文摘
为了探索血清肿瘤坏死因子的变化和临床意义α和il - 6和ET水平在妊娠高血压疾病的发病机制(HDIP),超声心动图,血清il - 6和TNF -α变化与高血压孕妇障碍,提出了临床分析方法。回顾性分析59孕妇去省立医院的产科部门分为两组。正常对照组由32正常,无并发症的孕妇;子痫前期组包括27个患者收缩压的血液 和/或舒张压 妊娠20周后出现蛋白尿。肿瘤坏死因子的水平α和正常孕妇血清中il - 6与子痫前期孕妇被酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。结果表明,与正常孕妇相比,血清TNF水平α和il - 6的早期孕妇紫芝和显著增加,和TNF -增加的趋势α和il - 6水平与并发症的严重程度有关。意思是肺动脉 ,血清肿瘤坏死因子-α孕妇水平显著高于平均肺动脉的孕妇 。分析发现,血清TNF水平α和il - 6在缺氧妊娠期高血压患者明显增加,和肺组织免疫组化的结果还表明,血清TNF -α缺氧妊娠期高血压患者和il - 6水平明显增加。和血清肿瘤坏死因子-α和il - 6水平与右心室收缩压呈正相关(RVSP)。结论。本研究显示,高水平的血清TNF -α和il - 6与妊娠期高血压的病理生理过程密切相关。血清肿瘤坏死因子水平α和il - 6等显著增加,血清肿瘤坏死因子的变化α和il - 6和ET水平有重要临床价值密切监测疾病的严重程度和发展的疾病。
1。介绍
怀孕是一个特殊的生理期女性,和各种人体的生理指标将会改变,以促进胎儿的生长在母亲和后来的交付。在怀孕期间,孕妇的孕激素和雌激素水平变化显著,和他们的血清水平达到第三阶段的峰值;这些激素影响合成、代谢和分泌功能,肝脏和肾脏。妊娠高血压疾病是一组与妊娠相关高血压、子痫前期,惊厥;慢性高血压子痫前期与并发症有关;妊娠并发症的高血压会增加妊娠年龄。损害孕妇如图1;影响可以是可逆的1]。高血压疾病在怀孕期间一直是产科工作者十分关注的疾病,它是一个主要的孕产妇和围产期生命和死亡的危险因素。在中国的发病率是9.4%,在国外报道发病率是7% - -12%,并造成的死亡占孕产妇死亡的12%;的主要原因之一,威胁安全的母亲和婴儿和孕产妇死亡原因。近年来,尽管研究妊娠高血压疾病出现在源源不断,到目前为止,这种疾病的发病机理尚未阐明(2]。妊娠期高血压的主要临床表现是高血压、心脏和肾脏衰竭,水肿、蛋白尿、抽搐、等;逐步发展的疾病,一些患者可能有肾功能衰竭等严重并发症,早产,昏迷,甚至死亡;在这些并发症,急性肾损伤(AKI)是主要的并发症和母亲流产的主要原因,早产、胎儿生长迟缓,和孕产妇死亡3]。因为肾功能的损伤可以通过治疗逆转时间的早期阶段,肾脏功能可恢复正常,所以早期诊断和早期治疗是临床治疗的建议。
2。文献综述
Gabbay-Benziv等人培养的滋养层细胞体外抑制素发现,表明有信使rna编码抑制素在滋养层细胞(4]。控制器等人表明,抑制素的表达是不同的滋养层细胞正常有子痫前期的怀孕妇女和妇女和后者高于前者5]。王等人的病例对照研究的结果显示,抑制素是295 pg / L,敏感性为85.7%,特异性为98.5%,精度为0.954,表明抑制素可以作为指标因素的早期预测子痫前期(6]。费雪发现,在妊娠高血压疾病的女性在怀孕中期,血清抑制素水平并不不同于正常孕妇(7]。易等人认为,血清抑制素浓度的孕妇在怀孕中期与子痫前期的发生[无关8]。Kumar等人表明,苯丙酸诺龙可以作为一个独立的危险因素预测早发型子痫前期,它与胎儿游离DNA有关,两者都是高与子痫前期孕妇血清的9]。Roukoz 50例子痫前期和250年相比正常情况下11 - 13周的妊娠和30-33周的妊娠。发现没有显著差异在两组之间血清激活素水平在11 - 13周的妊娠,但它是重要的在30-33周的妊娠,并结合血清激活素水平30-33周的妊娠孕妇的一般临床资料,可以检测到50%的子痫前期患者(10]。