甲状腺研究期刊》的研究

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甲状腺研究期刊》的研究/2017年/文章

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体积 2017年 |文章的ID 4354723 | https://doi.org/10.1155/2017/4354723

达缇女士Kharrazian,玛莎赫伯特,贵族Vojdani, 免疫反应性使用单克隆和多克隆抗体与膳食蛋白质自身免疫性甲状腺的目标网站”,甲状腺研究期刊》的研究, 卷。2017年, 文章的ID4354723, 13 页面, 2017年 https://doi.org/10.1155/2017/4354723

免疫反应性使用单克隆和多克隆抗体与膳食蛋白质自身免疫性甲状腺的目标网站

学术编辑器:玛丽安卢德门
收到了 2017年4月10
修改后的 2017年6月14日
接受 2017年6月15日
发表 2017年8月15日

文摘

许多甲状腺自身免疫性甲状腺患者经验反应特定的食物。此外,食物相互作用可能发挥作用的一个子集的人很难找到一个合适的甲状腺激素用量。我们的研究旨在调查饮食蛋白免疫反应的潜在作用与甲状腺激素和甲状腺轴目标站点。我们确定了膳食蛋白质和目标站点之间的免疫反应性甲状腺轴,包括甲状腺激素、甲状腺受体,酶,蛋白质和运输。我们还测量了免疫反应性的目标特定单克隆或多克隆抗体促甲状腺激素(TSH)受体,5′deiodinase,甲状腺过氧化物酶,甲状腺球蛋白,thyroxine-binding球蛋白,甲状腺素,和三碘甲状腺氨酸204纯化膳食蛋白质通常食用煮熟的和原始的形式。膳食蛋白质决定因素包括修改的(生)和修改(煮和烤)食品、草药、香料、食品牙龈、饮料、酿造和添加剂。没有膳食蛋白质与TSH受体免疫反应,甲状腺过氧化物酶,thyroxine-binding球蛋白。然而,特定的抗原抗体免疫反应识别与几个净化食物和三碘甲状腺氨酸蛋白质,甲状腺素,甲状腺球蛋白和5′deiodinase。实验室分析的免疫大甲状腺目标站点和膳食蛋白质之间必要的初始步骤在决定是否膳食蛋白质可能在自身免疫性甲状腺疾病潜在的免疫反应性的作用。

1。介绍

免疫大时自适应免疫反应对两个抗原也会发生抗原与氨基酸结构相似。免疫大在1942年首次发现的时候发现个人致敏花粉过敏原发达的免疫反应到特定的水果(1]。与花粉也可能发生进一步的研究发现,大到人体组织目标蛋白(2]。

暴露于抗原共享与组织蛋白质氨基酸序列同源性在易感宿主理论化触发组织自身免疫性疾病(3,4]。

各种抗原已被证明特别和甲状腺组织,引发甲状腺自身免疫交叉反应。此外,热休克蛋白60 (Hsp60),线粒体chaperonin参与应激反应,糖尿病,和免疫疾病,甲状腺球蛋白和甲状腺过氧化物酶分子结构相似。酶联免疫吸附试验(ELISA)评估也表明免疫大扮演一个角色在桥本氏甲状腺炎5]。

许多胃肠道病原体与甲状腺组织展示了分子模拟。例如,人类单克隆促甲状腺激素受体(TSH-r)已被证明与交叉反应鼠疫enterocolitica (y enterocolitica),从而提供一个机械框架分子拟态坟墓的疾病,y enterocolitica抗体生产促进可交叉反应的致病性应对TSH受体(6]。研究人员发现,外膜孔蛋白F蛋白的y enterocolitica与富亮氨酸域共享cross-immunogenicity TSH受体和在诱导自身免疫过程中发挥作用的TSH受体通过分子拟态(7]。

免疫之间的大幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌)和自身免疫性甲状腺疾病一直怀疑由于早发性之间的相关性幽门螺杆菌感染和桥本甲状腺功能减退,甲状腺机能亢进(8,9]。大与白色念珠菌和甲状腺抗原已被确认和与自身免疫性甲状腺疾病的发展10]。原生动物的刚地弓形虫也被报道可能诱发自身免疫性甲状腺大通过分子模拟机制(11]。

