文摘

目的。本研究的目的是评估作用的扫描电子显微镜(SEM)直接与负真菌学的疑似甲真菌病的诊断测试结果。方法。门诊诊断为疑似甲真菌病与消极真菌学的测试结果,包括直接显微镜检查10%氢氧化钾(KOH)和真菌培养,3次被招募。一小部分被感染的指甲是获得扫描电镜检查。结果。在48个疑似甲真菌病样本,扫描电镜显示,18(37.5%)为真菌阳性结构,包括10(20.8%)例菌丝和8(16.7%)例酵母芽生孢子或萌芽。结论。扫描电镜是一种有效的方法来诊断疑似甲真菌病当传统的真菌学的方法都是负面的。因此,这种技术可用于临床实践。

1。介绍

甲真菌病是一种常见的真菌感染皮肤诊所是由皮肤真菌引起的,假丝酵母或nondermatophyte模具。常用的真菌学的测试包括直接显微镜检查10%氢氧化钾(KOH)和真菌文化。然而,这些技术的积极率不高。有时候,尽管受感染的指甲是高度怀疑在诊所,真菌学的测试一直是负面的。在这种情况下,建议病人接受定期的随访或抗真菌实验治疗。因此,真菌感染的准确诊断对临床实践很重要。因此,我们旨在确定一个新方法来提高甲真菌病的诊断阳性检出率。

其他诊断方法包括组织病理学检查的周期acid-Schiff (PAS)染色的指甲剪或损坏钉板(1,2)或聚合酶链反应(PCR) (3,4]。尽管这些技术有积极率高,指甲活检过程复杂和耗时。此外,PCR只能用于几个著名真菌实验室。没有商业真菌PCR试剂在中国是可用的,这限制了PCR在临床的应用。

在临床实践中,扫描电子显微镜(SEM)已普遍用于许多材料的超微结构的观察,病原体和疾病。扫描电镜图片可以放大数千倍。在真菌学的领域,几项研究已经证明,扫描电镜观察真菌超微结构是一个很好的方法在指甲与甲真菌病5- - - - - -9]。观察皮肤真菌的SEM (5- - - - - -9]揭示与清晰可见菌丝分支和隔膜或arthroconidia,而分析假丝酵母培养基的SEM (10,11]经常显示假菌丝,芽生孢子萌芽,一圈芽伤疤。因此,SEM观察真菌形态是一个很好的工具。然而,这项技术却很少被用于真菌感染的诊断。剑et al。8]研究了48例疑似甲真菌病使用扫描电镜和扫描电镜表明积极的利率,组织病理学,真菌文化,和KOH是87.5%,60.42%,41.67%,和27.08%,分别。在我们之前的研究12,13),我们使用扫描电镜观察在活的有机体内真菌或的超微结构特征毛癣菌属石甲真菌病。此外,扫描电镜也用于提高负真菌治疗甲真菌病的文化。这两个研究表明,SEM是一个简单的,明确的工具观察真菌结构在受感染的指甲在活的有机体内,一个相对较大的样本很容易获得SEM。因此,在这项研究中,应用SEM与负甲真菌病疑似病例进行真菌学的测试来增加甲真菌病的诊断阳性检出率和提供更好的治疗策略。

2。材料和方法

2.1。临床数据

入选标准如下:门诊病人诊断为疑似甲真菌病与负10% KOH直接显微镜检查和真菌培养3次是从2014年10月至2016年5月在北京皮肤科诊所田Tan医院,首都医科大学。不限制年龄,性别和抗真菌治疗。以下排除标准被采用:任何肯定指甲病变,可以诊断为甲真菌病,甲脱离,twenty-nail萎缩症,指甲下的出血,或指甲疾病引起的扁平苔癣或牛皮癣。本研究通过北京田Tan医院,首都医科大学伦理委员会。研究对象被告知并签署书面同意书。

2.2。10% KOH考试和真菌文化

真菌学的分析,包括KOH考试和真菌文化,执行所述在作者之前的研究13]。首先,一些碎片从受感染的指甲应用滑下跌10% KOH和显微镜直接观察到。然后,额外的碎片被接种Sabouraud葡萄糖琼脂(SDA)和孵化28°C 1 - 4周。所有的患者检查3次。3次样本显示负面结果准备扫描电镜检查。