加上PP13 PAPP-A, ADAM12激活素A,抑制素A,和子宫动脉多普勒血流动力学在怀孕中期,预测子痫前期的灵敏度可以达到60% - -80%,和专一性可达60% - -80%;当激活素的特异性结合π值预测子痫前期为90%,灵敏度只有57%。Iwahasi等人带着早发型子痫前期孕妇的血清和正常孕妇血清中发现PAPP-A;使用中值比较,他们发现与早发型子痫前期孕妇低于正常孕妇(0.80 1.05妈妈和妈妈, ),结合RBP4,预计增加34%博士在早发型子痫前期,和PAPP-A可以作为一个有用的指标预测早发性和重度子痫前期11]。
3所示。研究方法
3.1。超声心动图评估疼痛妊娠高血压
超声心动图是由超声心动图有超过10年的临床经验。在考试时应注意以下几点:超声心动图图像等级不应低于年级c .肺动脉压力的计算值是一致+ 5毫米汞柱(轻度)的基础上,三尖瓣transvalvular压差。这份报告应该包括三尖瓣返流速度,transvalvular压力梯度,估计肺动脉收缩压。如果肺动脉压力高于50毫米汞柱,它应该被视为病态,不应该被视为正常的孕妇。
主要评价指标包括以下超声心动图指标:(1)纵轴的左心室:主动脉主要直径、左心房内径、室间隔厚度、左心室舒张期结束直径、左心室收缩末直径、左心室后壁厚度(2)烈度衰减的肺动脉干:肺动脉干(3)对心脏测量(顶端四腔心切面):右心室底座直径,右心房直径、左心室质量指数(LVMI),三尖瓣环presystolic振幅(TAPSE)(4)测量左心室收缩功能:左心室射血分数(EF)、左心室短期缩短(FS)、中风率(SV)和分钟输出(心输出量、公司)(5)测量左心室舒张功能:二尖瓣血流频谱图:E峰,峰,E / A和E峰时间延迟(美国东部时间);多普勒成像TDI:早期的收缩期峰值速度(S),舒张早期峰值速度(e ),和舒张晚期峰值速度(a )(6)肺动脉压力测量:三尖瓣返流速度,三尖瓣transvalvular压力梯度,估计肺动脉收缩压
同时,本研究也记录受试者的年龄、心率、身高和体重,问患者孕前体重作为他们的标准体重(12]。
左心室内径和墙壁的纵轴测量左心室。当测量时,选择一个垂直于纵轴和测量在或接近二尖瓣的顶点。电子光标放置心肌壁交界处和心脏室,室壁和心包。室的内径与2 d超声引导M-mode可以获得,但更好的方法是获得直接与二维超声图像,避免了斜的心室,使其更准确。
部分缩短可以从2 d引导M-mode获得图像,但最好是直接测量辐射线的2 d图像。节段的壁运动异常引起的冠心病或传导异常,左心室整体功能基于直径测量很有问题。患者无并发症高血压、肥胖、或瓣膜病,如没有临床确诊心肌梗塞,这样的节段性差异是罕见的,所以部分缩短临床可以提供有用的信息。患者基底LV,但增加内侧和左静脉体积,LV值高于基底LV。
计算分数(EF),不同于左心室收缩体积的平均值(类别)和左心室舒张期容积(ESV),其公式如下:
左心测量应在2 d或3 d。厚心肌之间的接口和左心室腔是关闭,关闭和整个轮廓与二尖瓣环的一条直线。时间线被选中在顶端两视图和四腔心切面。左心室容积应以顶端four-chamber两院的观点。选择最大的左心室、左心室区域,尽量不要缩短左心室和左心室容积的低估13]。当检查,减少图像的深度关注左心室腔,从而降低左心室缩短的机会;它还减少了错误跟踪心内膜。
在左心,M型,2 d和3 d计算左心是有效的方法。所有测量应该结束的时候心脏舒张期(二尖瓣关闭前的框架或框架最大的中央室直径或卷在心动周期)。左心室舒张期直径和壁厚测量与M型或2 d都依赖几何模型计算左心室直径,而3 d超声可以直接测量LV体积,一路改变音量大小的体积的心肌心肌密度。与此同时,该研究还记录年龄、心率、身高和体重,问病人体重在怀孕前根据自己的体重。
3.2。血清标志物TNF-a和il - 6水平之间的相关性和妊娠期高血压