除了胃肠道病原体,肉毒梭状芽胞杆菌神经毒素(Btx)据报道诱导血清TSH的高度。研究人员发现,Btx和甲状腺自身抗原氨基酸序列同源性,可能扮演一个角色在自身免疫性甲状腺疾病的并发症可交叉反应的12]。包柔氏螺旋体burgdorferi已被证明与TSH受体蛋白同源性,因此发挥作用作为一种抗原引发自身免疫性甲状腺疾病(13]。柯萨奇病毒病毒抗体反应也证明了大甲状腺和已报告是一个因素自身免疫性甲状腺疾病的发病机理14]。

致病菌的列表,如病毒、细菌、真菌、螺旋体、原生动物抗体,可能导致组织甲状腺自身免疫抗体通过氨基酸序列同源性越来越多的研究领域。然而,目前还没有做过任何研究食物蛋白在甲状腺抗体和其潜在作用特别大。发表研究看着谷蛋白和甲状腺自身免疫,但其他膳食蛋白质的免疫活性作用可能与甲状腺功能已经有限的研究领域(15,16]。

在这项研究中,我们评估潜在的食物大之间的免疫反应性甲状腺轴通过评估纯化膳食蛋白质和甲状腺目标特定的抗体。我们测量免疫反应性的目标特定单克隆或多克隆抗体TSH受体,5′deiodinase,甲状腺过氧化物酶,甲状腺球蛋白,thyroxine-binding球蛋白,甲状腺素,和三碘甲状腺氨酸204纯化膳食蛋白质通常在生的还是熟的形式。食品包括修改的决定因素(生)和修改(煮和烤)食品蛋白质、药草、香料、食品牙龈、饮料、酿造和添加剂。我们包括生与改良食物抗原由于在我们的早期研究表明,一些人可能生食抗原反应但heat-modified的,相反,其他人可能反应heat-modified但不生食抗原(17]。

特定的目标与自身免疫性甲状腺疾病相关蛋白质沿着甲状腺轴进行评估我们的研究包括促甲状腺激素受体(TSH-R) 5′deiodinase,甲状腺过氧化物酶,甲状腺球蛋白,thyroxine-binding球蛋白,甲状腺素和三碘甲状腺氨酸。TSH-R抗体反应是甲状腺机能亢进的标志。这些抗体反应促进自身免疫反应对目标蛋白质,但homosteric绑定到这些受体能够促进生产甲状腺激素的增加,导致甲状腺机能亢进(18]。甲状腺过氧化物酶(TPO)是关键甲状腺合成甲状腺激素所必需的酶,桥本的自身免疫的目标。房产申诉专员署抗体与破坏甲状腺和甲状腺炎(19]。甲状腺球蛋白(Tg)是一种二聚的蛋白合成的甲状腺和甲状腺激素的用于生产。其水平升高与甲状腺组织分解,如甲状腺炎和分化型甲状腺癌(20.]。Tg是一种常见的甲状腺自身免疫的目标(21]。Thyroxine-binding球蛋白(油管)对甲状腺激素在流通运输蛋白,具有较高的亲和力为甲状腺素和三碘甲状腺氨酸(22]。水平在体内可以改变由于代谢性疾病、怀孕、口服避孕药的使用,和激素替代疗法(23]。II型iodothyronine deiodinase(戴奥2)是酶激素原转化外圈deiodination甲状腺素的生物活性三碘甲状腺氨酸(24]。甲状腺素(T4)是一个由甲状腺激素原合成和分子组成四碘甲状腺球蛋白。三碘甲状腺氨酸(T3)是生物活性甲状腺激素,负责的主要生理机制甲状腺组织目标函数(25]。

在实验室免疫食品蛋白质的识别大甲状腺轴目标网站的第一步是理解是否膳食蛋白质可能在自身免疫性甲状腺疾病发挥免疫反应的作用。在这项研究中,我们试图把最初的第一步通过确定任何潜在的模式与多样化的食物蛋白质免疫大一个特定甲状腺轴自身免疫的目标网站。

2。材料和方法

2.1。多克隆和单克隆抗体

Affinity-purified兔多克隆促甲状腺激素受体抗体,Affinity-purified山羊多克隆甲状腺素5-deiodinase(戴奥2甲状腺过氧化物酶抗体,单克隆抗体,对甲状腺球蛋白单克隆抗体,鼠单克隆抗体、甲状腺素小鼠单克隆抗体三碘甲状腺氨酸,和thyroxine-binding球蛋白单克隆抗体购自MyBioSource, Inc .(美国圣地亚哥,CA)。

