文摘

本研究的目的是描述的肝油提取深海鲨鱼,Echinorhinus brucus,从中央印度洋和评估其对神经母细胞瘤细胞株的细胞毒性影响(SHSY-5Y)。肝油特性Echinorhinus brucus揭示了棕榈酸的存在(15%)、油酸(12%)、硬脂酸(8%)、二十二碳六烯酸(DHA)(18%),和二十碳五烯酸(EPA) (16%)。也发现,是一个很好的来源的角鲨烯(38.5%)和脂溶性维生素等,D和K(维生素a: 17.08毫克/ 100克油,维生素D: 15.04毫克/ 100克油,和维生素K: 11.45毫克/ 100克油)。因为它被发现富含必需脂肪酸,脂溶性维生素,和角鲨烯,它可以被认为是更好的膳食补充剂。的石油Echinorhinus brucus还显示高在体外对人类神经母细胞瘤细胞系细胞毒性作用(SHSY-5Y)和IC₅₀价值35 - 45 ng。

1。介绍

鲨鱼肝油的巨大的健康研究了在过去的几十年里,据报道作为营养来源如脂溶性维生素和必需脂肪酸。因为它的伤口愈合治疗等健康财产和造血作用的刺激,它被用于传统医学在斯堪的纳维亚国家1]。高含量的ω3多不饱和脂肪酸也有助于其多功能特性。已经证实了这些ω3 PUFA延迟负责心血管疾病血栓的形成。有密切关系的消费石油和降低血液中的胆固醇和甘油三酯水平,与降低血压,减少痛苦的风险因素冠状动脉粥样化病(2),已经使用在深海捕捞的鲨鱼被抓住在印度的时候大量的拖网捕鱼。各种有价值的产品直接从鲨鱼包括表面活性剂、芳香、润滑剂、人造丝、化妆品、和制药(3]。低生育能力和增长速度缓慢的鲨鱼不可能鱼肝油商业化在印度(4]。鱼油的消费有其高兴趣过去几年由于其多样的健康益处(5]。鲨鱼肝油包含一组ether-linked甘油称为1-O-alkylglycerols, n - 3 PUFA,角鲨烯,一些维生素。这些组件已报告呈现多个生物活动,包括抑制肿瘤生长的6,7和增强巨噬细胞的激活8)和特定的免疫在啮齿动物和人类9]。因为它的双重内容的n - 3 PUFA alkylglycerols,鲨鱼肝油的营养特别感兴趣。这些鲨鱼的肝油提取用于治疗各种病疾病的传染性疾病和癌症(10]。鲨鱼肝油发现富含各种维生素如维生素A和维生素e (11]。石油从深海鲨鱼中提取包含一个高耸的PUFA,角鲨烯,alkylglycerols,和琐碎的游离脂肪酸水平,甾醇,姥鲛烷和蜡酯(12]。某些生物活性化合物,即烷基甘油及其衍生品,建立了影响人体的许多生理机制。抗增殖效果烷基甘油对结肠癌细胞已经被报道(13]。角鲨烯和烷基甘油和脂肪酸对哺乳动物癌抗癌的作用。西方饮食包含了不成比例的高水平的ω6和低水平的ω3脂肪酸,导致高ω6 /ω3比率与多个病理条件。动物和人类的研究表明,减少ω6 /ω3的比例改善心血管疾病和改善身体的其他代谢的结果(14]。最近有兴趣探索的作用ω3 FAs几个患病的条件(15]。尽管的功效ω3 FAs人类癌症仍然是不确定的,在体外和在活的有机体内动物研究表明,ω3 FAs可能有保护作用对乳腺癌、前列腺癌、肝癌、结肠癌、皮肤癌除了神经母细胞瘤(16- - - - - -20.]。神经母细胞瘤(NB)是一个最常见的额外的颅固体癌症儿童和婴儿期最常见的一个很高的程度。当涉及到癌症治疗,治疗癌症的化疗是最使用的方法除了放射性疗法,但他们有很多副作用,因此寻找一个替代医学没有或很少的副作用是一个先决条件。Echinorhinus brucus深海鲨鱼发现主要在太平洋东部除了;这也是在世界各地的热带和温带水域发现的。这个很少遇到鲨鱼游泳接近海底的底部,通常在400 - 900米的深度(1300 - 3000英尺),尽管它可能进入水浅得多。鱼肝油是在南非这样的国家高度重视医学,而在印度的石油被认为是贫穷和用于外套独木舟阻止木无聊的甲虫。我们目前的研究是评价肝脏油提取的细胞毒性的活动Echinorhinus brucus对神经母细胞瘤细胞系并分析其生化成分。

2。材料和方法

2.1。样本收集和采油

树莓鲨鱼(Echinorhinus brucus)(12公斤,5.5英尺)期间被克鲁斯318号(400 - 600)在渔业海洋调查船(FORV) Sagar Sampada高池在芒格洛尔和西海岸的印度。深海拖网捕鱼被用于捕鱼和样本立即冻结在−20°C上,随后送到实验室进行进一步分析。树莓鲨鱼的肝脏(3.5千克)收集切除和体重。脂质提取是描述Folch et al。21),采用2:1的混合物chloroform-methanol称重部分肝脏样本。石油存储在琥珀颜色的瓶子,在氮、−60°C。

