文摘

白藜芦醇引起了重大的科学兴趣,并声称它展示一系列的健康益处。这些包括具有抗炎和抗肿瘤效应的化合物。本研究的目的是调查和比较任何潜在的白藜芦醇和抗生长影响两个衍生品,acetyl-resveratrol,白藜芦醇苷以及浸膏得率在3 d细胞聚集EGFR / her - 2阳性和阴性的卵巢癌细胞系SKOV-3 OVCAR-8,分别。结果表明,白藜芦醇和SKOV-3 acetyl-resveratrol减少细胞生长和OVCAR-8 dose-dependant方式。增长减少被诱导细胞凋亡介导通过解理保利(ADP-ribose)聚合酶(PARP-1)。在较低的浓度,5和10µM,白藜芦醇,acetyl-resveratrol,效果也比不上白藜芦醇苷以及浸膏得率更高的浓度,50和100µm . SKOV-3行显著降低白藜芦醇苷浓度更高,白藜芦醇和浸膏得率的磷酸化Erk的her - 2和表皮生长因子受体表达。Acetyl-resveratrol,另一方面,并没有改变her - 2和表皮生长因子受体的激活。白藜芦醇抑制VEGF的分泌白藜芦醇苷acetyl-resveratrol和浸膏得率dose-dependant时尚。OVCAR-8细胞系,白藜芦醇和acetyl-resveratrol 5和10µM增加Erk的活化。以上这些浓度降低激活。Polydatin没有产生这种效应。这项研究表明白藜芦醇及其衍生物可能抑制增长的3 d细胞聚集卵巢癌细胞系通过不同的信号分子。因此,白藜芦醇及其衍生物,进一步保证在活的有机体内评价评估其潜在的临床效用。

1。介绍

卵巢癌是一种致命的恶性肿瘤,预后很差的妇女出现的晚期疾病(1]。随着化疗通常并不是治疗晚期卵巢癌的女性,治疗可以减缓肿瘤的生长,因此,延长生命的疾病是非常重要的。常与腹水晚期卵巢癌,腹腔中的体液的过度积累(2,3]。血液和淋巴血管的渗透性在腹膜壁受到高水平的血管内皮生长因子(VEGF)和引起腹水。腹水可在腹腔恶性卵巢细胞包含自由行动;这些细胞会沉积在腹膜表面的膜,从而建立多个站点的二次增长。漂浮的癌细胞往往形成小3 d聚合,这可能帮助他们生存,因为他们在腹腔的传播3]。因此,这些3 d细胞总量可能导致癌细胞的可能来源有能力形成小肿瘤,后来在不受控制的方式生长。对卵巢癌总量如何生存在腹水。也有有限的研究集中于使用在这些卵巢癌总量可能的治疗靶点。

一个可能的目标卵巢癌的化疗会抑制酪氨酸激酶受体,ErBb1 (EGFR)和ErBb2 (her - 2)。已报告这些受体发挥重要作用在卵巢癌的一个子集。这些受体的高表达通常是与不良预后相关,因此针对他们的激活可能会影响肿瘤生长4]。表皮生长因子受体的激活,诱导出大量的her - 2信号蛋白负责细胞增殖、生存、转移,入侵,ECM重塑、血管生成5]。激活MAPK通路和VEGF的生产受到抑制EGFR / her - 2激活(5]。然而,表皮生长因子受体的作用,her - 2在卵巢癌总量仍然知之甚少。一种化合物能够抑制这些受体的激活可能是重要的在控制卵巢癌的发展总量和腹水。