2.2。准备饮食抗原

食物抗原准备从超市购买产品在这两种原料,烤或煮熟的形式。准备,10 g的食品是食品加工机使用0.1米的磷酸缓冲盐(PBS) pH值7.4。搅拌机是开启和关闭1小时,然后继续搅拌器在一夜之间在4°C。离心后20000 15分钟,顶层,中石油的身体,被丢弃。液相被除去,对0.01 PBS用透析袋透析,截止6000 kDa。透析是重复三次,以确保所有小分子被移除。透析后,所有样品都是0.2微米过滤器过滤删除任何碎片。蛋白质浓度测定使用工具包提供的Bio-Rad(美国大力神,CA)。不同的肽从synthesis购买(美国路易斯维尔,TX)。凝集素和凝集素是购买的西格玛奥德里奇(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.3。准备膳食Oleosin抗原

净化的oleosin花生、玉米、红花、向日葵、大豆,食物准备根据Vojdani[描述的方法26]。总共100毫升氯仿/甲醇(2/1,v / v)然后添加和混合使用食品加工机2分钟。混合在一个50毫升在14000 RPM管和离心5分钟。液体在上阶段是通过两层滤纸过滤的。由此产生的滤液收集在多个玻璃瓶和干空气流,具有较强的连续搅拌。氯仿/甲醇萃取步骤是重复两次。总共20毫升的乙醚随后补充道,和白色,固体材料表面的玻璃瓶是分离和resuspended乙醚。在这一点上,10毫升的水被添加到每个瓶子,离心机在20000 5分钟。上层乙醚层,含有脂质被删除,和白色固体,界面材料包含oleosins收集和转移到超小型电子管的用一种最小量的水和乙醚。超小型电子管离心机在20000 5分钟。氮的界面材料暴露于一个流蒸发剩余的乙醚。一毫升氯仿/乙醇(95/5,v / v)添加到界面材料在每个管。每个管的内容很快被漩涡和转移到玻璃烧瓶。分离蛋白质污染物从oleosins 10毫升氯仿/甲醇(95/5,v / v)补充说,混合物是通过滤纸过滤,以前用氯仿/甲醇冲洗。滤液收集瓶和干下的氮流。干oleosins溶解在氯仿/甲醇和应用于交联葡聚糖LH-60列(美国Bio-Rad大力神,CA)使用氯仿/甲醇作为溶剂。收集到的分数oleosins被检查的十二烷基硫酸钠(SDS)凝胶电泳。

2.4。抗原制备膳食口香糖

胶粘剂、卡拉胶、黄原胶、瓜尔胶、黄蓍胶、刺槐豆胶,β葡聚糖是购买的西格玛奥德里奇(圣路易斯,密苏里州,美国)。这些物品都准备根据提取物Vojdani[描述的过程27]。10克的口香糖在500毫升的缓冲pH值4.6提取混合他们8小时25°C电磁搅拌器。解决方案是离心机,享年20000岁 和上层清液被集中10倍使用Amicon过滤器。蛋白质浓度测定使用工具包提供的Bio-Rad(美国大力神,CA)。所有提取整除,存储冻结在−20°C到使用。不同胶提取溶解在0.1 PBS。这些抗原稀释1:50 0.1碳酸盐缓冲pH值9.2和100μ每个胶抗原的L。

2.5。酶联免疫吸附试验(ELISA)的免疫反应性

食物抗原和肽溶解在PBS或甲醇浓度为1.0毫克/毫升,然后稀释1:100年0.1 carbonate-bicarbonate缓冲区在pH值为9.5和100μL是添加到每个聚苯乙烯的平底ELISA板。一夜之间,盘子被孵化在4°C,然后用200洗了三次μL Tris-buffered盐水(TBS)含0.05%渐变20 pH值为7.4。非特异性结合的免疫球蛋白预防通过添加2%牛血清白蛋白(BSA)的混合物在TBS,然后一夜之间酝酿在4°C。盘子都洗如上所述,然后血清样本稀释1:100年0.1 PBS渐变含有2% BSA添加复制1小时在室温下井和孵化。

板块再次清洗,然后多克隆和单克隆抗体稀释的最佳稀释1:500添加到复制antigen-coated井;盘子被孵化一个额外的1小时在室温下。盘子被洗五次TBS-Tween缓冲区。酶反应是通过添加100年开始μL的paranitrophenylphosphate 0.1毫升二乙醇胺缓冲MgCl 1毫克/毫升含有1毫米2和钠在pH值为9.8。反应是停止了45分钟后,50μL 1 N氢氧化钠ELISA和样本阅读的读者,以及光学密度(OD)记录。

