力学的影响和管状钠重吸收和/或排泄(6]。
先前的实验证据表明,Ang -(1 - 7)释放减少和增加另一个儿茶酚胺的吸收,去甲肾上腺素,通过激活下丘脑和脑干的Mas受体血压正常的和月44,45]。依照这一事实,我们目前的结果表明,Ang -(1 - 7)增加多巴胺吸收在肾皮质,通过激活Mas受体。的主要受体Ang -(1 - 7)肾脏是由金管局受体,因为这个受体的缺失破坏其功能响应(46]。虽然Ang -(1 - 7)结合Mas受体具有高亲和力(Kd 0.83海里),它也能够绑定AT1R和AT2R低亲和力,提高某些生理效应的可能性intrarenal Ang -(1 - 7)可能是由non-Mas受体(47]。在我们的实验中,具体的Mas受体拮抗剂,a - 779,完全封锁了刺激Ang -(1 - 7)对多巴胺吸收的影响,证实了Mas受体的参与。根据与PD123319 AT2R抑制,Ang -(1 - 7)的刺激影响多巴胺吸收不变,表明AT2R并不影响的作用受体Mas Ang - (1 - 7)。有趣的是,Ang -(1 - 7)的刺激影响多巴胺吸收更加明显受到抑制AT1R (70% Ang -(1 - 7) +洛沙坦和39% Ang -(1 - 7)独自一人),这表明抑制AT1R揭示AT1受体抑制吸收反应Ang -(1 - 7)和反对Mas受体刺激效果(图8)。这个结果是按照我们之前的发现,在Angⅱ抑制多巴胺吸收AT1R的刺激(22]。Ang -(1 - 7)的机制通过激活Mas受体刺激多巴胺吸收可能包括几个交互途径。这样,多巴胺的相互作用和Ang -(1 - 7)与缓激肽(BK)、前列腺素(后卫)和一氧化氮(NO)必须指出。建立良好的互动Ang -(1 - 7)和BK在血管和神经元,但所知甚少在肾功能水平(48]。Caruso-Neves等人证明了BK抵消的刺激效应和Na - (1 - 7)+K+腺苷三磷酸酶活性(49]。dopamine-BK交互还建议。例如,多巴胺注入可能会增加尿激肽释放酶活动,钠排泄,肾血管舒缓素mRNA (50,51]。尿激肽释放酶活性增加多巴胺注入在血压正常的人以及必要的高血压患者52]。总之,这些数据表明,Ang -(1 - 7)和多巴胺与BK。此外,后卫和已被证明参与Ang -(1 - 7)和多巴胺作用[53- - - - - -60]。克拉克等人证明血管紧张素-(1 - 7)展品利尿剂和尿钠排泄的属性增加动力的生产。作者认为Ang -(1 - 7)反对肾脏Angⅱ的影响,通过动力分配的生产在一定程度上,这可能反过来减少AT1受体(55]。Ang -(1 - 7)抵消Angⅱ高血压的影响,通过绑定Mas受体和释放没有动力。肾血流量的增加引起了Ang -(1 - 7)月动物不仅被废除Mas受体的封锁,但也抑制的后卫,没有生产,突出肾的关闭这些系统之间的相互作用(57- - - - - -59]。此外,希利等人报道,D2受体的刺激磷脂酶A2 (PLA2)增加大鼠前列腺素生产内部medullar集合管细胞(53,54]。探测,在肾髓质和皮质多巴胺增加一氧化氮合酶(NOS)活性[61年]。另一方面,政府L-NAME减少尿钠排泄和利尿引起的多巴胺和硝酸尿排泄减少,表明没有参与调节肾钠排泄,,除此之外,不需要系统完整的表达D1受体激活利尿剂和利钠反应引起的(62年]。我们还报道,而抑制颗粒cGMP抑制ANP和URO刺激影响多巴胺在肾组织吸收,抑制可溶性cGMP的ODQ缺乏效果,建议ANP和URO影响nondependent没有(20.,21]。这等人报道,在调制at₂受体可能的病理生理学作用,肾血流动力学的影响和二世在萎缩的老鼠60]。通过使用卡托普利(血管紧张素转化酶抑制剂),化合物21 (at₂受体激动剂),fenoldopam (D1受体激动剂),PD123319 (at₂受体拮抗剂)L-NMMA (NOS抑制剂),吲哚美辛(COX抑制剂)和icatibant (B2受体拮抗剂),他们代表了一个复杂的和复杂的互动和关系和二世,Ang -(1 - 7),多巴胺,汉堡王,不,后卫,肾脏和环氧酶系统,除了生理调节肾脏血流动力学,参与高血压的发展。考虑所有这些证据,我们不能抛弃BK,后卫,或者没有参与Ang -(1 - 7)对肾的影响应该执行多巴胺吸收和进一步的实验来测试这个假说。
