文摘

遗传机制转换从一个良性纤维神经瘤恶性肉瘤患者neurofibromatosis-type-1——(NF1)相关或零星的恶性周边神经鞘肿瘤(对于)尚不清楚。假设许多基因变化参与转换。最近,它已被证明,磷酸酶和tensin同族体(PTEN),表皮生长因子受体(表皮生长因子受体)开始扮演重要角色的周围神经鞘瘤(PNSTs)。在人类对于,PTEN表达式通常是减少,表皮生长因子受体表达式通常是诱导。我们测试了,如果这两个基因PNSTs进化的合作。转基因小鼠产生条件的液氧等位基因Pten,表皮生长因子受体表达的控制下2′,3′-环核苷酸3′磷酸二酯酶(中国出版集团)启动子和沙漠刺猬(Dhh)监管元素驾驶Cre重组酶转基因小鼠(Dhhcre)。完整的损失Pten和表皮生长因子受体雪旺细胞过度导致高档PNSTs的发展。在体外使用人类许旺细胞永生化实验证明损失的PTEN和超表达表皮生长因子受体增加细胞增殖和anchorage-independent殖民地形成合作。这只老鼠模型可以快速概括PNST高档PNSTs发病和进展,如零星对于病人。

1。介绍

恶性周边神经鞘肿瘤(对于)是一种罕见的咄咄逼人的肉瘤与不良预后相关。对于可能发生的零星或上下文的常染色体显性遗传神经纤维瘤病1型(NF1)肿瘤综合征(1- - - - - -3]。基因异常,比在其他neurofibromin 1(NF1)轨迹,在良性纤维瘤很少被发现,但有很多对于表明许多二级基因变化所需的转换对于良性纤维神经瘤。复发性纯合子的损失细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2 a(CDKN2A在大多数非典型纤维瘤(发现)轨迹4]。突变鼠肉瘤病毒致癌基因相同器官(拉)或其pathway-associated基因也可能导致肿瘤发生的零星的对于所缺乏的NF1突变。激活突变拉(国家管制当局方面或喀斯特)或v-raf小鼠肉瘤病毒致癌基因相同器官B1(BRAF)突变在零星的对于已报告5,6]。对于基因组包含许多异常,很可能许多其他基因驱动对于的形成。目前,许多相关的基因改变对于起始/进展是未知的,和识别这些基因变化可能具有深远的临床益处。

磷酸酶和tensin同族体(PTEN),一个负面的监管机构PI3 K/一种蛋白激酶/mTOR通路参与调节细胞的生长和生存,是最经常灭活肿瘤抑制基因在零星的癌症7]。Pten用量已被证明是必不可少的纤维神经瘤和恶性转变的背景下发展喀斯特激活(8]。我们以前的协同作用Pten失活丛状神经纤维瘤肿瘤发生和发展高档PNSTs的上下文中神经纤维瘤病1(Nf1雪旺细胞)损失和/或他们的前体细胞9]。的作用PTEN在零星的对于有待阐明,重要的是,目前没有快速的动物模型可以概括零星对于。很多情况下NF1-associated和零星的对于升高表皮生长因子受体(表皮生长因子受体)表达和基因扩增,暗示表皮生长因子受体途径激活可能参与对于肿瘤发生[10- - - - - -12]。这个观察获得的结果是一致的,功能丧失的实验表皮生长因子受体转基因小鼠(13]。然而,之间的关系PTEN和表皮生长因子受体对于起始/进展仍然遥遥无期。

在NF1患者中,雪旺细胞被认为是主要致病细胞来源的纤维瘤,因为他们展示biallelicNF1基因突变(14- - - - - -16]。Pten调节通路已经被证明是主要的肿瘤抑制障碍PNST进展在上下文中的雪旺细胞Nf1损失(9]。尽管正常雪旺细胞不表达表皮生长因子受体,许旺细胞前体和突变体的亚种群Nf1雪旺细胞表达表皮生长因子受体(13]。之间的关系Pten和表皮生长因子受体在纤维神经瘤发展和发展积极PNST尚未阐明或转基因小鼠模型。我们假设体细胞Pten失活,表皮生长因子受体雪旺细胞的过度将促进进步的低级高档PNST形成。为了验证这个假设,Dhhcre用于引出的重组(17等位基因,使失活Pten雪旺细胞的基因。表皮生长因子受体的控制下中国出版集团启动子(中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体),用于允许其在雪旺细胞的超表达(13]。Pten损失的上下文中表皮生长因子受体雪旺细胞的过度导致高档PNSTs的形成。此外,这种合作是完成人类雪旺细胞永生化在体外。

