质分析、15-Lipoxygenase抑制、细胞毒性、基因毒性Dissotis野蔷薇(Sm)特里亚纳(野牡丹科),Paullinia pinnata林(无患子科)

文摘

本研究旨在评估抗炎、细胞毒性、基因毒性的活动Dissotis野蔷薇特里亚纳和(Sm)Paullinia pinnata传统上在喀麦隆Linn用于治疗传染病。植物化学的筛选进行了使用质过程。oxidation-xylenol亚铁橙色(福克斯)分析是用来确定15-lipoxygenase (15-LOX)抑制活性的植物样本。tetrazolium-based比色(MTT)分析了使用维洛细胞。艾姆斯测试进行使用鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100测试菌株。质色谱的d野蔷薇导致四种已知化合物的识别,即5 - (3,5-dinitrophenyl) 2 h-tetrazol (2), 2, 2’- {[2 - (6-amino-9H-purine-9-yl)乙基]亚氨基的}diethanol (14), 1, 2, 5-oxadiazolo [3、4 b]吡嗪,5,6-di (3 5-dimethyl-1-piperidyl)(19),和nimbolinin D(20),同时亦发现了四个化合物p . pinnata被称为2-hydroxycarbamoyl-4-methyl-pentanoic酸(2)、pheophorbide (16), 1 - [4 - ({2 - [(1-methyl-1H-indol-5-yl)氨基]4-pyrimidinyl}氧)1-naphthyl] 3 - (1 - (4 methylphenyl) 3 - (2-methyl-2-propanyl) 1 h-pyrazol-5-yl]脲(17)和nimbolinin D (18)。d野蔷薇和p . pinnata抑制浓度15-LOX活动方式。LC₅₀(浓度,可杀灭50%的细胞)的提取值范围从0.13±1±00 00毫克/毫升p . pinnata和d野蔷薇,分别。p . pinnata在细胞毒性浓度测试d野蔷薇不是。选择性指数(SI)值的范围从0.16到10.30维罗细胞系。观察无基因毒性效应对压力测试。这些提取的化合物来源,可用于控制传染病和炎症有关。然而,使用时应采取谨慎p . pinnata药用用途。

1。背景

炎症是免疫系统对感染的反应和损伤参与关节炎的发病机制,癌症、中风、神经退行性,和心血管疾病。这甚至删除违规因素和恢复组织结构和生理功能1]。然而,大规模生产的促炎的分子,如白细胞介素- 6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)和一氧化氮(NO)可以调节炎症2,3]。

植物生理活动的几项研究已经显示证据(4]。自古以来,植物用于治疗各种疾病,通常被认为是安全的5]。然而,缺乏植物的毒性数据需要详尽的评估他们的安全考虑到其中的一些主要来源的细胞毒性和基因毒性物质可引起不良反应(6- - - - - -8]。因此,重要的是要评估天然产品的功效和毒性之前潜在使用抗菌药物(9]。

在寻找有效安全的天然抗菌和抗炎化合物,目前的研究选择两个喀麦隆人根据他们的传统药用植物使用。水煎煮,叶子从粉Dissotis野蔷薇(Sm)特里亚纳野牡丹科家族的广泛应用于喀麦隆传统医学治疗传染病和相关疾病包括痢疾。在生物活性方面,很少有研究报道植物化学物质的存在,抗菌、抗氧化、止泻的活动ethanolic叶中提取的d野蔷薇(10,11]。Paullinia pinnata林的无患子科家庭是用来治疗伤口和其他皮肤疾病,伤寒、梅毒、淋病、肚子痛、腰痛,腹泻(12]。现代药理学研究表明,不同的部分p . pinnata具有抗氧化,止泻剂,antityphoid抗菌、伤口愈合,cytoprotective,抗炎和抗焦虑的活动13- - - - - -19]。植物化学的研究p . pinnata揭示存在的次生代谢产物而大量的酚类化合物生物活性有被隔离20.- - - - - -24]。

的广泛使用d野蔷薇和p . pinnata用于药用来治疗一些传染病研究的动机,知道没有或一些以往的研究报告他们的抗炎活性,细胞毒性、基因毒性。因此,目前的工作是为了调查15-LOX抑制活性,细胞毒性、基因毒性d野蔷薇和p . pinnataethanolic提取物。

2。材料和方法

2.1。植物材料和提取

的叶子Dissotis野蔷薇特里亚纳(野牡丹科)和(Sm)Paullinia pinnata林(无患子科)2013年12月收集Nkoupa Matapit,西方喀麦隆。植物识别和提取都是如前所述11,19]。