测定特异性单克隆和多克隆抗体affinity-purified与各种食物抗原反应,四个井的96孔板涂上2% BSA单独但不是食物抗原。除了所有其他抗原后,这些井的平均OD减去从所有其他的反应。

2.6。免疫反应性测定

二百零四蛋白(见表1)测试了七靶组织抗体在重复,导致2856抗原抗体OD测量。每个重复的结果OD一起平均OD值,控制井的CD,小于0.15,减去从所有其他测量。2856年的OD测量,平均OD 0.33标准差(SD)的0.53。OD 0.87代表两个标准差的意思是,1.41的OD代表三个标准差的意思是,和一个OD 1.95代表四个标准差的意思。OD值低于两个标准差或小于0.53被标记为不重要的。OD值两个标准差以上但低于三个标准差0.66 - -0.86的OD值分为1 +反应。OD值三个标准差以上但不到4个标准差的OD值0.87 - -1.07被归类为2 +反应。OD值以上四个标准差与OD值大于1.08被归类为3 +反应(见表2)。


乳制品和鸡蛋,修改
Alpha-casein和β-酪蛋白
牛奶
巧克力牛奶
蛋清、煮
蛋黄、煮
羊奶
牛奶butyrophilin
软奶酪+硬奶酪
乳清蛋白
酸奶

谷物、原始和修改
苋属植物
荞麦
Casomorphin
燕麦
藜麦
大米
大米,白色+棕色、煮
年糕
大米蛋白
大米endochitinase
黑麦、大麦、拼写、波兰小麦
芝麻
高粱
木薯
画眉草
野生稻、煮
小麦+ alpha-gliadins
酵母米勒

豆类、修改
黑豆、煮
豆凝集素
黑巧克力+可可
蚕豆、煮
鹰嘴豆豆,煮
芸豆、煮
扁豆、煮
小扁豆凝集素
利马豆,煮
平托豆,煮
大豆凝集素
大豆oleosin +水通道蛋白
酱油、无谷蛋白
豆腐

坚果和种子,生和修改
杏仁
杏仁、烤
巴西坚果,生+烤
腰果
腰果、烤
腰果vicilin
芡欧鼠尾草种子
亚麻籽
榛子,生+烤
澳洲坚果,生+烤
芥菜籽
山核桃,生+烤
花生、烤
花生酱
花生凝集素
花生oleosin
阿月浑子,生+烤
南瓜子、烤
芝麻白蛋白
芝麻oleosin
葵花籽、烤
胡桃木

蔬菜、生和修改
洋蓟、煮
芦笋
芦笋、煮
甜菜、煮
甜椒
西兰花
西兰花,煮
球芽甘蓝、煮
卷心菜、红+绿
卷心菜、煮
油菜oleosin
胡萝卜
胡萝卜,煮
菜花、煮
芹菜
红辣椒
煮玉米+水通道蛋白
了玉米
玉米oleosin
黄瓜、腌
茄子,煮
大蒜
大蒜、煮
绿豆,煮
生菜
蘑菇,生+煮熟
秋葵、煮
橄榄,绿+黑、腌
洋葱+葱
洋葱+葱烧、煮
豌豆,煮
豌豆蛋白
豌豆凝集素
土豆、白、烤
土豆、白、油炸
南瓜+南瓜,煮
萝卜
红花+向日葵Oleosin
海藻
菠菜+水通道蛋白
西红柿+水通道蛋白
番茄酱
山药+地瓜,烤
西葫芦、煮

水果、生和修改
苹果
苹果酒
鳄梨
香蕉
香蕉、煮
乳胶hevein
蓝莓
哈密瓜+蜜瓜
樱桃
椰子肉+水
蔓越莓
日期
无花果
葡萄、红+绿
红酒
白葡萄酒
葡萄柚
猕猴桃
柠檬+石灰
芒果
橙色
橙汁
木瓜
桃+油桃
菠萝
菠萝菠萝蛋白酶
李子
石榴
草莓
西瓜

