文摘

背景。Ezrin是membrane-cytoskeleton链接器蛋白在骨肉瘤转移和糟糕的结果和高档软组织肉瘤。ezrin表达尤因肉瘤的预后价值是未知的。方法。ezrin表达之间的关系和结果分析在一群53新诊断尤因肉瘤患者在2000年和2011年之间。ezrin的强度和比例的细胞免疫反应性进行评估诊断肿瘤组织中使用半定量的评分系统屈服强度和积极性分数为每个肿瘤。结果。Ezrin表达中发现72%(38/53)的肿瘤样本。转移性疾病患者的比例是相等的积极和消极ezrin表达组。风平浪静没有显著差异的5年生存率(EFS)患者积极与消极ezrin表达。病人的肿瘤样本显示高ezrin强度有明显更好的5年EFS相比,患者/不ezrin强度低(分别为78%和55%;)。结论。Ezrin表达可以发现在大多数尤因肉瘤肿瘤样本。强烈ezrin表达可能与良好的结果;然而进一步的调查需要一个更大的群体来验证这一发现。

1。介绍

Ezrin membrane-cytoskeleton链接器的蛋白质,对正常细胞的功能有多效性的影响包括指导细胞极性,能动性,附着力,入侵,细胞内组织1- - - - - -5]。此外,ezrin促进信号转导通过粘附分子和各种生长因子受体(3,6]。Ezrin已被证明在肿瘤的生长和转移中发挥作用通过几种机制包括药物流出,防止细胞凋亡,异常信号转导和吞噬作用在某些癌症(6- - - - - -12]。

增加ezrin表达与预后不良相关在多种人类癌症包括骨肉瘤,软组织肉瘤(STS)、乳腺癌、胃肠道、泌尿生殖器的,黑色素瘤,星形细胞瘤、鳞状细胞癌的头部和颈部13- - - - - -23]。分析进行五十STS患者的肿瘤样本显示显著关联积极ezrin免疫反应性伪劣无进展和整体生存,以及一个与远处转移在后续的发展(24]。同样,在骨肉瘤、多研究表明,ezrin表达与复发和恶化的风险增加总生存期(6,15,25,26]。

以前的工作在尤因肉瘤(EWS)细胞系透露无处不在,高水平ezrin表达和证明ezrin的作用依赖于一种蛋白激酶/ mTOR途径[7]。马查多等人评估肿瘤样本341例EWS,发现ezrin表达在40.7%的情况下(27]。没有先前的报道相关ezrin表达与患者的临床特点和成果评述。我们的研究的目的是描述的模式和频率ezrin表达和关联这尤因肉瘤患者的临床特征和治疗效果。

2。材料和方法

2.1。病人

队列包括新诊断EWS病人治疗儿童保健亚特兰大[(CHOA);(儿童医院)和加州大学旧金山分校贝尼奥夫2000年和2011年之间)。任何病人诊断肿瘤组织及相关临床数据包括在这项研究中。没有其他包含或排除标准。Formalin-fixed,石蜡包埋手术诊断性活检样本检索和使用在CHOA为患者做幻灯片,在加州大学旧金山分校组织患者组织微阵列。我们试图收集信息EWSR1在所有病人易位地位。对于这些患者数据,测试已经使用荧光原位杂交,执行反向transcriptase-polymerase连锁反应,或者一个完整的核型分析。所有患者接受vincristine-doxorubicin-cyclophosphamide交替周期和ifosfamide-etoposide鉴于在每两或三周的基础上,除了局部控制与手术,辐射,或两者兼而有之。机构审查委员会批准。

2.2。免疫组织化学

组织和幻灯片准备和免疫染色过程进行通过先前描述的方法(28]。组织部分被削减时4μ米,安装在徕卡键+幻灯片(猫# 00270),并在室温下晾干。徕卡的使用自动化协议债券Rx自动色料(徕卡产品/设备、徕卡微系统公司,野牛沟、IL),幻灯片是烤30分钟和脱蜡与徕卡键使脱蜡(猫# AR9222)的解决方案。债券表位抗原检索检索2(猫# AR9640),在pH值9.0解决方案进行20分钟。anti-ezrin主要抗体稀释1:200年30分钟(猫# AB4069;Abcam Inc .)。主要抗体绑定是可视化使用徕卡键完善检测设备(猫# DS9800) diaminobenzidine (DAB)发色体和苏木精复染色。消极的控制制备省略主要抗体。腺癌的冒号是用作积极与内部控制-控制(结肠粘膜)。独立组织部分被蒙蔽的方式得分由两个研究的病理学家(h . y和b . m . s .),发现至少有95%一致。

