文摘
背景和目标。结节病是一种炎症性疾病增加的炎性细胞因子水平。先前的研究显示肉芽肿浸润的程度之间的关系和血清细胞因子水平,除了白介素- 10 (IL)。这项研究的目的是进一步研究患者血清il - 10水平在结节病并与真菌暴露在空气中真菌的数量的家园β葡聚糖在支气管肺泡灌洗(BAL)流体。方法。结节病()和健康对照组()注册。血清中il - 10测定。和执行落下帷幕β葡聚糖是测量。国内接触真菌决心通过测量空中β-N-acetylhexosaminidase(那霸)卧室。结果。在高水平的真菌暴露(国内真菌暴露和β葡聚糖在BAL),血清il - 10值低于低,中间暴露水平。结论。低血清il - 10在高值真菌暴露表明真菌细胞壁代理扮演一个角色在结节病肉芽肿形成的抑制分泌抗炎细胞因子il - 10。
1。介绍
结节病是一种炎症性疾病,常常导致肉芽肿形成(1,2]。一些研究表明,大量的炎性细胞因子,特别是白介素- 10 (IL)和白介素,升高血清及支气管肺泡灌洗液(3- - - - - -6]。先前的研究已经表明,接触真菌是结节病的一个危险因素7- - - - - -9]。一个真菌细胞壁代理(FCWA)β-glucan-can诱发不同的免疫系统的变化和肉芽肿,根据剂量和管理的手段(审查(10])。肉芽肿的形成可以抑制il - 10 (11]。甲壳素是另一个FCWA能够诱导免疫变化,根据粒子的大小(12]。
在在体外研究反应性外周血单核细胞(PBMC),微粒β葡聚糖诱导肿瘤坏死因子的分泌α从PBMC、il - 6、il - 10、il - 1213)更高的分泌物患者PBMC取自结节病(14]。
临床研究评估肉芽肿浸润的程度之间的关系用x射线的分数和血清肿瘤坏死因子的数量α、il - 6、il - 10、il - 12,血管紧张素转换酶(ACE),和chitotriosidase(首席技术官)15]。有一个线性关系为所有炎症介质和标记除了il - 10。细胞因子,有一个初始增加增加x射线分数但值最高的x射线的得分越低。这表明阻断il - 10的正常分泌,由于炎症,可能是相关机制形成肉芽肿结节病的风险。这就促使本研究由一个评估患者的血清il - 10水平的结节病与真菌暴露的接触真菌在他们家里的数量β葡聚糖落下帷幕。
2。材料和方法
2.1。主题
受试者招募了呼吸疾病和过敏性疾病部门的大学医疗中心,卢布尔雅那,斯洛文尼亚,从2007年7月到2013年10月。国家中心的部门是结节病。诊断人/ ATS标准(16使用)。例程在诊所是使支气管镜检查和肺实质的5到10 transbronchial活检针纵隔淋巴结的愿望。支气管肺泡灌洗(BAL)和CD4 + / CD8 +比值决定。验证noncaseating肉芽肿组织学上的存在。如果活检不被认为是代表,病人接受手术肺或淋巴结活检。愿望从正确的执行,上部叶培养病原真菌和细菌包括肺结核。大多数切片染色(银染色,Gomori)确定真菌感染的存在。IgA、IgM和免疫球蛋白抗体假丝酵母种虫害和曲霉属真菌种虫害决心以及甘露聚糖抗原的血液。与结节病诊断BAL和痰的主题展示没有致病性真菌和结核病。
这项研究由新诊断病例肺结节病()和健康受试者()检查。所有受试者不吸烟者。这项研究是在大学医学中心伦理委员会批准,卢布尔雅那(198/05/04)和书面知情同意。
2.2。临床评估
血清中il - 10测定使用商业酶联免疫试剂盒(Milenia研究,德国,和热科学、美国)和表达为更易/毫升。Chitotriosidase(首席技术官)测定血清中的活动使用22μM 4-methylumbelliferyl -β-D-N, N′, N′′-triacetylchitotriosiose柠檬酸(σ)磷酸盐缓冲剂(pH值5.2)和表达为nmol / h /毫升(17,18]。
2.3。分析β葡聚糖
球样品液混合着20毫升的包含0.15 mol / L KOH溶液,0.3 mol / L氯化钾,0.1%聚凝胺和孵化37°C 10分钟。分析β葡聚糖,商用方法基于鲎的反应性提取使用。球制备中稀释蛋白阻断缓冲区(Biodispersing剂、查尔斯河、查尔斯顿、SC、美国),保存在沸水中煮两分钟,进一步稀释内毒素自由水(LAL,查尔斯河)。此后,25μL是添加到每个4井的一盘preprepared鲎试剂特有的β葡聚糖和阅读在一个自动分析器(Endosafe分,查尔斯河)。检测下限为1 pg / mL。样品产生读出值< 100 pg / mL的统一价值90为了节省试剂。道德理由BAL只是表现在9个对照组。