鱼和海鲜,生和修改
鳕鱼、烤
大比目鱼,烤
鲭鱼、烤
红鲷鱼,烤
大马哈鱼
鲑鱼,烤
沙丁鱼+鳀鱼,煮熟
鲈鱼,烤
罗非鱼,烤
鲑鱼,烤
金枪鱼
金枪鱼、烤
白鱼、烤
螃蟹+龙虾煮熟
模仿螃蟹
蛤、煮
牡蛎、煮
扇贝、烤
鱿鱼(鱿鱼),烤
虾,烤
虾原肌球蛋白
小清蛋白

肉、修改
牛肉,煮介质
鸡,煮
羊肉、烤
猪肉、烤
土耳其烤
明胶
肉胶

草本植物,生
罗勒
香菜
孜然
莳萝
牛至
欧芹
迷迭香
百里香

香料、生
肉桂
丁香
薄荷
肉豆蔻
红辣椒
姜黄(姜黄素)
香草

牙龈
角叉菜胶
瓜尔豆胶
黄蓍胶
刺槐豆胶
胶粘剂+阿拉伯树胶
黄原胶

酿造饮料和食品添加剂
咖啡豆蛋白质,酿造
速溶咖啡
红茶,酿造
绿茶,酿造
亲爱的,生+处理
葡聚糖
食用色素


食物蛋白质 TgydF4y2Ba3 TgydF4y2Ba4

杏仁 + +
杏仁烤 + + + + +
苋属植物 + + + +
鳄梨 + +
大麦 + +
黑豆煮熟 +
巴西坚果生&烤 + + + +
球芽甘蓝煮熟 + + +
荞麦 + + +
酪蛋白(α&β) +
腰果 + + +
腰果烤 + + + + +
腰果vicilin + + + +
巧克力 + +
蛤蜊煮熟 + + + +
咖啡 + + +
玉米 + + +
牛奶 + +
蛋黄煮熟 + + + + +
明胶 + + + + +
榛子生和烤 +
+ + +
卡姆 + + +
乳胶hevein + + +
柠檬和酸橙 + +
澳洲坚果生和烤 + + + +
小米 + +
芥菜籽 + + + + + +
燕麦 + + + + +
橙汁巴氏杀菌或集中 + + +
花生酱 + + + +
花生烤 + + +
阿月浑子生和烤 + + +
土豆 + + +
土豆白色烤 +
藜麦 + + +
萝卜 +
大米 + + +
黑麦 + +
三文鱼生 + + + +
扇贝煮熟 + + + + + +
海藻 + + + + + +
芝麻 +
虾煮熟 + + + + +
高粱 + + +
大豆凝集素 +
酱油无谷蛋白 + + + +
拼写 + +
鱿鱼(鱿鱼)煮熟 + + + + + +
葵花籽烤 +
木薯 + + +
豆腐 + + + + + +
罗非鱼煮熟 + + + +
金枪鱼煮熟 + + + +
金枪鱼生 + + + + +
酵母 +
南瓜煮熟 + +

+ = 0.66 - -0.86;+ + = 0.87 - -0.107;+ + +≥1.08。
2.7。结合连续稀释甲状腺抗原抗体固定浓度的各种食物

演示的抗甲状腺抗体绑定食物抗原,不同井的微量滴定板第一次涂上了最优浓度(10μ腰果的g /),烤腰果、乳胶hevein,蛋黄煮熟,和海藻。所需的所有步骤完成后涂层板,每个单克隆抗体的稀释1:500 - 1:512000添加到两个不同的微量滴定板行,和ELISA所有步骤完成后,光学密度(ODs)测量。

2.8。绑定固定抗体的浓度连续稀释食物抗原

不同的食物抗原浓度的400μg / mL连续稀释。微量滴定板涂有0.03 -40人μg的每一个抗原在重复的行。孵化和屏蔽措施后,添加1:500稀释的单克隆抗甲状腺抗体,ELISA所有步骤的完成,OD记录。

2.9。抑制甲状腺抗体绑定到不同浓度的食物抗原Antigen-Coated盘子的食物

四种不同的三种不同的微量滴定板行涂在这个模式:井A1, B1, C1, D1涂以T3;每一行的其他11井(A2-A12, B2-B12、C2-C12 D2-D12)被涂上一层烤腰果、鸡蛋、海带或乳胶hevein。控制和抑制剂被添加如下:100μL的血清稀释剂井a1a2 b1 b2, c1, D1-D2;100年μ包含100 L的稀释剂μg (T)3井A3, B3, C3和D3;和0.5 -120μ克的腰果、鸡蛋、海带、乳胶hevein,分别A4-A12, B4-B12 C4-C12, D4-D12。

