文摘

背景。nongastrointestinal间质肿瘤的最佳治疗软组织肉瘤(non-GIST STSs)切除与广泛的利润率。本研究调查的预后影响angiogenesis-associated血小板源生长因子(pdgf)及其受体(pdgfr) non-GIST STS宽,nonwide切除患者的利润率。方法。肿瘤样本和临床数据从249年non-GIST STS患者获得,每个标本,同时构建组织微阵列。免疫组织化学是用来评估a的表达,b - c和- d和PDGFR -α和- - - - - -β。结果。广泛切除患者的多变量分析利润,高表达PDGF-B (,HR = 2.954, 95% CI = 1.255 - -6.956)和PDGF-B coexpression和PDGFR -α(整体;,高低/低;,HR = 2.678, 95% CI -7.200 = 0.996,高/高;HR = 3.930, 95% CI = 1.542 - -10.015)是独立负对特定疾病的生存预后标记。结论。PDGF-B和coexpression PDGF-B和PDGFR -α是强大和独立的预后因素与广泛切除non-GIST STSs利润率。

1。介绍

软组织肉瘤(STSs) mesenchymal-derived肿瘤包含大约0.5%的年度癌症发病率估计一万新病人和近四千相关的死亡在美国在20091]。STS集团由50多个组织实体(2]。因为这些肿瘤的发病率低和类似的祖先很方便的分组进行研究时(2,3]。提议的方式组织这些肿瘤尤因家庭肿瘤,胃肠道间质瘤(总结),和non-GIST STSs,后者包括剩余的肿瘤(3]。尽管改善治疗在过去的几十年里,针对疾病的生存(DSS)和肉瘤患者的无进展生存(PFS)仍然是穷人。的主要治疗方法是切除广泛的利润率,而放射治疗常用于高档利润边际和广泛切除肿瘤(4,5]。即使广泛切除获得的利润,相对较高比例的患者死亡(6,7]。几个辅助chemotherapy-regimes用于治疗肉瘤,但除了儿童横纹肌肉瘤,尤因家族肿瘤和依据,研究不确定这些药物的影响(4,8,9]。识别病人的子群,广泛切除和低利润生存,可能是重要的,因为这些病人可能受益于辅助治疗。

血小板源生长因子(PDGF)的信号分子由四个蛋白质形成五个可能的配体在活的有机体内,即PDGF-AA PDGF-AB PDGF-BB, PDGF-CC, PDGF-DD [10]。血小板源生长因子受体(pdgfr)结构相关的酪氨酸-受体组成的α——或者β进行攻击形成三种可能的受体:PDGFR -ααPDGFR -αβ和PDGFR -ββ。专门PDGFR - PDGF-AA绑定αα,而PDGF-AB和PDGFR - cc绑定αα和PDGFR -αβ;PDGF-DD PDGFR -绑定αβ和PDGFR -ββ,而PDGF-BB结合所有pdgfr (10]。

pdgf和pdgfr发挥重要作用在血管生成,肿瘤基质的招聘和管理,调节肿瘤间质流体压力(奖学金)11]。除了pdgf有功能强大的转化生长因子,导致细胞通过细胞循环,避免细胞凋亡(12]。

PDGF / PDGFR通路曾牵涉到一些肉瘤包括要点,dermatofibrosarcoma protuberans,儿童横纹肌肉瘤,卡波西氏肉瘤,骨肉瘤,尤因肉瘤(家庭11,13- - - - - -19]。关于non-GIST STSs,没有确凿的研究PDGF / pdgfr预后的影响。pdgf的表达与预后影响知识和pdgfr可能是重要的识别广泛切除患者低利润率和DSS。新兴阶级的选择性小分子抑制剂针对这些途径,这可能是特别重要的。本调查研究的预后影响pdgf和pdgfr non-GIST STS和宽nonwide切除利润率。

