几种药用植物对人致病菌的体外抗菌活性研究

摘要

抗生素耐药性的出现和传播，以及致病原新菌株的演变，引起了全球卫生界的极大关注。对一种疾病的有效治疗需要开发新的药物或某种新型药物的潜在来源。我们社区常用的药用植物可能是一个很好的药物来源来对抗这个问题。本研究的重点是探索常用传统药物植物的抗菌特性。筛选了4种不同植物提取物对12种病原微生物和2株对照菌株的抑菌作用。Methanolic提取的酢浆草草坪那艾属寻常的那Cinnamomum tamala.,Ageratina adenophora用琼脂孔扩散法测定其抗菌性能。结果表明，大部分提取物具有一定的抗菌性能。在提取液中观察到最高的电位o .草坪对大肠杆菌，沙门氏菌蒂米，耐多药伤寒沙门氏菌，肺炎克雷伯菌，和Citrobacter Koseri.抑菌带(ZOI)分别为17 mm、13 mm、16 mm、11 mm和12 mm。酢浆草草坪还显示出最高的MIC抗试验生物。甲醇提取物艾属寻常的那樟属梓樟,和Ageratina adenophora显示效果对金黄色葡萄球菌。Ageratina adenophora也表现出抗真菌活性根霉实验证实了一些选定的植物提取物作为天然抗菌剂的功效，并提出了将它们用于药物治疗受试生物引起的传染病的可能性。

1.介绍

抗微生物剂在减少传染病的全球负担方面基本很重要[1］．然而，致病菌中耐多药(MDR)菌株的出现和传播已经成为严重的公共卫生威胁，因为用于致病菌引起的感染的有效抗菌剂很少，有时甚至没有[2那3.］．

因此，鉴于耐药临床分离株在全球迅速传播的证据，找到新的抗菌药物的需求至关重要。然而，过去对新引入的抗菌药物迅速、广泛出现耐药性的记录表明，即使是新的抗菌药物家族也将有很短的预期寿命[4.那5.］．

广泛的药用植物被认为是天然抗菌化合物的宝贵资源，作为可能有效地治疗这些有问题的细菌感染的替代方案[6.］．根据世界卫生组织(WHO)的说法，药用植物是获得各种药物的最佳来源[7.］．

许多植物因其抗菌特性而被使用，这些抗菌特性是由于植物在次生代谢过程中合成的植物化学物质[8.那9.］．植物含有丰富的各种次生代谢物，如单宁，生物碱，酚类化合物和表现（已发现的黄酮类）在体外具有抗菌特性[10那11］．一些植物治疗手册提到了用于治疗尿路感染、胃肠疾病、呼吸道疾病和皮肤感染等感染性疾病的各种药用植物。

尼泊尔的土着人民很久以前一直在使用许多植物物种作为传统药物，包括治疗传染病，但有关于他们的数据缺乏缺乏在活的有机体内和在体外功效(12］．

考虑到植物作为抗菌药物来源的巨大潜力，本研究旨在进行研究在体外尼泊尔某些药用植物提取物对包括MDR细菌在内的最常见的微生物病原体的抗菌和抗真菌活性。

2。材料和方法

２.１.样品收集

从加德满都当地市场收集了四种基于传统医药历史的植物材料。表格1显示本研究中植物的植物学名称、科、使用部位和民族药用用途[13-15］．

２.２.植物提取物的制备

首先在运行自来水下首先洗涤收集的样品，在室温下在室温下风干一个月。使用家用磨床，然后将植物部件研磨成细粉。取出地面粉末的重量，通过使用冷渗透法制制备来自每种植物的提取物。将每种植物的60克细粉末在室温下在160ml绝对甲醇中溶解在一个连续的三天。通过Whatman滤纸过滤上清液，而残留物用于第二和第三萃取。将溶解的部分过滤并储存在玻璃瓶中。第三萃取后，使用旋转蒸发器在50℃下减压蒸发滤液，得到粗提物。 粗提取液被收集在一个小瓶中以备进一步使用。