盘子在37°C 1小时,孵化和100年μ鼠单克隆anti-T L3被添加到所有48井。洗涤,重复孵化后,添加二级抗体,并完成所有的ELISA步骤,光学密度记录。板# 2是用于添加T4和anti-T4抗体。板# 3是用于添加Tg和anti-Tg通过适当的控制。

3所示。结果

3.1。免疫反应性之间Affinity-Purified抗原多克隆抗体和食物

的affinity-purified对TSH-R多克隆抗体和单克隆抗体对传真照片没有反应任何204年食物蛋白质和油管。但多克隆抗体对DIO2反应只有荞麦1 +反应。

3.2。单克隆抗体对甲状腺球蛋白,T的反应3,T4与204年食品蛋白质

使用这种单克隆抗体对Tg导致3 +免疫反应与乳胶hevein(见表2)。

用单克隆抗体对T4我们的研究发现,食物蛋白质的重要列表直接证明与甲状腺素免疫反应性。柠檬和酸橙,这些食物包括鳄梨煮甘蓝,海藻,煮熟的南瓜,烤和生杏仁、煮熟的黑豆,原始和巴西烤坚果,腰果,烤腰果、腰果vicilin,原始和烤榛子、原始和烤坚果,芥菜籽,烤花生、花生酱、原始和烤开心果,无谷蛋白酱油,豆腐,明胶,煮熟的蛋黄,生鲑鱼,罗非鱼,煮生金枪鱼、金枪鱼、煮熟蛤蜊煮扇贝、煮熟的鱿鱼(鱿鱼),煮熟的虾、苋菜、燕麦(见表2)。

同样,使用单克隆抗体对T3,我们发现一个重要的食物蛋白质列表直接证明和三碘甲状腺氨酸免疫反应性。乳胶hevein,这些食物包括鳄梨柠檬和酸橙,橙汁(巴氏杀菌和集中),煮熟的球芽甘蓝,烤土豆,海藻,萝卜,烤杏仁、生和巴西烤坚果,腰果,烤腰果、腰果vicilin,原始和烤坚果,芥末种子、烤花生、花生酱、原始和烤开心果、大豆凝集素,无谷蛋白酱油,豆腐,烤葵花籽,明胶,煮熟的蛋黄,生鲑鱼,罗非鱼,煮生金枪鱼、金枪鱼、煮熟蛤蜊煮扇贝、煮熟的鱿鱼(鱿鱼),煮熟的虾、牛奶、酪素(α和β)、芝麻、麻、黑麦、大麦、荞麦、高粱、小米、卡姆,拼写,苋菜,藜麦,酵母,燕麦,玉米,大米(见表2)。

3.3。同时反应性单克隆抗体对甲状腺的目标网站

我们选择10食物表1是否相同的免疫反应性与一个特定的食物,例如乳胶hevein,引起的单克隆抗体对T3例如,会发生不同的单克隆抗体。数据清楚地表明,每个单克隆抗体显示不同模式的免疫反应性食物抗原(见表3)。事实上,房产申诉专员署和TBG没有反应任何食物。


Tg TgydF4y2Ba3 TgydF4y2Ba4

乳胶hevein + + + + + +
卡姆 + + +
酱油 + + + +
明胶 + + + + +
扇贝 + + + + + +
腰果、烤 + + + + +
腰果,vicilin + + + +
咖啡的蛋白质 + + +
巴西坚果 + + + +
杏仁 + +