2。患者和方法

2.1。病人和临床样本

从匿名病人诊断为原发性肿瘤组织non-GIST STS大学医院北挪威和阿尔汉格尔斯克的县医院,俄罗斯,从1973年到2006年,收集。总共496名患者从医院注册数据库。的247名患者被排除在研究由于缺少临床数据()或固定石蜡包埋组织块(不足)。因此,249例完整的医疗记录和足够的石蜡包埋组织块是合格的。

这个报告包括跟踪数据截至2009年9月。跟踪中值为37.6(范围0.1 - -391.7)个月。完成人口统计学和临床回顾性收集数据。Formalin-fixed和肿瘤石蜡包埋标本病理档案的部门获得大学医院北挪威和阿尔汉格尔斯克的县医院,俄罗斯。肿瘤分级根据法国联邦国家des中心de Lutte靠le癌症(FNCLCC)系统和组织学检查子类型根据世界卫生组织指南(2,20.]。广泛切除边缘被定义为宽与自由微观局部切除边缘或截肢肢体或器官的影响。Nonwide切除intralesional切除或利润率被定义为边际利润率,或没有手术。

2.2。微阵列结构

所有肉瘤组织学上由两个训练有素的病理学家(s . Sorbye和a . Valkov),和最具代表性的地区的肿瘤细胞(肿瘤间质细胞)是精心挑选和标记的苏木精和伊红(H / E)幻灯片和抽样的组织微阵列(TMA)块。蓝玉是组装使用tissue-arraying仪器(比彻仪器,银泉,医学博士,美国)。详细的方法之前已经报道过(21]。简而言之,我们使用了一个0.6毫米直径探针,研究标本常规采样和四个复制核心样本不同区域的肿瘤组织。正常组织的病人被用作染色控制。

包括所有核心样本,12 TMA块了。多个5 -μ米部分削减了一微米切片机(HM355S)和通过特定的抗体免疫组织化学染色(包含IHC)分析。

2.3。免疫组织化学

应用抗体受到内部验证的制造商包含IHC分析石蜡包埋材料。中使用的抗体研究如下:PDGF-AA(山羊多克隆;ab - 221 na;研发系统;1:200),PDGF-AB / BB(兔多克隆;rb - 9257;Neomarkers;1:15),PDGF-CC(山羊多克隆;GT15151;Neuromics; 1 : 80), PDGF-DD (goat polyclonal; AF1159; R&D Systems; 1 : 400), PDGFR-α(兔多克隆;rb - 9027;Neomarkers;1:75)和PDGFR -β(兔多克隆;rb - 9032;Neomarkers;1:25)。

部分与乙醇deparaffinized二甲苯和水化。抗原检索a - b、c和d是由将标本在pH值6.0和0.01 M柠檬酸缓冲暴露他们重复(×2)微波加热10分钟在450 W。a、b和c使用过氧化物酶染色/轻拍(Dako想象+ System-HRP /轻拍)。主要的抗体在室温下培养30分钟。PDGF-D被添加一个可视化二次抗体与生物素结合,紧随其后的是一个亲和素/生物素过氧化物酶复合物(Vectastein ABC精英装备从向量实验室)。主要抗体是孵化一夜之间在4°C。最后,所有幻灯片与苏木精复染色细胞核形象化。

受体(PDGFR -α和- - - - - -β)染色使用Ventana基准XT (Ventana医疗系统公司),过程iView轻拍。抗原检索在三羟甲基氨基甲烷/ EDTA缓冲液pH值为30分钟(PDGFR - 8.4α)或60分钟(PDGFR -β在37°C)。主要的抗体在室温下培养30分钟。

