文摘gydF4y2Ba
EGFR(表皮生长因子受体)在多种人类癌症(包括头部和颈部鳞状细胞癌、结肠癌、乳腺癌和一些),因此被认为是一个理想的目标为癌症治疗或成像的目的。在目前的研究中,我们制作了一个scFv-based近红外探测器(称为cet.hum.scfv irdye - 800连续波)和评估能力的认识和成像EGFR-overexpressing肿瘤小鼠模型。像父母的抗体的分子探针组成(西妥昔单抗,fda批准的单克隆抗体)和IRD800CW, cet.Hum。scfv irdye - 800连续波是能够识别EGFR-overexpressing肿瘤在小鼠体内。cet.Hum。scfv irdye - 800连续波被发现优于cetuximab-based探测成像的老鼠肿瘤。tumor-to-background比率和血液清除率cet.Hum时更高。scfv irdye - 800连续波作为成像探针。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
手术切除的主要实体肿瘤患者在癌症治疗中扮演一个重要的角色。积极的一个不完整的切除后剩余利润明显导致疾病复发(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。传统肿瘤成像技术,如核磁共振成像,计算机断层扫描和x射线不够敏感的和特定的肿瘤组织与周围正常组织处理(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。荧光图像引导手术,是一种很有前途的技术,术中监测,提供实时指导外科医生在手术过程中(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。荧光目标代理,如荧光dye-conjugated单克隆抗体,可以形象的高特异性的肿瘤(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
许多研究都强调了临床的好处fluorescence-guided实体肿瘤患者手术,分子探针由抗体分子和一个使用荧光染料(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。例如,组成的分子探针anti-EGFR单克隆抗体和荧光染料已被证明是一个不错的探针来检测人类头部和颈部肿瘤(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。表皮生长因子受体(EGFR)是一个属于她的家人跨膜细胞表面蛋白酪氨酸激酶受体在扩散中起着关键作用,迁移,生存和癌细胞的入侵gydF4y2Ba18gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。表皮生长因子受体经常在各种癌症,包括头部和颈部(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),非小细胞肺癌(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba],乳腺癌[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba),颈和结肠直肠癌gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba),所以它可以被视为一个理想的分子目标用于癌症成像和治疗。gydF4y2Ba
目前,有四个主要EGFR-targeting单克隆抗体,即帕尼单抗、西妥昔单抗,necitumumab nimotuzumab。帕尼单抗、nimotuzumab和西妥昔单抗结合各种示踪剂,由此而来的轭合物目前正在临床试验(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。例如,罗森塔尔和他的同事们评价的能力cetuximab-IRDye800CW共轭成像的头部和颈部癌症(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
Tumor-detecting代理是外科肿瘤学家极大的兴趣。OTL-38是fda批准的代理,用于检测卵巢癌fluorescence-guided手术期间(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。Antibody-fluorescent染料配合也感兴趣的肿瘤检测。完整的抗体或抗体片段可以用于此目的。尽管有几个优势(例如,高亲和力和特异性对他们的相关抗原),全长抗体是相对较大的分子(范围140 - 150 kDa)。这个缺点可能会限制他们的应用程序在处理实体肿瘤(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。长半衰期和有限的渗透全身的抗体会导致高背景水平,导致低tumor-to-background比(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。因此,较小的抗体分子将为癌症成像更高的利息。anti-EGFR单克隆抗体、西妥昔单抗(与IRDye800CW接合)评估在动物和临床试验研究表明,一个有效的代理EGFR-bearing肿瘤(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),所以我们将它用作控制在这个研究。单链抗体,立即叫scFvs,最小的抗体片段之一,满足对抗原亲和力。通过地区只有两个变量,scFv抗体分子被认为是小分子的分子量≤30 kDa [gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。由于其规模相对较小、低免疫原性和容易生产,scFvs已经为多个应用程序吸引了巨大的关注gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。此外,由于缺乏scFvs Fc片段,脱靶效应对Fc-receptor-positive细胞减少。龚和他的同事报道,IRDye800CW-conjugated anti -标签- 72 scFv提供快速和识别特定的结直肠肿瘤在小鼠模型gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
