文摘

脂肪肉瘤是间质肿瘤包含变量成脂细胞和脂肪细胞的数量。最常见的实体,肉瘤分化良好/脂肪肉瘤(数字图书馆/ ddl)和黏液样/圆细胞脂肪肉瘤(毫升/ RCLS),都以基因重组影响转录因子的表达DDIT3。DDIT3诱发脂肪肉瘤形态当ectopically表达人类纤维肉瘤。的角色DDIT3脂肪瘤的肿瘤,但是,不清楚。我们分析了DDIT3的表达在37例脂肪肉瘤(数字图书馆/ ddln= 10毫升/ RCLSn= 16,多形性脂肪肉瘤(PLS)n= 11)和11例常见的良性脂肪瘤。数字图书馆的主要细胞亚群/ ddl和MLS / RCLS肿瘤被发现表达DDIT3或派生的融合蛋白,而请情况下显示只有少数阳性细胞。大亚种群表达DDIT3包含的脂肪瘤。之间没有相关性的DDIT3表达细胞和成脂细胞的数量/脂肪细胞被发现。体外脂肪形成的治疗两个DDIT3表达细胞系诱导脂质积累在小亚种群。促进和限制,我们的结果显示一个双重角色DDIT3成脂细胞的形成和脂肪肉瘤形态。

1。介绍

Adipocytic肿瘤是最常见的类型的软组织肿瘤发生在人类身上。他们也代表了最大的间质肿瘤(1或多或少),主要由著名的成脂细胞和脂肪细胞的存在。一些adipocytic肿瘤表现为复发性肿瘤类型特定的基因重组。大多数数字图书馆/ ddl病例包含放大部分染色体12 q13-15进行环染色体或大型标记染色体(2- - - - - -4]。放大区域包含许多肿瘤相关基因,其中DDIT3。美国职业足球大联盟/ RCLS重新安排DDIT3融合,付家或EWSR1(5,6]。DDIT3表达和参与调节脂肪细胞的发展和我们以前显示的表达吗DDIT3在低分化纤维肉瘤细胞系导致形态转换向脂肪肉瘤表型(7]。这些观察表明,DDIT3蛋白的表达可能是一个常见的几种类型的表型决定因素脂肪瘤的肿瘤。本研究的目的是为了测试这个假说通过调查DDIT3蛋白的表达在3个不同的脂肪肉瘤亚型和常见的脂肪瘤。

我们进一步评估的角色DDIT3表达式通过研究成脂细胞形成培养脂肪肉瘤细胞治疗脂肪形成的因素。DDIT3表达式是严格监管在几个水平包括翻译和蛋白质降解8]。这使得表达分析在蛋白质水平最相关的方法。

2。材料和方法

2.1。免疫组织化学

石蜡包埋的部分是从我们的病理部门获得符合瑞典立法。材料由11个脂肪瘤,11请10数字图书馆,16毫升/ RCLS。

部分是由常规石蜡包埋的肿瘤组织样本48例脂肪瘤、脂肪肉瘤(表1)。免疫组织化学(包含IHC)如前所述执行7)使用DDIT3特定抗体Gadd153 R20从圣克鲁斯生物技术的稀释1:200。

组织学标本被蒙蔽的方式检查和评估两个考官。彩色肿瘤细胞的比例数在200 x放大。细胞的核和胞质表达计算避免炎症细胞,内皮细胞,坏死区域。三个不同地区每个幻灯片数,计算平均值。

2.2。荧光原位杂交分析

间期鱼formalin-fixed分析肿瘤组织进行1 - 4μ石蜡切片。三个分开探针、DDIT3付,EWSR1 (Vysis, Inc ., IL),根据厂家提供的协议使用。核与10复染色μL 4′, 6′, -diamidino-2′-phenylindole盐酸盐(DAPI)。由两个独立的部分进行了分析和重新分析评论家。至少每节100核得分。完整的解释、融合和分裂的信号是基于指南推荐的制造商和其他临床实验室使用这种方法。

2.3。体外脂肪形成

GOT3细胞株,建立从世界肿瘤(4),是用于研究脂肪形成的分化。RPMI 1640到100%的细胞培养融合,之后改变了媒介脂肪形成感应介质(PT3004含重组人胰岛素,地塞米松,消炎痛,和3-isobutyl-l-methylxanthine (IBMX);Cambrex,新泽西东卢瑟福)或维护媒介(MM;RPMI 1640含8%胎牛血清)。细胞治疗与脂肪形成感应介质为3天,紧随其后的是1到3天在毫米。这是重复三次。美联储控制文化只有毫米沿着相同的时间表。循环完成后,在MM细胞培养7天更换中每2到3天。这些细胞被使用显微镜检查,和积累的脂肪被评估后与油红O染色细胞缓冲福尔马林固定为4%。

3所示。结果与讨论

临床资料、组织学特征和DDIT3蛋白表达详细表1和代表的例子包含IHC染色图所示1。DDIT3表达式中检测出所有但2 48调查情况。

在数字图书馆/ ddl 40 - 94%的肿瘤细胞表达DDIT3(表1)。本构DDIT3表达式可以解释这种肿瘤的复发性基因扩增子携带DDIT3这个肿瘤类型(2,4]。没有明显差异DDIT3表达细胞的数量在这个小世界和ddl之间一系列肿瘤。