白藜芦醇(3、5、4′-trihydroxy-trans-stilbene)(图1(一))及其衍生化合物,acetyl-resveratrol (3、5、4′-tri-O-acetylresveratrol)(图1 (b)(3、5、4′白藜芦醇苷)和浸膏得率-trihydroxy-stilbene-3-beta-mono-D-glucoside)(图1 (c)),是自然发生的多酚化合物,引起了利益由于其潜在的健康益处。白藜芦醇可以影响表皮生长因子受体的激活和her - 2在几种类型的癌症在临床前研究(6]。此外,EGFR / her - 2相关信号蛋白PI-3K和MAPK通路已报告的影响和负责白藜芦醇的抗肿瘤活动(6]。尽管有前途的白藜芦醇的抗肿瘤效应在体外动物模型研究中,其抑制肿瘤进展不太好定义和变量。一些研究已经证实,肿瘤的生长减少白藜芦醇摄入时间,但其他人没有注意到任何白藜芦醇的抗肿瘤效应(7,8]。此外,白藜芦醇也已被证明能够增加肿瘤生长在某些类型的癌症9]。白藜芦醇的抗肿瘤特性之间的差异在体外和在活的有机体内研究可能是部分原因是白藜芦醇的活跃分子的生物利用度。

白藜芦醇作为一个潜在的抗癌药物的使用在人类仍然是有争议的10]。一个明显的缺点对白藜芦醇对癌症患者的临床使用通常是其低生物利用度(11]。有鉴于此,更多的数据对其治疗效果与特定的癌症类型需要解决其潜在作为单一疗法或作为辅助疗法。因为白藜芦醇的用处有限的可能性本身由于等离子体浓度低,有必要调查相关的化合物白藜芦醇,摄入后可能会有更大的生物利用度。两种可能的候选化合物acetyl-resveratrol,白藜芦醇苷以及浸膏得率目前接受调查癌症预防属性(12,13]。Polydatin表明抗肿瘤活动在体外研究[14,15]。Polydatin曾被报道有一个更大的抗炎效果比白藜芦醇在结肠炎大鼠的研究16]。是白藜芦醇苷在动物实验中,摄入后,浸膏得代谢白藜芦醇和白藜芦醇glucuronidated在肠道和肝脏,分别为(17]。此外,已被证明是白藜芦醇苷原生浸膏得率出现在显著水平的等离子体小鼠模型(18]。Acetyl-resveratrol代谢和转换回白藜芦醇能被探测到的等离子体小鼠模型(7]。

显然对卵巢癌聚合,需要更多的研究近年活动和这些化合物的可能的机械效应。鉴于上述,在这项研究中,我们调查是否白藜芦醇,引起抗生长白藜芦醇苷acetyl-resveratrol和浸膏得率的3 d细胞聚集EGFR / her - 2阳性细胞株SKOV-3和EGFR / her - 2 -细胞系OVCAR-8。此外,我们提出了初步研究机械的看着化合物潜在的调制通过依赖和独立的EGFR / her - 2的表达。

2。材料和方法

人类卵巢腺癌细胞系,SKOV-3,用于从写明ATCC购买这个项目。这个细胞株高表达EGFR和her - 2, PTEN野生型,钙粘蛋白阴性,nullP53、喀斯特野生型和BRAF野生型(19]。OVCAR-8朱迪斯·麦肯齐博士获得血液学研究小组,克赖斯特彻奇,新西兰奥塔戈大学的。该细胞系低表达EGFR和her - 2,P53突变,和钙粘蛋白-19]。SKOV-3细胞被维护在淘汰赛杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM目录编号为10829,GIBCO ThermoFisher科学、新西兰)。这个高葡萄糖基中补充10%胎牛血清(的边后卫)(GIBCO ThermoFisher科学,新西兰),PenStrep (GIBCO ThermoFisher科学,新西兰)在工作青霉素100单位/毫升的浓度和100年μg / mL链霉素,2毫米GlutaMAX (GIBCO表达载体,新西兰),和2μ克/毫升二性霉素b (ThermoFisher科学、新西兰)。OVCAR-8保持类似的媒体,但它含有5%的边后卫和5%血清替代(ThermoFisher科学、新西兰)。今后的补充DMEM媒体称为媒体工作。SKOV-3 OVCAR-8细胞在媒体各自的工作保持在37°C湿润5%有限公司₂大气孵化器。细胞系都持续保持在一个培养瓶。