在我们以前的工作,我们生产和评估的绑定能力germline-humanized重组anti-EGFR scFv [gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。在当前的研究中,我们评估的能力,这在识别EGFR-overexpressing scFv肿瘤在小鼠模型IRDye800CW共轭。IRDye800CW通过肾脏从血液中清除(gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。IRDye800CW荧光染料吸收和发射波长的近红外光谱(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。医疗光学成像中扮演一个重要的角色在生物医学和外科手术。然而,由于严重的可见光的光散射和组织自体荧光光谱(650 - 900海里),传统的荧光染料(如FITC)通常有一个贫穷的信噪比(信噪比)和低渗透能力和成像灵敏度。近红外光谱(700 - 900 nm)据报道,更多的组织穿透能力和更高的信噪比。低散射率和最小组织的自体荧光的近红外染料可以获得更好的图像的肿瘤(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。在目前的研究中,我们比较西妥昔单抗的能力和一个anti-EGFR scFv EGFR-overexpressing肿瘤成像的接合后IRDye800CW近红外染料。gydF4y2Ba
2。材料和方法gydF4y2Ba
2.1。试剂gydF4y2Ba
西妥昔单抗(5毫克/毫升的浓度、总量的20毫升)准备从红十字会的药房Gorgan (Gorgan、伊朗)。IRDye800CW-NHS购买LI-COR生物科学、林肯(美国)。Diaminobenzidine (DAB)平板集(猫。不。T0440)和三甲(3、30日,5、50-tetramethylbenzidine)(猫。不。从Sigma-Aldrich D4293)购买。重组人表皮生长因子受体蛋白(猫。不。ab155726)和anti-alpha微管蛋白抗体(猫。 no. ab15246) were purchased from Abcam. HRP-Protein L (cat. no. M00098) and Ni-NTA Agarose (cat. no. 30210) were purchased from Qiagen (Germany) and GenScript Biotech (USA), respectively.
2.2。cet.Hum.scFv的克隆和表达gydF4y2Ba
人源化单链可变片段(scFv)是我们之前研究的产物。我们命名为scFv cet.Hum.scFv。scFv-encoding序列(包含重链可变域- (VH)编码序列,linker-encoding序列,和轻链可变域-(六世)编码序列)被插入的克隆地区pET22b(+)细菌NcoI和XhoI限制站点之间的表达载体。表达的序列导致生产27 kDa scFv VH-linker-VL格式(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.3。cet.Hum.scFv表达和纯化gydF4y2Ba
重组蛋白表达,重组pET22b -cet.Hum (+)。scFv向量转化为gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba)BL21 (DE3)使用热休克细胞的方法。gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba细胞培养在一个锥形瓶含有50毫升Luria-Bertani(磅)中补充了100gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL氨苄青霉素和允许增长3 h在37°C。当ODgydF4y2Ba600年gydF4y2Ba达到0.5,IPTG(异丙基-gydF4y2BaβgydF4y2Ba-d-1-thiogalactoside)添加到瓶(0.1毫米)的最终浓度诱导重组cet.Hum。scFv表达式。一夜后增长18°C,媒介是离心机,享年4000岁gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟和合成细菌颗粒悬浮在裂解缓冲(含50 mM Tris-HCl pH值7.5,200毫米氯化钠,1毫米PMSF)声波降解法。声波降解法是在冰上30 80年与30年代的间隔周期振幅。cet.Hum。scFv纯化使用Ni-NTA琼脂糖根据公司(试剂盒)协议和存储在−20°C供后续使用。布拉德福德的试验被用来量化cet.Hum。scFv浓度的解决方案。gydF4y2Ba
2.4。细胞系,细胞培养gydF4y2Ba
- 431和u - 87毫克(u - 87)细胞系获得细胞库的巴斯德研究所(德黑兰,伊朗)。- 431是一种人体皮肤癌症细胞系overexpressing表皮生长因子受体(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。u - 87是一种大脑癌症细胞系表皮生长因子受体表达水平较低(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。这两个细胞系培养在37°C公司为5%gydF4y2Ba2gydF4y2Ba杜尔贝科的修改鹰的介质(DMEM;Gibco)补充10%胎牛血清的边后卫,1%青霉素和链霉素(笔/喉炎的症状),和25gydF4y2BaμgydF4y2Ba克/毫升庆大霉素。- 431和u - 87毫克是用作高低EGFR-expressing细胞系,分别。gydF4y2Ba
