文摘
多发性硬化(MS)进行通过炎症和退行性疾病阶段。基于临床feaures,它可以分为三组:复发缓和多发性硬化症,次要进步女士,女士和初级进步多发性硬化症有多因子的病因与遗传倾向的相互作用,环境因素,自身免疫炎症机制中发挥关键作用CC-chemokines及其受体。在本文中,我们研究了Δ32 CCR5基因的等位基因频率在一群西西里RR-MS患者比较一般的西西里人。同时,我们评估之间的联系一般这种多态性和残疾发展和疾病的发病年龄在同一队列。我们的结果表明,存在CCR5Δ32扩大残疾状态量表得分显著相关(eds)但不随着年龄的疾病发作。
1。介绍
多发性硬化(MS)是一种自身免疫性慢性疾病的中枢神经系统(CNS)的特点是多病灶的炎症破坏髓鞘,轴突损伤,损失的少突胶质细胞,修复机制(1]。
女士是一个可怕的和潜在的致残性疾病的年轻人折磨全球约250万人的发病率大约每100000人每年大约120每100000人,患病率和一生的风险1 400年[2]。
MS-twin对的研究表明,异卵的估计女士的一致性为3% -5%和25% -30%,同卵双胞胎(3,4]。
的基础上颞病程,女士可以细分为三个临床组:复发缓和女士(RR-MS,表现为复发时爆发的症状,其次是缓解时没有症状),次要进步女士(SP-MS,缓慢而渐进的形式开始复发缓和),和初级进步女士(PP-MS表示,从一开始,逐步发展残疾)。最常见的疾病在大约85%的情况下是RR-MS,通常,复发的疾病通过阶段全面复苏,复发与持续的赤字,和中等进展(1,2]。RR-MS积累残疾患者从疾病发病更慢比原发性进行性多发性硬化症。大部分女士用药物(如免疫抑制和免疫调节药物和细胞循环中断药物)只用于RR-MS。这些治疗显示了一些效率减少复发率RR-MS和时间进程但不能治愈,因此,需要新的有效治疗所有类型的女士5]。未知但可能是多因素的,女士的病因与遗传倾向的相互作用,环境因素和自身免疫性炎症机制;事实上,这种疾病是通过两个阶段进行:炎症和退行性6,7]。炎症细胞的迁移是促进粘附的upregulation molecules-1 (ICAM-1),血管细胞粘附molecules-1 (VCAM-1)和血小板内皮细胞粘附molecule-1 (PECAM-1) [8]。另一方面,基质金属蛋白酶(MMPs)可能降解基底膜组件,和趋化因子可以形成浓度梯度,吸引白细胞激活白细胞整合蛋白,提高依从性和外渗9]。然后,促炎细胞因子(例如,TNF-a, INF-g, 2,和il - 12)发布了Th - 1细胞和巨噬细胞引发一连串的事件,导致脱髓鞘斑块的形成和轴突损伤(8,10,11]。激活T细胞进入中枢神经系统,引起炎症级联,导致招聘其他免疫细胞。有越来越多的证据支持与参与的趋化因子及其受体在一些神经退行性疾病,包括阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD),艾滋病痴呆(了),以及多发性硬化症(MS) (12]。遗传研究表明,CC-chemokines和趋化因子受体参与女士的易感性13),事实上;他们扮演了一个重要的角色在单核细胞和T细胞的迁移。特别是,CC-chemokine受体5 (CCR5), seven-transmembrane生成G protein-coupled受体,是一种特定的结合位点CC-chemokines像咆哮(CCL5)、巨噬细胞炎性蛋白MIP 1α(CCL3)和巨噬细胞炎性蛋白质MIP 1β(亚兰)14]。CCR5 CCR5基因编码,位于3号染色体p21 [15),已被确认为人类免疫缺陷virus-1 coreceptor (hiv - 1)16]。非功能等位基因,造成32-bp外显子4中删除,CCR5Δ32,导致截短形式的功能受体。个人32-bp删除等位基因的纯合子CCR5, CCR5Δ32,抗hiv - 1感染尽管一再接触(14]。此外,在中枢神经系统,CCR5表达在神经元,星形胶质细胞和小胶质细胞17),以及内皮细胞和血管平滑肌细胞和辅助细胞(18]。在MS发病机理,缺乏功能CCR5在细胞表面可能导致白细胞减少走私到病变网站,因此大脑组织中表达下调炎症。评估CCR5Δ32之间可能存在的相关性和女士的过程中,进行了各种研究,虽然一些研究显示CCR5Δ32和良好的临床过程之间的联系的女士(19- - - - - -21之间不存在相关性,这种多态性和病程在其他研究22- - - - - -24];然而,相比之下,结果不清楚(25]。基于所发挥的关键作用的迁移趋化因子巨噬细胞和T细胞在女士,和遗传因素的重要性和可能的病毒或病毒的刺激参与相关疾病的发病机理,在这个工作中,我们调查的影响CCR5Δ32发病的年龄,当然,和疾病严重程度的西西里RR-MS患者。
2。材料和方法
2.1。患者样本
外周血标本取自180 RR-MS患者(131名女性和49岁男性)招募的神经科学,精神和Anaesthesiological科学,大学墨西拿,意大利。所有的病人在这项研究完成的标准临床定义[女士26),并进行了常规诊断脑脊液和血液测试,和一个完整的神经系统检查。样本集合的时候,疾病类型被定义为复发缓和多发性硬化(RR-MS)疾病,Kurtzke扩大残疾状态量表得分在0.0和6.5之间(EDSS-expanded残疾状态或疾病进展索引规模)。
