山柰酚除了增加青蒿素的抗疟活性在实验老鼠

文摘

山柰酚(KMF)是普遍存在于茶黄酮醇)的一员,西兰花,苹果,草莓,和豆类。它已被证实能出现几个与强力的抗疟活性与药理性质鼠体内来华的老鼠。因此,寻找一个安全的和新的抗疟化合物组合推迟耐药性的发展是本研究的目的。因此,KMF和青蒿琥酯的疗效(ART)p .鼠老鼠是来华的评估。KMF和艺术的结合p .鼠安卡(PbANKA)感染了ICR小鼠在一个固定比率(1:1)和分数的半数有效量(ED₅₀)也使用标准的调查为期4天抑制试验。的艾德₅₀老鼠KMF水平和艺术感染PbANKA分别为20.06±2.65,6.06±1.33毫克/公斤,分别。此外,KMF显示承诺协同结合艺术的剂量₅₀和固定比率(1:1)组合₅₀1/2的组合指数(CI)值为0.86和0.47,分别。此外,KMF、艺术及其组合的剂量₅₀和固定比率(1:1)组合₅₀的1/2还呈现显著( )长时间的平均生存时间(MST)。本研究的结果表明,KMF和艺术的结合增强艺术的抗疟活性和延长MST。本研究支持的基础选择KMF作为进一步考虑未来的复合药物为艺术作为合作伙伴。

1。介绍

疟疾仍然是主要原因的死亡率和发病率约占撒哈拉以南非洲儿童死亡人数的10% (1]。2018年,据估计,2.28亿疟疾病例和405000疟疾有关的死亡发生在世界上2]。的电阻疟原虫寄生虫对青蒿素的抗疟药物尤其是可用和延迟寄生虫间隙以青蒿素为基础的联合疗法(ACT)的增加导致治疗失败(3- - - - - -6]。因此,寻找安全、选择性化疗药物的功效不会妥协疟原虫依然是焦点。

山柰酚、黄酮醇广泛存在于不同的蔬菜(茶、西兰花、苹果、草莓、和豆类),被认为是最活跃和重要的天然化合物与几个药理属性包括抗氧化,抗炎,抗菌,抗癌7- - - - - -9]。此外,山柰酚进行了研究,发现是一个重要的化合物在寻找一种有效的抗疟药物恶性疟原虫和鼠体内来华的老鼠(10,11]。然而,山柰酚的组合的可能应用广泛使用青蒿素衍生物,青蒿琥酯,在抗击疟疾尚未研究。因此,本研究旨在调查山柰酚和青蒿琥酯的疗效p .鼠老鼠来华的使用在活的有机体内模型。

2。材料和方法

2.1。药品和试剂

青蒿琥酯(艺术)、山柰酚(KMF)和渐变- 80是来自Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。所有试剂均为分析纯。选中的剂量的艺术和KMF准备在渐变- 80和20%的口服药物填喂法。治疗组给予20%渐变- 80只。

2.2。实验小鼠

只有雄性老鼠,4 - 6周大,重达25 - 30 g原发感染的时候是用在这个研究。他们从国家实验室获得动物中心,泰国Mahidol大学和保存在一个动物的房间温度22 - 25°C, 12 h光暗周期。动物们被允许自由访问随意饮食和干净的水。所有实验中实验老鼠Walailak大学动物伦理委员会的批准(AE002/2019)。

2.3。啮齿动物疟原虫

在这项研究中,chloroquine-sensitive鼠体内应变安卡(PbANKA)获得疟疾研究和参考试剂资源中心(MR4,https://www.beiresources.org/About/MR4.aspx)使用。这种寄生虫是由1×10的腹腔内注射(IP)⁷寄生的红细胞PbANKA天真ICR小鼠。传播的寄生虫是由显微镜监控Wright-Giemsa血涂片,染色和寄生虫血症随后百分比计算使用

2.4。抗疟药抑制试验

的艾德₅₀艺术和KMF估计使用标准的为期4天抑制试验(如前所述)(12]。45天真ICR小鼠感染1×10⁷寄生的红细胞PbANKA通过IP注入。2 h后,老鼠被分成9组,每组5老鼠。测试组有KMF(1、5、20和100毫克/公斤)、艺术(1、3、10和30毫克/公斤)口服。20%的未治疗组10毫升/公斤渐变- 80。药物治疗每天一次连续4天(D0-D3)。D4,寄生虫血症估计使用显微镜Wright-Giemsa薄血涂片,染色和寄生虫抑制随后计算百分比

2.5。在活的有机体内抗疟组合测试

为了获得艺术的结合能力和KMF,抗疟活性化验使用上述标准4天抑制测试之前。20天真ICR小鼠由IP感染1×10⁷寄生的红细胞PbANKA。2 h后,小鼠分为5组,每组5老鼠和给定的组合药物剂量的各自的ED₅₀和固定比率(1:1)各自的组合₅₀1/2、1/4和1/8。治疗组给予10毫升/公斤20%渐变- 80。治疗进行了每天一次连续4天(D0-D3)。寄生虫血症和抑制寄生虫的百分比增长D4随后被计算。