2.2。脂肪酸分析

脂肪酸甲酯(饥饿)的方法分析了Sankar et al。22]。的一小部分脂质提取和0.5 N氢氧化钠皂化在甲醇甲基化在14%三氟化硼甲醇(男朋友₃/甲醇)。甲基酯脂肪酸从而获得分离的气相色谱法(GC超热跟踪)配备了珀金埃尔默精英225®毛细管柱(30 m×0.25毫米×0.25μ米)和火焰离子化检测器。载气是氮和流量为0.7毫升/分钟。初始柱温箱温度设置为110°C的速度增加了2.7°C /分钟到240°C,紧随其后的是一个保持4分钟。这导致总运行时间为57.15分钟。注入器和检测器温度保持在300°C。氢气和空气流速调整到45毫升/分钟和450毫升/分钟,分别。单个组件被确定通过比较保留时间与那些从名人获得混合标准(Supelco-Sigma奥德里奇QumHmica、墨西哥)。定量成分的基础上计算一个特定的峰面积的百分比总峰面积。定量数据修正了探测器响应的差异通过分析每个脂肪酸报道的真实的标准。使用的所有溶剂从默克公司分析试剂级(Merck-Mexico s.a.)。

2.3。角鲨烯的gc - ms量化

GC - MS(珀金埃尔默Turbomass女士和珀金埃尔默Autosystem XL GC)法识别和量化鲨鱼肝油样本中角鲨烯。角鲨烯是来源于鲨鱼油,Echinorhinus brucus通过一系列的过程,即石油nonsaponifiable物质的提取分离的方法Folch et al。21]。从nonsaponifiable角鲨烯是用气相色谱-质谱法识别和量化使用商业角鲨烯(σ)标准。的浓度为20微窝作为标准。

2.4。脂溶性维生素通过反相高效液相色谱法提取和量化

脂溶性维生素,维生素A,维生素D2,和维生素K2,识别和量化的反相高效液相色谱法鲨鱼肝油中提取的Echinorhinus brucus。Nonsaponifiable物质分离方法从鲨鱼肝油的Folch et al。21]。从提取的脂溶性维生素被确定nonsaponifiable物质和量化通过反相高效液相色谱使用商业标准。

2.5。细胞培养

美国细胞培养SH-SY5Y细胞(写明ATCC)经常在杜尔贝科的修改鹰培养基培养(DMEM)(表达载体Inc .)、美国)补充10%胎牛血清的边后卫,青霉素100单位/毫升和100μg / mL链霉素在37°C公司为5%₂。

2.6。使用MTT测定细胞毒性效应的鱼肝油

细胞的生存能力是评估通过MTT测定使用癌症细胞系。分析是基于减少可溶性黄四唑盐不可溶性紫色甲瓒晶体通过新陈代谢活跃的细胞。只活细胞能够占据四唑盐。琥珀酸脱氢酶(酶)在活细胞的线粒体可以转换内化四唑盐甲瓒晶体,紫色的颜色。然后细胞细胞溶解,溶解在DMSO溶液的解决方案。然后确定颜色开发ELISA阅读器570海里。短暂,MTT的解决方案(5 g / L)被添加到每个在37°C和孵化4 h。在100年的培养基μL二甲亚砜是添加到每个溶解甲瓒。光密度测量在570 nm使用标(Tecan、奥地利)。对照组的光学密度被认为是细胞生存能力的100%。细胞毒性效应评估在不同浓度SHSY-5Y细胞系中,0.01 ng 100000 ng。

3所示。结果与讨论

3.1。脂肪酸分析

一些脂肪酸中确定的可皂化的分数鲨鱼肝油在这项研究和总结在表1。主要营养重要脂肪酸被观察到在这个概要文件,他们为相应的石油的生物活性。棕榈酸(),肉豆蔻酸()、硬脂酸()的饱和脂肪酸。不饱和脂肪酸是考虑油酸()、亚油酸()、亚麻酸()、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的贡献主要部分(和职责。)(表1)。这是依照以前的结果(23]。饮食成分和水温可能是两个重要的因素负责EPA和DHA含量低的鲨鱼的肝油,以及浮游甲壳类动物是一个重要的食物来源,及其EPA和DHA含量受环境温度的影响在这个意义上:水温的增加可能导致减少的EPA和DHA水平鲨鱼肝油(24]。鲨鱼肝油中脂质含量和成分已知可能会受到不同的影响因素,如捕鱼季节,物种,位置,和可用性的食物。鲨鱼肝油被认为是一个很好的来源的多不饱和脂肪酸(PUFA)。两种酸、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),已报告是重要的在预防或减少心脏疾病25)和炎症性疾病和营养补充大脑和视网膜发育的婴儿。饱和脂肪酸(SFA),如油酸、棕榈,硬脂酸,作为能源,结构元素的构建块,蛋白质修饰和基因转录的调控。成分分析显示显著的特异性细胞特定国家林业局的隔间,虽然个人的新陈代谢和健康影响方面SFA很难检查。脂肪组织和肝脏自身的能力新创合成和储存SFA,尤其是棕榈酸酯(16:0),从极地前兆,尤其是葡萄糖。除了16:0,乳腺拥有意味着生产其他特定国家林业局,如十四(14:0)和月桂酸(12:0),提供容易获得能源和微生物的来源保护确保增长、发展和生存的哺乳动物的后代26]。

