自由轻链和鞘内B细胞活动在多发性硬化症:前瞻性研究和荟萃分析

文摘

背景。脑脊液寡克隆乐队(突发)的存在是一个独立的预后因子对多发性硬化(MS),但是困难的标准化测试和报告的多个实验室的变化导致了其有限的用于疾病的诊断。标准浊度的分析测量自由轻链(方法)水平最近开发和测试可以提高鞘内B细胞活动的检测。方法。奥林匹克广播服务公司的存在,卡帕和lambda方法水平,和标准指数连续鞘内炎症是在100年评估病人,包括MS患者,临床孤立综合征(CIS),中枢神经系统的其他炎性疾病,检测不到发炎和其他迹象的疾病。结果。KFLC和LFLC相关强烈与台籍干部的存在和鞘内炎症所有常见的测试(所有的比较)。KFLC LFLC明显不同的女士和CIS患者相比其他组(和、职责)和有一个更好的诊断精度比所有其他的测试(曲线下的面积82.3%,KFLC指数为79.3%,LFLC指数)。结论。浊度的测定CSF的KFLC可靠地检测病人女士鞘内免疫球蛋白合成和歧视。

1。介绍

各种多发性硬化症(MS)的发病机制的研究表明,B细胞、体液组件的自适应免疫系统,是活跃的参与者的发病机理和损伤维护在整个疾病过程中(1]。这个假设被证实了最近的临床试验的阳性结果anti-B细胞药物的疾病(2]。

最早的和可能仍然最一致的异常免疫实验室发现女士是搞笑CSF和浓度的增加存在CSF-restricted寡克隆乐队(时常),所有这些构成持续的炎症的病理生理证据在中枢神经系统(3,4]。特别是,它已经表明,时常出现在患者的CSF临床孤立综合征(CIS)是一个独立的预后因子的后续发展疾病(5- - - - - -7]。此外,一个更有利的长期预后和疾病的进展放缓OCB-negative病人已经证明(8]。时常是等离子体爆炸和浆细胞产生的免疫球蛋白免疫球蛋白的CSF或中枢神经系统室9),通常由等电点聚焦检测免疫印迹紧随其后。

结果的解释是rater-dependent,尽管很高评分者间信协议据报道(10]。几项研究已经显示一个潜在的诊断价值自由轻链(方法)[女士11- - - - - -13]。方法,kappa或者λ(KFLC和LFLC),浆细胞分泌活跃在完整的免疫球蛋白。标准immunonephelometric方法定性和定量评估CSF方法最近发达水平,和测试有可能改善囊内的B细胞的检测活动。

在这项研究中,我们旨在验证以前发表的结果确认KFLC LFLC是有效的生物标志物鞘内免疫球蛋白合成和独联体和MS患者的诊断价值。

2。方法

2.1。病人

之间的2014年1月1日,12月31日,2014年,脑脊液和血清样本收集从100年连续没有病人承认我们部门一位疑似神经疾病和接受了腰椎穿刺的诊断检查的一部分。入院病人的人口特征(年龄、性别)和临床信息收集(最终诊断)从医院图表。这项研究是圣拉斐尔医院伦理委员会批准,米兰,意大利。书面知情同意了所有的病人和控制。

2.2。血液和脑脊液样本分析

成对脑脊液和血清样本期间收集的100例诊断腰椎穿刺和外周静脉穿刺,分别是标准的做法。脑脊液和血清样本800转离心10分钟,10分钟在3000 rpm,分别存储在−20°C到分析。

脑脊液和血清免疫球蛋白和清蛋白浓度测定在同一个分析系列由immunonephelometry使用BNII系统(西门子、德国)校准器和西门子提供的内部控制,按照制造商的建议。

鞘内的定量表达总血清免疫球蛋白合成基于CSF /商QIgG,根据不同的公式。CSF指标定义如下:(我)CSF /血清白蛋白商,Qalb = albCSF / albserum×1000,被用来评估blood-CSF屏障功能。(2)Ig index(链接索引)是计算根据戴培杰Lichtblau蛋白质商QIg / Qalb(正常:0 - 0、7)(14]。(3)鞘内产生了搞笑的绝对数量(根据Reiber-Felgenhauer Ig)计算双曲函数= [QIg−Qlim (Ig)]×(正常:< 0),Qlim (Ig)代表参考范围的上限(15]。(iv)Tourtellotte指数据Ig合成率公式计算[(IgCSF−Igserum / 369)−(albCSF−albserum / 230)×(Igserum / albserum)×0.43)]×5(正常:0 - 3,3)(16]。琼脂糖等电点聚焦(pH值3.0 - -10.0)其次是immunofixation与过氧化物酶标记anti-IgG抗血清进行检测台籍干部(17]。血清样本稀释加载凝胶与等量的血清和脑脊液总免疫球蛋白(20 mg / L)。试验是采用半自动仪器Hydrasys系统(Sebia、法国)和设计工具(Hydragel 9 CSF Isofocusing、Sebia、法国)。该系统可以检测时常在30 - 125的浓度范围μg / L。台籍干部模式进行分类根据国际共识的指导方针18]。