2.1。代的3 d细胞聚集

防止粘附的细胞培养板和鼓励的形成3 d聚合,12-well文化板块是预镀24毫克/毫升poly-HEMA(σ,新西兰)之前,细胞培养(0.6毫升/)。poly-HEMA涂料之前,在95%的乙醇浓度24毫克/毫升是加热到约70°C,以确保poly-HEMA完全溶解。涂板了一夜之间在一个轨道瓶37°C。在细胞培养之前,涂板和PBS pH值7.4洗一次。SKOV-3和OVCAR-8细胞株的细胞单层培养了1 x trypsin-EDTA 20 - 30分钟分离细胞表面的长颈瓶。细胞数与血球计来确定细胞在细胞悬液的浓度。细胞被镀在150000细胞/密度,在37°C湿润5%孵化有限公司₂大气6天在这段时间内的细胞变得紧凑的总量。在此期间的媒体被愿望,取而代之的是1.5毫升新鲜的媒体每2天工作了六天。

2.2。白藜芦醇治疗和衍生品

白藜芦醇、acetyl-resveratrol粉末白藜芦醇苷以及浸膏得率被Saurabh Shah博士,请提供Biotivia(美国)。Acetyl-resveratrol溶解在100% DMSO溶液;polydatin和白藜芦醇溶解在50%:50% PBS和DMSO的组合。对所有实验,最后的DMSO控制和复合处理样品(卷/期)0.5%。新媒体工作包含相关的化合物(浓度在5、10、50和100μM)每2天更换一次总共6天。因此,在细胞培养细胞的端点12天的总孵化时间:6天3 d聚合形成和6天的各自的治疗。至少四个独立的实验,每个实验进行了三个复制。

2.3。分析细胞集群形态

6天的孵化后生成细胞聚集和6天的治疗化合物,使用摄像机采集到的图像(德国徕卡DFC310FX)连接到一个倒置光学显微镜(德国徕卡DMI6000) 10倍物镜为了评估SKOV-3细胞聚合形态。

2.4。用结晶紫分析经济增长的决心

3 d细胞总量的增长是量化的间接使用结晶紫染料染色。总之,细胞聚集收获和孵化1 x trypsin-EDTA 20分钟37°C。细胞被洗两次与PBS pH值7.4和孵化进一步30分钟37°C 2毫克/毫升乙醇结晶紫在2% (v / v)去离子水。这些细胞被然后用去离子水清洗去除游离结晶紫染料和收获了在1500转离心5分钟。上层清液被删除,这个过程重复3 - 5次,直到上层清液是无色的。细胞被细胞溶解在10% (w / v)钠十二烷基硫酸盐(SDS)的解决方案。同质细胞溶解产物稀释在去离子水和200年的三倍μL的样品被加载到一个96孔板。光密度是决定在560 nm (OD_560年)使用一个微型板块读者(SpectraMax M5、分子设备)。测量每个样品一式三份。

2.5。使用Alamar蓝色染料测定细胞新陈代谢的决心

治疗化合物的第五天,100人μL (Alamar蓝色染料(ThermoFisher科学、新西兰)1毫升媒体添加到细胞聚集。细胞聚集进一步孵化20小时的染料和200年μL培养基从每个被转移到一个96孔板。570和600海里的吸光度测量使用微型板块读者(SpectraMax M5、分子设备)。

2.6。检测血管内皮生长因子(VEGF)

各自的治疗后6天,媒体的控制和治疗细胞被用来确定VEGF分泌。分析VEGF分泌人类使用DuoSet VEGF进行酶联免疫试剂盒(研发系统、新西兰)。每个的光密度测量使用标(SpectraMax M5、分子设备)在450海里。VEGF在每个样本的数量取决于比较每个井的吸光度的标准曲线。SigmaPlot (Systat软件,圣何塞,CA)是用于创建一个标准曲线VEGF浓度的细胞媒体样本推断。

