文摘

刺盘孢属、炭疽(Penz)。Sacc。是一种真菌引起的疾病在热带水果植物炭疽病,导致损害的水果植物和水果产量和品质低。化学杀菌剂的使用是这种疾病的共同管理,但它也会导致真菌耐化学品的发展。因此,本研究旨在在体外评估14原油叶子提取物的功效c、。结果表明,Piper sarmentosum叶提取物,用80%的乙醇,甲醇,氯仿为溶剂,被发现有很高的抗真菌的活动。粗甲醇提取的p . sarmentosum叶子能有效地抑制真菌菌丝的生长(100%),其次是原油氯仿提取物(81.85%)和80%乙醇提取物(45.50%)。最大的抑制c、孢子萌发后可以获得应用程序与粗甲醇提取的p . sarmentosum叶子和原油氯仿提取的各种等叶子分别为1.25和2.5%。总之,原油中提取的p . sarmentosum叶子被发现是高度有效的抑制c、菌丝生长和孢子萌发,他们有一个潜在的新的天然杀菌剂管理炭疽病的疾病。

1。介绍

刺盘孢属、炭疽(Penz)。Sacc。是炭疽病疾病的病原体在许多热带果树,如芒果和木瓜。这种疾病是非常有害的,会导致变质和腐烂的水果植物,导致产量低、质量差的水果1]。化学杀菌剂的使用管理炭疽病疾病是最常见的选择,但这也导致真菌耐药性的发展(2]。此外,连续和不当使用化学杀菌剂管理炭疽病疾病并不被认为是长期的解决方案,因为这可以增加投资费用,拥有高水平的有毒残留的风险,同时也关注人类健康和环境的设置(3]。由于这些原因,有几次试图寻找替代措施来控制炭疽病疾病有效。最近的努力集中在环境安全的发展,持久和有效的生物防除方法管理炭疽病的疾病。利用天然产物,尤其是植物提取物,对许多植物病原体已被证明是有效和被认为是安全的对消费者和环境4]。许多植物物种已报告拥有天然物质对多种植物病原真菌有毒(5,6]。的提取姜黄(叶子和根茎),万寿菊(叶),姜药用(粉末)被证明具有抗真菌的活动完全针对真菌炭疽病的抑制分生孢子的萌发c、(7]。南美番荔枝叶水提取物(番荔枝属网状l .)和木瓜可以抑制孢子的形成和萌发根霉stolonifer和分生孢子的形成c . gloeosporioide年代(8]。此外,c . capsici菌丝的生长和孢子萌发被发现被原油叶提取物的抑制Piper betlel使用甲醇、氯仿和丙酮为溶剂9]。因此,在这项研究中,在体外抗真菌的活动14叶子提取物进行了评估c、,一个芒果炭疽病疾病的病原体。

2。材料和方法

2.1。真菌文化

c、被隔离的上表面受感染的芒果和培养使用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)介质25°C。

2.2。植物材料和提取

叶子从14种不同植物物种收集本地或在当地市场买的摩诃Sarakham省东北部地区的泰国(表1)。叶样本使用自来水彻底洗干净,晾干在室温下3 - 4 h,最后在热空气干燥炉在45 - 50°C 1到2天取决于植物物种。使用小磨床干叶样本地面,然后放置在聚乙烯袋,并存储在4°C,直到需要。对于每一个样本,叶粉50克被添加到150毫升的甲醇(M)、80%乙醇(E),或氯仿(F)(因此叶粉和溶剂之间的比例是1:3)。72 h的混合物被激动旋转瓶(130 rpm)。获得的提取在8000转离心10分钟,透过绘画纸滤纸。1,转移到250毫升圆底烧瓶。最后,这些42提取使用旋转蒸发器蒸发在45°C。集中提取被允许在热空气干燥炉,又重,保持在4°C到所需的抗真菌化验。