2.3。微生物培养

研究中使用了12种人致病微生物菌株：金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,大肠杆菌那伤寒沙门氏菌（S. Typhi.),耐多药S. Typhi.那P.铜绿假单胞菌,耐多药k .肺炎那Citrobacter Koseri.（c . koseri),模具根霉SPP，Aspergillus尼日尔（答:尼日尔)，曲霉菌曲藤（答:flavus)、酵母白色念珠菌（C.老年人）和参考菌株大肠杆菌写明ATCC 25922和金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923。进行了一系列的形态学、生理学和常规生化试验来鉴定选定的微生物。真菌在适当的培养基上生长，并进行了形态学和显微特征鉴定[16］．在临床和实验室标准研究所（CLSI）指南之后，通过改性的柯比鲍尔盘扩散方法对所有微生物分离株进行抗菌易感性试验。多药抗性（MDR）分离物定义为具有耐三种抗生素的分离物[17］．

2.4。植物提取物的抗微生物测定

通过蛆锭术琼脂（MHA）板中的琼脂孔扩散法进行不同植物提取物的抗微生物测定。将测试生物接种在营养肉汤中，并在37℃下孵育过夜，调节浊度至0.5麦克兰标准标准，得到1.5×108 CFU / ml的最终含量。MHA板是用标准化的微生物培养肉芽培养的草坪。制备50mg / ml浓度的植物提取物，在二甲基亚砜（DMSO）中制备。六个井在接种介质中均借助无菌软木螟（6mm）钻孔。每个井都装满了50μ.l不同植物提取物:细菌阳性对照(阿米卡星30 mcg和呋喃妥因300 mcg)，真菌分离株环己胺1 mg/ml，阴性对照/溶剂对照(DMSO)。室温扩散约30分钟，37℃孵育18-24小时。孵育后，观察板形成一个清晰的区域周围的井，这符合抗菌活性的测试化合物。抑菌带(ZOI)以mm为单位进行观察和测量。

2．5．植物提取物的MIC和MBC测定

肉汤微脱硅方法用于根据CLSI确定MIC。将萃取液的双重稀释液直接制备在含有Mueller Hinton Brooth的微量滴定板中以获得各种浓度。加入细菌接种物，得到终浓度为5×10^5.每孔CFU/mL。阳性对照以含阿米卡星为标准药物。用无菌封口器覆盖平板，37℃孵育24小时。微量滴定板每孔加入Resazurin, 37℃孵育30 min，有细菌生长的孔变为粉红色，无细菌生长的孔仍为蓝色。MIC被认为是完全抑制细菌生长的提取物的最低浓度[17］．

结果

3.1。植物提取物的提取产量

通过使用冷渗透方法，获得最高产量C. Tamala.提取液的提取率为9.35%，提取率最低答:adenophora(表2）.

采用圆盘扩散法初步评价4种植物提取物对不同微生物的抑菌活性。这些微生物在传染病中经常遇到。研究表明，研究中使用的所有植物提取物对所有被测微生物都有不同程度的抗菌活性(见表)3.）.

据观察，o .草坪在测试的四种植物提取物中是最有效的。它显示了对所有革命的革兰氏阴性细菌的抑制区（ZOI）区显示，而没有针对革兰氏阳性细菌和真菌的活性。答:adenophora被发现对克阳性和革兰氏阴性细菌有效。提取物答:adenophora显示ZOI反对金黄色葡萄球菌以及S. Typhi.．它还显示出抗真菌活动根霉SPP。C. Tamala.和A. vulgaris.仅显示针对革兰氏阳性细菌的抗菌活性。抗真菌活性仅显示答:adenophora对根霉其他植物提取物均无抗真菌活性3.）.

通过测量最小抑制浓度（MIC）测定测试细菌菌株中提取物的有效性。仅对那些显示抑制区的生物进行麦克风，并通过琼脂孔扩散法在先前的抗微生物测定中对植物提取物敏感。在所有测试的植物提取物中，o .草坪发现表现出强烈的抗菌活性。麦克风S. Typhi.是100mg/ml和MDRS. Typhi.50毫克/毫升对吗o .草坪．同样，其他革兰氏阴性菌(大肠杆菌，K.肺炎，和mdr.c . koseri)的含量为25 mg/ml(表3.）.其他植物提取物仅对金黄色葡萄球菌MIC值为12.5 mg/ml4.）.