2.7。免疫印迹分析

细胞集群被离心收获5分钟,每分钟1500转,细胞颗粒resuspended在寒冷里帕缓冲区包含蛋白酶抑制剂鸡尾酒平板电脑(完整的迷你,罗氏、新西兰)。细胞溶解产物留在冰进一步30分钟完成总溶解。样品缓冲(0.2% (v / v)溴酚蓝,25% (v / v)甘油,10% SDS Tris-HCl和pH值6.8)添加和蛋白质溶解产物是煮10分钟。在装载之前,细胞溶解产物涨跌互现,在12000转离心5分钟。蛋白溶解产物被加载并分开使用叠加5% sds - page凝胶和12%的分离胶。sds - page运行在120伏使用Tris-glycine运行缓冲。MagicMark西方使用的sds - page标记蛋白质标准(表达载体,新西兰)和精密加蛋白质标准(美国大力神Bio-Rad)。在硝化纤维膜分离蛋白质是electroblotted(0.45微米,Trans-Blot硝化纤维膜,Bio-Rad,赫拉克勒斯,美国)。electroblot运行60分钟的100伏在寒冷Tris-glycine运行缓冲含10%甲醇v / v。60分钟的膜被封锁或5% (w / v)脱脂脱脂牛奶(Pams品牌,新的世界,新西兰)或1% (w / v)牛血清白蛋白(ThermoFisher科学、新西兰)由TBS-T缓冲区或与皮尔斯无蛋白阻断缓冲区(热科学、新西兰)。 Antibodies were diluted from 1 : 500 to 1 : 1000 with the appropriate blocking solution. Membranes were incubated with primary antibodies overnight at 4°C. The membranes were washed with TBS-T buffer on an orbital shaker for 4 × 10 minutes and then incubated with secondary antibody on an orbital shaker for 90 minutes at room temperature. Membranes were subsequently washed a further four times with TBS-T. Antibody localisation was determined using a chemiluminescent detection kit (Amersham ECL Prime Western Blotting Detection Reagent Kit, GE Healthcare). The protein bands were visualized and a densitometry analysis was performed using Alliance 4.7, Unitec (Cambridge, UK). Cell lysates were collected from at least 3 separated cell culture experiments. Antibodies were purchased from Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, USA). The primary antibodies used in this study were anti-PARP (sc-25780), anti-GAPDH (sc-25778), anti-pHER2 (sc-12352-R), anti-EGFR (sc-03), anti-pEGFR (sc-101668), anti-ERK (sc-94), and anti-pERK1/2 (sc-7383). Anti-Her-2 was purchased from BD Biosciences (Auckland, New Zealand). The two secondary antibodies used in this study were bovine anti-rabbit IgG-HRP (sc-2385) and bovine anti-mouse IgG-HRP (sc-2380).

2.8。统计分析

数据统计分析(SigmaPlot 11)使用学生的以及和方差分析被认为是显示统计学意义。所有数据都意味着±SEM。每个实验重复了至少四次。

3所示。结果

3.1。白藜芦醇及其衍生物对细胞生长的影响

SKOV-3细胞大密集聚集形成圆形,椭圆形,管状结构在参与样本(数据2(一),2(f)2(k))。这个一般形态和集料尺寸不影响低浓度(5μ米和10μ米)的所有测试的化合物。3 d总量控制,低浓度的白藜芦醇治疗(数字2(b)和2(c)), acetyl-resveratrol(数字2(g)和2(白藜芦醇苷(h))和浸膏得率数据2(左)和2(m))有一个光滑的边缘。然而,在更高浓度的白藜芦醇(数字2(d)和2(e))和acetyl-resveratrol(数字2(我),2(j)),聚集了一个粗略的不规则的边缘。Polydatin治疗总量还显示一个不规则的边缘,但这是明显低于在白藜芦醇和acetyl-resveratrol总量。