在美国职业足球大联盟/ RCLS, DDIT3表示为FUS-DDIT3或EWSR1-DDIT3融合癌基因蛋白的一部分5,9]。由无所不在地融合致癌基因的转录调控的积极推动者付家或EWSR1伴侣基因(6]。毫升/ RCLS肿瘤包含24 - 73%(表FUS-DDIT3或EWSR1-DDIT3阳性细胞1)。融合蛋白的只能检测到在一个族群的肿瘤细胞表明,融合蛋白的水平监管也在转录后的水平。没有明显差异的阳性细胞数量之间的典型的黏液样例和那些圆细胞组件。

细胞质DDIT3染色模式被认为在大多数请情况下只有在低比例的细胞。三个肿瘤(例29、30、31)显示一个核的染色模式DDIT3在少数细胞中,主要与奇异核。没有报道复发性遗传畸变导致请DDIT3表达式。相反,应力诱导表达可以解释DDIT3蛋白在这些肿瘤的存在。细胞质或核DDIT3表达式可能诱导作为响应DNA损伤等各种压力条件,缺氧,和缺乏营养10- - - - - -12]。肿瘤组织中,这种情况很常见,可能因此导致DDIT3表达式。

高度分化的常见脂肪瘤表示DDIT3(图15 - 81%的细胞1)。DDIT3蛋白被发现在univacuolated脂肪细胞和周围的梭形细胞。DDIT3不放大或重新安排脂肪瘤。相反,大多数的情况下进行重新安排HMGA2基因可以促进adipocytic分化(13]。DDIT3表达式中发现脂肪瘤细胞可能因此造成终端脂肪细胞的分化程序在这些肿瘤细胞(14]。因此,目前还没有理由相信异常DDIT3表达参与了肿瘤的发展类型。

DDIT3通常是表示在脂肪细胞分化相关的转录因子一起CEBPA [14]。的时机表达DDIT3和CEBP因素对正常分化(图是至关重要的2)。过早或过度DDIT3五月preadipocytes分线盒分化(15- - - - - -17]。在脂肪肉瘤的背景下发展,异常DDIT3或FUS-DDIT3表达式在原始肿瘤细胞可能会打开一个adipocytic脂肪细胞的分化途径但块后阶段发展。我们推测,只有少数的肿瘤细胞通过块将它和成脂细胞分化。这也解释DDIT3表达的数字之间缺乏相关性研究肿瘤细胞和成脂细胞的数量。

为了验证这个假设,分析了数字图书馆/ ddl派生细胞系GOT3后脂肪形成的治疗。这个细胞株带有大12派生的扩增子包括DDIT3基因和染色体被发现在几乎所有细胞表达DDIT3既定的(4]。积累有限的脂质在零星的细胞被认为在标准文化(图2 (b))。转移到脂肪形成的文化条件导致脂质积累和成脂细胞发展但只有少数细胞。类似的结果与EGFP标记纤维肉瘤细胞系稳定转染DDIT3(图2 (b))。这些结果表明DDIT3可以促进脂肪肉瘤的异常表达在人类原始的肉瘤细胞表型(7]。

FUS-DDIT3转染小鼠间充质干细胞引起MLS / RCLS像肿瘤在小鼠和注入FUS-DDIT3转染转换3 t3小鼠成纤维细胞(18,19]。这表明FUS-DDIT3是一个强有力的致癌基因。FUS-DDIT3蛋白保持DDIT3能力形成与CEBPA形成CEBPB和已被证明修改或块二聚体合作伙伴的活动(17,19]。阻塞CEBPA可以抑制终端分化的17]。自融合基因的转录是由无所不在地活跃的启动子,失败的表达时间的异常变异DDIT3也可能导致致癌活性。付家FUS-DDIT3被发现是必要的一部分转换3 t3成纤维细胞(19),迫使表达FUS-DDIT3未能诱导细胞周期阻滞作为DDIT3报道。

FUS-DDIT3相比,迫使DDIT3蛋白的表达在转基因小鼠间充质细胞或没有转换或肿瘤发生的活动的证据(20.]。正常DDIT3蛋白质从而不能被视为推动肿瘤蛋白。然而,DDIT3表达式可能停止扩散(19,21]。在WLDLS和ddl中连同其他一些原癌基因MDM2和到一起,可能会导致肿瘤的发展。异常表达,DDIT3可能在这种情况下作为一个促进或/和肿瘤类型指导因素通过阻止或干扰脂肪细胞的分化终止程序和相关的增长。

最初被描述为一个核dna结合转录因子、应力诱导DDIT3后来被定位在细胞质室(21]。细胞质DDIT3显示诱导部分核DDIT3相比截然不同的影响。提出的机制之一是封存CEBP家庭二聚伙伴(21]。在目前的研究中我们观察到细胞质DDIT3主要在请包含奇异核细胞,从而支持压力相关的这些细胞表达背后的机制。应力诱导DDIT3表达更有可能临时但可能引发的一些低请细胞分化成一个adipocytic分化路径解释成脂细胞的存在在这个肿瘤类型。WLDLS和ddl,表达DDIT3也可能促进肿瘤发展的停止adipocytic终止程序和相关的增长。

总之,DDIT3表达在肿瘤细胞的亚种群4调查脂肪瘤的肿瘤类型。没有明显区别DDIT3表达细胞的数量更激进的ddl和RCLS相比,数字图书馆和美国职业足球大联盟。此外,DDIT3表示在可比水平良性脂肪瘤。只有少数DDIT3表达肿瘤细胞对体外脂肪形成的条件表示一个复杂的角色DDIT3脂肪瘤的肿瘤表型指导因素。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是由瑞典癌症协会,支持国Gabrielsson研究基金会,约翰简颂癌症研究基金会Socialstyrelsen,瑞典社会医学研究,瑞典儿童癌症协会,BioCARE国家战略研究项目哥德堡大学的威廉和玛蒂娜·朗格的基础科学研究。