4。讨论

抗生素抗性是一个问题，这在发展中国家和发达国家的大部分世界中继续挑战医疗保健部门。多药物抗性病原体的出现和传播基本上威胁到目前的抗菌治疗。这需要寻找诸如植物的新来源，因为它们产生了已知治疗性质的各种生物活性化合物。已经进行了该研究以评估不同药用植物提取物针对人类病原体的抗微生物活性，包括两个参考菌株[2那9.那18］．

虽然部分植物提取物对不同供试菌株均表现出较好的抑菌活性，但从其MIC值来看，许多植物提取物对供试菌株的抑菌活性有限。

植物提取物o .草坪对5种病原菌的活性最高，大肠杆菌,．伤寒,耐多药S. Typhi.那k .肺炎和c . koseri．提取物也显示出显着的MIC值E.．肺炎杆菌、k,和C. Koseri。该结果类似于其他研究报告的甲醇提取物的抗菌活性o .草坪[19]．然而，与我们的结果相反，它们也报道了对金黄色葡萄球菌．结果的差异可能是由于使用的植物提取物浓度(50mg/ml)比他们使用的(250mg /ml)低[19］．莫汉和Pandey还报告说o .草坪是有效的对金黄色葡萄球菌．这种结果的差异可能是由于使用了不同的溶剂体系[20.］．植物的药用价值在于其存在于不同溶剂体系中的生物活性植物成分，这已被广泛观察和接受[21］．多药抗性的出现S. Typhi.和k .肺炎正对人类构成最大的威胁。提取物显示的显著活性o .草坪对抗它们让我们推断，这可能是对抗这场噩梦的一个重要选择。

植物提取物C. Tamala.被发现对一种测试细菌有抗菌活性，金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25293)。Hassan Waseem等人[22]检测到抗微生物活性C. Tamala.对抗一些生物。他们发现不同程度的抗菌活性对所有测试的革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌与我们的结果相反金黄色葡萄球菌被发现是有效的植物化学物质类黄酮，萜类，单宁和生物碱C. Tamala.显示抗喉，抗炎，抗菌活性。MIC值表明，这些植物提取物具有最少的抗微生物活性。

答:adenophora据报道可产生结构多样的化学物质，包括(单、倍半、二、三)萜类、苯丙素、黄酮类、香豆素、甾醇和生物碱，显示出抗菌活性[23那24］．提取物答:adenophora被发现具有广泛的谱抗微生物潜力S.金黄色葡萄球菌，MRSA，和S. Typhi.以及根霉这与Rajamani等人的结果一致[25］．提取物答:adenophora表现出显着的麦克风价值S.．葡萄球菌这意味着它们可能是对抗它的潜在选择[26］．不同性质的细胞壁使革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌更容易对不同的化合物敏感。

提取物A. vulgaris.显示活动对S.aureus.．一些研究报告了抗微生物性质A. vulgaris.对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌与我们的发现相似[27］．提取物A. vulgaris.还表现出显着的MIC值金黄色葡萄球菌．

虽然有一定数量的提取物表现出良好的抗菌作用，但与我们的预期相反，一些植物的抗菌作用有限，这表明传统的原始药用植物用于治疗感染性疾病的方法并不完全一致。然而，仍有必要进一步研究它们在抑制寄生虫、病毒和/或真菌生长方面的有效性。某些植物抗菌能力有限的另一种可能是由于冷渗透提取方法和使用粗提取物。

5.结论

本研究采用冷渗法对尼泊尔4种传统药用植物的抗菌活性进行了评价。结果表明，该菌具有潜在的抗菌作用o .草坪对测试的细菌菌株提取物，而C. Tamala，A.Adenophora，和A. vulgaris.只有对抗金黄色葡萄球菌。提取物答:adenophora也表现出抗真菌活性。

尽管我们表现得很强大在体外一些传统植物提取物对某些细菌的活性，可能无法翻译体内。用索氏提取法、亚馏分、半纯化合物或从这些植物中分离出的纯化合物代替冷渗法可能具有更好的抗菌活性。需要进一步的研究来评估抗细菌、抗病毒和抗寄生虫的活性。此外，还需要对植物的其他部分进行研究，以评价所研究的植物提取物作为潜在的抗菌剂。

数据可用性

没有数据支持本研究。

利益冲突

作者宣布没有利益冲突。

致谢

作者感谢Khushibun国立学院为进行实验提供了实验室设施。

参考

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