我们进一步研究了相对使用结晶紫测定细胞总量的增长。如图2(p),经济增长降低了约70%的浓度更高(50和100μ米)的白藜芦醇和20%低浓度的10μM(图2(p))。类似的增长减少也获得更高浓度的acetyl-resveratrol(图2(问))。Polydatin显示更少的抑制增长。在50和100的浓度μ米,它的增长减少了20 - 50%(图2分别(r))。没有增长抑制观察到的低剂量acetyl-resveratrol。白藜芦醇苷以及浸膏得率

调查是否减少细胞凋亡促进细胞死亡导致的3 d聚合增长细胞治疗化合物的浓度越高,我们检查了凋亡标记蛋白的表达,保利(ADP-ribose)聚合酶(PARP)。白藜芦醇和acetyl-resveratrol增加了PARP的碎片给乐队89 kDa的分子量;这是符合事实,细胞数量的减少在更高浓度的化合物是由于细胞凋亡(数字3(一个),3 (b),3 (c))。89 kDa分散PARP也观察到在控制除了处理样本,表明一个基线细胞的凋亡水平集群。

3.2。白藜芦醇的影响,对白藜芦醇苷Acetyl-Resveratrol和浸膏得细胞信号分子

之前的研究工作表明,白藜芦醇的抗生长效应可能是由于其作用在许多细胞内信号分子(6]。然而,所知甚少acetyl-resveratrol癌症细胞白藜芦醇苷以及浸膏得率的影响,尤其是在卵巢癌细胞的3 d细胞聚集。我们选择了SKOV-3细胞系致癌的因为它有高表达EGFR和her - 2蛋白,可能的潜在目标化合物。白藜芦醇在50和100μ米被发现减少的水平pHer-2(数字4(一)和4 (b)(一))和pEGFR(数字4(一)和4 (b)(C))。没有明显减少pHer-2和pEGFR 5和10μ(数据4 (b)(一)和4 (b)(C))。高剂量的白藜芦醇Erk1/2总表达减少,显示趋势抑制pErk1/2(数字4 (b)(F)和4 (b)(E))。

白藜芦醇相比,acetyl-resveratrol不会降低pHer-2和pEGFR浓度越高。pHer-2增加(图5 (b)(一))5和10μM和pEGFR 10μM(图5 (b)(C))。Acetyl-resveratrol没有调节的Erk活性形式的测试浓度(图5 (b)(E));然而Erk1/2的表达减少100μM(图5 (b)(F))。Polydatin在50和100μM显著降低her - 2的磷酸化(数字6(一)和6 (b)(一))和显示显著减少表皮生长因子受体的表达和磷酸化,享年100岁μM(图6 (b)(C))。Polydatin没有改变Erk1/2的表达。

有报道称协会的表皮生长因子受体和增加血管生成蛋白质的表达her - 2 (5]。血管内皮生长因子(VEGF)是一种强有力的血管生成肽,及其与先进的高浓度女性卵巢癌与不良预后相关(20.]。评估的影响对VEGF的分泌的化合物SKOV-3细胞聚集,我们执行一个ELISA。白藜芦醇(图7(一))和acetyl-resveratrol(图7(b))在50和100μ米被发现显著降低VEGF的分泌SKOV-3细胞聚集。更有力的白藜芦醇苷再次浸膏得率,显著降低VEGF分泌仅在100年的浓度μM(图7(c))。