2.6。平均生存时间的确定

所有实验小鼠的死亡率是日常监控,并从寄生虫的天数接种在随访期间死亡记录。平均生存时间(MST)是使用以下公式计算13]:

2.7。统计数据

所有结果都表示为的意思平均数标准误差(SEM)使用GraphPad棱镜(GraphPad软件5.01版本,Inc .)、美国)。s形剂量反应变量的非线性回归函数斜率是用来计算最佳₅₀。单向方差分析之后,图基的事后测试是用来比较的测量参数。的 在95%信心被认为是具有统计学意义。此外,结合指数(CI),它定义了合作(CI < 1),添加剂效果(CI = 1),和对抗(CI > 1),自动模拟了CompuSyn(美国CompuSyn软件、ComboSyn Inc .) (14]。

3所示。结果

3.1。抗疟活性KMF和艺术对PbANKA-Infected老鼠

KMF和艺术的chemosuppressive抗疟活性与PbANKA-infected老鼠如图1。KMF呈现显著( )剂量依赖性抑制寄生虫血症水平和类似的抑制ART-treated组。剂量反应曲线,艾德₅₀KMF和艺术为20.06±2.65,6.06±1.33毫克/公斤,分别。

3.2。结合KMF和艺术对PbANKA-Infected老鼠

KMF和艺术的结合各自的剂量₅₀和固定比率(1:1)各自的组合₅₀产生了重大(1/2的 )减少寄生虫血症,而未治疗组的CI值0.86和0.47,分别指示合作(图2和表1)。另外,重要的( )抑制也观察到在这些组合相比,6毫克/公斤ART-treated集团。然而,KMF和艺术的结合剂各自的1/4₅₀和1/8艾德₅₀没有显示与对照组相比显著抑制和6毫克/公斤ART-treated团体CI值为4.64041和85.9454,分别指示对抗(表吗1)。

3.3。MST KMF和艺术效果

为期4天的抑制试验,5(14.4±1.9天),20(22.8±1.9天),和100毫克/公斤(33.6±4.0天)KMF产生显著( )长时间的MST剂量依赖性的方式相比治疗组(8.2±1.9天)。此外,结合药物剂量的各自的ED₅₀(51.8±2.2天),固定比率(1:1)结合各自的1/2₅₀(43.0±2.1天)显著( )长期的MST相比,未经处理的(8.2±1.9天)和10毫克/公斤的艺术-(28.4±2.9天)治疗组。然而,MST并不显著延长结合各自的1/4₅₀(9.4±1.7天),1/8₅₀(9.0±1.6天)(表2)。

4所示。讨论

现在的主要战略行动疟疾治疗由于高疗效、低概率抗疟药物的耐药性发展(15]。本研究关注KMF和艺术的结合,目的是开发一种新的行动。使用慢性毒性试验,小鼠KMF之前已经报道过安全剂量2000毫克/公斤的老鼠(10]。此外,敏试验在抑制模型对PbANKA KMF显示强力的抗疟活性剂量依赖性的方式。因此,这是一个基础的选择剂量(1、5、10、20和100毫克/公斤)的KMF ED₅₀评估。产生了重大(KMF )剂量依赖性的抗疟活性与抑制在ART-treated组。正是由于抗氧化和抗癌KMF活动可能对其抗疟活性[负责7,10,11]。对于我们的发现,本研究首次报道₅₀在抗疟KMF水平在活的有机体内模型。

联合治疗(1:1)₅₀KMF和艺术的价值观产生更显著抑制寄生虫血症相比,只有艺术的使用。协同效应是明显的,当KMF和艺术一起使用的剂量的1/2₅₀每一个。这可能与一个快速的抗疟活性KMF结合的艺术。不幸的是,行动的模式参与增强抗疟活动获得KMF和艺术组合尚未研究。应该进行进一步的研究来强调其抗疟交互背后的机制。此外,KMF和艺术的结合剂₅₀1/4和艾德₅₀1/8显示拮抗效应。这可能是由于开始剂量使用。

被描述的测试化合物能显著延长MST受感染的老鼠被认为是积极的(13]。MST从这项研究中获得的结果,PbANKA-infected老鼠KMF对待艺术,其组合大大延长MST比未经处理的组。这可能是由于这些化合物的抗疟活性。

5。结论

从这项研究中,可以得出结论,结合在一个固定的比率(1:1)KMF和艺术施加强力的抗疟活性的协同效应对PbANKA-infected老鼠。此外,显著延长MST PbANKA-infected小鼠接受这些药物也被观察到。因此,KMF可以作为一个潜在的合作伙伴的药物,可以结合艺术治疗疟疾的感染。

数据可用性

图表或数字数据用于支持这项研究的结果已经存入Figshare库(DOI: 10.6084 / m9.figshare.7973849)。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关出版的手稿。

确认

特别感谢将卓越研究中心创新和健康产品(RECIHP) Walailak大学,提供实验室设备。作者也承认的特别支持盟军的健康科学学院的学生和员工的动物Walailak大学的研究机构。这项工作是支持的研究和创新研究所Walailak大学(批准号吴-尾声- 62 - 002),新战略研究(P2P)项目,还有部分由清迈大学。

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