2.4。真菌暴露在家里
暴露于真菌的房屋是由分析机载的数量β-N-acetylhexosaminidase(那霸)作为真菌细胞生物量的标志(19,20.]。空气样本(约2000升)拍摄主题的卧室里使用一个过滤器和fluorogenic酶底物(4-methylumbelliferyl n -乙酰-β-D-glucosaminide, Mycometer / S,哥本哈根,丹麦)添加到过滤器。的潜伏期大约30分钟后,设定的室内温度,增加了开发人员和液体的荧光在荧光计读(Picofluor,特纳设计,桑尼维尔,美国)。单位读除以10减少方法论的散射和表达为那霸单位/ m3。
2.5。统计分析
不同组中的值计算使用SPSS支W7和被表示为均值和标准平均误差(SEM)。组之间的差异进行评估使用以及或确切概率法。一个≤0.05被认为是具有统计学意义的价值。
3所示。结果
3.1。测试对象的特点
研究对象的基本特征如表所示1。
新诊断结节病的临床典型值。有四例皮肤结节病。
血清il - 10在表值2。
没有明显差异之间的平均值控制和结节病。主题与结节病之间的最大价值较高。在控制所有β葡聚糖值不到90 pg / mL和那霸值小于30 U / m3除了一个例外(76)。
图1说明血清il - 10水平与结节病的关系β葡聚糖落下帷幕。
(一)
(b)
在大量的β葡聚糖落下帷幕,那霸的房屋,反映出更高的接触真菌,没有高水平的il - 10。在折断的750 pg / mLβ葡聚糖,降低il - 10的平均值β葡聚糖值组23.5/5.7比3.8/0.5的更高价值集团(,Mann-Whitney测试)。75年在折断的那霸,相应的il - 10值是20.6/8.9,,5.6/1.5,(,确切概率法)。
4所示。讨论
研究的主要发现,血清il - 10的值很低在高接触真菌,在图中以国内暴露和数量β葡聚糖落下帷幕。
这项研究有一些局限性。受试者的数量是相当小的,特别是在高真菌暴露组。测量的那霸是家庭但重要的风险敞口也可以出现在工作场所。拜尔港为β葡聚糖的决心不能执行的所有课程,因为道德原因。
先前的研究表明,il - 10的值较低,高水平的首席技术官,疾病严重程度的一个标志(15]。在这项研究中有类似的下降与真菌暴露在家里。这表明,有抑郁症的il - 10分泌能力更高的暴露水平。几乎所有细胞的先天和适应性免疫系统的怀抱可以表达il - 10包括树突细胞、巨噬细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞,T调节细胞(21,22]。这种细胞因子是其中最重要的抗炎和免疫抑制的细胞因子。它通过抑制影响血管系统leukocyte-endothelial细胞相互作用和抑制促炎细胞因子和趋化因子的生产由巨噬细胞和淋巴细胞(23]。在动物模型的低水平的il - 10是一个诱发因素慢性纤维化(24]。结节病特别感兴趣的是,il - 10可以抑制一个实验性的肉芽肿性炎症(11)和糖皮质激素,通常用于治疗疾病,有能力增强il - 10的生产(25]。
这开辟了一个新的可能的机制来解释真菌暴露和结节病之间的关系(9]。人们很容易推测,肉芽肿结节病的发展是由炎症引起的吸入β葡聚糖,这种炎症在更高的暴露水平降低了il - 10的重要防御机制方面。进一步的工作需要评估这一假设。虽然在这种情况下已经关注真菌,它不能排除其他微生物制剂可能诱发类似反应的抑郁症的细胞分泌il - 10的能力。评估这些代理的重要性,例如,分枝杆菌,研究暴露水平以及对细胞的影响机制是必需的。
5。结论
在高环境接触真菌、血清il - 10水平在主题与结节病很低。这表明,β葡聚糖能扮演一个角色在结节病肉芽肿形成通过阻断il - 10分泌方面的防御系统。真菌暴露在高水平的结节病有抑郁患者分泌的抗炎细胞因子il - 10。这表明一个新的机制发展的肉芽肿结节病。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
作者的贡献
m . Terčelj和芭芭拉Salobir负责临床工作,s . Stopinšek a . Ihan和美国SimčičPBMC工作,负责和r .阮兰德负责环境和葡聚糖措施和数据的分析。所有作者同意的内容。
承认
本文只收到内部医院资金。