2。材料和方法

2.1。代的转基因动物

代的转基因老鼠携带Dhh基因调控元件驱动Cre重组酶(Dhhcre)先前描述(18)(图1(一))。转基因老鼠携带液氧Pten等位基因的重要外显子4和5Pten基因液氧loxP网站之前描述(17)(图1(一))。转基因老鼠携带中国出版集团基因调控元件驱动表皮生长因子受体(中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体)已经被先前描述(13]。育种策略生成各种实验,和控制军团如图1 (b)。动物垂死的麻痹和尸体剖检时牺牲了。所有动物的工作是明尼苏达大学的批准进行动物福利的协议。

2.2。PCR基因分型

识别的各种基因型成人转基因动物和幼崽进行如下。首先,基因组DNA是隔绝的尾巴剪使用标准的蛋白酶K治疗,phenol-chloroform提取和乙醇沉淀。基因组DNA被溶解在无菌TE(10毫米tris-HCl (pH7.5), 1毫米EDTA (8) pH值)和量化使用Nanodrop分光光度计。PCR基因分型结果进行使用50 ng稀释基因组DNA作为模板在25μL PCR反应体积。PCR引物用于Dhhcre是向前5′-CTGGCCTGGTCTGGACACAGTGCCC-3′和反向5′-CAGGGTCCGCTCGGGCATAC-3′(扩增子385个基点);Pten液氧等位基因是向前5′-AAAAGTTCCCCTGCTGATTTGT-3′和反向5′-TGTTTTTGACCAATTAAAGTAGGCTGT-3′(WT扩增子310 bp和液氧等位基因扩增子435个基点);中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体提出了5′-TGACATCTCCTCCTCCCTTC-3′和反向5′-TGCCCAACTGCGTGAGC-3′(扩增子380个基点)。PCR条件GoTaq绿色主人混合(Promega)是根据制造商的指示使用95°C的初始变性步骤2分钟;30或35周期的变性在95°C 25秒,退火在55°C 35秒和扩展为65秒72°C;紧随其后的是最后一个在72°C扩展了5分钟。PCR产品2%琼脂糖凝胶上分离和基因型由缺乏或预期扩增子的存在。

2.3。周围神经肿瘤分析

PNSTs小心翼翼地抹杀了牺牲动物解剖显微镜下(莱卡),洗净,把在寒冷的磷酸缓冲盐(PBS)。任何异常的坐骨神经,臂plexi和/或骶plexi也被删除。三叉神经与大脑也观察到任何异常和删除。的数量扩大为整个脊髓背根神经节是计算。所有合理大小的肿瘤结节(> 1毫米直径)删除使用细钳很仔细,放置在PBS新鲜的冷。

2.4。Hematoxylin-Eosin(他)染色

组织学的部分仅仅是来自大肿瘤结节(> 1毫米直径)。组织在10%福尔马林固定,常规处理,嵌入石蜡。部分组织学削减在5微米的石蜡块使用标准切片机(莱卡),安装和heat-fixed到玻片上。幻灯片都沾染了他使用标准协议,免疫组织化学和/或甲苯胺蓝染色在下一节中描述。

2.5。免疫组织化学(包含IHC)和甲苯胺蓝(TB)染色

福尔马林fixed-paraffin嵌入部分从不同的组织在5微米,分段安装和heat-fixed玻片用于包含IHC分析。简而言之,玻璃部分幻灯片脱蜡、水化通过乙醇浓度逐渐降低。组织部分的抗原表位被揭露使用商用揭露解决方案(向量实验室)根据制造商的指示。组织切片的幻灯片被3%过氧化氢处理以消除内源性氧化酵素。阻止了在4°C使用M.O.M.鼠标immunoglobulin-blocking试剂(向量实验室)或在适当的正常血清从主机二次抗体(PBS) 5%的血清在湿润室几个小时。包含IHC,部分被孵化一夜之间在4°C调湿室使用各种主要抗体稀释表示:Ki67 (1: 200) (Novocastra) S100ß(1:100)(Santa Cruz), Pten(1: 200)(细胞信号),phospho-Erk1/2(1: 400)(细胞信号),phospho-Akt (Ser473) (D9E)(1: 250)(细胞信号),和phospho-S6 (Ser240/244)(1: 200)(细胞信号)。初级孵化后,部分被彻底清洗前在PBS孵化与辣根peroxidase-secondary抗体针对所使用的最初主要抗体。与PBS彻底清洗后,部分是刚做好的民建联处理衬底(向量实验室),允许足够的信号开发之前停止反应在水里。最后,部分被轻轻计数器与苏木精染色,通过逐渐增加脱水乙醇浓度、二甲苯清理,安装在Permount(费舍尔)。