3.2.1之上。研究人群
分析的对象是孕妇的记录了住院病人在省立医院产科部门在2021年5月和2022年5月之间。这项研究包括59个参与者被分成两组。其中一个组是27个孕妇患有prepain和生在我们的医院,被指定为prepain组。显著的症状是两个或两个以上的湿的测量孕妇怀孕20周后血压,收缩压的血液 ,和/或舒张压 ,和测量时间至少4小时,蛋白尿。在另一组,32岁的孕妇生了没有问题在怀孕期间被确认为正常对照组。孕妇的妊娠年龄和产妇年龄pre-Ziton和对照组总是相似的。所有孕妇一怀孕,这项研究不包括女性高血压、心脏病、肾病、1型或2型糖尿病。
3.2.2。方法
分析组设置如下:(1)normoxia控制妊娠组,(2)妊娠高血压组,和(3)treprostinil治疗组(14]。肿瘤坏死因子-血液样本α从心脏和il - 6收集并存储在-80°C。
(1)右心室收缩压检测。Pentohexidine管理静脉注射(30毫克/公斤)是静脉注射,气管插管和放置在通风良好的环境。胸腔打开,PE-50聚乙烯管插入到右心室,右心室收缩压是能源实验采集的数据收集。
(2)总RNA的提取。用试剂盒从肺组织中提取总RNA,和具体操作步骤如下:(一)50毫克的肺组织加入1毫升的试剂盒,放置在液态氮,由均质机均质(b)均质样品被放置在室温下5分钟完全独立的核酸和蛋白质(c)增加200μl氯仿,动摇了15年代,并允许站在室温下为1分钟(d)离心机在 15分钟在4°c,离心后,样本分为三层:较低的层(红色有机phenol-chloroform阶段),中间层,无色的水相。RNA上无色的水相(e)无色无水的阶段转移到一个新EP管,增加500异丙醇,并允许在室温下站10分钟(f)离心机在 在4°C为15分钟去除顶层(g)洗RNA丸,加1毫升的预冷75%酒精,离心机 在40°C 5分钟,去除顶层(h)干RNA球在室温条件下,添加约50(取决于颗粒的大小)RNase-free水,并存储在80°C溶解RNA丸
(3)反转录的RNA。互补脱氧核糖核酸合成体外Moloney白血病病毒的逆转录酶(M-MLV RT),操作步骤如下:(一)添加以下组件表1nuclease-free微型离心管(b)混合后加热在70°C 5分钟,很快就在冰上冷却5分钟(c)经过短暂离心,以下组件被添加,如表所示2(d)组件混合轻轻地,在室温下反应10分钟然后加热45°C 50分钟(e)热量在70°C 15分钟停止反应
(4)实时定量PCR(实时定量PCR)。的SYBRPemix交货标签™工具是用于实时荧光定量PCR反应。具体步骤如下:(一)准备反应系统根据组件表3(准备应在冰上)(b)运行rt - pcr反应。反应过程如表所示4
(5)免疫组织化学。(我)脱蜡(一)石蜡的部分4厚度按顺序放置在100%二甲苯(a)和100%二甲苯在37°C (b) 15分钟(b)片按顺序放置在100%乙醇- 100%乙醇- 95%乙醇- 80%乙醇- 70%乙醇加%乙醇2分钟(c)片被浸泡在重蒸馏的水2分钟,重复3次(15](2)抗原检索(一)脱蜡后,样品被放置在3% H2啊,在室温下15分钟,然后浸泡在重蒸馏的水2分钟,重复3次(b)在微波预热0.1柠檬酸溶液3分钟,迅速把切片放入柠檬酸钠溶液,并继续煮15到20分钟(3)血清阻断(一)样品冷却30分钟,然后浸泡在重蒸馏的水2分钟,重复3次(b)组织的重蒸馏的水蒸发后,立即添加血清过氧化物酶阻断剂阻止,酝酿在37°C 30分钟(iv)抗体孵育(一)孵化与主要抗体,酝酿在37°C 30分钟,丢弃屏蔽解决方案,添加TNF -α在4°C或il - 6抗体,孵化过夜(b)与二级抗体孵化后,复苏的主要抗体后,样本与PBS洗了三次每次5分钟。洗涤后,生物素化的兔抗体增加了二次抗体和孵化在室温下15分钟(v)显色性