2.5。西方墨点法gydF4y2Ba
细胞被声波降解法细胞溶解(5 s),而被悬浮在修改裂解缓冲(50毫米三,1毫米EDTA, 150毫米氯化钠,0.1% SDS, 1% Triton x - 100,和100毫米PMSF,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba,gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。在10000 g细胞碎片被离心10分钟,和上层的整除后储存在-80°C。gydF4y2Ba
- 431和u - 87细胞溶解产物进行sds - page,和分离蛋白被转移到PVDF膜。为了防止非特定的反应,膜被阻断缓冲区(TBS缓冲区包含3%牛血清白蛋白(BSA)和0.05% Tween-20)。在4°C一夜孵化后,膜的清洗与cet.Hum TBS缓冲区和反应。scFv (50gydF4y2BaμgydF4y2Ba西妥昔单抗(30 g / mL)gydF4y2BaμgydF4y2Ba克/毫升)或anti-alpha微管蛋白(20gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL)在室温下2小时(RT)。与TBS另一轮的洗涤后,细胞膜(那些与cet.Hum反应。scFv或西妥昔单抗在前一阶段)反应HRP-Protein L的解决方案(最终浓度为0.5gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL) 1小时在rt,最后,膜的反应是刚做好的民建联可视化解决方案。gydF4y2Ba
2.6。IRDye800CW抗体标记gydF4y2Ba
cet.Hum。scFv和西妥昔单抗与IRDye800CW标记(IRdye800CW-NHS酯LI-COR生物科学)根据制造商的指南(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba,gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]。短暂,抗体与IRDye800CW孵化(抗体/染料的摩尔比1/10)磷酸钾缓冲(1米,pH值8.5),轻轻在4°C群在一个旋转。2 h孵化后,解决方案是用透析袋透析(分子量截止12 - 14 kDa)隔夜孵化在4°C摩尔比1 x PBS缓冲(pH值7.0)。gydF4y2Ba
透析后,dye-to-antibody比率(程度的标签(痛单位))使用Picodrop微升UV / Vis分光光度计测定吸光度的波长280 nm和774 nm (gydF4y2Ba和gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.7。结合试验(抗原饱和试验)gydF4y2Ba
使用ELISA亲和力IRDye800CW-conjugated分子的决心。简单地说,100年gydF4y2BaμgydF4y2BaL细胞溶解产物(溶菌产物- 431或u - 87毫克细胞)被添加到每个隔夜孵化的ELISA板在4°C。与PBS三次洗涤后,通过添加250井被封锁gydF4y2BaμgydF4y2BaL阻断缓冲区(PBS缓冲补充3% BSA) 2 h。PBS的另一个轮洗涤后,dye-conjugated分子(cetuximab-IRDye800CW和cet.Hum.scFv-IRDye800CW)被添加到井(100gydF4y2BaμgydF4y2Ba信用证,最终浓度0.7 - 50gydF4y2BaμgydF4y2Bag /反应),并允许细胞溶解产物为2 h 37°C。三次洗涤后PBS(每次5分钟),HRP-Protein L是添加到每个(最终浓度为0.5gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL),允许1 h的内容做出反应。洗井后PBS缓冲与前面的阶段,100年gydF4y2BaμgydF4y2BaL三甲是添加到每个antibody-antigen交互获取OD值在450海里。gydF4y2Ba
2.8。动物模型和近红外荧光成像gydF4y2Ba
4-6-week-old女性免疫抑制BALB / c小鼠(准备根据协议Jivrajani和同事的gydF4y2Ba44gydF4y2Ba)被用于这项研究。标准的老鼠被关在笼子里无菌住房条件下25°C,相对湿度60%,和12 h光/暗周期,提供食物和水随意。所有动物实验和麻醉/安乐死过程按照制度进行动物保健和使用委员会(IACUC)。伦理批准本研究从Golestan大学获得医学科学(道德注册IR.GOUMS.REC.1398.001数量)。对肿瘤诱导,每个免疫抑制小鼠(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba收到(皮下注射到正确的后侧面地区)100gydF4y2BaμgydF4y2BaL FBS-free培养基包含gydF4y2Ba a - 431或u - 87细胞。肿瘤生长监控每周使用卡尺直到肿瘤大小达到10 - 15毫米。老鼠被随机分成六个不同的组(每组)6 - 8老鼠:(1)- 431,PBS;(2)a - 431, cet.Hum.scFv-IRDye800CW;(3)a - 431, cetuximab-IRDye800CW;(4)u - 87, PBS;(5)u - 87, cet.Hum.scFv-IRDye800CW;(6)u - 87, cetuximab-IRDye800CW。然后老鼠系统通过尾静脉注射PBS, cet.Hum。scfv irdye - 800连续波或西妥昔单抗irdye - 800连续波(75gydF4y2BaμgydF4y2Bag在100年的总量gydF4y2BaμgydF4y2BaL),小鼠麻醉2毫克的氯胺酮和甲苯噻嗪0.2毫克注入腹腔和成像(0,1,4,24、48、72和96 h后注入(hpi)。近红外光谱图像被使用FluoVision光学成像系统(Tajhiz Afarinan这Parseh有限公司,德黑兰,伊朗)(gydF4y2Ba45gydF4y2Ba配备一套近红外特定的过滤器(零件号irdye800 - 33 - lp - 000, Semrock,美国)激发和发射波长的747和776海里。gydF4y2Ba
