文摘
Mannose-binding凝集素是先天免疫系统的分子。Mannose-binding凝集素2启动子多态性和结构变异与结核病易感性有关。然而,矛盾的结果在不同的人口已报告,导致没有令人信服的证据mannose-binding凝集素2和结核病易感性之间的联系。出于这个原因,我们进行了一项研究在基因守恒的西班牙人口为了阐明这个有争议的协会。我们分析了六子和结构性mannose-binding凝集素2基因变异在107年肺结核患者和441名健康对照组。只有D变异和HYPD单体型更时常在控制这将表明,该等位基因可能对肺结核提供保护,但这种差异统计修正后消失。其他等位基因和单体型明显与疾病有关。这些结果表明mannose-binding凝集素启动子多态性和基因变异不会与肺结核的风险增加有关。尽管D等位基因的轻微的趋势和HYPD单体型在赋予预防肺结核,对这种疾病的易感性可能会由于其他遗传因素,至少在我们的人口。
1。介绍
结核病是世界上最重要的全球传染病死因。超过9000万名结核病患者向世卫组织报告在1980年到2005年之间,他们中的大多数在亚洲和撒哈拉以南非洲地区(1]。西班牙是欧洲国家结核病的发病率和患病率最高的(2]。
大约-95%的人感染的90%结核分枝杆菌(MTB)能够挂载一个免疫反应,停止发展从潜伏结核感染到疾病活动性结核病。这是其中一个主要原因,表明需要识别和治疗那些与结核病的风险因素3,4]。
结核病似乎多因子的易感性,活动性疾病的发展可能是一个复杂的结果宿主与病原体相互作用受环境和遗传因素的影响。许多宿主基因可能参与这个过程(5- - - - - -7]。
Mannose-binding凝集素(MBL)是一种急性期蛋白主要由肝脏。它的一个主要角色是激活补体系统认为这是一个最重要的成分的先天免疫系统8- - - - - -12]。MBL基因编码与易感性有关结核病和其他传染性疾病(8,13]。第一个突变MBL21991年,MBL基因编码被发现(14]。现年54岁的三个结构性突变,影响密码子52和57岁的第一个外显子MBL2基因(MBL1假基因)已经找到,和相应的等位基因被指定为D, B和C,分别(是所有三个位置的野生型等位基因)。此外,三个多态性也被确认的MBL2启动子和5′非翻译区:H / L 550−位置,在位置−221 X / Y, P / Q在位置+ 4 (15]。
三个结构性突变的影响MBL2第一外显子包括损伤MBL multimerization。这导致减少配体结合,因此,缺乏补体激活(16]。一般来说,所有这些基因变异导致表型的低血清MBL的水平,结核病易感性的影响和不同的疾病(13,17,18]。
到目前为止,已报告有争议的结果有关的结构基因变异和多态性之间的关系MBL2基因和不同人群的结核病的风险增加19- - - - - -30.]。几项研究已经发现了一个重要的关联结构的频率等位基因启动子多态性和血清MBL与结核病易感性水平(20.,23,24,26- - - - - -30.)当别人没有发现任何重大协会(19,21,25]。最近的荟萃分析17个人体试验考虑的影响MBL2基因型和/或MBL水平和结核病感染没有发现显著的关联MBL2基因型和肺结核感染(22]。大多数的研究分析都没有报告MBL2单体型和启动子多态性。我们的研究的目的是分析如果基因变异,启动子多态性,单,或者diplotypes可以有助于增加活性肺结核(PTB)的风险在人类免疫缺陷病毒-遗传同质性(西班牙北部坎塔布里亚),包含新诊断活动性结核病患者。
2。材料和方法
2.1。研究人群
探讨可能的联系MBL2多态性和肺结核感染我们的人口,我们招募了107活跃的肺结核病人和441个随机选择健康献血者来自坎塔布里亚(西班牙北部)。他们都是HIV阴性的。