半定量的评分系统是用来量化ezrin积极性,也就是说,细胞的百分比ezrin呈阳性,ezrin强度,即多强染色的细胞。积极的表达被分级为1 + = 1 - 25%的细胞染色阳性,2 + = 26 - 50%的细胞染色阳性,和3 + = 51 - 100%的细胞染色阳性。肿瘤没有ezrin表达有积极性分值为0。强度表达式被分级为1 + =弱染色,2 + =适度染色,3 + =强大的染色。肿瘤没有ezrin表达有一个强度得分为0。ezrin染色也是评估的模式被称为胞质,膜质,或细胞质膜(扩散)。

2.3。主要的预测变量

患者被分类进行分析肿瘤积极或消极ezrin表达,高(3 +)与低/不(0 - 2 +)ezrin积极性,高(3 +)与低/不(0 - 2 +)ezrin强度、细胞质和noncytoplasmic(膜性或弥漫性)ezrin表达模式(图1)。一个ezrin总分是由ezrin积极性分数乘以ezrin强度得分对于一个给定的病人的肿瘤。

2.4。临床变量

以下临床变量进行了分析:年龄;性;种族(白人和非白人);肿瘤大小;原发部位;和程度的疾病诊断(本地化和转移性)。主站点进一步分类为分析轴向或nonaxial和盆腔或nonpelvic,和肿瘤大小进一步分为≤8或> 8厘米最大尺寸。从放射肿瘤尺寸获得回顾性分析报告所以没有对所有患者可用。感兴趣的临床结果包括死亡和复发/发展。

2.5。统计方法

所有变量的描述性统计计算利息和包括计数和百分比为分类变量和中间值和四分位范围(25 th - 75)连续变量。分类变量之间比较患者积极和消极ezrin表达,高、低/不ezrin积极性,高、低/不ezrin强度,使用双边Fisher精确和胞质与noncytoplasmic表达模式或卡方测试。使用Wilcoxon排名连续变量组间比较和测试。

感兴趣的主要结果是风平浪静的生存(EFS)之间的时间定义为诊断和分析事件的发生或日期最后一个病人接触,哪个是第一位的。疾病进展和死亡被认为是分析事件。病人没有经历一个事件作为他们最后的联系被审查的EFS的分析。总生存期(OS)是一个次要结果和被定义为从诊断到死亡或最后幸存的患者随访。EFS kaplan meier和操作系统分布估计的方法。不同组之间的事件风险评估使用生存率较。

所有统计分析使用SAS 9.3版本(SAS研究所,Inc .,卡里,NC)。统计学意义是评估在0.05水平值是双面的,除非另有注明。

3所示。结果

3.1。基于Ezrin表达的临床特点

整个组的临床特点如表所示1。信息易位地位是可以从16/53(30%)的病人的医疗记录,杜绝使用这个变量的子集分析。在那些易位,11/16(69%)有一个EWSR1易位。

Ezrin表达38/53(72%)的尤因肉瘤在我们的研究样本。大多数的这些落入高ezrin积极性(57%)和强度(51%)组(表2)。基于表达模式的分析表明,大约三分之二(68%)的ezrin阳性样本细胞质表达模式。

患者之间的临床特点比较积极和消极ezrin表达没有任何明显的差异(数据未显示)。也没有区别,当临床特点比较基于高与低/不ezrin强度(表3)、高与低/不ezrin积极性和胞质与noncytoplasmic表达模式。

3.2。基于Ezrin表达的临床结果

5年为每个ezrin表达EFS类别(强度、积极性和模式)使用生存率较比较。比较5年EFS那些积极[65%(95%可信区间(CI): 48% - -81%)]和负(71% (95% CI: 46% - -91%)] ()、高积极性[63% (95% CI: 44% - -81%)]和低/无积极性[71% (95% CI: 50% - -88%)] ()和胞质[72% (95% CI: 50% - -90%)]和noncytoplasmic [50% (95% CI: 23% - -77%)] ()ezrin表达未能表现出显著差异。相比之下,5年EFS患者肿瘤显示高ezrin强度为78% (95% CI: 57% - -93%)相比,55% (95% CI: 35%−74%)对于那些低ezrin强度(;图2)。一个子集分析患者局部疾病()反映结果的整体人群,ezrin高强度组的患者拥有优越的5年EFS [86% (95% CI: 51% - -96%)和59% (95% CI: 33% - -77%);)和其他ezrin组之间无显著差异(补充表1网上https://doi.org/10.1155/2017/8758623)。少数病人转移性疾病在我们的群有限生存的可靠性比较这组(补充表2)。我们一分为二的病人中ezrin的综合得分为6。没有显著差异在5年EFS患者中ezrin总分> 6相比平均ezrin总分≤6 ()。