2.3。扫描电镜样品的制备和观察指甲

样本准备按照作者的先前的研究[10- - - - - -12]。受感染的钉板的宽度大于4毫米摘除和固定。样品被,后缀,脱水,流离失所,干,喷涂,化学干。日本日立tm - 1000(日立)利用SEM观察和样品照片。

3所示。结果

3.1。基本的临床信息和SEM的结果

总共48例疑似甲癣患者招募,包括48感染的指甲。临床特点包括变色(黄色或gray-black),钉板增厚,指甲下的碎片积累,和损坏的钉板。样品显示- KOH和真菌培养结果3次。然而,48个样品,18(37.5%)被SEM积极诊断,检测10(20.8%)例菌丝和8(16.7%)例酵母芽生孢子或萌芽。

3.2。真菌根据扫描电镜超微结构观察

一些48钉板与紊乱层受损。菌丝出现在10个样本(数据1(一)和1 (b)例1和2),类似于皮肤真菌形态。一些菌丝出现光滑、完整、弯曲和成熟与当地分支机构或干燥,而有些arthroconidia(图1(b2))。酵母芽生孢子萌芽,一圈芽伤疤被确定在8样本(数据1 (c)和1 (d)例3和图4),这表明酵母形态。孢子是分散或本地积累。一些出芽酵母的结构就像一个保龄球瓶(图1(d2)),没有观察到典型的假菌丝。

4所示。讨论

虽然传统真菌学的方法使用KOH和真菌文化很容易执行,他们积极的利率相对较低是一个大问题在临床实践中。因此,开发和测试一种新的诊断方法是必要的。然而,SEM是很少用于甲真菌病的诊断。在这项研究中,48个疑似甲真菌病病例显示- KOH和真菌培养结果3次;然而,37.5%(18)样品的样品表现出菌丝和酵母在SEM芽生孢子。这些结果表明,扫描电镜诊断甲真菌病是一种有效的方法当传统真菌学的考试有一致的负面结果。这种方法代表了小说在皮肤科的应用SEM。此外,菌丝的形态和酵母芽生孢子在我们的研究中类似于那些在其他研究报告(8- - - - - -13]。因此,这种方法可以用来初步估计压力和援助在一个敏感的抗真菌药物的选择。这是本研究的另一个优点,因为在作者之前的研究报告(12]。

剑et al。8]研究了48个疑似甲真菌病病例使用扫描电镜和证明,积极的SEM率为87.5%。与他们的研究不同,我们只招募与负甲真菌病疑似病例进行真菌学的考试成绩,这也解释了为什么我们积极率低。此外,超过三分之一的这些样本阳性作为评估SEM甲真菌病;因此,需要更有效和准确的方法来提高诊断阳性率,避免误诊,当传统真菌学的检查结果都是负面的。扫描电镜是一种非常有效的、准确的诊断方法,为扫描电镜分析和样品很容易达到。

在我们的研究中,通过SEM arthroconidia显然是发现了。这种形态也观察了KOH直接镜检。推断这个形态可能是自我保护的,宿主的免疫系统是更积极的或抗真菌治疗后。这是非常明显的形态首先通过SEM,以前从未被报道过。这项技术是用于获取更多关于真菌形态的信息在活的有机体内。

然而,SEM仍有一些局限性。例如,需要2 - 3天准备样品。这种方法通常是昂贵的,不可以在所有医院。然而,一些样品可以固定,然后发送到另一个实验室执行扫描电镜。

总之,我们表明,SEM是一个简单、准确、有效的方法来识别甲癣当传统真菌学的测试是负的。扫描电镜还提供了更好的信息选择最优的抗真菌药物。因此,它可以应用于临床实践。

信息披露

投资者没有参与研究设计、数据收集和分析,决定发表,或准备的手稿。

的利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突。

作者的贡献

交给岳参加了实验设计、协作和起草的手稿。清丽和王航参与实验设计和修改了手稿。

确认

作者感谢研究参与者和实验室工作人员和承认的资金来源进行这项研究。这项工作是由从北京自然科学基金资助(7164255)提供给交给曰。