利钠肽发挥其生物行为通过激活NPR-A和/或NPR-B受体(4];与此同时,这些肽的间隙取决于他们绑定NPR-C受体(63年]。在我们的实验中,具体的NPR-A抑制剂,anantin,并不影响本身多巴胺吸收在肾皮质和CNP缺乏影响相同的过程即使在anantin的存在。为了抛弃NPR-C间隙受体的参与,缺乏行动的原因的CNP在多巴胺吸收,我们执行另一组实验的截短肽cANP (4-23-amide)。这种肽NPR-C受体结合,缺乏激酶和guanylyl环化酶活动(64年]。类似的cANP (4-23-amide)没有改变多巴胺吸收甚至单独或CNP的存在。总之,这些结果表明,CNP对肾没有影响多巴胺吸收通过激活NPR受体(图8)。
当比较的效力Ang -(1 - 7)与其他血管活性的多肽刺激肾多巴胺吸收(图4),Ang -(1 - 7)显示力量比ANP(分别为39%和32%,分别地。),但低于URO(39%和45%)。然而,当我们评估的影响Ang -(1 - 7)抑制AT1R和洛沙坦,Ang -(1 - 7)的刺激作用多巴胺吸收上涨70%。
为了阐明是否CNP Ang -(1 - 7)对多巴胺吸收的影响可能修改肾钠排泄,我们确定在Na这些血管活性的肽的影响+K+atp酶活性。为了避免可能的内源性肾多巴胺和多巴胺神经元的影响,我们使用卡比多巴抑制肾多巴胺合成和nomifensine防止多巴胺神经元摄取。肾钠+K+腺苷三磷酸酶活性增加多巴胺合成时被卡比多巴,同意多巴胺的减少可用性。在这种情况下,多巴胺添加时,酶的活性降低,根据恢复多巴胺可用性。另一方面,Ang -(1 - 7)显著降低钠泵的活动,并与多巴胺加在一起的时候,他们减少进一步的Na+K+腺苷三磷酸酶活性,添加剂对钠泵的影响。评估是否Ang -(1 - 7)全身抑制Na+K+腺苷三磷酸酶活性与Ang -(1 - 7)刺激extraneuronal吸收多巴胺,额外的实验研究氢化可的松的存在,一个已知的抑制剂extraneuronal胺的吸收。氢化可的松本身复制类似水平的Na+K+腺苷三磷酸酶活动卡比多巴但逆转酶的过度抑制诱导Ang -(1 - 7) +多巴胺。这一发现证实了Ang -(1 - 7)可能刺激肾脏多巴胺吸收,通过调节一个典型的氢化可的松sensitive-extraneuronal胺的吸收。
必须指出,肾Ang -(1 - 7)的影响是复杂的理解和可能并不总是对那些引起Angⅱ的。事实上,Ang -(1 - 7)影响可能会有所不同,取决于(a)中使用的动物模型研究;(b)浓度达到Ang -(1 - 7)在局部或全身性的水平;(c)的肾元段进行研究;(d)水平的RAS激活;和(e)肾脏钠和水的状态(65年]。进行一些研究在体外也在活的有机体内表明,Ang -(1 - 7)增加尿钠排泄和调节钠转运蛋白的活性利尿的近端小管(13]。它被描述,Ang -(1 - 7)可以抑制ouabain-sensitive Na+- k+腺苷三磷酸酶在孤立的大鼠近端小管66年]。此外,其他作者报道,Ang -(1 - 7),在高浓度(10−8米),抑制流体吸收分离大鼠近端小管直(67年]。这些报告同意我们的结果和展示Ang -(1 - 7)可以抑制Na+- k+腺苷三磷酸酶活性的肾脏。相反,洛佩兹Ordieres等人表明,大鼠肾脏钠+- k+atp酶活性下降约40 - 70%和10−10到10−6M Ang - 10(1 - 7),但增加了22%−12M肽浓度,从而表明两相的影响(68年]。从这个意义上讲,ibsen Pinheiro等人已经证明,Ang -(1 - 7)可能产生抗利尿和antinatriuretic效果,特别是在水负载动物(69年,70年]。关于肾小球水平,一些报告显示,Ang -(1 - 7),注入大鼠在低剂量时,能血管舒张preconstricted肾传入小动脉在兔子和增加肾血流量(58,71年]。Ang二世的这一行动不同于同样的船只,因为Angⅱ在传出小动脉显示更高的反应性,没有传入小动脉的阻力的变化(72年]。
不像Ang -(1 - 7),中国出版集团,本身并不影响Na+- k+atp酶活性。此外,当CNP添加与多巴胺,利钠肽显示肾Na的抑制作用+K+atp酶,观察多巴胺单独使用时。这些结果说明CNP对Na缺乏规范操作+K+atp酶活性。
的利钠、利尿作用的肾脏是由刺激多巴胺D1受体,主要是细胞内,位于基底条件(17]。这些受体可以招募到质膜,通过D1受体激动剂或胞内多巴胺的增加可用性(17]。也表明,第二信使,cGMP,使快速易位D1受体的质膜(17]。另一方面,Mas受体激活导致一氧化氮生成,可以增加细胞内cGMP水平通过激活可溶性鸟苷酸环化酶的形式(12,73年]。因此,当Ang -(1 - 7)增加肾的多巴胺,它还导致代cGMP,两个因素密切参与招聘D1受体的质膜,从而帮助维持对多巴胺的反应和提供一个通用的机制,肽激素能调节间接钠体内平衡,通过敏感的多巴胺受体。