4所示。讨论

我们的研究提供了新的信息的表达中ezrin EWS和报告小说ezrin表达强度与临床结果之间的相关性。我们的数据表明,ezrin表达在大多数EWS肿瘤样本。我们没有发现任何不同患者之间的临床特点全面ezrin表达的存在与否。也没有不同的临床特征,当患者分类基于ezrin积极性,强度,和表达模式。我们表明,病人的肿瘤有很高的ezrin强度有一个优越的5年EFS患者相比,低或没有ezrin强度。鉴于ezrin表达之间的联系和劣质结果发表在其他肉瘤,我们的发现是无法预料的。我们没有发现显著差异结果患者积极与消极ezrin表达,高和低/不ezrin积极性或胞质与noncytoplasmic ezrin表达模式。

类似于之前的一份报告,高水平ezrin表达检测EWS肿瘤样本的80%,ezrin表达在肿瘤的72%我们的研究[7]。相比之下,马查多等人发现ezrin表达的只有41%的EWS肿瘤样本(27]。病人在后者的研究被视为消极ezrin表达即使低水平(5 - 10%)的ezrin被检测到,所以这可能部分解释为什么研究中的发病率低于我们所报道。另外,目前尚不清楚马查多的肿瘤样本研究当时从病人诊断或手术切除或复发。这是很重要的考虑,目前尚不清楚ezrin表达模式可能会改变在治疗或与肿瘤进展。超过半数(68%)的ezrin表达阳性的肿瘤细胞胞质免疫反应性。ezrin表达的模式在EWS此前还没有报道,数据显示骨肉瘤肿瘤样本显示,胞质表达模式发生在49%,是更有利的预后相关25]。虽然有一个优越的EFS的趋势与胞质表达,病人在我们的研究中没有达到统计学意义。

高档STS和骨肉瘤患者,高ezrin表达与劣质EFS和OS和转移患者的发病率增加STS (15,24- - - - - -26]。患者在我们的研究中积极ezrin表达更不可能转移的诊断。我们没有找到任何劣质EFS或操作系统之间的相关性和ezrin表达的存在与否,也不是ezrin积极性高。克里希南等人证明ezrin及其影响细胞的生物学在EWS有别于其他肉瘤中描述,所以这可能部分解释这些差异(7]。矛盾的是,患者高ezrin强度有一个优越的患者5年EFS相比低或没有ezrin强度。从我们的数据的解释是不清楚。大多数之前的调查ezrin表达肉瘤肿瘤样本没有评估的预后影响ezrin强度很难直接比较。可能是激烈的ezrin表达的亚细胞定位在起作用,作为ezrin被认为是不活跃在细胞质中29日]。一个亚组分析比较ezrin表达模式的强度没有透露任何团体之间的差异,尽管这种分析是由小的病人数量有限(数据没有显示)。虽然我们没有观察到任何重大高低ezrin之间的关联强度组和已知EWS预后因素(如年龄、舞台、肿瘤大小和主网站),这些因素可能会混淆我们的发现之一。也有可能有其他生物高强度和低ezrin患者之间的差异可以解释优越的结果患者ezrin强度高。

这项研究是第一个报告中ezrin表达与患者的临床特点和成果评述。与临床结果在统计学上意义重大,这个观察的临床效用并不清楚观察到的效果。我们的分析是有限的可用少量的诊断标本。正在努力尝试和比较EWSR1-ETS融合状态与ezrin表达模式;然而,这些数据只是用于少数患者,杜绝这一分析。

5。结论

我们的研究表明,ezrin表达在大多数尤因肉瘤肿瘤样本。强烈ezrin表达可能与良好的结果;然而与更大的样本量是需要进一步的研究来证实这一发现。在我们的群尤因肉瘤患者,积极ezrin表达并不与更糟糕的EFS,操作系统,或者在诊断转移的发生率增加。未来的研究应该试图获得病人配对样本的诊断,手术切除,复发和/或调查是否ezrin表达模式随时间变化的。

信息披露

这项工作提出了部分在2016年的美国临床肿瘤学会(ASCO)会议在芝加哥,IL (30.]。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者承认埃默里+儿童儿科研究生物统计学核心的援助与这个手稿。提供研究支持是游过美国和亚特兰大的儿童保健基金会/斯科特·肖克利的家庭。

补充材料