对照组由213无关的,健康的捐赠者没有自身免疫性疾病的家族史和实地研究期间收集在1999年和2005年进行。样本取自几个城镇在西西里。
本研究的个人捐赠者都有资格如果他们的祖先出生在相同的位置,如果他们没有共同的祖细胞grandparental代。
所有参数(年龄、发病年龄、eds)男性与女性的MS患者组的匹配以及年龄的男性和女性的控制。所有参与者把他们的书面知情同意。
2.2。基因分型
基因组DNA分离采用盐析法(27]。
Eparinized外周血之前收集到的病例和控制任何治疗。PCR进行了热循环(Amp基因PCR系统9600;PE应用生物系统公司,福斯特城,CA)在50岁μ包含0.2 L卷μ每个引物浓度(向前CCR5底漆:5′-GTCTTCATTACACCTGCAGCTC;反向:5′-GTGAAGATAAGCCTCACAGCC), 1 u欧元Taq (Euroclone Spa生命科学部门,意大利)和0.8μg基因组DNA为模板,在下列条件:变性在95°C 1.5分钟,退火56.5°C 1分钟和50年代在72°C扩展35周期,在最初5分钟变性在95°C。整除的PCR产品使用琼脂糖凝胶电泳分离,和198年英国石油公司在野生型等位基因的情况和166年英国石油公司在使用紫外线Δ32等位基因的可视化,溴化乙锭染色。
2.3。统计分析
为每个组(控制和患者),CCR5Δ32等位基因频率的计算是通过直接的基因数。统计分析使用“Statistica”包(28]。提出了数据作为参数变量和的平均数±标准差作为非参数值的百分比。使用学生的连续变量进行比较以及测试可能CCR5Δ32等位基因对eds得分和年龄发病的影响。目的是减少可能的来源的方差,我们在分析包括性别、年龄、发病年龄不使用方差分析方法进行统计分析。所有价值观是2-tailed,被设定为统计意义。
3所示。结果
人口数据表1这表明没有显著差异()整体女士年龄与整体健康控制时代。女士(患者CCR5Δ32等位基因的频率)的控制没有显著差异()和不受性别的影响(,)。我们观察到一个重要CCR5Δ32等位基因之间的联系和eds分数(,)。因此,为减少可能的来源的方差,我们介绍了所有这些变量不我们的模型。数据显示,引入性别、年龄、发病的年龄,不,结果仍然显著。我们没有观察到任何重大CCR5Δ32等位基因之间的联系和发病年龄()(表2)。
4所示。讨论
趋化因子受体及其配体发挥关键作用在一些神经退行性疾病,如女士,当他们被激活(不当34]。辅助T细胞表达的趋化因子受体可能是重要报告允许多发性硬化和中枢神经系统之间的关系渗透CD4细胞和单核细胞。出于这个原因,似乎这些受体可能与开发新的病变在多发性硬化(35]。
除了在T-cell-mediated炎性疾病如女士,趋化因子及其受体的表达明显受促炎细胞因子,例如,肿瘤坏死因子和白细胞介素(36]。所有这些证据也证实了各种研究显示的表达升高CC-chemokine MS患者的中枢神经系统:研究人员专注于趋化因子受体,它们的配体,他们强调了角色在女士的开发和临床过程(37- - - - - -39]。女士CCR5的作用,特别是进一步加强了最近发现的CCR5水平升高在MS患者CD8(+)细胞(36]。
从我们的研究中,人们发现CCR5Δ32等位基因频率在西西里RR-MS患者()是与一般人群()[40]。我们的结果,一方面,是一致的与一些研究[20.),另一方面,不证实了其他研究29日,31日]。
事实上,Otaegui等人报道较低频率女士CCR5Δ32等位基因的患者与巴斯克的控制人口相比,西班牙(31日]。事实上,在伊朗人口,Shahbazi等人证明了MS患者Δ32等位基因频率高于控制(29日]。这些互相矛盾的数据可能来自几个因素作为样本大小,环境因素,种族的差异41]。
关于协会Δ32CCR5等位基因和临床的医学文献中的数据是相互矛盾的。事实上,各种研究描述Δ32CCR5等位基因的一个协会良好的临床过程[女士19- - - - - -21),而其他人则没有任何明显的多态性和病程之间的相关性(22,23](的概述主要关联研究是总结表3)。我们的数据显示一个协会CCR5Δ32等位基因与扩大残疾状态量表评分(,RR-MS患者),这表明它的存在导致疾病进展的速度较慢。从这些结果出现功能受体CCR5的表达较低,可能会影响残疾的速度发展,然后窝藏CCR5基因突变可以被认为是女士的良好的预后因素。
然而,相对于另一个最近的报告(19),我们没有发现不同Δ32CCR5运营商之间的发病年龄和非()。在我们看来,重要的是要注意,这项工作中所示的数据并不影响因素如年龄、疾病发病的年龄和性别(见表中的结果2)。
总的来说,遗传易感性女士仍然是一个悬而未决的问题。未来的研究兴趣将更好地理解这种疾病的遗传异质性和治疗需要个人虽然候选基因关联分析是困难的复制女士通常发生在复杂的遗传疾病。趋化因子及其受体的广泛的系统可能是一个重要的关键在寻找这些问题的答案。需要更多的研究来揭示趋化因子网络的确切作用及其协会与其他因素在这种疾病的发病机制。我们的数据表明,这个CCR5的存在多态性RR-MS患者可能帮助设计一个治疗方案和可能作为预后标记然后CCR5拮抗剂可以被认为是潜在的治疗目标。
确认
作者感谢所有参与者,使得这一研究成为可能。作者也感谢神经科学的区域来,精神和Anestesiological科学,墨西拿大学帮助他们在招聘多发性硬化症患者。