2.9。统计分析gydF4y2Ba
cet.Hum的浓度。scFv-IRDye800CW cetuximab-IRDye800CW是使用以下公式计算:gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba标签的程度是衡量使用以下公式:gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba吸光度的校正因子的IRDye800CW 280海里(等于3.0%的吸光度在774海里)是0.03。gydF4y2Ba的摩尔消光系数是蛋白质。MW蛋白质的分子量的蛋白质。稀释系数是稀释的标记共轭之前用分光光度计测量。IRDye800CW的摩尔消光系数是240000米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba和蛋白质的摩尔消光系数(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba是53860米gydF4y2Ba1gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(用于scFv)和217440米gydF4y2Ba1gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(西妥昔单抗)。ELISA数据分析使用GraphPad棱镜8 (GraphPad软件,圣地亚哥,CA)。tumor-to-background比率和荧光信号强度计算使用ImageJ (gydF4y2Bahttps://imagej.net/gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
3所示。结果gydF4y2Ba
3.1。表达人类单链抗体片段的净化gydF4y2Ba
cet.Hum。scFv表达式进行描述在我们以前的工作并使用NI-NTA纯化树脂(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)。正如所料,这两个cet.Hum。scFv和西妥昔单抗检测表皮生长因子受体分子的溶解产物EGFR-overexpressing A431细胞溶解产物,但不明显在u - 87细胞的溶解产物(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba)。人类cet.Hum IRDye800CW NHS酯是共轭。scFv和西妥昔单抗(control antibody) by acylating the free primary amines, such as lysine residues in antibodies (Figure2gydF4y2Ba)。最后cet.Hum的蛋白质浓度。scFv和西妥昔单抗后净化是48.9gydF4y2BaμgydF4y2Ba和51.3克/毫升gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL,痛单位的比例是1.983和2.128,分别。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
3.2。Cell-Binding cet.Hum化验。scFv cet.Hum。scFv-IRDye、西妥昔单抗和Cetuximab-IRDyegydF4y2Ba
我们测量标记和标记cet.Hum的能力。scFv和西妥昔单抗识别- 431和u - 87细胞ELISA(数字gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(一)和gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(b))。- 431细胞,gydF4y2Bacet.Hum的价值观。scFv-IRDye800CW和计算cetuximab-IRDye800CW 21(±0.5)和24.3 nM(±0.9),分别。标记cet.Hum。scFv和西妥昔单抗gydF4y2Ba的值gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba分别。没有发现显著差异gydF4y2Bacet.Hum之间的值。scFv和西妥昔单抗(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba没有明显的OD值时获得的抗体反应与u - 87毫克细胞(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
3.3。使用IRDye800CW-Conjugated抗体体内肿瘤成像gydF4y2Ba