结核病对肥大细胞染色使用标准协议进行。短暂,部分脱蜡、水化水,与甲苯胺蓝染色工作方案(0.1%甲苯胺蓝O在0.9%氯化钠pH值2.3)2 - 3分钟,用蒸馏水洗3次脱水快速通过一系列醇,清除在Permount二甲苯最后安装。

2.6。组织学评价

部分沾他;Ki67和S100ß抗原的抗体;所有肿瘤和甲苯胺蓝进行评估(19]。每个样本都使用建立分级标准产生转基因小鼠肿瘤(20.,21]。简单、低级PNSTs表现出低细胞结构如果任何核异型性和有丝分裂活动。高档PNSTs越来越与增加核异型性和增加细胞有丝分裂活动。

2.7。微阵列基因表达分析

被定义为基因的差异表达基因表达水平至少三倍高或低正常雪旺细胞相比,目标群体(N-SC)业务应用Benjamini和错误发现率校正(22]在GeneSpring GX v7.3.1。自定义Affymetrix芯片定义文件(23)基于RefSeq目标定义(Hs133P RefSeq 8版)下载和使用提供准确的解释GeneChip数据。使用GeneSpring GX v7.3.1热图生成。

2.8。基因击倒和超表达

正常培养雪旺细胞是来源于健康的个体的坐骨神经24),它由overexpressing两人端粒酶逆转录酶(叔)和鼠标细胞周期蛋白依赖性激酶4(到),以便在体外studies-immortalized人雪旺细胞称为HSC2λ以后(h . Li & m·r·华莱士在准备手稿)。在图所示的质粒载体5随着一个质粒,其中包含(a)piggyBac 7(PB7)转座酶[25]一个巨细胞病毒启动子的控制下构造没有显示)被转染进HSC2λ使用霓虹灯转染细胞系统,根据制造商的协议(表达载体)。PiggyBac(PB)转座子表达式构造控制真核翻译延长因子1α1(EEF1A1)启动子驱动的表达PTEN成分和/或表皮生长因子受体互补脱氧核糖核酸和包括一个嘌呤霉素抗性基因绿色荧光蛋白(绿色荧光蛋白为选择目的)的互补。的PB阀门向量包含了荧光素酶和绿色荧光蛋白报告基因的控制下巨细胞病毒早期增强剂元素和鸡beta-actin(CAG)启动子。转染后的细胞进行了选择标准DMEM完全包含4媒体μg / mL嘌呤霉素(表达载体)。Transposon-mediated基因转移验证绿色荧光蛋白表达和定量PCR。

2.9。在人类文化细胞定量PCR

从100万个细胞总RNA提取使用高纯RNA隔离设备(罗氏)。RNA被Nanodrop量化(热科学)及其纯度经琼脂糖凝胶电泳。一微克的RNA被用来合成cDNA使用Transcriptor第一链合成(罗氏)使用随机六聚体和低聚糖dT引物。定量PCR反应进行了使用LightCycler 480 SYBR我绿色(罗氏)和运行在一个埃普多夫Mastercycler ep梯度s .引物PTEN提出了5′-TTGGCGGTGTCATAATGTCT-3′和反向5′-GCAGAAAGACTTGAAGGCGTA-3′;表皮生长因子受体提出了5′-TTCCAAATTCCCAAGGACC-3′和反向5′-GGGCTCTGGAGGAAAAGAAA-3′;肌动蛋白β(ACTB)转发5′-CACAGGGGAGGTGATAGCAT-3′和反向5′-CTCAAGTTGGGGGACAAAAA-3′。数据分析使用RealPlex软件校准ACTB归一化,PB阀门细胞和平均在3实验复制。