2.2。细胞培养

非洲绿猴肾细胞系(州立)从美国获得类型文化集合(写明ATCC)维持在37°C和5%的公司₂在湿润环境中修改鹰的介质(MEM)高葡萄糖(4.5 g / L)包含谷酰胺(Lonza、比利时)和补充5%胎牛血清(摩羯座科学GmbH,南美)和1%庆大霉素(Virbac, RSA)。

2.3。质过程

质分析d野蔷薇和p . pinnata提取后进行了修改方法,阿拜et al。25)如前所述,乔戈et al。26]。烤箱和反向阶段列C₁₈使用(30°C)。

2.4。抑制15-Lipoxygenase (15-LOX)酶

spectrophotometrically执行的分析是基于复杂的铁的形成^{3 +}据平托/二甲酚橙et al。27)如前所述,Motlhatlego et al。28]。

2.5。细胞毒性试验

细胞毒性的提取测定MTT (3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2、5溴化diphenyltetrazolium)还原试验对州立细胞系根据Mosmann [29日)所描述的Omokhua et al。30.]。之前报道的MIC值(10,1950 (LC)和致死浓度₅₀)值在当前的研究中获得的,选择性指数(SI)值计算使用以下公式:如果= LC₅₀/麦克风。

2.6。Genototoxicity化验

植物样品的基因毒性评价做了histidine-deficient增长中使用沙门氏菌微粒体试验根据马龙和艾姆斯(31日)所描述的Omokhua et al。30.]。

2.7。统计分析

每个实验进行了一式三份。数据表示为平均值±标准偏差。Microsoft Excel用于输入和捕获数据提取的图和表。

3所示。结果与讨论

3.1。但是有的植物提取物的分析

的质d野蔷薇和p . pinnata发现许多化合物的存在与已知或未知的治疗潜力。的质谱图d野蔷薇(图1(一))显示36峰识别(图4个化合物1 (b)),即5 - (3,5-dinitrophenyl) 2 h-tetrazole (2), pseudo-molecular离子峰在m / z 290克/摩尔[m + H) +对应分子式C₇H₄N₆O₄和保留时间为0.4分钟,2,2′- {[2 - (6-amino-9H-purine-9-yl)乙基]亚氨基的}diethanol(14)分子式C₁₅H₁₈N₆O₂分子量314.34克/摩尔,保留时间为4.4分钟,1,2,5-oxadiazolo [3、4 b]吡嗪,5,6-di (3 5-dimethyl-1-piperidyl) (19), pseudo-molecular离子峰在345.2397 m / z [m + H) +相应的分子式C₁₇H₂₇N₆O和保留时间为5.2分钟,nimbolinin D(20)、分子式C₃₆H₄₄O₉分子离子峰,m / z 621.3083克/摩尔[m + H] +,和保留时间为5.7分钟。(5)- 3 5-dinitrophenyl 2 h-tetrazole衍生品被发现具有抗细菌、抗菌、抗真菌和细胞毒性属性(32]虽然nimbolinin D具有抗炎活性,特别是抑制一氧化氮的生产(33]。ethanolic叶的生物活性成分的存在d野蔷薇提供科学依据的使用这种植物是underexploited这里首次筛选色谱配置文件。

有关P。pinnata质色谱图(图2(一个))28日峰值识别(图4个化合物2 (b)),即2-hydroxycarbamoyl-4-methyl-pentanoic酸(2)、分子式C₇H₁₃没有₄、分子量184克/摩尔和保留时间为0.4分钟,pheophorbide(16)、分子式C₃₅H₃₆N₄O₅分子离子峰,m / z 593.2763克/摩尔[m + H] +,和保留时间为5.4分钟,1 - [4 - ({2 - [(1-methyl-1H-indol-5-yl)氨基]4-pyrimidinyl}氧)1-naphthyl] 3 - (1 - (4 methylphenyl) 3 - (2-methyl-2-propanyl) 1 h-pyrazol-5-yl]脲(17)、分子式C₃₇H₃₆N₈O₂分子量637.3042克/摩尔,保留时间为5.6分钟,而nimbolinin (18) D,分子式C₃₆H₄₄O₉分子离子峰,m / z 621.3083克/摩尔[m + H] +,和保留时间为5.7分钟。在第四个鉴定化合物,nimbolinin和pheophorbide已知化合物存在于其他植物也在传统医学使用。Nimbolinin D表现出抗炎活动(33]虽然pheophorbide细胞抑制剂,诱导中断G0 / G1事物之某一面和MG U87细胞凋亡没有直接的光活化(34]。它还引起显著的抗增殖作用的人类癌症细胞系(35]。新成分的鉴定p . pinnata叶提取物添加到现有的数据,强调存在众多生物活性化合物的分离和特征(20.- - - - - -22,24]。