这项研究是由一个1200个床位的社区和教学医院。同时,献血者(平均年龄,48年;范围内,18 - 65年;男/女比,1.3)和肺结核患者(平均年龄56岁;范围,23 - 76年;男/女比,1.5)的白种人的背景。肺结核病人组选择从病人传染性呼吸医学单位和部门(医院品牌大学de Valdecilla)从2008年到2011年,实现临床、放射学、细菌学的准则的活性肺结核结核的诊断和分类标准由美国胸科学会和疾病控制和预防中心http://www.cdc.gov/mmwr/)。肺结核的诊断是临床和x射线和证实了细菌(显微镜和文化)程序。我们排除了肺外结核病患者由于传播和随后的单个或多个nonpulmonary网站的参与。同样,我们排除了患者自身免疫或肿瘤疾病,慢性肾功能衰竭、移植个人,和患者遭受酗酒或药物滥用。控制既没有先前的结核病的历史,也没有接触受感染的病人。此外,我们排除了活跃的存在或潜在的结核病控制集团通过执行一个移行细胞释放试验(Quantiferon结核病黄金,Cellestis有限公司,卡内基,维多利亚,澳大利亚)。研究中使用的所有程序符合赫尔辛基宣言中概述的原则。匿名知情同意获得和数据记录。研究协议被接受和研究伦理委员会批准的医院。
2.2。DNA基因组DNA的提取和放大MBL2基因分型
血液收集EDTA-stabilized管符合批准的协议从我们的机构。基因组DNA从病人和控制从外周血中提取利用麦克斯韦16基因组DNA净化系统。为MBL2基因扩增的基因,我们使用了INNO-LiPAMBL2(Innogenetics Diagnostica伊比利亚S.L.U,巴塞罗那,西班牙),制造商的指示。的INNO-LIPAMBL2行调查分析,基因分型结果为6的变化人类MBL2基因(−> C 550克、221克−> C + 4 C > T, R52C, G54D,和G57E)导致分析七个常见的单体型和28可能导致diplotypes。
3所示。统计分析
等位基因频率和diplotypes患者和健康对照组估计直接计数。等位基因和基因型频率(dyplotypes)进行了比较必要时测试或确切概率法。值和耶茨校正优势比(或)和95%可信区间(CI)计算使用SPSS 12.0版(美国SPSS . n:行情)、芝加哥、IL)。被认为是具有统计学意义。哈迪温伯格平衡(HWE)患者进行了测试和控制的分析参数。Bonferroni调整为多个比较应用为了避免假阳性结果。
单体型分析、频率和连锁不平衡计算槽期望最大化算法使用SNPStats基于web的工具(http://bioinfo.iconcologia.net/SNPstats/)。确定双等位基因之间的连锁不平衡,我们计算了D′统计。比较患者和控制执行的测试或确切概率法考虑每个单体型像一个等位基因。
统计能力计算通过使用PS权力和样本大小的计算软件3.0版本,(http://biostat.mc.vanderbilt.edu/PowerSampleSize)。
4所示。结果与讨论
4.1。MBL2结构变异,启动子多态性和基因型
的频率MBL2等位基因如表所示1。所有的结构变异基因和启动子多态性HWE的范围内。对照组的平均杂合度为0.88的7个等位基因MBL2基因进行分析,这个频率高于其他之前报道在不同人群30.]。
没有显著差异的频率不同的启动子多态性。关于结构变异,只在控件(D等位基因明显更频繁或0.33,95% CI 0.13 - -0.84),但是这个意义Bonferroni调整后消失。
表2显示的频率MBL2单相比,控制和肺结核病人从坎塔布里亚与先前报道的其他人群。与D结构变体,HYPD显示相同的肺结核病人和控制之间的显著差异Bonferroni调整后消失。所有启动子多态性和结构变异符合不同的单在连锁不平衡。
4.2。MBL2完整的基因型(Diplotypes)在肺结核患者和健康对照组
所有可能的组合的频率出现在两组的7个单表所示3。没有发现显著差异的完整diplotypes肺结核病人和健康对照组之间。
7个单都出现在两组频率相同的顺序后,引起22个不同MBL2diplotypes在我们的主题。18这些diplotypes在场的两组,5在肺结核病人或对照组,和六个diplotypes没有观察到任何组。
HYPA是最常见的单体型,其次是LYQA, LXPA, LYPB, LYPA, HYPD和LYQC分别。当我们重整旗鼓22 diplotypes观察到所有可能的基因型组合(structural-structural、structural-polymorphism polymorphism-polymorphism),我们并没有发现任何显著差异(数据没有显示)。
5。讨论
先天免疫是最重要的一个障碍对入侵的病原体。补体系统被激活,当检测到微生物,导致生化途径,导致传染病的毁灭。这些途径之一的补体系统是MBL的凝集素途径起主要作用。因此MBL蛋白是重要的,特别是在一线防御入侵的病原体。据报道,低水平的循环MBL可能使对传染性疾病(8,31日,32]。