马斯AT1 at₂和受体之间的复杂的相互作用应该考虑了解我们的结果。是否ACE2的增加和Ang -(1 - 7)可能造成的有利影响古典RAS抑制剂仍是一个有争议的问题。从这个意义上讲,Ferrario等人报道,治疗与洛沙坦浓度增强等离子体和尿Ang -(1 - 7)在肾皮质和ACE2活动,没有表情的变化ACE Mas和AT1受体(74年]。因此,ACE2活动增加AT1阻塞将增强肾Ang -(1 - 7)浓度,这反过来会增加多巴胺吸收和Mas受体激活,我们在实验中观察到。因此,在肾皮质多巴胺运输,增加了Ang -(1 - 7),一起活动的增加ACE2-Ang - (1 - 7) mas受体轴,有助于renoprotection由AT1受体阻滞剂。这是在协议与Da对峙等人报道,在一个小鼠模型75年),外生Mas受体的激活受体激动剂大街0991防止adriamycin-induced肾病和有助于AT1受体封锁与洛沙坦的有利影响。此外,政府的Mas受体拮抗剂,a - 779实验模型的高血压、减毒的影响ACE抑制剂和Ang II受体阻滞剂(76年]。此外,Igase等人证实,高血压肾病模型的抑制AT1受体olmesartan增加等离子体水平的Ang -(1 - 7),也导致有氧运动——和renoprotective效果通过减少肾小球硬化和肾血管周围胶原沉积(77年]。同样,宗庆后等人表明,老鼠adriamycin-induced心脏衰竭了等离子体水平低的Ang -(1 - 7)和减少心肌Mas受体的表达,而用替米沙坦治疗和洛沙坦恢复Ang -(1 - 7)水平、抑制心肌AT1受体表达但不影响Mas和at₂受体的表达78年]。Sukumaran洛沙坦在刘易斯等人报道,治疗水平也增加自身免疫性心肌炎心肌的老鼠ACE2 Mas受体减少纤维化和肥大和炎症的分子标记,胶原蛋白和III,心房利钠肽(79年]。这些结果表明,AT1堵塞显著改善左心室功能和改善心脏重构的发展通过调制ACE-2 / Ang - (1 - 7) / Mas受体轴。另一方面,考克等人报道,接受血管紧张素转换酶抑制剂结合低钠饮食健康个体表现出等离子体水平升高的Ang - (1 - 7) Angⅱ的浓度没有变化80年]。因此,ACE抑制和低钠饮食似乎转变之间的平衡Ang - (1 - 7), AngⅱAng -(1 - 7),反过来,可能导致ACE抑制的疗效。Da对峙等人报道,Mas受体激动剂治疗大街0991改善肾功能,降低尿蛋白的损失,和减毒组织学变化75年]。类似renoprotection观察与AT1受体拮抗剂治疗后,洛沙坦,重建Mas受体表达和ACE2表达。但同样的作者证明了Mas受体的存在似乎renoprotective AT1受体拮抗剂的作用至关重要,因为与洛沙坦是治疗不能减弱adriamycin-induced Mas基因敲除小鼠的肾损伤。
总之,角色的知识ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas轴在肾脏疾病中可能是有用的,以防止急性和慢性炎症和纤维化药物目标明确ACE2 / Ang - (1 - 7) / Mas轴可能为治疗人类提供新的治疗机会肾病(81年,82年]。总的来说,这些发现表明,增加活动ACE2-Ang -(1 - 7)的mas受体轴有助于引发的有氧运动——renoprotection ACE抑制剂和阿拉斯。这些复杂的AT1和Mas受体之间的相互作用应该考虑的解释结果。
总之,Ang -(1 - 7)刺激多巴胺吸收马斯在肾皮质激活受体。与其他成员的利钠肽,CNP无法调节肾多巴胺吸收和Na+K+atp酶活性。多巴胺和Ang -(1 - 7)可能一致的行动来抑制肾小管钠重吸收,因此增加的多巴胺吸收,导致过度抑制Na+K+atp酶活性。这样,Ang -(1 - 7)反对的一和二钠运输监管机制。必须执行进一步的研究以确定细胞内事件和信号参与Ang -(1 - 7)多巴胺在肾的关系。我们的结果表明存在肾多巴胺和血管活性的肽之间的密切关系,交互可能影响hydrosaline平衡的障碍也可能参与高血压的发病机制。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
n . l . Rukavina Mikusic和n . m . Kouyoumdzian贡献同样这项工作。
确认
这项工作是布宜诺斯艾利斯大学的赠款支持(UBACYT 20020130200105 ba)和国家科技推广机构(ANPCYT,皮克特人2012 - 1775)。