3.2。抑制15-Lipoxygenase (15-LOX)酶

15-LOX酶干涉白细胞三烯的合成从花生四烯酸。事实证明,大量的促炎介质和生物活性白细胞三烯过敏反应。因此,15-LOX抑制活动是最重要的一个,甚至在炎症条件的控制36]。ethanolic 15-LOX抑制活性的提取物d野蔷薇和p . pinnata评估在不同浓度(6.25,12.5,25、50、100μg / mL)并与槲皮素(图3)。提取物表现出15-LOX concentration-dependant方式抑制作用与抑制之间的不同比例4 45.85%,两种植物的提取物。酚提取和发现可能负责15-LOX抑制活动(10,37]。

3.3。细胞毒性试验

细胞毒性测试是对维罗猴肾细胞执行,确保安全使用d野蔷薇和p . pinnata。LC₅₀提取的值介于0.13±00和±1 00之间原油毫克/毫升的摘录p . pinnata和d野蔷薇分别为(表1)。它已经表明,LC₅₀值20μg / mL和低于被认为是有毒的38]。从这个意义上说,所有提取都是无毒的。在先前的研究中,我们确定了ethanolic叶提取物的抗菌活性d野蔷薇和p . pinnata对伤寒沙门氏菌,弗氏志贺菌,变形杆菌,肺炎克雷伯菌,蜡样芽胞杆菌,大肠杆菌(10,19]。的SI值提取计算细胞毒性除以LC₅₀(毫克/毫升)麦克风(毫克/毫升)。结果表明,SI值介于1.28和10.30之间d野蔷薇而从0.16到0.66不等p . pinnata(表1)。根据Mongalo et al。39),SI值高于1参考下面更少的有毒和1是有毒的。因此,d野蔷薇SI值高于1显示没有毒性的初步迹象p . pinnata与SI值低于1可能没有抗菌活性。我们所知,本研究首次报道的细胞毒性d野蔷薇。在一个在活的有机体内研究中,d野蔷薇据报道,缺乏亚急性毒性剂量低于200毫克/公斤。粗糙的植物提取物的细胞毒性的潜力Dissotis rotundifolia同一属的植物,据报道是剧毒MRC-5细胞系(40]虽然Abere et al。41)报道,剂量低于500毫克/公斤被亚急性毒性无毒。p . pinnataethanolic叶提取物对菌株活跃度较低。因此,更糟糕的是选择性指数在浓度测试。的在活的有机体内毒性试验表明p . pinnata提取并不是有毒剂量200毫克/公斤(24,42]。每个人都应该观察到的结果在体外毒性评价与观察很大的不同在活的有机体内。这可能是由于药代动力学和例注意事项43]。

3.4。基因毒性试验

基因毒性测试是为了确定执行范围的植物提取物的生产合成基因突变的基因损害无代谢活化。从艾姆斯测试中,我们发现所有的提取测试在不同浓度没有的回复突变的殖民地美国沙门氏菌感染TA98和TA100菌株等于或大于两倍的负面控制(表2)。因此,这两种植物提取物不诱发基因突变(31日]。在所有情况下,下降的值在正常范围内,按照文献[44]。

4所示。结论

d野蔷薇和p . pinnata提取了15-LOX抑制的影响。质导致识别与已知的生物活性化合物的提取。没有观察到的细胞毒性效应d野蔷薇和p . pinnata在细胞系进行测试。然而,p . pinnata没有有用的抗菌活性为选择性指数越糟糕。我们的研究表明植物样品的潜在nongenotoxic效果测试。然而,研究包括代谢激活步骤是必要的批准这一发现。15-LOX信息抑制作用、细胞毒性和基因毒性的植物样品激发进一步的研究旨在孤立和确定植物生物安全的化合物的性质。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

法进行实际工作和准备草案的手稿,圣言会执行质分析,男人和EFX设计研究。所有作者阅读和批准最终的手稿。

确认

作者感谢African-German网络卓越科学(艾格尼丝),德国联邦教育和研究(BMBF),和亚历山大•冯•洪堡基金会(AvH)通过计划艾格尼丝移动格兰特(非洲内部)逐渐初级研究人员对金融支持。作者非常感激Jacobus教授尼古拉斯Eloff,教授Lyndy McGaw,植物学期刊项目,比勒陀利亚大学,南非,为本研究提供的设施。他们也感谢实验室的化学,高等教师喀麦隆雅温得我大学培训学院协助质分析。

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