3.4。演示的特异性甲状腺绑定到不同的食物抗原的抗体

这些单克隆anti-T的特异性3,anti-T4,anti-Tg证实了绑定到各种食物抗原的抗体稀释和抑制研究。如数据所示1(一),1 (b),1 (c),单克隆抗体的稀释比例,OD或食物抗原免疫反应显著下降。例如,anti-T的反应3抗体的稀释1:500年,海藻了OD 2.8,稀释1:16000给出了OD的1.23,和稀释1:512000给出了OD的0.2,相当于ELISA(参见图的背景1(一))。类似的结果的反应稀释T4各种食物抗原(见图1 (b))。有趣的是,使用anti-T4抗体,我们发现显著差异之间的免疫反应性生腰果和烤腰果(图1 (b))。乳胶hevein anti-Tg抗体的结合,而不是海藻,鸡蛋,或腰果,绑定到抗体稀释的比例如图所示1 (c)。此外,当固定大量的抗体对T3T4涂,Tg添加到盘子食物浓度为0.037 -400μg / mL, ELISA OD增加食物抗原的浓度比例(见图2(一个),2 (b),2 (c))。anti-T的反应4用连续稀释烤腰果强于生腰果(见图2 (b))。为了进一步证明这些抗原抗体反应的特异性,不同数量的食物抗原(抑制剂)浓度的0.5 -120μg或控件被添加的液相板块包含食物抗原固相的最佳浓度。添加anti-T3、anti-T4或anti-Tg抗体混合物导致显著抑制甲状腺抗体绑定一些食物抗原在盘子上。这种抑制抗原抗体反应时更明显更高浓度的食物抗原用于液相(数字3(一个),3 (b),3 (c))。

4所示。讨论

分享我们实验室研究发现饮食蛋白质氨基酸序列同源性和有可能发挥作用在大甲状腺目标站点。这可能有助于填补知识空白,可能发现了一个起点为进一步研究膳食蛋白质免疫反应之间的关系和自身免疫性甲状腺疾病。我们确定了免疫反应之间各种甲状腺对目标抗原的抗体和食物蛋白质和目标网站各种甲状腺轴的位置。这种潜在的抗体特定甲状腺轴站点与食物抗原可能导致的可能性,一些膳食蛋白质可能在自身免疫性甲状腺疾病中发挥作用。我们的研究发现T4T3、Tg和5-deiodinase反应与净化食物抗原的抗体。这些反应表明免疫食品免疫反应和甲状腺轴之间的大网站。

有趣的是,尽管许多致病菌显示直接大TSH-R和传真照片,我们的研究发现,没有204年食品测试证明任何免疫活性反应这些关键自体免疫目标站点与坟墓的桥本氏病,除了乳胶hevein甲状腺球蛋白。Hevein lectin-like蛋白质来自橡胶树取代巴西橡胶树(橡皮树)。虽然这没有找到lectin-like蛋白质在食品,它是与latex-fruit综合症有关。大约有30 - 35%的人对天然橡胶乳胶过敏可交叉反应的IgE过敏症展示给植物来源如鳄梨、板栗,甜椒,猕猴桃,桃子和西红柿。免疫大橡胶或latex-fruit综合症可能导致易感个体Tg大活性天然橡胶乳胶和相关食品(28]。

虽然与TSH-R直接食物反应不会发生和传真照片通常与坟墓的疾病和桥本,之间有明显的大T4和T3发现在甲状腺激素25 - 35食物抗原(表2)[29日,30.]。

我们也没有确定油管的免疫反应在我们的研究中,表明食品免疫反应似乎没有一个角色在甲状腺激素运输失调或比率的甲状腺激素结合蛋白,因此,食物不应影响绑定的比率比游离甲状腺激素或生物标志物如T3吸收。

一个反应是II型5-deiodinase(戴奥之间的识别2),从而表明T与荞麦食品免疫反应可能会潜在的影响4T3甲状腺转换与nonthyroidal疾病综合症(NTI),或euthyroid病综合症。这些发现表明潜在的新NTI机制没有报告在文献中我们所知。

大部分的可交叉反应的反应发生和T4和T3,许多的可交叉反应的食物重叠与激素,当T4和T3有非常相似的氨基酸同源性,尤其是碘测序(31日]。一些常见的模式是与这些反应,包括交叉反应许多含谷蛋白食品,谷物和含碘食物结构序列类似于甲状腺激素,如海藻、土豆,坚果(杏仁、腰果、榛子和花生),海鲜,和更多的(表2)。

也有重叠T4和T3与碘的食物,如煮熟的球芽甘蓝,柠檬和酸橙,萝卜,豆腐,无谷蛋白酱油,和煮熟的南瓜。其中的一些食物蛋白质已被列为goitrogens;然而,他们对甲状腺功能的影响可能是由于免疫大而不是干扰碘的摄入,goitrogenic所提出的模型。这尤其可能考虑到这些goitrogenic食品测试修改熟状态删除goitrogenic芥子油等特性。免疫大食物列为goitrogenic或许可以解释的一些观察到的不良反应发生在一小部分甲状腺患者,虽然现在的机制似乎是免疫而不是goitrogenic。