KFLC和LFLC测量进行雇佣particle-enhanced immunonephelometry使用西门子BNII系统(N乳胶方法kappa和乳胶方法λ包;西门子医疗诊断产品GmbH,马尔堡,德国)。方法在脑脊液和血清样本测量根据制造商的协议与校准器和西门子提供的内部控制。血清样本稀释1:100年KFLC和1:20 LFLC决定;模型分析了未稀释的作为一个起点。根据制造商,KFLC检测下限为0.03 mg / L和LFLC为0.06 mg / L。

KFLC LFLC指数被定义为商KFLC和LFLC在脑脊液和血清浓度除以各自Qalb:

KFLC指数= (KFLC CSF / KFLC血清)/ Qalb×1000。

LFLC指数= (LFLC CSF / LFLC血清)/ Qalb×1000。

2.3。统计分析

正态分布变量显示为意味着(SD),并使用未配对组之间的差异进行了分析t测试。非正态的分布变量与25和75%百分位数,显示为中位数和非参数方法(克鲁斯卡尔-沃利斯和Mann-WhitneyU测试)被用来测试的差异。分类变量显示为比例,使用的差异进行了分析χ²测试。值小于0.05被认为是具有统计学意义。接收机算子特征(ROC)曲线生成和曲线下的面积(AUC)计算比较CSF的诊断准确性指标预测截止值精度最高的女士被选为诊断截止点。标准CSF截止值索引(链接、Tourtellotte Reiber和Qalb)也进行测试。所有统计分析使用计算环境R (R开发核心团队,2013)。

2.4。荟萃分析

我们进行了分析,结合当前的研究结果发现先前的研究的诊断方法的准确性我们搜索Pubmed和EMBASE女士从开始到8月1日,2016年,使用搜索条件自由轻链与多发性硬化相结合。综述了参考相关文章列表来确定进一步的相关研究。研究均包括在内的量化标准浊度的方法用于方法计算的水平,如果数据报告允许以下参数:真阳性(TP),真正的底片(TN),假阳性(FP),和假阴性(FN)。文献检索的结果给出流程图棱镜后的指导方针。

主要结果测量是诊断测试的性能KFLC指数分离MS患者控制检测不到发炎(独联体、其他炎性疾病迹象疾病),有报道称KFLC指数为最佳指数根据所有研究鞘内合成。以下信息是提取所有的研究:灵敏度(TP / (TP + FN))和特异性(TN / (TN + FP)),作者的名字,出版年,人口特征(集团大小、比例的炎性疾病在对照组,性别,年龄)。数据提取是分别由两位作者(加布里埃尔Passerini,格洛丽亚Dalla Costa),以确保准确性和分歧达成共识会议上进行了讨论。二元方法与线性混合模型被用来估计敏感性和特异性跨研究[19占之间的异质性,多元回归已经完成评估最终的估计的协变量的影响。荟萃分析结果分别在森林土地的敏感性和特异性。所有计算都使用了R软件(R开发核心团队,2013)包了(20.]。

3所示。结果

一百个连续的患者承认一位疑似神经疾病和我们部门进行了腰椎穿刺作为他们的诊断检查的一部分已经登记。

根据他们的最终诊断,我们建立了一些诊断子组:34例完成传播在时间和空间上的标准复发缓和多发性硬化的诊断根据最新标准(21];22例临床孤立综合征与典型的MRI改变但没有完成诊断标准;23例其他中枢神经系统炎症性疾病;21例没有主要临床或paraclinical炎症的迹象。病人特点和患者团体如表所示1和2。

3.1。脑脊液寡克隆条带地位和标准指数

CSF-restricted时常出现在46例。女士和CIS患者的患病率最高台籍干部积极性(79.4%和59%),尽管这些百分比低于之前报道的文献[22]。检测不到发炎患者迹象疾病患病率最低(9.5%)的CSF台籍干部,如预期。时常面对的存在能显著或第一集的女士(女士< 000.1),测试灵敏度为71.4%(95%独联体:57.8 - -82.7)和86.4%的特异性(95%独联体:72.7 - -94.8)。

标准CSF指数(Qalb、链接、Tourtellotte Reiber-Felgenhauer)女士也明显不同,检测不到发炎CIS患者对其他炎症或迹象中枢神经系统疾病(表2)。最好的截止值最大化(敏感性+特异性)在我们的样例环比指数分别为0.6,0.9−Tourtellotte指数−0.6 Reiber免疫球蛋白合成率,5.8,Qalb指数。这些截止值相似文献和测试报告的参考价值也有类似的敏感性和特异性(表3)。

3.2。CSF免费λ和Kappa连锁店的水平

女士或患者发病的女士,我们发现高水平的KFLC和LFLC CSF。没有明确的女士或患者主要区别CIS。方法值中位数在MS和CIS患者CSF 9.1 mg / l(3.2 - -19.0)和7.3 mg / l KFLC(1.4 - -15.2)和5.6 mg / l(2.2 - -9.3)和4.5 mg / l LFLC (2.3 - -11.2)。患者与其他炎症性疾病检测不到发炎或迹象通常表现出低水平,KFLC和CSF LFLC水平(表4,图1)。所有的病人,包括那些女士组表现出方法水平血清内或接近健康的捐赠者发表正常范围(23]。因此KFLC和LFLC指数有显著不同的女士和CIS患者相比其他组(和、职责)。最好的截止值最大化(敏感性+特异性)在我们的样例为KFLC指数分别为2.43和3.04的LFLC指数。