IRDye800CW-antibody注射后不同时期拍摄的图像数据所示gydF4y2Ba4gydF4y2Ba和gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。在老鼠的情况下轴承- 431肿瘤异种移植,cet.Hum。scFv——IRDye800CW被发现比cetuximab-IRDye800CW产生更强烈的和浓缩的信号。cet.Hum。scFv-IRDye800CW继续发出信号即使在第四天注射(96 h后注入)。最大信号强度发生注射后24小时(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(a))。cetuximab-IRDye800CW也能够发出荧光在a - 431肿瘤异种移植。像cet.Hum。scFv-IRDye800CW分子,即使在第四天cetuximab-IRDye800CW继续发出荧光的注入。的最大信号强度cetuximab-IRDye800CW发生48 h后注入(gydF4y2Ba )。gydF4y2Bacet.Hum信号强度。scFv-IRDye800CW 1、4和注射后24小时计算gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba和gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba分别。这些值cetuximab-IRDye800CW计算gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba和gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba分别(见图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba统计显著性水平(b))。tumor-to-background比率明显高于接受cet.Hum在老鼠身上。接收cetuximab-IRDye800CW scFv-IRDye800CW比。两两比较的这些比率IRDye800CW-conjugated cet.Hum。scFv /西妥昔单抗所示如下:注射后24小时(5.9和4.3),48 h后注入(7.1和4.2),72 h后注入(6.9和5),和96 h后注入(7.1和5.8)(见图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(b))。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
我们研究了IRDye800CW-labeled人性化cet.Hum的积累。scFv和西妥昔单抗在u - 87毫克肿瘤异种移植(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。cet.Hum。scFv-IRDye80CW-induced信号强度在u - 87毫克肿瘤异种移植(100 - 125 au)显著低于EGFR-overexpressing A431异种移植(278 - 420 au) (gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(a))。注射后1 h,接收IRDye800CW——cet.Hum tumor-to-background比率在老鼠身上。scFv计算是2,72 h后提高到3.2;同样的趋势观察当u - 87 MG-bearing老鼠收到cetuximab-IRDye800CW;信号强度(65 - 119 au)从A431肿瘤异种移植(低于发射gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(数据gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(一)和gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(a))。tumor-to-background比小鼠接受cetuximab-IRDye800CW没有超过3(图gydF4y2Ba7gydF4y2Ba(b))。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
4所示。讨论gydF4y2Ba
在目前的研究中,我们比较了人性化cet.Hum的能力。scFv(大约27 kDa)及其长篇父母抗体(西妥昔单抗,大约152 kDa)看哪一个是更好的肿瘤成像当共轭IRDy800CW近红外荧光染料。IRDye800CW-conjugated西妥昔单抗检测EGFR-overexpressing肿瘤的能力已经被报道在临床前和临床研究,它被发现是一个合适的tumor-detecting代理(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。在目前的研究中,我们表明,cet.Hum。scFv-IRDye800CW可以输入EGFR-overexpressing肿瘤以一种有效的方式。cet.Hum。scFv携带相同的CDR循环西妥昔单抗,所以保留了antigen-binding能力,由于其规模相对较小,它将更容易进入肿瘤组织。我们的研究结果证实了这一假设;我们发现cet.Hum。scFv-IRDye800CW比其母进入肿瘤组织更有效和发出较强的荧光信号。需要长时间较大的蛋白质从血流消失后肝脏代谢(gydF4y2Ba46gydF4y2Ba]。所以,cet.Hum。scFv分子应该消失在血液早于西妥昔单抗,同时还表现在肿瘤组织,肿瘤细胞EGFR表达较高。这可能是为什么tumor-to-background比率在不同注入cet.Hum后拍摄的图像。scFv-IRDye800CW cetuximab-IRDye800CW。tumor-to-background比率明显高于a - 431肿瘤小鼠接受cet.Hum。接收cetuximab-IRDye800CW scFv-IRDye800CW比。数据显示重组抗体片段的其他抗体(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba),cet.Hum。