探讨可能的机械的白藜芦醇及其衍生物的基础,我们也利用了EGFR和her - 2 -细胞系,OVCAR-8。如数据所示7(d) -7(右),在50 - 100的浓度就越高μ米,白藜芦醇产生不规则的边缘的三维球状体OVCAR-8(数字7(g)和7(h))。类似的效果被观察到在暴露于更高浓度的acetyl-resveratrol球状体(数字7(左)和7(m))。没有显示白藜芦醇苷的浓度越高,浸膏得率(数据任何显著的影响7(q)和7(r))。在低浓度时,对球体形态这三个化合物没有影响。接下来,我们测量细胞代谢OVCAR-8白藜芦醇及其衍生物的球状体。如图8,白藜芦醇(图8(一个))和acetyl-resveratrol(图8 (b)剂量依赖性的方式降低了细胞的新陈代谢。Polydatin没有产生这种效应。然后我们检查的生长活动OVCAR-8球状体,和更高浓度的白藜芦醇(图8 (d))和acetyl-resveratrol(图8 (e)没有影响白藜芦醇苷)显著增长有限的活动而浸膏得率(图8 (f))。接下来,我们研究了表皮生长因子受体的表达,her - 2, PARP-1, Erk和phospho-Erk。OVCAR-8非常低水平的表达EGFR和her - 2(数据没有显示)。在较高的浓度,白藜芦醇(图8 (g))和acetyl-resveratrol(图8 (h))的表达水平增加89 kDa PARP-1表明这些化合物介导的凋亡通路,促进抗生长活动。没有造成白藜芦醇苷相比之下浸膏得率的增加水平PARP-1(图8(我))。有低水平的89 kDa PARP-1与低浓度的三个化合物。在低浓度的5和10μM白藜芦醇(图8 (g))和acetyl-resveratrol(图8 (h)激活Erk)增加,但更高的浓度减少这种影响。Polydatin没有调节激活Erk(图8(我))。

4所示。讨论

在这项研究中,我们将演示抗生长活动的白藜芦醇,对白藜芦醇苷acetyl-resveratrol和浸膏得率的3 d细胞聚集SKOV-3和OVCAR-8卵巢癌细胞系。增长似乎是由于细胞凋亡的抑制作用和选择性信号蛋白的改变。这些化合物是依赖细胞株的影响。SKOV-3细胞系,白藜芦醇调节表皮生长因子受体的激活白藜芦醇苷以及浸膏得率和her - 2,但acetyl-resveratrol并非如此。此外,血管生成蛋白质的分泌VEGF, SKOV-3细胞集群减少剂量依赖性的方式。OVCAR-8细胞系,白藜芦醇调制白藜芦醇苷以及浸膏得Erk的活化。

恶性肿瘤细胞在晚期卵巢癌患者腹水中浮动小细胞3 d聚合(3]。这些癌症细胞总量将在二级再生网站如腹膜壁,网膜,内部器官的表面。因此,抗癌药物预防总量的增长和控制腹水的可能的使用先进的治疗卵巢癌。在目前的研究中,我们使用3 d细胞聚集SKOV-3 OVCAR-8细胞系,我们评估的抗生长活动白藜芦醇和衍生品对这些细胞模型。SKOV-3细胞系有酪氨酸激酶受体的高表达,表皮生长因子受体、her - 2描述了白藜芦醇的潜在目标。OVCAR-8细胞系较低的这些受体的表达,但是这两个细胞系都独特的遗传和分子概要文件(19]。

大多数的在体外在细胞单层膜上研究白藜芦醇的影响评估;细胞培养模型并不是生理相关和未能认识到微环境在肿瘤组织。在3 d细胞聚集,癌症细胞的异质性,可能有不同的代谢活动由于养分的限制。此外,3 d信息联系自分泌激活可能起到至关重要的作用。因此,该三维模型可能是生理有关。与先前的研究一致,我们的数据表明,SKOV-3 OVCAR-8细胞形成大型密集细胞聚集在不依从条件培养,模拟浮动癌症细胞集群的腹水的女性与先进的疾病(21,22]。在目前的研究中,我们选择一系列浓度的白藜芦醇及其衍生物。可以被认为是生理浓度水平;5和10μM和可以被认为是大于生理浓度,50和100μm .我们的结果表明,该化合物浓度较高导致减少3 d细胞总量的大小,但在生理浓度就没有可测量的影响。在浓度越高,SKOV-3三个化合物诱导细胞凋亡细胞,但只有白藜芦醇和OVCAR-8 acetyl-resveratrol展览可衡量的细胞凋亡。我们目前的研究与之前的研究一致,3 d细胞聚集来自癌细胞显示一些固有细胞凋亡,凋亡细胞的比例相似,在固体肿瘤(23,24]。据报道,p53的状态是细胞凋亡的决定因素。与野生型p53肿瘤细胞对细胞毒性更敏感DNA损伤,可以比p53突变细胞更容易接受细胞凋亡(25]。然而,也有报道说,细胞凋亡是独立于p53的野生型和突变体(26,27]。SKOV-3细胞系具有nullp53基因(28)和OVCAR-8细胞系p53突变(19]。因此,我们的数据是一致的,表明白藜芦醇及其衍生物p53-independent引起细胞凋亡的途径(29日,30.]。