3.2。角鲨烯的gc - ms量化

众所周知,鲨鱼肝油推荐的营养增补剂,因为烃角鲨烯的含量高。角鲨烯,C_30.H₅₀三萜烃有六个nonconjugated双键,通常是发现在深海鲨鱼、橄榄油、棕榈油(27]。一个已知的天然抗氧化剂,起着重要的作用在降低血液胆固醇,增强化疗药物的抗肿瘤作用,抑制肿瘤生长,增加免疫系统的效率(27]。因此,角鲨烯brucus石油的存在将提高其营养价值。角鲨烯标准峰是显示在图1。鲨鱼肝油中角鲨烯浓度计算为38.4%(图2)。获得的结果有很好的按照工作通过烘焙和尼科尔斯,199528]。角鲨烯是被证明是参与作为静压器官(肝脏的功能12]。角鲨烯的肝细胞E。brucus本研究分析了高于Deprez发现et al。12]。角鲨烯的量的差异可能是由于各种各样的因素;季节性变化和同一物种不同石油成分以前记录(29日]。

3.3。脂溶性维生素的色谱图

脂溶性维生素,即维生素D2和维生素K,是识别和量化的反相高效液相色谱法鲨鱼肝油中提取的Echinorhinus brucus。列是一个反相硅胶柱,嵌入式磺酰胺极性基团提高固定相。这个专栏有选择性类似C18柱分析物的极性低,兼容性的优势与水只移动阶段。一些类的化合物(例如,硝基芳香化合物)显示显著不同的选择性模式键合相。相应的峰值维生素A、D和K是观察到3日,7日,9分钟。维生素K2和维生素D2水平被发现11.45毫克/ 100克石油和15.04毫克/ 100克油,分别,而维生素A水平被发现(图17.08毫克/ 100克油3)。定量成分的基础上计算一个特定的峰面积的百分比总峰面积。定量数据修正了探测器响应的差异通过分析每个报道维生素的真实的标准。健康问题可以阻止身体吸收维生素K,如胆囊或胆管疾病,囊性纤维化,乳糜泻和克罗恩病。在过去的十年中,已经有了较大的进步,在维生素D的研究超越了简单的概念,维生素D是重要的预防佝偻病儿童和成年人生理相关性不大。维生素D不足,除了引起佝偻病,防止孩子达到他们的基因峰值骨量,导致和加剧成人骨质疏松,导致经常痛苦的骨病骨软化。病人患有视力降低半暗条件(夜盲症或夜盲症疾病)被局部应用肝汁或治愈牛肝提取物(之前煮熟)的眼睛。关于这个过程,目前维生素A在视觉周期的生物作用是众所周知的,它直接关系到眼睛的视杆细胞在视网膜(30.]。

3.4。神经母细胞瘤细胞系细胞毒性评价的鱼肝油

这是观察到鲨鱼肝油提取物Echinorhinus brucus有细胞毒性作用剂量依赖性的方式(图4)。肝油提取显示细胞毒性效应与IC对SH-SY5Y细胞系₅₀35 - 45 ng。48小时后的细胞毒性效应进行了分析与肝油提取的治疗。我们的研究首次表明,Echinorhinus brucus鱼肝油可以扮演一个角色在发展中新的策略来预防和治疗神经母细胞瘤。相关研究表明,角鲨烯烷基甘油,脂肪酸在肝油起到anticancerous作用[31日]。

4所示。结论

没有全面的数据关于生物活性化合物的生化特性在深海鲨鱼肝油印度专属经济区。角鲨烯鲨鱼肝油有好的内容,表明它可以用作营养增补剂。鲨鱼肝油含有高量的饱和脂肪酸(SFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)。他们有多重在体外和在活的有机体内属性:他们减少放疗的副作用,抑制肿瘤生长,刺激和调节免疫反应。明显细胞毒性活动发现的石油用于这个研究提供了潜在的使用对人类神经母细胞瘤和它的使用作为一种替代方法对神经母细胞瘤化疗目前使用有严重的副作用。我们假设鲨鱼肝油是一个很好的候选人在癌症治疗进一步的研究。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者表达真诚的感谢中央渔业技术研究所主任提供的所有设施和海洋生物资源与生态中心主任资金支持成功完成的工作。