对于每个抗体,包括负染法控制,TMA染色都是做的一个实验。

2.4。得分的免疫组织化学

ARIOL成像系统(Genetix圣何塞,CA)是用来扫描蓝玉的抗体染色的幻灯片。幻灯片在自动加载幻灯片加载程序(应用成像SL 50)和低分辨率的标本进行扫描(1.25×)和高分辨率使用奥林巴斯(20 x)显微镜与自动化平台(之前)。代表和可行的组织部分得分手动在电脑屏幕半定量的胞质染色。占主导地位的染色强度得分为0:消极,1:弱,2:中间,和3:强。所有样品都是匿名和独立得分由两个训练有素的病理学家(a . Valkov和Sorbye)。当评估一个变量对于一个给定的核心,其他的观察家对分数也不变量和结果。平均评分从每个重复的核心是分开计算的。

高表达的肿瘤细胞被定义为分数≥1.5 (a、PDGF-C和PDGF-B),≥2 (PDGF-D PDGFR -α和PDGFR -β)(图1)。

2.5。统计方法

所有统计分析都使用统计软件包SPSS(美国芝加哥,IL), 16版。IHC分数从每个观察者比较interobserver可靠性通过使用双向随机效应模型绝对协议定义。组内相关系数(可靠性系数)是获得这些结果。卡方检验和渔民的测试被用来研究分子标记表达和各种临床病理参数之间的关系。单变量分析是通过使用kaplan meier方法和统计学意义之间的生存曲线是生存率较评估。DSS的日期确定诊断癌症相关死亡的时间。评估不同预处理变量对生存的独立价值,在其他变量的存在,多变量分析进行了使用Cox比例风险模型。只有变量的单变量分析的重要价值进入Cox回归分析。和删除是概率逐步条目。05年和。10,respectively. The significance level used for all statistical tests was。

2.6。道德的间隙

全国数据检查委员会和地区研究伦理委员会批准了这项研究。

3所示。结果

3.1。Clinopathological变量

总结了clinopathological变量表1。中位数年龄为59岁(范围0 - 91)年,56%是女性;167名患者82年挪威和俄罗斯。249年Non-GIST STSs由肿瘤包括血管肉瘤()、纤维肉瘤()、平滑肌肉瘤()、脂肪肉瘤()、多形性肉瘤(),neurofibrosarcoma /恶性周边神经鞘肿瘤(对于,)、横纹肌肉瘤(),滑膜肉瘤(),未指明的肉瘤()。肿瘤起源分布如下:36%的四肢,躯干19%,腹膜后15%,7%的头部和颈部,发自肺腑的23%。228年接受手术的病人,53%仅接受手术,手术和放疗24%,18%的手术和化疗,和6%的手术,放疗和化疗。除此之外,21日不接受手术的病人由于不实用的肿瘤(),高年龄/其他严重疾病()、STS尸检证实()和病人拒绝()。这些患者姑息性,7个患者接受化疗或放疗,而14收到任何抗癌治疗的病人。

3.2。Interobserver可变性

Interobserver得分协议测试的一个配体(PDGF-B)和一个受体(PDFGR -α)。PDGF-B组内相关系数分别为0.890 (0.892)和PDFGR -α()表明两者之间良好的再现性调查病理学家。

3.3。pdgf的表达/ pdgfr及其相关性

PDGF / PDGFR-expression观察肿瘤细胞的细胞质中。没有相关肿瘤PDGF / PDGFR表达和肿瘤深度增加,手术、放疗或化疗。最有趣的相关性,PDGFR -α与恶性肿瘤相关等级(高表达;1级:25%,2级:39%,等级3:54%,)和PDGFR -β通常是表示转移患者在诊断(35%,与没有转移的诊断,18%,)。

3.4。单变量分析

人口统计学和临床病理的变量中总材料,病人国籍(),组织实体(),肿瘤大小()、恶性肿瘤年级(),肿瘤深度(),在诊断转移()、手术(),切除的利润()是DSS(表的重要预后指标1)。

在子群广泛切除利润率,病人国籍()、恶性肿瘤年级(),肿瘤深度(),在诊断和转移()是DSS的重要预后指标。在子群nonwide切除利润率,恶性肿瘤年级(),在诊断转移()、手术(),组织实体()是DSS的重要预后指标。