比cetuximab-IRDye800CW scFv-IRDye800CW血液清除率较高,生产更多凝聚在肿瘤部位的信号。研究比较完整的抗体和抗体片断fluorescence-guided手术是罕见的。El-Sayed和他的同事们报告说,全身anti-HER3免疫球蛋白和fc (scFv)融合蛋白比scFv更有效,scFv-CH3, diabody, Fab片段在成像HNSCC异种移植(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba]。cet.Hum相比。scFv-IRDye800CW, cetuximab-IRDye800CW需要更长的时间来生产它的最大信号强度,可能由于其大这会减慢肿瘤渗透。抗体片段(例如,工厂,minibodies diabodies, scFv)被用作针对代理fluorescence-guided手术治疗各种癌症,包括头颈癌、结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba50gydF4y2Ba]。Schoonooghe和他的同事们报告说,更小的抗体片段(称为nanobodies和抗体重链可变区)可以作为潜在的显像剂(gydF4y2Ba51gydF4y2Ba]。u - 87毫克癌细胞表达低水平的表皮生长因子受体(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。正如所料,没有IRDye800CW-conjugated分子能够检测u - 87肿瘤异种移植在一个有效的方式。注射荧光分子导致分散在老鼠的身体信号。注射后24小时,cet.Hum。scFv-IRDye800CW导致网站的微弱信号u - 87毫克肿瘤,逐渐消失在未来48 h。许和他的同事们报告说,anti-EGFR工厂没有积累在表皮生长因子受体表达细胞(M14细胞),但能够识别EGFR-overexpressing - 431细胞(gydF4y2Ba52gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
Cetuximab-IRDye800CW也无法检测肿瘤u - 87毫克。这些结果证实cet.Hum。scFv-IRDye800CW有更高的肿瘤比RDye800CW-conjugated西妥昔单抗渗透能力。考虑cet.Hum的特异性。scFv-IRDye800CW EGFR-overexpressing细胞也减少组织穿透能力的红外波段(相对于x射线、伽马射线,等等),这将是有用的只有成像过多表达EGFR的肤浅的人类癌症。头颈部鳞状细胞癌的头颈部鳞状细胞癌()是一组癌症通常过多表达表皮生长因子受体分子。这些癌症也肤浅足以使用红外成像像cet.Hum.scFv-IRDye800CW dye-conjugated抗体。gydF4y2Ba
以前的研究已经表明荧光团结合会导致亲和力降低(gydF4y2Ba53gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba55gydF4y2Ba]。荧光量子产率参数antibody-conjugated荧光团一直低于自由报道荧光团(gydF4y2Ba53gydF4y2Ba]。在这项研究中,我们两cet.Hum标记。scFv和西妥昔单抗,近红外染料IRDye800CW,分别在1.983和2.128染料/抗体。gydF4y2Bacet.Hum的值。scFv和西妥昔单抗,出乎意料,IRDye800CW接合后增加。虽然平常,gydF4y2Ba上升后染料结合已经被报道。伯纳德和他的同事们报告说gydF4y2Ba的值(scFv) 2、scFv-Fc IgG IRDye800CW接合后增加但没有指出如何在转变gydF4y2Ba值出现。gydF4y2Ba
互补决定区(CDRs)负责抗原抗体分子识别。有许多氨基酸的CDR cet.Hum的循环。scFv和西妥昔单抗主要或次要氨基侧链(s)。基于LI-COR所提供的资料(gydF4y2Bahttps://www.licor.com/bio/reagents/irdye - 800 - cw nhs酯gydF4y2Ba通过侧链),IRDye800CW结合蛋白质主要和次要氨基酸组。染料(图gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)有许多潜在的网站,容易形成氢键与侧链的氨基酸(如酪氨酸、精氨酸和赖氨酸)。越高的抗体和抗原之间的氢键,越高gydF4y2Ba可以获得价值。gydF4y2Ba
肿瘤成像使用IRDy800连续波有几个优势noninfrared荧光染料(如FITC)以及一些红外染料如5-aminolevulinic酸(5-ALA)。IRDy800CW已近红外光谱吸收和发射波长(774 - 794 nm)。因此,自发荧光观察5-ALA和可见光荧光染料不会明白地发生在处理IRDy800连续波(gydF4y2Ba56gydF4y2Ba]。总之,这项研究的结果表明,分子探针组成的一个anti-EGFR cet.Hum。scFv IRDye800CW是能够识别EGFR-overexpressing肿瘤细胞在一个有效的方式,可以很好的候选人,希望进一步的研究开发一种新的分子探针对肿瘤成像。gydF4y2Ba
数据可用性gydF4y2Ba
没有生成数据集在这个研究。gydF4y2Ba
的利益冲突gydF4y2Ba
作者宣称没有利益冲突。gydF4y2Ba
作者的贡献gydF4y2Ba
嗜和屈服应力是负责概念化和方法论。和F.S.负责正式分析,调查,和数据管理。嗜和屈服强度准备初稿。嗜和Y。审查和编辑。所有作者回顾了手稿。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这个项目是由Golestan大学医学科学(Gorgan、伊朗)批准IR.GOUMS.REC.1398.001 110121和伦理批准代码的代码。gydF4y2Ba