2.10。扩散分析

扩散分析建立在一个96 - 100格式与镀细胞在DMEM /全媒体包含4μg / mL嘌呤霉素(表达载体)。扩散是评估每24小时/ 6天的MTS试验(Promega)根据制造商的协议。吸光度是阅读490海里来确定扩散和650海里占细胞碎片BioTek协同Mx自动化板读者。实验4 3实验技术复制和复制。数据显示是代表实验复制。

2.11。集落形成实验

Six-well板与底准备琼脂(3.2%在媒体DMEM完全SeaPlaque琼脂)和允许在顶级琼脂固化前10000个细胞在DMEM (0.8% SeaPlaque琼脂全媒体)镀和允许固化。DMEM完全媒体与4μ镀g / mL嘌呤霉素(英杰公司)在细胞和细胞在标准条件下(5%孵化有限公司₂和37°C) 2周。最高的媒体被和细胞被固定在10%福尔马林含有0.005%结晶紫在室温下1小时。福尔马林被和殖民地成像徕卡S8 AP0显微镜。每细胞系被十二个图像,自动菌落数量使用ImageJ软件(NIH)。结果显示是一个代表三个独立实验的例子。

3所示。结果

3.1。早期产后杀伤力的结果Pten失活,表皮生长因子受体过度的雪旺细胞

转基因用于生成零星的周围神经鞘瘤进展小鼠模型图所示1(一)。单独转基因老鼠携带三个个人转基因产品(Dhhcre,,中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体)杂交生成实验和控制军团(图1 (b))。观察在生存方面的显著区别实验群体Dhhcre;;中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体(缩写为Pten/C- - - - - -表皮生长因子受体以下)和控制队列Dhhcre;;中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体(缩写为Pten- - - - - -het/C- - - - - -表皮生长因子受体以下)(,生存率较)(图1 (c))。Biallelic失活的Pten和表皮生长因子受体超表达(Pten/C- - - - - -表皮生长因子受体雪旺细胞)导致产后快速死亡,导致生存中值年龄(图26天1 (c))。一个较小的生存之间观察到的差异Pten/C- - - - - -表皮生长因子受体和一个控制群组Dhhcre;(缩写为Pten以下)()(图1 (c))。还有一个显著的差异在生存率观察控制军团Pten和Pten- - - - - -het/C- - - - - -表皮生长因子受体()(图1 (c))。周围神经系统的发生表型和中位数生存不同年龄人群如表所示1。增加的水平Pten与表皮生长因子受体(Pten-het / C- - - - - -表皮生长因子受体)部分缓解严重的表型,导致增加生存和生存年龄中位数415天(图1 (c))。Biallelic失活的Pten(Pten)单独导致生存年龄中位数(图247 -天1 (c))。相比之下,Dhhcre;(缩写为Pten- - - - - -het以后)控制老鼠显示没有明显的表型如前所观察到(9),而类似的表型观察中国出版集团- - - - - -表皮生长因子受体(缩写为C- - - - - -表皮生长因子受体以后)控制老鼠如前所述13]。

3.2。严重的周围神经系统表型观察到Pten/表皮生长因子受体动物

Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体实验动物显示多个放大背根神经节和扩大周围神经:臂plexi,骶plexi、三叉神经和坐骨神经(图2(一),左和表1)。Pten控制动物显示类似的周围神经系统表型,但延迟延迟和多样性显著降低肿瘤(图2(一),中间和表1)。Pten-het / C- - - - - -表皮生长因子受体动物显示类似的周围神经系统表型Pten控制动物,但延迟的415天(图2(一),正确的)。周围神经和背根神经节增大被描述C-EGFR(13]。

重要的是,Pten导致损失扩大背根神经节的形成。Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体动物有更显著的扩大背根神经节(平均值±标准偏差),相比之下,(我)Pten动物(,未配对t以及)和(2)Pten-het / C- - - - - -表皮生长因子受体动物(,未配对t以及)(图2(b)和表1)。没有统计学意义的数量扩大背根神经节之间Pten(),Pten-het / C- - - - - -表皮生长因子受体()动物(图2(b)和表1)。Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体实验动物显示以下周围神经表现型:大臂plexi(100%)、扩大三叉神经(92%)、扩大腰骶plexi(50%),和扩大坐骨神经(50%)(表1)。Pten和Pten-het / C- - - - - -表皮生长因子受体动物也有类似的发病率扩大周围神经:大臂plexi(100%)、扩大三叉神经(90 ~ 100%),扩大腰椎plexi(10 ~ 20%),和扩大坐骨神经(80%)(表1)。组织学分析显示放大周围神经Pten动物是低级PNSTs,扩大周围神经Pten-het / C- - - - - -表皮生长因子受体控制动物被分级为增生低级PNSTs基于相同的评分标准(表1)。C-EGFR控制动物只显示周围神经增生,纤维神经瘤的罕见事件。