有一些报告表明白藜芦醇对3 d细胞培养的影响。白藜芦醇可以抑制增长的3 d细胞球状体的某些类型的癌症31日- - - - - -33]。高剂量的白藜芦醇妥协线粒体膜和引发肺癌的球状体(细胞凋亡34]。使用3 d细胞聚集SKOV-3和OVCAR-8细胞,我们的研究结果证实,在更高浓度的白藜芦醇,第一次acetyl-resveratrol可以改变白藜芦醇苷以及浸膏得一些细胞信号分子的形象。我们表明,白藜芦醇在更高浓度的白藜芦醇苷以及浸膏得率可以抑制her - 2的激活和抑制表皮生长因子受体在SKOV-3行和可能影响增长通过MAPK信号级联的衰减35,36]。Acetyl-resveratrol没有同样的效果。在目前的研究中,我们还使用EGFR / her - 2 -细胞系,OVCAR-8,白藜芦醇及其衍生物的影响进行调查。白藜芦醇和acetyl-resveratrol能够减少Erk的活化后的浓度越高,但他们可能会增加Erk的活化在低浓度表明这个活动可能EGFR / her - 2独立。双官能的白藜芦醇在乳腺癌的研究报告;低浓度增加her - 2的表达,但高剂量显示相反的效果37]。我们看到这种效果在白藜芦醇和acetyl-resveratrol OVCAR-8治疗细胞Erk活化的调制。然而,我们的研究结果表明,在低浓度acetyl-resveratrol增加活动形式的her - 2和表皮生长因子受体在SKOV-3细胞。

不同的作用机制白藜芦醇已被证明在不同癌症细胞系使用在体外2 d细胞单层膜。在单层膜,nonphysiological剂量的白藜芦醇显示抗肿瘤活性通过多种信号通路调节细胞生长,生存,迁移,入侵,粘附在各种类型的肿瘤细胞(6,8,35,38]。有一些报告显示,生理浓度的白藜芦醇可以引起抗肿瘤活动,但这种效应是cancer-cell-type-specific [39]。在细胞层的卵巢癌细胞系,白藜芦醇在25μ米没有显示任何抗增殖活动(40]。线粒体活动减少72小时后孵化OVCAR-3细胞系的12.5μM白藜芦醇,但没有明显的调制信号蛋白分子(30.]。Raj et al。41)报道,持续治疗0.5和5μM白藜芦醇6天显著降低SKOV-3细胞的线粒体活动细胞单层但没有诱导细胞凋亡。我们的结果表明,白藜芦醇,但不是acetyl-resveratrol,白藜芦醇苷和浸膏得抒发抗生长活动在低浓度SKOV-3细胞聚集,这是符合先前的发现在结直肠癌细胞模型(36]。此外,生理浓度的白藜芦醇和acetyl-resveratrol显著降低细胞代谢OVCAR-8球状体。

在最近的研究中,很可能相对功效的白藜芦醇,对白藜芦醇苷acetyl-resveratrol和浸膏得率3 d细胞总量可能是由于他们不同的官能团。白藜芦醇有三个羟基(-哦)官能团,用乙酰基(-COCH取代这些₃)形成acetyl-resveratrol这仍然可以引起生长抑制3 d细胞聚集(图1)与白藜芦醇类似程度的力量本身。含有大量亲水葡萄糖分子白藜芦醇苷然而,浸膏得不够有力,并有可能葡萄糖官能团可能影响进入细胞白藜芦醇苷的浸膏得率的能力。我们的研究结果是一致的另一项研究已经证明白藜芦醇苷的浸膏得率效能比白藜芦醇在体外(38]。已被证明白藜芦醇苷尽管如此,浸膏得率降低线粒体活动在人类鼻咽癌细胞5和10μ米用MTT试验证明效果在体外(14)可能表明某种程度的渗透率和它不抑制DNA合成在体外在路易斯肺癌细胞系10和100的浓度μ米(15]。