表1
植物的列表。
2.3。叶提取物的筛选c、菌丝的生长

四十两个原油叶提取物在体外测试的有效性c、菌丝生长使用有毒食品技术(10]。所有原油叶提取物被重组的浓度5%。1毫升每提取用于混合有19个毫升的温暖的PDA和注入无菌培养皿9厘米。凝固后,盘子注射6毫米琼脂块包含一个星期c、菌丝。对于每个粗叶提取物,实验三个复制。PDA板块和多菌灵(商业杀菌剂0.005%)和无菌水蒸馏作为积极的和消极的控制,分别。接种板块在30°C,孵化和真菌菌落的直径测量每天5天。

抑制菌丝的生长是使用以下公式计算11]: :真菌菌落直径生长在消极的控制面板, :真菌菌落直径生长在盘子里包含原油叶提取物。

2.4。叶提取物准备在不同浓度的影响c、菌丝的生长和孢子萌发

十二岁的叶提取物发现高水平的活动c、菌丝体生长在低浓度选择进行进一步的测试。不同浓度的选择原油叶提取物是准备(2.5,1.25,0.625,0.3,0.2,0.1,0.05%)在体外测试c、菌丝的生长和孢子萌发(如上所述)。抑制孢子萌发蔓延了100μL (c、孢子悬液(105孢子/毫升)PDA板块包含每片叶子提取物。多菌灵和无菌水蒸馏作为积极的和消极的控制,分别。盘子在30°C和孵化监控7天。

2.5。统计分析

受到所有数据方差分析(方差分析)使用一般线性模型过程(SAS研究所卡里、数控、美国)。菌丝的抑制百分比的数据之前反正弦转换分析。%的菌丝的抑制治疗的手段比较并确定使用LSD测试 。

3所示。结果

3.1。筛选42原油叶子提取物c、菌丝的生长

不同溶剂用于提取可能导致不同程度的在体外抗真菌的活动原油叶提取物(5%)以有毒食品技术。叶提取物的抗菌活动使用80%的乙醇,甲醇和氯仿为溶剂被发现介于0.77 - -45.50%之间,分别为4.35 -100%和12.37 -100%,(图1)。即使所有原油叶子提取物表现出某种程度的活动c、菌丝,80%乙醇提取的o . bacilicum和氯仿提取的答:heterophyllus和c . siamea没有有效地阻止菌丝的生长。c . siamea叶子,使用80%的乙醇和甲醇提取有很低的抗真菌的活动在4.35%和0.77,分别为(图1)。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
图1
抑制c、菌丝体生长粗叶提取物(a)使用80%乙醇,甲醇(b)和(c)氯仿为溶剂。酒吧(均值±SE)和相同的字母(s)并不像由LSD检验显著不同 。

原油叶提取物使用80%的乙醇作为溶剂被显示,而低抗真菌的活动(小于50%),如图所示p . sarmentosum a . heterophyllus和大肠camaldulensis可以预防的发展c . gloeosporiodes菌丝为45.50、42.75和33.85%,分别为(图1(一))。有趣的是,粗甲醇提取的p . sarmentosum针对叶片表现出最高的抑制活动c、mycelialgrowth(100%),紧随其后的是大肠camaldulensis(57.75%),o .密室(52.75%)和p . guajava(52.75%)。然而,其他甲醇叶提取物有抗真菌的活动水平不到50%(图1 (b))。有5氯仿提取物有抑制50%以上活动c、菌丝的生长,包括m .等(100%),p . sarmentosum(81.75%),大肠camaldulensis(60.25%),m .香(55.50%)和o . bacilicum(91.10%)(图1 (c))。

3.2。叶提取物准备在不同浓度的影响c、菌丝的生长和孢子萌发

十二个原油叶提取物(来自7植物物种),包括提取p . sarmentosum和大肠camaldulensis在所有溶剂,提取的答:heterophyllus在80%的乙醇中,提取的o .密室和p . guajava在甲醇提取的o . bacillicum和m .香氯仿准备在不同浓度(2.5,1.25,0.625,0.3,0.2,0.1,0.05%)和确定的功效c、菌丝生长和孢子萌发。