3.3。比较自由λ的诊断准确性和Kappa连锁店指数台籍干部和标准CSF指数

我们比较KFLC LFLC指数与常见的性能测试鞘内炎症的能力区分女士和独联体其他神经系统疾病。根据中华民国曲线(图2)KFLC和LFLC指数诊断准确性高于所有其他测试,作为曲线下的面积(AUC) KFLC和LFLC指数明显高于其他测试(82.3%,KFLC指数为79.3%,LFLC指数)。

敏感性和特异性的测试如表所示3。与其他指标相比,KFLC指数特别好的评估患者鞘内炎症CSF-serum屏障受损。

积极的台籍干部强烈KFLC和LFLC指数相关。46名患者检测台籍干部,44了高架KFLC指数()和36个高架LFLC指数()。之间有高度的相关性也LFLC鞘内炎症和KFLC指数和常见的测试(所有的比较)。KFLC指数帮助女士的歧视和CIS患者患有其他疾病,尤其是在患者负台籍干部(图3)。

3.4。荟萃分析

最初的文献检索发现95的研究兴趣。检查所有的研究和应用入选标准后,五个研究已确定(12,24- - - - - -27]。结合当前的研究中,六个研究共有252 MS 1047成年人的情况下确定被包括在分析中。女士KFLC指数幸免,在所有研究病例控制的灵敏度为90.1%(95%置信区间CI: 81.6 - -95.6%;参见图4),特异性为89.9%(95%置信区间CI: 80.8 - -95.0%;参见图5)。总结估计ROC曲线包含的研究以及总结呈现在图6。回归平均年龄的人口,女:男性比率,比例的患者炎性疾病的控制,和截止值没有任何影响的敏感性和特异性。

4所示。讨论

越来越多的证据表明,B细胞、体液适应性免疫系统的组件,是活跃的参与者在MS和病变的发病机制维护在整个疾病过程中。台籍干部、等离子体爆炸所产生的免疫球蛋白和浆细胞的CSF或中枢神经系统室9),长期以来一直被认为是黄金标准鞘内炎症的迹象,和他们的存在已被证明是一个独立的预后因子在CIS患者(5- - - - - -7),与一个更有利的MS患者的长期预后相关(8]。rater-dependent解释结果和温和的诊断敏感性CIS患者造成了其在诊断多发性硬化症的有限使用。方法曾被报告为代理标记鞘内免疫球蛋白的合成,但使用的测试实际上并不是诊断使用方法的确定,由于在过去的技术难度,在临床常规并不可行。最近,小说介绍了自动分析方法确定。

我们这里一个标准immunonephelometric方法应用于评估定性和定量CSF方法的水平,和我们的研究结果表明,方法的水平,尤其是KFLC指数,有很好的诊断准确性KFLC指数与台籍干部身份和女士似乎有优越的诊断准确性与常见的鞘内合成指数相比,特别是在CSF-blood脑屏障损伤的情况。KFLC指数的显著相关性与台籍干部身份支持观察从其他研究表明患者CSF KFLC高架在鞘内免疫球蛋白合成、独立的单克隆的类型。根据我们的结果,KFLC允许歧视MS-CIS患者患有其他疾病,尤其是在患者负台籍干部。我们的研究结果与最近的报告相一致的使用这样的化验检测常规检测的方法并验证其使用鞘内免疫球蛋白合成(11- - - - - -13]。值得注意的是,使用方法的相似性阈值在不同研究低是由于不同的研究设计和人口和差异阈值选择方法。会因此值得评估MRI KFLC指数的贡献可以提供生物标志物的女士目前用于诊断标准和评估的截止值最大化提供的歧视改善KFLC指数。此外,这些发现强调和独联体女士脑脊液参数的相关性。事实上,尽管CSF分析不再基本检查诊断名RRMS CIS患者CSF应该分析,鉴于鞘内的证据合成的支持因素的准确诊断,女士可能潜在的预后价值,可能有利于临床和治疗决策。

总的来说,呈现至少等于诊断准确性KFLC决心有潜力取代台籍干部在疑似中枢神经系统脱髓鞘疾病的诊断检查。浊度的测定的检测方法是十分容易执行和标准化,这是快速,并因此将很容易集成到实验室流程。此外,解释KFLC是明确的,因为它提供了一个定量测量和允许容易鞘内免疫球蛋白合成的变化。

进一步多中心前瞻性研究招收大量的CIS患者是必要的为了评估方法提供的歧视改善目前磁共振成像条件,最终,在MS的诊断方法的效用。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突在准备这篇文章。

作者的贡献

加布里埃尔Passerini和格洛丽亚Dalla科斯塔同样导致了这项工作。

确认

这项工作是由西门子医疗支持。

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