有有限的报道acetyl-resveratrol的作用机理在体外和在活的有机体内。Acetyl-resveratrol已表现出抑制细胞周期在建立癌症细胞系和协同行动与细胞毒性药物(42,43]。在低浓度,它可以增加mRNA抗氧化蛋白质的水平,表明acetyl-resveratrol可能充当chemopreventive化合物(12]。在无细胞系统中,acetyl-resveratrol转换回白藜芦醇的水解胞内酯酶乙酰基序。Acetyl-resveratrol代谢和转换回白藜芦醇能被探测到的等离子体小鼠模型(7]。

而我们的研究结果显示不同的抗生长性能的白藜芦醇及其衍生物在体外条件下,他们在活的有机体内行动仍然是未知的。因此,重要的是要确认数据在动物模型。有许多研究表明,白藜芦醇可以引起生物代谢活动。在一个临床试验结直肠癌患者每天摄入1克白藜芦醇为8天前手术切除肿瘤。这些显示癌症细胞增殖减少5% (44]。然而,在摄入5克白藜芦醇,可利用水平在2.4和4.2之间的等离子体μ摄入(m .这急剧减少60分钟后6,11]。然而,代谢形式的白藜芦醇可以找到如resveratrol-sulphate和resveratrol-glucuronide水平明显高于父母的化合物在人类的等离子体44]。Resveratrol-sulphate已表现出抑制NF-Kb COX-1和cox - 2激活在体外研究[45]。Polydatin已经显示出可喜的成果在活的有机体内研究。摄入后,白藜芦醇苷的浸膏得发现了白藜芦醇在小肠和粪便,表明白藜芦醇可以转化为活跃。白藜芦醇苷的浸膏得率在活的有机体内(13]。Polydatin已经被证明可以减少炎症分子的生产通过NF-kB的失活途径在小鼠溃疡性结肠炎16]。在刘易斯白藜芦醇苷的抗肿瘤和antimetastatic活动浸膏得肺癌异种移植可能是由于抑制内皮细胞的血管生成15]。

VEGF是一个强有力的血管生成肽分泌许多细胞的人体包括癌症细胞。卵巢癌的女性产生高水平的VEGF和肿瘤进展的迹象,通常有一个短期的生存46]。白藜芦醇和acetyl-resveratrol显示降低VEGF分泌浓度更高,可能与细胞数的减少有关。显示白藜芦醇苷,浸膏得率的影响较小。白藜芦醇的直接目标对其抑制VEGF在肿瘤细胞的能力仍在调查之中。一些研究表明,白藜芦醇可能抑制NF-kB通路可能会妨碍VEGF基因启动子的转录能力(6]。

5。结论

综上所述,我们的研究结果表明,白藜芦醇和衍生品,acetyl-resveratrol,白藜芦醇苷以及浸膏得率有抗生长活动对3 d细胞聚集的卵巢癌细胞系不管EGFR和her - 2的表达水平。生长抑制浓度相关的。白藜芦醇及其衍生物的交互,acetyl-resveratrol,白藜芦醇苷以及浸膏得率与下游信号蛋白可能导致事件导致细胞凋亡和抑制增长。识别的目标分子是一个具有挑战性但有前途的领域,权证更多的研究。我们得出的结论是,白藜芦醇的抗生长衍生品活动值得进一步的研究尤其是使用在活的有机体内动物模型以翻译任何临床试验前抗肿瘤效应。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

本研究支持的卵巢癌研究基金会(OCRF),墨尔本,澳大利亚,和内部研究经费从妇产科学系的奥塔哥大学、坎特伯雷大学的。