影响DSS的pdgf和pdgfr表所示2和图2。在总的材料,高表达PDGFR -α()和PDGFR -β()是重要的- DSS的预后指标。在子群广泛切除利润率、高PDGF-B表达式(),PDGF-D (),PDGFR -α(),和PDGFR -β()是重要的- DSS的预后指标,而在子群与nonwide切除边缘没有pdgf和pdgfr DSS的重要指标。

3.5。多变量Cox比例风险分析

多元分析的结果提出了在表3和4。在总的材料,肿瘤深度(),肿瘤大小(),高恶性肿瘤年级(),缺乏手术(),nonwide切除利润率(),在诊断和转移()是DSS(表的重要独立的预后指标3)。在子群广泛切除利润率,俄罗斯国籍(),高恶性肿瘤年级(),在诊断转移()和高表达的PDGF-B (HR = 2.954, 95% CI = 1.255 - -6.956)是DSS(表的重要独立的预后指标4)。在子群nonwide切除利润,高恶性肿瘤年级(),缺乏手术(),在诊断和转移()是DSS的重要独立的预后指标。

3.6。Coexpression PDGF-B和PDGFR -α

是相关的评估coexpression pdgf及其受体之间的这些能代表添加剂和/或协同对DSS的影响。在单变量分析中,coexpression PDGF-B和PDGFR -α是一个重大的负面DSS的预后指标的总材料(),宽子群与切除利润率()。在后者中,coexpression显著独立- DSS的预后指标(整体;,中间;,HR = 2.678, 95% CI -7.200 = 0.996,高;HR = 3.930, 95% CI = 1.542 - -10.015)。

4所示。讨论

non-GIST STSs的主要治疗手段是手术广泛切除利润(4]。5年存活率是30%,nonwide切除组利润和利润率60%其中广泛切除。温和的解释生存,尽管广泛切除利润,可能微小转移到周围组织,lymphogenic地区扩散,或血性的转移。任何可能性来识别这些患者将随后屈服于从他们的切除肿瘤进展和转移中的广泛切除边缘集团至关重要,因为这些病人可能受益于辅助治疗。

提出了一种大规模的回顾性研究的预后影响a, b - c和- d和PDGFR -α和- - - - - -β在non-GIST STS的病人。高表达的PDGF-B和PDGF-B coexpression和PDGFR -α是重要的独立- DSS的预后指标广泛切除的利润率。据我们所知这是第一个评价pdgf和pdgfr non-GIST STSs根据切除利润(22]。

这项研究由肿瘤异质性的主要限制作为non-GIST STS的不同类型,不同疾病的网站,以及不同的疗法。至少在一定程度上,这些点是占的多变量分析。最近的研究表明新方法分组STSs根据他们的突变状态除了组织学(22]。同源的人口的知识共同肉瘤突变的突变状态是有趣,但这是很难安排设置的回顾性研究。

这项研究的主要优势在于队列的大小,与先前的研究临床变量的一致性肉瘤,和我们的发现的生物稳定性。

1994年,王等人报道增加PDGF-B表达式之间的正相关和高组织学恶性肿瘤STSs等级使用一组56 STSs所有成绩包括良性肿瘤(23]。,我们没有观察到PDGF-B表达与组织学分级之间的相关性,但PDGF-B似乎是一个重要的独立负广泛切除患者预后的标志DSS的利润率。