3.3。组织病理学和免疫组织化学(包含IHC)分析

组织病理学和免疫组织化学(包含IHC)周围神经系统组织的分析Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体实验动物展示高档PNSTs低级PNSTs看到与增生Pten- - - - - -het / C- - - - - -表皮生长因子受体动物组织学和Ki67染色标准定义(20.,21)(图3(一个)和3 (b))。肥大细胞被发现在这些放大周围神经由甲苯胺蓝染色法(数据没有显示)。扩大周围神经了Pten控制动物是低级PNSTs如前所观察到(9]。扩大周围神经来自代表实验和控制动物S100ß染色阳性,与神经协会(图一致3(一个))。扩大周围神经了Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体和Pten- - - - - -het / C- - - - - -表皮生长因子受体Ki67-positive在不同强度,表明细胞增殖(图3(一个))。分析扩散表现出显著差异()Ki67-positive细胞的数量Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体动物与与其他人群相比高档PNSTs增生/低度低档肿瘤中看到Pten- - - - - -het / C- - - - - -表皮生长因子受体和Pten动物,分别(图3 (b)和补充图1:网上http://dx.doi.org/10.1155/2012/620834)。重要的是,快速增长的肿瘤的组织学和免疫组织化学特性是一致的转基因小鼠模型(GEMM)高档PNST和模仿人类零星的对于20.]。代表肿瘤样本,我们发现肾小球内的细胞排列,细胞分化差,变量核多形性、有丝分裂指数(补充图2)高。此外,所有GEMM-PNSTs显示神经和分散S100之间的联系β阳性细胞(图3(一个)和补充图2),典型的GEMM高档PNSTs。

扩大周围神经取自两个Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体和Pten- - - - - -het / C- - - - - -表皮生长因子受体动物都包含IHC pErk1/2积极的发现水平高于正常神经(补充图1),从而证实表皮生长因子受体超表达雪旺细胞和/或他们的前体细胞导致激活拉/Mapk / Erk信号(图3(一个))。周围神经从增大Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体和Pten动物也包含IHC pAkt积极,发现水平高于正常神经(补充),从而确认条件的失活Pten雪旺细胞和/或他们的前体细胞在激活的结果Pi3k/一种蛋白激酶/mTor信号(图3(一个))。的激活mTor在两个信号通路是明显Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体和Pten- - - - - -het / C- - - - - -表皮生长因子受体动物通过魔法石第六章染色(图3(一个))。然而,魔法石第六章染色强度更高的大多数扩大周围神经Pten / C- - - - - -表皮生长因子受体动物。

3.4。微阵列基因表达人类周围神经肿瘤样本的分析

这两个PTEN和表皮生长因子受体水平纯化从人类周围神经的雪旺细胞和纤维神经瘤细胞;转化细胞取自对于细胞株(图4(一))和实体肿瘤(图4 (b))在疾病的不同阶段分析了微阵列基因表达分析。

尽管会有减少的趋势PTEN表达水平在疾病的早期阶段,有一个戏剧性的减少在其表达水平在恶性疾病的阶段(数字4(一)和4 (b))。表皮生长因子受体mRNA表达随疾病进展从良性恶性肿瘤(数字4(一)和4 (b)),可能由于细胞群的同质性。似乎有选择性的压力损失PTEN并获得表皮生长因子受体表达水平在肿瘤的进化。