结构变量的编码区域MBL2导致低或附近没有血清MBL基因杂合现象和纯合性,分别。Low-serum水平的MBL与调理素作用的缺陷,导致复发性感染主要是婴儿期(31日]。由于强大的连锁不平衡之间的多态性在催化剂和结构变异在人类的第1外显子MBL2描述了基因,只有7个常见单(HYPA、LYPA LXPA, LYQA, HYPD, LYPB,和LYQC)产生28可能的单体型组合。种群之间的七单的频率相差很大(17,18]。单中携带野生型等位基因,HYPA导致大量的MBL的生产,而LXPA与血清MBL水平较低有关。
几组研究MBL2基因变异和肺结核,暗示部分杂合性的保护作用MBL2变异等位基因对肺结核(33- - - - - -35),而其他人则指向有关肺结核易感性为纯合子的载体MBL2变异的等位基因(36]。
先前的研究已经发现有争议的结果,至少在基因水平。一些作者报道B等位基因频率较低的机会,但不是白种人或所谓的“西班牙”结核病患者(28]。然而,其他报告没有发现任何显著差异在结构的频率MBL2肺结核白种人患者和对照组之间等位基因。然而,当他们包含启动子多态性根据高血清MBL水平(丫/丫,丫/ XA,XA / XA,丫/ O),MBL水平低(XA / OMBL不足),个人(O / Odiplotype频率),一个显著差异是显示(25,27,29日]。最后,另一个研究发现的频率明显增加O / Odiplotype结构多态性和的Y / Ydiplotype艾滋病结核病+病人与对照组的启动子多态性(24]。
在目前的研究中,我们调查了是否或启动子多态性结构变化MBL2基因单独考虑他们重整旗鼓可能与肺结核在西班牙北部。我们的结果统计修正后显示没有差异,也没有在启动子多态性的频率和5′非翻译区和结构变异的外显子1的MBL2基因肺结核病人和对照组之间单独当我们考虑他们。
缺乏我们的结果与其他研究结果一致,专门研究的另一个西班牙的报告MBL2基因变异的人群从加那利群岛,27可以解释,至少,病原体和宿主的遗传特征。因此,有两种可能性,理解不了这些岛和半岛西班牙人之间的区别。
首先,它应该考虑不同种族背景的地理上分开人群(37- - - - - -40]。遗传研究已经证明,一个非洲土著背景仍然坚持从加那利群岛的居民。估计的遗传贡献金丝雀岛民的假定的父母数量基于mtDNA和其他遗传标记是柏柏尔人43%,35%半岛西班牙,21%几内亚(被西班牙核贡献由于男性和几乎所有的柏柏尔语和几内亚由于雌性)。另一方面,坎塔布连,在伊比利亚半岛的北部,表现为一个半封闭的结果一个古老的土著衬底或多或少夹杂着最近的移民。这个群体似乎是基因分化良好型的社区,从单亲的推导和常染色体标记,也许比他们的邻居向更高水平发展,巴斯克人,最著名的欧洲孤立语言理由(41- - - - - -43]。
其次,另一种解释可能是由于遗传背景结核分枝杆菌因为不同菌株之间的差异结核分枝杆菌低聚糖在其表面,可能导致不同程度的MBL与阻力或敏感性对肺结核(27,44,45]。因此,当地理变异在病原体多态性是叠加在宿主的遗传异质性,可能发生相当大的变化在可检测等位基因协会(5]。这些因素可以解释我们的研究分析了西班牙北部的人口。
6。结论
在我们的研究中获得的结果显示显著更高的患病率MBL2D等位基因和HYPD控制的单体型比肺结核病人(6.7%比2.3%,或0.33,95% CI 0.13 - -0.84)。
虽然统计修正后,意义消失;这一趋势的值可以表明D等位基因的作用和意义HYPD赋予预防肺结核的单体型。出于这个原因,我们不能认为MBL2D等位基因或HYPD单体型将作为抗肺结核的因素,并对这种疾病的易感性可能由其他环境和遗传因素决定的,至少在我们的人口20.,46- - - - - -50]。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作在一定程度上支持赠款pi05 - 0503和g03 - 104 f . Leyva-Cobian。和格兰特pi04 - 1086 M。卡门·艾尔。从洋底de Investigaciones疗养地(卫生部、西班牙)。所有作者阅读和批准出版论文的最终版本。