尽管这些植物提取物表现出较低的浓度较低的抗真菌的活动,一些植物提取物(表仍然有效2和3)。特别是,相比多菌灵(商业杀菌剂)、粗甲醇提取的p . sarmentosum和氯仿提取的Mcordifolia可以显著抑制的增长2.5%c、菌丝体分别为97.60%和100(表2);此外,这两种植物提取物1.25%也完全预防c、孢子萌发(100%)(表3)。然而,其他原油叶提取物在低浓度中并没有表现出显著的抗真菌活性c、(表2和3)。

表2
12的影响选择原油叶提取物在不同浓度刺盘孢属、炭疽菌丝的生长。
表3
12的影响选择原油叶提取物在不同浓度刺盘孢属、炭疽孢子萌发。

4所示。讨论

在这项研究中,12叶提取物(从7获得植物物种)被发现抑制c、菌丝体生长强烈选择5%,然后准备在低浓度,用于进一步评估c、菌丝的生长和孢子萌发(表2和3)。2.5%的粗甲醇提取的p . sarmentosum和氯仿提取的m .等被抑制c、菌丝的生长,为1.25%,这两个也可以完全避免c、孢子萌发。

从先前的报道,有各种各样的植物提取物,用来控制真菌炭疽病。例如,粗甲醇、氯仿和丙酮提取物Piper betle叶子在10的浓度μg / mL可能抑制经济增长炭疽菌capsici(负责辣椒炭疽病疾病)菌丝体为85.25,78.53和73.58%,分别为(9]。同时,在同一浓度,粗甲醇,氯仿,丙酮提取物p . betle叶子,以防被发现c . capsici孢子萌发为80.93、74.09和72.91%,分别为(9]。此外,叶的提取物o . bacillicum和大蒜表现出100%的抑制c、(para橡胶炭疽病负责)菌丝体生长在应用w / v 50岁和100%,分别,这两种提取物可以完全抑制孢子萌发时应用最小10% (w / v12]。此外,乙醇提取的罗勒属gratissimum和Aframomum melegueta叶子被抑制的增长Botryodiplodia theobromae菌丝体(香蕉炭疽病的病原体)在68.2%和72.1,分别为(13]。

其他植物病原真菌也可以被植物提取物。例如,乙醇提取的o . gratissimum和答:melegueta叶子也防止报道尖孢镰刀菌和黑曲霉孢子萌发在65%以上13]。此外,根霉oryzae孢子萌发和菌丝生长抑制的叶子中提取的o . gratissimum(14]。

本研究表明,p . sarmentosum和m .等叶子有显著的抗真菌活性。植物化学的特征的研究表明,生物活性化合物各种sp.谷甾醇和β-sitosteryl -β-D-glucoside,风笛手sp.木酚素、类固醇、neolignans、生物碱、propenylphenols,萜烯,piperolides,化合物,黄烷酮类、黄酮、和酰胺轴承异丁基吡咯烷,dihydropyridine,哌啶根,所有这些可以表现出较高的抗菌和抗真菌特性(15- - - - - -17]。植物生物活性化合物和抗真菌活性的水平可能会受到许多因素的影响,包括植物的年龄,收获时间点、萃取剂,萃取法(18]。

总之,这项研究表明,粗糙的叶子中提取的p . sarmentosum有很强的抗真菌的活动反对c、。这可能表明他们潜在的未来制定产品控制的芒果炭疽病疾病和其他水果。植物化学的特点和更广泛的研究在活的有机体内功效还有待确定。

确认

这项工作是支持的财务NRCT、泰国。作者还要感谢美国生物技术,技术学院Mahasarakham大学、泰国、实验室设备和设施。