此外,有许多可交叉反应的食物和T4和T3不互相重叠。尽管T3和T4有一些结构相似,T4有两个独立的构象晶格的显著差异外苯基环几何相比,T3。T之间的主要区别4和T3结构是缩短C4′- o4债券收缩的C3′′C4′C5′角度和提高C3′和碳C5′T的角度4(31日]。这些差异可以解释为什么某些食物蛋白质只有与T可交叉反应的反应3或T4。总的来说,这同时反应的三种不同的单克隆抗体对Tg, T3,T4与一些食物抗原而不是其他人是最好的指示之间的免疫反应的特异性抗体对甲状腺目标抗原和不同的食物蛋白质(见表24)。


抗体 程度的反应
+ + + + + +

多克隆抗体对TSH-R 204年 0 0 0
多克隆抗体对戴奥2 203年 1 0 0
单克隆抗体对传真照片 204年 0 0 0
多克隆抗体对油管 204年 0 0 0
多克隆抗体对Tg 203年 0 0 1
多克隆抗体对T3 151年 18 16 19
多克隆抗体对T4 172年 7 7 18

这些甲状腺抗体的特异性结合的抗原决定因素食物抗原被连续稀释食物抗原或显示不同浓度的单克隆抗体具有相同食物抗原固相的浓度。剂量反应曲线如图1(一),1 (b),2(一个),2 (b)先用海藻,紧随其后的是烤腰果,和煮熟的蛋黄,曲线在图1 (c)显示一个强有力的回应乳胶hevein支持这些抗原抗体反应的特异性。进一步证实这一点与食物抗原的抗体反应,抑制进行了研究与不同浓度的食物抗原在液相和甲状腺的单克隆抗体。如数据所示3(一个)3 (b),120年的μg的海藻液相导致76%的抑制anti-T的绑定3和80% anti-T4食物抗原(绑定的数据3(一个)3 (b))。Tg抗体的抑制海藻不显著,因为首先,anti-Tg抗体不应对海藻(见图3 (c))。相比之下,乳胶hevein anti-Tg绑定的抑制作用是非常重要的(> 50%),15 - 120μ克抗原被添加到液相中。总的来说,这种抑制甲状腺抗体绑定到不同的食物抗原被推翻的比例低浓度的液相免疫反应性的食物。这些实验的结果支持命题,单克隆抗体的结合T3, T4和Tg对不同的食物如表所示1- - - - - -3是特定的,因此大甲状腺组织抗原和各种食物抗原之间应该认真对待。

5。结论

我们的研究结果发现T之间的免疫反应性3T4,戴奥2、甲状腺球蛋白和许多食物蛋白质。这些免疫反应可以解释某些情况下食物交互的病因与甲状腺激素替代和甲状腺激素代谢。从理论上说,这些食物蛋白质反应可能导致自身免疫反应在自身免疫性甲状腺疾病患者的一个子集,一个需要进一步研究的话题。

值得怀疑的消费潜在活性食品蛋白质就会引起炎症反应对甲状腺轴目标网站。膳食蛋白质的消耗与消化酶等其他因素诱发免疫反应是必要的。首先,膳食蛋白质不能影响antigenic-antibody模型如果正确地消化,除非个人免疫反应那些食物,从而产生抗体特定饮食蛋白质由于口腔失败宽容那些特定的未消化的食物抗原(32]。如果个人有口服耐受摄取蛋白质和不产生重要的这些蛋白质的抗体,然后不会反应。第二,抗原抗体反应就不单独负责致病反应。细胞免疫、免疫耐受、人类白细胞抗原(HLA)等位基因和其他因素是膳食蛋白质参与致病性免疫反应。因此,结合抗原的抗体并不总是致病性;然而,特定单克隆和多克隆抗体的能力与纯化蛋白质绑定显示潜在的免疫大易感个体的一个子集。

进一步的研究应该进行评估特定的抗原决定基为每个这些食物和甲状腺轴目标网站。此外,免疫因素如宽容,t细胞极化,和其他因素,可能导致对膳食蛋白免疫反应需要调查。个案研究和临床试验来评估是否需要实际的临床作用对这些食物蛋白质存在于眼球运动反应。我们的研究结果提供敏感的列表可能甲状腺免疫影响膳食蛋白质交互和值得进一步研究。这些结果提供了一个第一步缩小特定膳食蛋白质的列表,由于蛋白质大,可能影响自身免疫性甲状腺疾病。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

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