添加显色底物3之后,3-diaminobenzidine (3 3-diaminobenzidine轻拍),样品与辣根peroxidase-labeled反应链霉亲和素,和在显微镜下观察到的颜色。足够的显色后用干净的水冲洗。(vi)对比染色
幻灯片重蒸馏的水里洗了3分钟,然后用苏木精复染色30秒后重复3次。自来水冲洗两次,每次6分钟。(七)脱水
幻灯片重蒸馏的水里洗了3分钟,重复3次,然后放置在70% - 80%的乙醇90%的酒精100% - 95%的乙醇- 100%乙醇- ethanol-xylene-xylene 2分钟,最后浸泡在二甲苯(16]。(八)封面页
把旁边的中性牙龈组织,盖上盖玻片,躺下,然后另一边避免气泡。干燥密封的幻灯片65°C的烤箱内过夜。
3.2.3。数据分析
除非另有说明,所有的数据表示 。图基的事后测试进行使用棱镜版本5的软件,以确定是否存在差异的控制面板和测试组使用 - - - - - -测试或单向方差分析。差异的相关性评估的皮尔森相关系数(17]。 被认为是具有统计学意义。
4所示。分析的结果
4.1。临床特征的参与者
所有参与者的临床特点在怀孕的概念如表所示5。出生在婚姻没有明显差异,历史,种族,或教育水平对照组和产前高血压组(18]。然而,在孕妇妊娠期高血压组中相同的妊娠期母亲的年龄,与对照组相比,他们的孕前体重指数高,他们有贫血的发生率更高。
4.2。的血清TNF -α和孕妇的血清il - 6增加了梓潼的早期阶段
血液中的肿瘤坏死因子-α和ELISA测定il - 6进行检测,血液中的肿瘤坏死因子-α在孕妇被发现在早期阶段比对照组。Ziji集团也在增长。此外,我们发现血浆TNF水平α和血液中il - 6,由于怀孕导致肺动脉高血压患者,病理生理变化肺动脉高血压孕妇增加发病率和死亡率。孕期高血压是由肺动脉压力的平均值(19]。我们回顾性分析了27日的血流动力学数据与子痫前期孕妇血清TNF -α水平意味着肺动脉的孕妇 ,明显高于平均肺动脉 在孕妇(图2)。
血浆肿瘤坏死因子-α水平孕妇意味着肺动脉 是高于孕妇平均肺动脉压力小于50毫米汞柱。的意思是 偏差, 意味着比对照组显著差异。孕妇的il - 6水平,这意味着肺动脉 和肺动脉压力小于50毫米汞柱,满足TNF -α的水平。基于上述结果,血清TNF水平α和il - 6在孕妇妊娠期高血压和显著升高与并发症的严重程度有关。
4.3。药物治疗可以降低血清TNF -α在低氧诱导妊娠高血压和il - 6水平
,以确定哪些血浆TNF -α和il - 6水平可作为生物标记物在产前高血压,我们检查了血液肿瘤坏死因子-α在怀孕和il - 6水平样本处理treprostinil [20.]。Treprostinil是一组血管舒张药用于治疗肺动脉高血压。三个最近的研究表明,treprostinil是有效治疗肺动脉高压与低氧诱导高血压的孕妇。与常氧管理相比,右心室收缩压增加缺氧期间,和treprostinil治疗减少右心室收缩压在低氧诱导妊娠高血压。Treprostinil治疗可以显著降低妊娠高血压的发病率由于缺氧。
5。结论
研究表明,血液肿瘤坏死因子-α和il - 6水平较高和高血压的孕妇比孕妇,表明TNF -α和il - 6水平较高,与高血压有关。右心室收缩压明显高于暴露于缺氧的病人比在常氧控制。treprostinil处理时,右心室收缩压在hypoxic-induced高血压萧条时期怀孕的减少。血浆TNF水平α和il - 6也可以用于治疗和预防妊娠高血压。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
刘英和小林侯同样这项工作,应该视为co-first作者。
确认
这项研究是由以下项目:2007年河北科学技术支持项目计划(072761740),中国,和2021年河北医学科学研究项目计划(20211366),中国。