3.5。击倒的PTEN和超表达表皮生长因子受体合作在体外Oncogenically变换人类雪旺细胞永生化

击倒的PTEN和超表达表皮生长因子受体进行在人类雪旺细胞永生化确认表型观察小说中零星的小鼠模型。结构用来表达PTEN成分或表皮生长因子受体互补脱氧核糖核酸单独或结合图所示5(一)HSC2λ与各种结构和细胞转染piggyBac转座酶诱导transposon-mediated基因转移的结构(图5(a))。定量PCR分析表明这些构造导致的表达在mRNA水平预期的表达变化。PTEN信使rna水平时减少了超过7倍PTEN时,“碳足迹”独自撞倒,大于11倍吗PTEN的上下文中被撞倒了吗表皮生长因子受体超表达。表皮生长因子受体被约28-fold单独或过表达的吗PTEN击倒(图5(b)和5(c))。虽然没有显著改变细胞之间的细胞增殖率表示PTEN成分或表皮生长因子受体孤独,当扩散有显著增加PTEN的上下文中被撞倒了吗表皮生长因子受体超表达(,未配对t以及)(图5(d))。同样,anchorage-independent增长以软琼脂集落形成被大于3.5倍时增强PTEN成分和表皮生长因子受体结合表达()(图5(e))。

4所示。讨论

越来越清楚的是,PTEN监管途径代表重要的主要肿瘤抑制周围神经鞘肿瘤发生障碍。在当前的研究中,我们提出的假设PTEN合作与表皮生长因子受体在从良性与恶性PNST基因进化。这个假设成立于最近的一次睡美人转座子插入突变对于基因的遗传屏幕,这是表现的遗传背景表皮生长因子受体过度表达雪旺细胞制备(手稿)。有一个基本的遗传差异的进化之间的零星的对于人类和小鼠模型:人类零星对于长期延迟由于多基因改变的积累在一个克隆,而我们的转基因小鼠模型开发寡克隆优质PNSTs迅速。因此,我们的老鼠模型不能模拟人类疾病的遗传多样性和对于可能反映了只有一个基因亚型。然而,我们目前的研究提供了一个快速的动物模型说明的零星的上下文中出现的遗传机制新创对于进展。

表皮生长因子受体超表达中发现了一些人类癌症如乳腺癌、肠道和肝细胞癌(26- - - - - -29日]。NF1-associated和零星的对于表皮生长因子受体基因扩增和超表达mRNA和蛋白水平,支持其作用对于肿瘤发生[10,11]。除了其在肿瘤恶化可能的作用,更高的肿瘤表皮生长因子受体表达与患者预后差相关对于[30.]。激活表皮生长因子受体触发信号过程,促进细胞增殖、迁移、粘附、血管生成和抑制细胞凋亡31日]。转基因小鼠模型表皮生长因子受体过度增生等雪旺细胞纤维瘤引起的特性,过量的胶原蛋白,肥大细胞积累,进步的离解non-myelin-forming雪旺细胞的轴突(13]。在这些转基因小鼠中,没有证据表明高档PNSTs表明额外的基因进化所需的事件从一个对于良性纤维神经瘤。微阵列数据的分析从人类肿瘤细胞系和散装孤立纤维瘤和对于表明,有一个选择性压力损失PTEN表达,而表皮生长因子受体表达式是诱导在疾病进展(数字4(一)和4 (b))。它最近被表明的损失PTEN与高表皮生长因子受体和HER2表达和唾腺癌预后差,进一步证明这两个基因在其他癌症类型的重要性(32]。在当前的研究中,我们提供了遗传证据表明损失Pten合作与表皮生长因子受体雪旺细胞中过度表达,进化中从低档到高档PNST GEMM使用。转换的遗传机制涉及的upregulation拉/Mapk / Erk和Pi3k/一种蛋白激酶/mTor信号通路(图3(一个)和4 (c))。毫不奇怪,一个类似的机制(s)也观察GEMM条件失活的Nf1和Pten在雪旺细胞9]。此外,我们表明,该机制是可能发生在人类患者,减少PTEN和超表达表皮生长因子受体在人类雪旺细胞永生化合作文化,赋予这些细胞具有致癌特性如扩散和anchorage-independent增长(图5)。这进一步强调的重要性,这两个不同的信号通路在肿瘤发生NF1-associated和零星对于。更强烈的药物开发寻找新药物靶点应该解决这两个信号通路。重要的是,我们现在有快速GEMMs概括了人类NF1-associated [9)和零星的对于治疗药物的临床前测试。

确认

作者要感谢蒂莫西·p·库卡围l·李和阿曼达·l·Halfond优秀的技术支持。资金由国家提供Health-NINDS-P50 N5057531和玛格丽特•哈维先灵葆雅的信任。a·l·沃森是儿童肿瘤基金会资助的年轻调查员奖授予2011-01-018。k . Choi是由国家癌症研究所资助的培训5 t32ca059268-15格兰特。

补充材料