小鼠实验表明参与endothelial-derived PDGF-B,外膜细胞和血管平滑肌细胞(VSM)招聘和稳定,在血管形成(24- - - - - -26]。周与分化和稳定的血管,和血管壁的特点是一个重要的组成部分。作为肿瘤形成足够的血液供应是关键,tumor-derived PDGF-B可以代表一种招聘周和特点,导致肿瘤生长和增加转移性肿瘤的可行性和肿瘤形成能力。高肿瘤间质流体压力(奖学金)已被证实能够降低化疗反应由于低transcapillary运输的化疗药物27]。PDGF-B被证明能增加奖学金,并可能发挥作用在肿瘤对化疗的反应显示出意想不到的贫穷(11]。对小鼠的研究表明,阻止pdgf对化疗的反应和pdgfr导致更好的在几个实验肿瘤类型(28,29日]。这些发现表明,增加pdgf的表达和pdgfr可能扰乱化疗的效果,因此有助于解释为什么反应在non-GIST STSs化疗仍存在争议。通过PDGFR PDGF-B主要信号β但也已被证明能够通过PDGFR信号α(10]。受体激活后,PDGF-B有很强的转换功能,激活几个细胞内途径,包括PI3K PLCγ、SRC和RAS。这些通路的激活可能会导致细胞循环,避免细胞凋亡增加12]。在单变量分析,高表达的PDGF-D显著负预后标记non-GIST STSs广泛切除的利润率。PDGF-D曾被证明能够表现出广泛的转换和血管生成的能力(30.]。肿瘤血管形成PDGF-D-driven展示伟大的相似性PDGF-B-driven肿瘤血管形成,表明PDGF-D,在缺乏PDGF-B,可以部分或全部PDGF-Bs血管生成函数(30.]。进一步,PDGFR -α和- - - - - -β是重大的负面预后标记为non-GIST STSs广泛切除的利润率。pdgfr一直被视为“驱动力”在许多人类癌症,包括依据,通过自体活动和本构信号(19]。PDGFR——这一事实α与恶性肿瘤相关年级和PDGFR -β与转移相关的诊断表明,这可能也是在non-GIST STSs,尽管进一步的调查是十分必要的。

我们还发现PDGF-B coexpression和PDGFR -α有显著独立负non-GIST STS的广泛切除预后影响利润率。高组显著降低生存与新低和高低/低组表明一个添加剂或协同效应(图2)。这一发现的确切机制还不清楚,但有几种可能的解释。如前所述,通过PDGFR PDGF-B最好信号β但也可以通过PDGFR信号α。当和PDGFR PDGF-B表达在肿瘤很可能是两种途径同时刺激PDGF-B或连续的刺激PDGFR -β和PDGFR——持续活跃α。的一部分与基质效应也可能来自PDGF-B交互组件的周和特点。同时刺激的PDGFR轴,连同拟议中的血管生成和基质PDGF-B监管的影响,或许可以解释non-GIST STS广泛切除患者的减少DSS的利润率。

小分子酪氨酸激酶受体抑制剂已被用于治疗胃肠、dermatofibrosarcoma protuberans,慢性粒细胞性白血病,和其他人,展示未来的治疗(31日]。细胞株和动物实验研究表明,协同效果和减少副作用的抑制性药物与常规化疗或放疗(28,29日]。

5。结论

尽管广泛切除边缘,三分之一的病人仍死于non-GIST STS。我们已经确定了高表达的PDGF-B non-GIST STS的独立- DSS的预后因素广泛切除患者的利润率。此外,PDGF-B和PDGFR -αcoexpression显示广泛切除边缘子群与特别可怜的DSS。我们的研究结果表明PDGF和/或pdgfr参与non-GIST STS发病机理。负责这个参与的机制需要进一步阐明,终于在前瞻性临床试验验证。与小分子抑制剂的发展针对这些途径,pdgf和pdgfr可能成为治疗non-GIST STSs重要目标。

资金

这项研究是由挪威北部卫生权威,挪威儿童癌症网络,挪威肉瘤组和挪威癌症协会。资金来源没有影响研究设计、数据收集、分析和解释数据,在论文的写作,或决定提交投稿。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

我们应感谢Frode Skjold耦合的数据库,使TMA块马格努斯·l·佩尔森,Helge Stalsberg收集临床信息。